精氨酸甘氨酸天冬氨酸多肽表面修饰促进生物支架材料对骨髓来源种子细胞的黏附

背景:精氨酸甘氨酸天冬氨酸多肽具有较强的黏附性和生物支架材料可接枝结合,且不会改变材料的表面理化性质.目的:观察应用精氨酸甘氨酸天冬氨酸多肽表面修饰猪主动脉瓣去细胞支架材料对骨髓干细胞黏附性的影响.方法:采用胰蛋白酶+TritonX-100 法制备猪主动脉瓣去细胞支架材料,用YGRGDSP多肽(酪氨酸-甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸-脯氨酸)进行处理,按照精氨酸甘氨酸天冬氨酸多肽的质量浓度(0.5,1.0,1.5,2.0 g/L)、反应时间(4,8,12,24 h)、反应pH值(7.0,7.4,8.0)分为不同实验组.结果与结论:茚三酮显示精氨酸甘氨酸天冬氨酸多肽可很好的交联到猪主动脉瓣去细胞支架材料,最佳反应条件为:室温、1.5 g/L精氨酸甘氨酸天冬氨酸、pH 7.4、持续振荡12 h.提示利用YGRGDSP多肽对猪主动脉瓣去细胞支架材料进行表面修饰可显著改善骨髓来源种子细胞的黏附性.     

整合素αvβ3受体靶向载药脂质体的制备及体外靶向性

背景:含RGD序列的多肽是多种整合素的识别位点,以其相对分子质量小、稳定、易于制备,且无免疫原性等优点被广泛用于纳米靶向药物传递系统的设计.目的:制备以RGD环五肽为配基的整合素αvβ3载药脂质体,通过体外细胞学实验证实其受体靶向性.方法:使用人工合成的RGD环五肽作为靶向分子探针,通过高压均质法制备靶向整合素αvβ3载药脂质体,采用扫描电镜和激光粒度分析仪检测纳米颗粒形态和粒径;以流式细胞分析观察其对血管平滑肌细胞的特异性标记,并考察荷载药物的离体缓释能力以及体外靶向能力.结果与结论:合成的靶向载药脂质体粒径为(175±6) nm,包封率为(96.33±1.02)%,体外溶出时间超过5 d.靶向载药脂质体对整合素αvβ3具有较高的特异性亲和力,可通过受体介导的内吞作用进入细胞内.提示制备的靶向整合素αvβ3载药脂质体,具有较高的药物包封率及缓释性,能与整合素αvβ3受体特异性结合,是一种新型的受体介导靶向制剂.     

携抗αvβ3-整合素单抗靶向微泡对肿瘤新生血管靶向效应的研究

目的 探讨携抗αvβ3-整合素单抗靶向微泡对肿瘤新生血管的靶向效应.方法 通过生物素桥接法制成携抗αvβ3-整合素单抗的靶向脂质微泡(MBa)、对照微泡携同型抗体脂质微泡(MBc);选取12只HepG2皮下移植瘤裸鼠模型(肿瘤组)和正常对照裸鼠(对照组),经尾静脉随机注射MBa、MBc和RGDfvV封闭10 min后再注射MBa(Blocking+MBa),并行对比超声检查,测量声强度(VI).分别取肿瘤组肿瘤组织和对照组正常骨骼肌组织行病理学和免疫组化检查.结果 肿瘤组中MBa的VI值(17.43±3.30)U,较MBc的VI值(5.88±1.04)U增大近3倍,差异有统计学意义(P <0.01),应用RGDfvV封闭αvβ3-整合素后MBa的VI值降至(6.14±2.25)U,与MBc及对照组的各VI值比较差异均无统计学意义.免疫组化检查显示:肿瘤组织的新生血管内皮有大量αvβ3-整合素显色,可被RGDfvV封闭;而骨骼肌中仅有少量αvβ3-整合素显色.结论 携抗αvβ3-整合素单抗的靶向微泡对肿瘤新生血管具有明显的靶向效应,有望用于肿瘤的诊断和疗效评估.     

