环氧化酶-2和p63基因蛋白在食管鳞状细胞癌的表达及其临床意义

目的探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous carcinoma,ESC)组织中COX-2和p63基因蛋白表达与ESC生物学行为的关系。方法应用免疫组织化学方法,检测65例ESC组织中COX-2和p63蛋白表达水平。结果在ESC中COX-2和p63表达阳性率分别为73.8%(48/65)和86.2%(56/65)。COX-2和p63表达均与肿瘤分级、浸润、淋巴结转移和预后相关。结论COX-2和p63异常表达与ESC的病理生物学行为密切相关,可作为预测ESC转移潜能和评估ESC患者预后的客观指标。     

抑癌基因p53与肺癌关系的研究进展

肿瘤抑制基因p53是目前研究最为广泛和系统的抑癌基因之一。野生型p53参与了DNA损伤修复、细胞周期调控、细胞凋亡及抑制血管生成等过程。p53基因的点突变、缺失及灭活在肺癌的发生和进展过程中起着关键性的作用。现综述目前p53基因与肺癌关系的研究进展。     

腺病毒介导的p16和p53的联合应用对胆管癌细胞QBC939的生长抑制作用

为研究p16和p53基因的联合应用对胆管癌细胞的作用,将重组体腺病毒p16、p53、p16联合p53转移到人胆管癌细胞QBC939,对p16、p53基因的表达,细胞的生长抑制及机制进行了分析。RT－PCR显示在胆管癌QBC939细胞系中p16呈低表达,p53不表达,重组体腺病毒能介导p16和p53等外源基因在胆管癌QBC939细胞系中高效表达,两者联合应用能明显抑制QBC939细胞的生长和集落形成。流式细胞计数证实其能诱导,QBC939细胞发生明显半调并导致其发生G1期阻滞,本研究显示p16及p53基因通过诱导肿瘤细胞凋亡及G1期阻滞在肿瘤的基因治疗方面发挥作用,两者联合应用具有协同作用。     

Apak对p53R175H的调控研究

目的 探讨Kruppel相关盒(KRAB)型锌指蛋白Apak对p53R175H的调节功能及机制.方法 报告基因检测Apak对p53R175H的活性调控,实时定量PCR检测Apak对p53R175H下游靶基因的转录水平的调控能力,Western印迹实验检测蛋白的表达.结果 Apak抑制p53175H的转录活性功能与抑制野生型p53(wtp53)的转录活性功能相比被大大减弱,Apak能够下调wtp53相关凋亡基因的水平,而在转染了p53R175H的细胞中,Apak的这种下调功能几乎丧失.结论 Apak对突变型p53R175H失去调控能力.     

转染野生型p53基因介导的HL—60细胞凋亡与p21蛋白表达的关系

目的：探讨野生型p53基因对HL－60细胞的作用机制,并检测p21的表达,探讨二者在白血病中的关系。方法：用脂质体介导的方法将野生型p53基因导入p53基因严重缺失的人髓细胞白血病细胞系HL－60中,用形态学,电镜,流式细胞仪,间接免疫荧光等方法检测p53对HL－60细胞的促凋亡作用及对p21表达的调节作用。结果：野生型p53基因能促进HL－60细胞凋亡及上调p21表达。结论：p21可能在p53促HL－60细胞凋亡中起协同作用。     

辐射联合外源性野生型p53基因对不同p53状态的黑色素瘤细胞系的生物学效应

目的研究辐射结合腺病毒（Ad CMV）载体介导的p53基因转导对不同p53状态的人黑色素瘤细胞系基因转移效率、凋亡和辐射敏感性的影响。方法用复制缺陷的重组腺病毒载体（AdCMV-p53）介导入p53基因转导1Gy X射线预照射的黑色素瘤细胞系A375（wt p53）和WM983a（mu p53），RT-PCR检测mRNA水平，流式细胞仪测定细胞周期阻滞及外源性P53蛋白表达情况，Tunel法检测细胞凋亡，克隆形成率测定辐射后细胞存活率。用携带报道基因的复制缺陷重组腺病毒载体AdCMV-GFP作为对照。结果1Gy X射线照射可较高地增加AdCMV-p53对A375和WM983a细胞系的基因转导效率，转导的外源性野生型p53可在两种细胞中高效表达，并诱导细胞周期G1期阻滞；单纯转导p53对A375（wt p53）细胞无明显诱导凋亡和生长抑制效应，但可部分诱导WM983a（mu p53）细胞凋亡；而转导p53基因48h后给予X射线辐射，两种细胞的克隆存活率较其对照组均明显减低，外源性p53基因对WM983a（mu p53）细胞的辐射增敏作用较A375（wt p53）细胞明显。结论外源性野生型p53基因过表达可增加黑色素瘤细胞系A375和WM983a的辐射敏感性，但对WM983a细胞系的辐射增敏作用高于A375细胞系。表明p53是基因治疗黑色素瘤较好的候选基因。     

中药制剂预防放射性直肠炎37例临床观察

目的 研究野生型p53基因转染卵巢癌SKOV－3细胞对放疗敏感性的影响。方法 用脂质体介导的转染技术，将人野生型p53 cDNA的真核表达重组质粒分别导入受不同剂量放射照射的SKOV－3培养细胞中，观察p53不同状态下对肿瘤细胞放疗敏感性的差异。结果 SKOV－3、SKOV－3－vect及SKOV－3－p53经2Gy照射后，其集落形成数分别下降了18．6％、22．9％及44．5％；经4Gy照射后，其集落形成数分别下降了63．6％、64．9％及88．9％。转染p53基因后，肿瘤细胞S期和G2／M期的比例下降，G1／G0期的比例增加，p53基因的转染使卵巢癌细胞发生G1期阻滞。结论 外源性野生型p53基因的转染，增加了卵巢癌SKOV－3细胞对放疗的敏感性。     

肺癌的早期诊断一CT与p53、p16对比研究

目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)的CT征象与p53、p16基因蛋白异常表达之间的相关性.方法应用免疫组化SABC法检测52例经手术病理证实的周围型非小细胞肺癌(NSCLC)石蜡包埋标本p53、p16基因蛋白表达,并与相应的CT征象作对比研究.结果(1)正常肺组织、癌旁肺组织和肺癌组织中,p53基因蛋白阳性表达率分别为0.0%、45.0%、63.5%;p16基因蛋白阳性表达率分别为85.7%、55.0%、45.0%.(2)CT显示NSCLC肿块轮廓出现深分叶征、棘状突起征,边缘出现短毛刺征组p53蛋白表达率高,p16蛋白表达率低.结论CT征象与p53、p16等分子生物学指标对比观察,有助于提高肺癌的早期诊断水平.     

p53基因治疗恶性肿瘤的现状与趋势

恶性肿瘤的治疗包括手术、放疗、化疗和生物治疗 ,基因治疗是生物治疗的主要内容 ,该领域的研究正方兴未艾 ,p53基因治疗恶性肿瘤越来越受到人们的重视。本文对p53基因的结构和功能以及该基因治疗恶性肿瘤的现状和趋势作一综述。1　p53基因治疗恶性肿瘤的理论依据　　p53基因是     

p53与HBV相互作用对7721细胞凋亡及p21启动子的影响

为了观察HBV与p53是否存在相互作用的关系，以进一步揭示与原发性肝细胞肝癌发生发展的相关机制，选用7721肝癌细胞系（表达野生型p53，HBV阴性）为靶细胞，应用磷酸钙转染法，将pCMVp53单独或者与野生型HBV质粒（pCMVHBVa）、突变型HBV质粒（pCMVHBVb）共转染细胞，用annexin-V-FITC标记及流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。各组另与含有p21基因启动子的荧光素酶报告基因质粒p21-luc共转染细胞，通过检测荧光毒酶的表达，了解p21启动子的活化情况。结果表明，单独的pCMVp53质粒转染7721细胞系能够促进p21报告基因的表达，细胞凋亡率升高；pCMVp53与pCMVHBV。共同转染时，对p21基因启动子的激活作用增强、细胞凋亡率明显增加，而与pCMVHBVb共转染时则否。提示HBV在该细胞内的复制能够诱导增强p53的作用并对其下游基因p21的转录有促进作用，导致细胞凋亡的增强。     