靶向肿瘤血管多肽显像的研究进展

肿瘤细胞如正常组织一样,存活需要氧气和代谢,而血管生成对于肿瘤的生长是一个重要的过程。新生肿瘤血管与正常血管相比有独特的特点：新生肿瘤血管结构排列紊乱,扭曲并且扩张,它们在其内膜的表面表达特异性标记物,可以利用其表面的特异性标记物选择性靶向肿瘤血管。本文对近年来有关特异性靶向肿瘤血管的多肽显像,尤其对三肽序列精氨酸-精氨酸-亮氨酸（Arg-Arg-Leu,RRL）进行详细的介绍。     

血管新生及抗血管新生靶向治疗在神经纤维瘤中的研究进展

神经纤维瘤是整复外科最常见的良性皮肤软组织肿瘤之一,但约8%~13% 的神经纤维瘤存在恶变风险。研究提示血管新生对神经纤维瘤的进展和恶变起着重要的促进作用,而抗血管新生药物在神经纤维瘤的相关研究中也充分显示出潜在的临床应用价值。本文主要对神经纤维瘤的血供特点、血管新生机制以及抗血管新生靶向治疗的研究进展进行综述。     

血管新生及抗血管新生靶向治疗在神经纤维瘤中的研究进展

神经纤维瘤是整复外科最常见的良性皮肤软组织肿瘤之一,但8%～13%存在恶变风险。研究提示血管新生对神经纤维瘤的进展和恶变起着重要的促进作用,而抗血管新生药物在神经纤维瘤的相关研究中也充分显示出潜在的临床应用价值。本文主要对神经纤维瘤的血供特点、血管新生机制以及抗血管新生靶向治疗的研究进展进行综述。     

多发性骨髓瘤血管新生研究进展

多发性骨髓瘤(MM)骨髓血管再生程度与骨髓瘤细胞的增殖活性高度相关,活动期MM有高水平的血管生成因子.血管新生是肿瘤生长的关键因素.肿瘤血管新生对肿瘤的发生、发展及转移起重要作用.血管新生为MM细胞的生长创造了有利的微环境.靶向血管新生药物的出现,对克服传统药物的耐药和提高MM患者的生存率有重要作用.现就MM血管新生研究进展进行综述.     

多发性骨髓瘤与新生血管形成

尽管大剂量化疗和和造血干细胞移植提高了多发性骨髓瘤(MM)的完全缓解率,但其复发率高,是一种不可治愈的疾病。目前,研究新生血管形成尤其是血管内皮生长因子(VEGF)已经成为生物医学的焦点,由此产生的单克隆抗VEGF抗体bevazicumab等各类靶向药物,显示出显著的临床前和临床的抗肿瘤活性。已知浆细胞的累积可以诱导骨髓层面的基础血管形成,支持肿瘤细胞的生长,加速疾病的进展。这里,我们讨论肿瘤血管生成的机制,并总结现有的和潜在的抗MM血管生成剂,以寻求MM新的治疗方案。     

αvβ3整合素受体靶向性超顺磁性脂质体的建立及体外磁共振观察

目的 合成以RGD短肽为亲和成分的靶向性超顺磁性长循环脂质体,并通过体外细胞学实验确定其受体靶向性,探讨其用于肿瘤受体成像的可能性.方法 采用薄膜法分别合成表面连接和不连接RGD的靶向性和非靶向性长循环脂质体;以流式细胞分析及共聚焦激光扫描显微镜观察靶向对比剂对HUVEC细胞的特异性标记.结果 ①合成的超顺磁性脂质体粒径在150 nm左右,具有较高的弛豫率;②靶向性对比剂对αvβ3整合素受体具有较高的特异性亲和力;可通过受体介导的内吞作用进入细胞内;③靶向对比剂与细胞结合后,可以明显降低细胞的信号.结论 RGD-超顺磁性长循环脂质体具有较高的弛豫率,能与αvβ3整合素受体特异性结合,在靶点特异性浓聚,并能经MR扫描证实.     

New peptide nucleic acid analogues: synthesis and applications

Peptide nucleic acids are oligonucleotide mimics characterised by high chemical and enzymatic stability, high specificity and affinity toward complementary DNA/RNA. The lack of charge and polar groups in the backbone decrease their solubility in aqueous environment and their ability to cross cell membranes, reducing their performance in in vivo applications. To improve solubility, increase affinity and specificity of binding and to control recognition between nucleic acids, several analogues bearing modifications on the nucleobase, nucleobase-backbone linker and on the backbone were synthesised. This paper describes the synthesis and applications of Peptide nucleic acid analogues and discusses the potential of analogues for which no application is reported.     

New peptide nucleic acid analogues: synthesis and applications

Peptide nucleic acids are oligonucleotide mimics characterised by high chemical and enzymatic stability, high specificity and affinity toward complementary DNA/RNA. The lack of charge and polar groups in the backbone decrease their solubility in aqueous environment and their ability to cross cell membranes, reducing their performance in in vivo applications. To improve solubility, increase affinity and specificity of binding and to control recognition between nucleic acids, several analogues bearing modifications on the nucleobase, nucleobase-backbone linker and on the backbone were synthesised. This paper describes the synthesis and applications of Peptide nucleic acid analogues and discusses the potential of analogues for which no application is reported.     

Effect of an arginine-glycine-aspartic acid-containing peptide on hematogenous candidal infections in rabbits.

The adherence of Candida albicans yeast cells to the subendothelial extracellular matrix, fibronectin, laminin, and type I and IV collagen was tested. Fibronectin (10(-7) M) and a peptide, PepTite-2000 (Telios Pharmaceuticals Inc., San Diego, Calif.), containing the sequence arginine-glycine-aspartic acid (RGD) inhibited Candida adherence to these targets by greater than 90%. When C. albicans was perfused over ex vivo rabbit aortic endothelium, there was no significant difference in the amount of adherence in the presence or absence of the RGD-containing peptide. However, the RGD-containing peptide reduced the number of Candida organisms present in liver, brain, heart, and kidneys (P less than 0.05) of rabbits 4 h after intravenous inoculation of 5 x 10(7) C. albicans yeast cells. The peptide also reduced the number of macroscopic Candida abscesses in the kidneys of rabbits 72 h after intravenous inoculation of 10(7) C. albicans yeast cells (P less than 0.05). Inhibition of Candida adherence in vitro and in vivo may occur because the peptide blocks a fungal receptor that is necessary for adherence.     

内皮前体细胞移植对新血管形成的促进作用

目的:观察体外培养的内皮前体细胞自体移植后在缺血肢体新血管形成和改善血液灌注过程中的形态学变化及其作用。方法:①实验于2002-08/2003-04在解放军总医院心内科实验室完成。选用成年雄性新西兰白兔20只。随机将动物分为2组,分别为细胞移植组和对照组(肌肉注射磷酸盐缓冲液1mL),各10只。实验2个时间点3,5周各5只。②细胞移植组兔抽取骨髓,分离单个核细胞,采用内皮细胞专用培养基(添加体积分数0.2胎牛血清,肝素1×104U/L和青霉素1×105U/L)体外培养扩增内皮前体细胞并给予鉴定。细胞移植组动物肌肉注射内皮前体细胞悬液,移植细胞数量为(7.4±1.7)×106,共注射5个点。③分别饲养3和5周后行激光多普勒灌注显像显示缺血肢体血液灌注情况;行腹主动脉造影计数右侧大腿自腹股沟韧带至膝关节的血流时间,以股骨中点的垂直线为标准,计数侧支血管数目;行组织学和免疫组织化学检测观察缺血肌肉组织标记细胞是否整合至血管壁内。④采用t检验比较计量资料间差异。结果:①内皮前体细胞贴壁后呈纺锤体形,原代细胞呈集落生长,生长速度较慢,传代以后分布较均匀,生长迅速。原代细胞培养时可见较多杂细胞存在,但传代2次以后细胞形态非常单一。Ⅰ型荆豆凝集素、乙酰化低密度脂蛋白和抗Ⅷ因子相关抗原单克隆抗体鉴定均为阳性,细胞纯度达100%。②内皮前体细胞移植后3周,激光多普勒灌注显像检测显示细胞移植组缺血肢体血液灌注显著改善(t=5.96,P<0.01),血管造影显示细胞移植组侧支血管生成增多(t=5.28,P<0.01),血流速度增快(t=-6.85,P<0.01)。细胞移植后5周,切开动物缺血肢体皮肤发现,细胞移植组皮肤、皮下组织和肌肉基本不形成粘连,而对照组粘连严重,此时激光多普勒灌注显像检测显示细胞移植组和对照组血液灌注检测无显著差别(P>0.05),但造影检测显示细胞移植组侧支血管数目明显多于对照组,血流时间明显短于对照组(t=3.32,-4.62,P<0.01)。③组织学检测显示对照组缺血肢体存在肌肉坏死现象,同时有大量炎细胞浸润,而细胞移植组未见未见肌肉坏死和炎细胞浸润,细胞追踪显示大量标记的细胞整合至血管壁内形成内皮细胞。结论:①骨髓中的内皮前体细胞可以在体外大量扩增,从而达到满足自体移植的需要。②内皮前体细胞自体移植后可以参与新血管形成,进而形成侧支血管,有效改善缺血组织的血液灌注。     