癌基因与涎腺多形性腺瘤相关性研究

 目的探讨涎腺多形性腺瘤与c-erbB-2,H-ras,p53和bcl-2基因的关系.方法采用免疫组织化学染色和HE染色观察21例多形性腺瘤和24例恶性多形性腺瘤癌基因c-erbB-2,H-ras,p53和bcl-2表达情况,分析c-erbB-2,H-ras,p53和bcl-2基因与涎腺多形性腺瘤的相关性.结果c-erbB-2与p53和bcl-2基因呈正相关(P＜0.05),p53与bcl-2基因呈正相关(P＜0.05),多元回归分析结果表明,用c-erbB-2,H-ras,p53和bcl-2基因对涎腺多形性腺瘤进行判别,bcl-2基因意义最显著.结论涎腺多形性腺瘤是多种癌基因共同作用的结果,c-erbB-2,H-ras,p53和bc-2基因可作为良恶性涎腺多形性腺瘤诊断参考指标.     

胃粘膜肠化生组织YNZ22基因杂合缺失及p53基因突变、蛋白表达的研究

为探讨YNZ22基因杂合缺失（LOH）及p53基因突变、蛋白表达在胃粘膜肠上皮化生中的作用,应用PCR－RFLP、PCR－SSCP及免疫组化技术检测了不同类型肠化生组织中YNZ22基因LOH、p53基因素5－8外显子突变及其蛋白表达。结果显示,YNZ22 LOH率为19.4%（6／31）,p53突变率为29.8%(14/47),p53蛋白表达率为10.0%（6/60)。将肠化生分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型,发现Ⅲ型肠化生中p53突变率及其蛋白阳性表达率分别为57.1%(8/14)和27.8%(5/18),无显著高于Ⅰ（18.2%)、Ⅱ型肠化生（2．4％）（均P＜0.05)。p53蛋白表达与p53基因突变显著相关（P＜0.05),YNZ22 LOH与p53突变及蛋白表达无显著相关性（P＞0.05)。提示,YNZ22基因LOH及p53基因异常可能在胃粘膜肠化生的发生及其癌变中起一定作用,p53基因有可能成为胃癌早期诊断的分子指标。     

p53基因在肝细胞癌治疗中的现状与展望

p53基因突变可以引起细胞转化,导致癌变。通过特异性途径及载体人工导入野生型p53基因可以使肿瘤局部高表达野生型p53基因,野生型p53基因具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡的功能,从而达到治疗恶性肿瘤的目的。目前,p53基因治疗肝细胞癌的实验及临床应用也取得了一定的成绩。就p53基因治疗肝细胞癌的现状及进展情况予以综述。     

p53基因与肝癌

p53肿瘤抑制基因突变与多数恶性肿瘤的发生发展有关,包括肝细胞癌(hepatocelluar carcinoma,HCC)在内的人类恶性肿瘤中至少有50%发生了p53基因改变。因此,以正常p53基因治疗肿瘤就成了研究热点,随着介入放射学(inter-ventional radiology)向纵深发展,经介入放射方法进行肝癌的基因治疗令人关注。本文介绍了p53基因的结构与功能,其与肝癌的病理联系以及在肝癌治疗中的应用。     

IKKα通过激活p38 K介导紫外线诱导的p53活化反应

目的：探讨IκB激酶（IκB kinase,IKK）催化亚基α（IKKα）在紫外线（ultraviolet radiation, UV）诱导的细胞反应中介导p53活化的信号转导机制。方法采用双荧光素酶报告基因分析系统检测在UVB诱导细胞反应中p53的转录激活活性。 Western印迹检测IKKα、p53、p38K蛋白表达水平和诱导活化状态。结果 UVB在野生型小鼠成纤维细胞中能显著诱导p53发生磷酸化修饰反应;同时转录激活活性显著提高,IKKα基因敲除后,以上活化反应受到显著抑制,而恢复IKKα表达水平后这种活化反应得以恢复。同样条件下IKKα也能调节p38K的诱导活化,抑制p38K活性显著下调p53的诱导活化水平。结论 IKKα能通过调控p38K活化进而介导UVB诱导p53磷酸化修饰反应。     