内皮前体细胞移植对新血管形成的促进作用

目的：观察体外培养的内皮前体细胞自体移植后在缺血肢体新血管形成和改善血液灌注过程中的形态学变化及其作用。方法：①实验于2002—08／2003—04在解放军总医院心内科实验室完成。选用成年雄性新西兰白兔20只。随机将动物分为2组．分别为细胞移植组和对照组（肌肉注射磷酸盐缓冲液1mL），各10只。实验2个时间点3．5周各5只。②细胞移植组兔抽取骨髓，分离单个核细胞，采用内皮细胞专用培养基（添加体积分数0．2胎牛血清，肝素1&;#215;10^4U／L和青霉素1&;#215;10^5U／L）体外培养扩增内皮前体细胞并给予鉴定。细胞移植组动物肌肉注射内皮前体细胞悬液，移植细胞数量为（7．4&;#177;1．7）&;#215;10^6，共注射5个点。③分别饲养3和5周后行激光多普勒灌注显像显示缺血肢体血液灌注情况；行腹主动脉造影计数右侧大腿自腹股沟韧带至膝关节的血流时间，以股骨中点的垂直线为标准，计数侧支血管数目；行组织学和免疫组织化学检测观察缺血肌肉组织标记细胞是否整合至血管壁内。④采用t检验比较计量资料间差异。结果：①内皮前体细胞贴壁后呈纺锤体形，原代细胞呈集落生长，生长速度较慢，传代以后分布较均匀，生长迅速。原代细胞培养时可见较多杂细胞存在，但传代2次以后细胞形态非常单一。Ⅰ型荆豆凝集素、乙酰化低密度脂蛋白和抗Ⅷ因子相关抗原单克隆抗体鉴定均为阳性，细胞纯度达100％。②内皮前体细胞移植后3周，激光多普勒灌注显像检测显示细胞移植组缺血肢体血液灌注显著改善（t=5．96，P〈0．01）．血管造影显示细胞移植组侧支血管生成增多（t=5．28,P〈0．01），血流速度增快（t=-6．85，P〈0．01）。细胞移植后5周．切开动物缺血肢体皮肤发现．细胞移植组皮肤、皮下组织和肌肉基本不形成粘连．而对照组粘连严重，此时激光多普勒灌注显像检测显示细胞移植组和对照组血液灌注检测无显著差别（P〉0．05）．但造影检测显示细胞移植组侧支血管数目明显多于对照组，血流时间明显短于对照组（t=3．32，-4．62．P〈0．01）。③组织学检测显示对照组缺血肢体存在肌肉坏死现象，同时有大量炎细胞浸润，而细胞移植组未见未见肌肉坏死和炎细胞浸润，细胞追踪显示大量标记的细胞整合至血管壁内形成内皮细胞。结论：①骨髓中的内皮前体细胞可以在体外大量扩增，从而达到满足自体移植的需要。②内皮前体细胞自体移植后可以参与新血管形成，进而形成侧支血管，有效改善缺血组织的血液灌注。     

胃癌的分子靶向治疗研究进展

胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤,全世界恶性肿瘤的病死率中胃癌居第二位[1].目前,手术治疗仍然是根治胃癌的最有效方法,然而,仅有30%～40%的胃癌患者可能通过单纯的手术治疗而获得治愈,大部分患者死于肿瘤的再发或远处转移[2].寻求手术以外的途径治疗胃癌的转移、复发成为了胃癌综合治疗的重点和热点.     

血管内皮生长因子与放射性视网膜病变新生血管的形成

目的:放射性视网膜病变作为头、颈部肿瘤放射治疗的一种眼部并发症,国内外的报道不多,其发病机制尚未完全明确,因此归纳总结放射性视网膜病变的发病机制以为临床治疗提供依据。资料来源:应用计算机检索Pubmed数据库1990-01/2006-06期间有关放射性视网膜病变的文章,检索词“VEGF,Radiation Retinopathy,New Blood Vessels”,限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库1990-01/2006-06期间的相关文章,检索词“血管内皮生长因子,放射性视网膜病变,新生血管生成”,限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,取符合研究要求的有关文章找全文。资料提炼:共收集到60篇有关血管内皮生长因子及放射性视网膜病变的文章,其中45篇为血管内皮生长因子在各系统器官中的作用,涉及糖尿病视网膜病变,放射性视网膜病变等方面;其中15篇为放射性视网膜病变文章,涉及病例个案报道,临床观察等方面。资料综合:①放射性视网膜病变眼底视网膜新生血管形成是其特点性病变。血管内皮生长因子近年来被确定为对新生血管性疾病发展过程有重要影响的细胞因子。②血管内皮生长因子可诱导视网膜下新生血管的形成。缺氧启动了血管新生的过程。③发病机制考虑为放射线诱导的DNA损伤使内皮细胞在有丝分裂过程中死亡,当正常分裂的细胞数量难以补偿丢失的细胞时,血管内皮连续性破坏,功能障碍。结论:目前放射性视网膜病变的发病机制仍有争议,但眼底新生血管出现是其重要的临床表现。血管内皮生长因子的表达高低与新生血管形成有关。     

水通道蛋白分子靶向治疗和分子靶向成像研究进展

水是组织、细胞代谢的基础。水分子是通过细胞膜的水通道蛋白（Aquaporins,AQPs）进行转运的。AQP是一族在细胞膜上具有选择性的能够高效运转水和甘油等小分子的特异孔道,对水和甘油等小分子物质具有选择性通透作用[1-3]。AQP与许多疾病具有密切的关系,比如：痴呆、帕金森病、海马硬化癫痫、脑血管疾病、脑水肿、肝脏纤维、全身肿瘤、心功能衰竭和冠心病,以及肾脏功能变化等。     

5-Aminolaevulinic acid peptide prodrugs enhance photosensitization for photodynamic therapy

Intracellular porphyrin generation following administration of 5-aminolaevulinic acid (ALA) has been widely used in photodynamic therapy for a range of malignant and nonmalignant lesions. However, ALA is relatively hydrophilic and lacks stability at physiologic pH, limiting its bioavailability. We have investigated more lipophilic, uncharged ALA-peptide prodrugs based on phenylalanyl-ALA conjugates, which are water soluble and chemically stable for improving ALA delivery. Pharmacokinetics of the induced protoporphyrin IX (PpIX) were studied in transformed PAM212 keratinocyte cells and pig skin explants. The intracellular porphyrin production was substantially increased with Ac-L-Phe-ALA-Me (compound 1) and Ac-L-Phe-ALA (compound 3) compared with equimolar ALA: after 6-h incubation, the PpIX fluorescence measured using 0.01 mmol/L of compound 1 was enhanced by a factor of 5 compared with ALA. Phototoxicity results showed good correlation with PpIX levels, giving a LD(50) (2.5 J/cm(2)) of 25 micromol/L for ALA, 6 micromol/L for 5-aminolaevulinic hexyl ester, and 2.6 micromol/L for compound 1, which exhibited the highest phototoxicity. However, these results were stereospecific because the corresponding D-enantiomer, Ac-D-Phe-ALA-Me (compound 2), induced neither porphyrin synthesis nor phototoxicity. PpIX levels were considerably reduced when cells were incubated with compound 1 at low temperatures, consistent with active transport. In pig skin explants, compound 1 induced higher porphyrin fluorescence than ALA by a factor of 3. These results show that water-soluble peptide prodrugs of ALA can greatly increase its cellular uptake, generating more intracellular PpIX and improved tumor cell photosensitization. The derivatives are comparable in efficacy with 5-aminolaevulinic hexyl ester but less toxic and more stable at physiologic pH.     

Molecular targeted therapy in lung cancer

Lung cancer continues to be the leading cause of cancer death worldwide, and nonsmall cell lung cancer(NSCLC) is the most common type of lung cancer. Despite many clinical trials of platinum-based chemotherapy in combination with various drugs, the median survival time of NSCLC patients remains poor. The overall 5-year survival rate is approximately 15%, and has improved only marginally over the last few decades despite the introduction of new therapeutic agents. A recent milestone in this field has been the development of molecular-targeting drugs, among which gefitinib and erlotinib targeting the epidermal growth factor receptor (EGFR) have improved the efficacy of therapy for NSCLC. Anti-angiogenetic drug, such as bevacizumab, had become clinical use in the treatment for NSCLC. Moreover, discovery of EML4-ALK made the marvelous progress in cancer research in NSCLC. In this review, we discuss about the development of molecular-targeting drugs, such as EGFR-TKI, anti-angiogenetic drug, and EMLA-ALK inhibitors.