E4F1真核表达载体的构建及与p53的相互作用

目的：构建E4 F1野生型及缺失32～81位氨基酸的真核表达载体,检测其与p53的相互作用及对下游基因p53的调节。方法分别用普通PCR和重组PCR方法从乳腺文库中扩增E4F1野生型编码序列及缺失32～81位氨基酸的突变型序列,分别将其以正确相位构建到pXJ40-MYC载体中,得到重组质粒MYC-E4F1和MYC-E4F1（Δ32-81）,分别转化大肠杆菌DH5α,重组质粒经酶切鉴定并转染293 T细胞, Western印迹检测蛋白的表达。将MYC-E4F1和MYC-E4F1（Δ32-81）质粒与FLAG-p53质粒共转染293T 细胞,免疫共沉淀实验检测其相互作用,野生型及缺失突变型表达载体共转染骨肉瘤细胞U2OS,检测其对下游基因p53的调节。结果 E4F1重组质粒及其突变型构建成功,在293 T细胞中鉴定表达正确,野生型及突变型E4 F1均与p53存在相互作用,突变型的结合能力增强,野生型E4F1升高p21蛋白表达水平,而突变型不改变p21蛋白水平。结论成功构建E4F1野生型及缺失32～81位氨基酸的突变型真核表达载体,二者都能与p53相互作用且突变型结合能力更强,野生型E4F1升高基因p53的靶基因p21的蛋白表达水平,而突变型不改变靶基因p21的蛋白水平。该研究为进一步研究E4 F1对p53的调节及其机制奠定了基础。     

周围型肺癌的CT征象与p53基因结构及表达异常的关系

目的探讨周围型肺癌CT表现的分子生物学基础。材料及方法利用免疫组化、PCR-SSCP方法及螺旋CT扫描，分析52例经病理证实的周围型肺癌p53基因结构及表达异常与CT征象之间的关系。结果分叶、细毛刺、棘突、增强值大小及淋巴结转移等征象与p53基因结构及表达异常有关。结论p53基因突变及表达异常在肺癌的发生、发展及CT表现中可能起重要作用，检测该基因可作为临床诊断及预后评估指标。     

p53基因在肝细胞癌治疗中的现状与展望

p53基因突变可以引起细胞转化,导致癌变.通过特异性途径及载体人工导入野生型P53基因可以使肿瘤局部高表达野生型p53基因.野生型p53基因具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡的功能,从而达到治疗恶性肿瘤的目的 .目前,p53基因治疗肝细胞癌的实验及临床应用也取得了一定的成绩.就p53基因治疗肝细胞癌的现状及进展情况予以综述.     

食管反流促进肿瘤发生与抑癌基因mRNA表达的相关性

为研究胃二十指肠食管反流的大鼠诱癌过程中食管组织内p53,p16,p21等抑癌基因的mRNA表达，制作3种食管反流动物模型及对照组，术后均注射致癌剂，用原位杂交法检测术后20，26周时食管组织中p53,p16,p21基因的mRNA表达。结果显示，各反流组食管上皮中p53的mRNA表达均较对照组显著增强，其中十二指肠食管反流组（D组），十二指肠胃食管反流组（DG组）的表达较胃食管反流组（G组）更强，D组与DG组结果相似；D，DG组的p16,p21基因mRNA表达较C组减弱，而G组与C组相比差异无显著性意义。提示胃液及十二指肠内容物反流可改变抑癌基因在转录水平的表达，促进大鼠食管肿瘤的发生，其中十二指肠内容物的作用较强。     

肺腺癌CT征象与p53基因缺失表达相关性研究

目的探讨肺腺癌CT征象与p53基因缺失率间的关系。方法采用荧光原位杂交技术,检测30例经病理证实的肺腺癌的p53基因缺失情况,并回顾性分析其与术前CT征象间的关系。结果 p53基因缺失率与纵隔淋巴结转移相关(P<0.05),与瘤体大小、深分叶征、短毛刺征、棘状突起、癌性空洞、空泡征、胸膜凹陷征等征象无明显相关性(P>0.05)。结论 p53基因缺失率与肺腺癌的恶性程度呈正相关。