三氧化二砷治疗大鼠C6脑胶质瘤的研究

目的：研究三氧化二砷(As₂O₃)体内外抑制脑胶质瘤生长的作用。方法：将不同浓度As₂O₃(1,2,4,6,8 μmol·L^-1)加入体外培养的C6脑胶质瘤，MTT法检测体外细胞增殖率，PCNA染色检测细胞增殖活性、TUNEL法检测原位细胞凋亡和Western印迹检测Bc1-2蛋白表达水平。另将大鼠C6胶质瘤细胞(5×10⁵个/15 μL)种植于雄性SD大鼠右侧尾状核(模型组、治疗组各10只)，治疗组荷载C6脑胶质瘤鼠用前面筛选的浓度(1 mmol·L^-1)实施肿瘤原位治疗，对照组仅注入生理盐水，观察动物一般情况、生存期、MRI动态变化及病理改变。结果：与模型组和低浓度组相比，中、高浓度治疗组C6细胞增殖明显下降(P<0.01)，TUNEL法表明细胞凋亡指数上升(P<0.01)；Western印迹显示凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达水平呈下降趋势。模型组动物均于3周内死亡(17.8±0.92) d；治疗组8只动物死于24～36(32.1±1.35) d；余2只第120天时处死。治疗组MRI检查：4周时扫描的4只动物，1只瘤体有缩小，另3只瘤体变化不大；8～12周时，残存2只动物，1只瘤灶基本消失，1只残存小瘤灶。结论：As₂O₃具有体内外抑制脑恶性胶质瘤生长的作用，有可能成为临床治疗胶质瘤的候选化疗药物之一。     

莪术、三氧化二砷对晶状体上皮细胞增殖及信号转导分子的影响

目的：探讨莪术(RC)、三氧化二砷(As₂O₃)对晶状体上皮细胞(LEC)增殖及细胞信号转导的影响,为防治后发性白内障提供实验依据。方法：采用重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF)诱导牛LEC增殖；四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测RC,As₂O₃对LEC增殖的抑制率；流式细胞术(FCM)检测RC,As₂O₃对LEC增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的抑制作用；荧光分光光度法检测LEC内［Ca²⁺］i、放射免疫分析法检测cAMP和cGMP。结果：RC,As₂O₃对rhbFGF诱导的LEC增殖的抑制率增加(P＜0.01)；明显下调rhbFGF诱导增殖的LEC内PCNA蛋白表达(P＜0.01)；使增殖的LEC内［Ca²⁺］i和cAMP显著增高(P＜0.01),cGMP显著降低(P＜0.01)。上述指标均呈剂量-效应关系。结论：RC,As₂O₃能显著抑制LEC增殖；Ca²⁺,cAMP和cGMP细胞信号转导是其抑制LEC增殖的重要分子机制；RC,As₂O₃对防治后发性白内障具有广阔的前景。     

JAK,PTPs抑制剂钙拮抗剂对As2O3引起的[Ca2+]i变化的影响

 目的　研究蛋白酪氨酸激酶 (JAK)、蛋白酪氨酸磷酸酶 (PTPs)抑制剂和Ca²⁺通道阻滞剂对As₂O₃致人脑皮层神经元和白血病细胞的胞浆 [Ca²⁺]_i变化的影响。方法　Fluo-3/AM荧光探针标记胞浆游离Ca²⁺,激光共聚焦显微镜实时测定不同浓度As₂O₃干预后胞浆[Ca²⁺]_i 的变化及JAK PTPs抑制剂和Ca²⁺通道阻滞剂对As₂O₃引起的胞浆[Ca²⁺]_i 变化的影响。结果　As₂O₃升高胞浆[Ca²⁺]_i,并被Ca²⁺通道阻滞剂不完全抑制。1μmol·L^-1的As₂O₃使NB4胞浆[Ca²⁺]_i明显增高,而对神经元胞浆[Ca²⁺]_i 影响不明显。JAK抑制剂genistein能浓度依赖性抑制As₂O₃触发的[Ca²⁺]_i 升高。给药后 280s的总抑制率均值分别为NB4:(6.7± 2.9)%,(25.6±2.5) %和(52.2±3.5)%;皮层神经元:(7.8±3.1)%,(18.1± 2.8) %和(51.3±3.3)%。结论　As₂O₃对不同细胞的胞浆[Ca²⁺]_i 升高程度不同。JAK,PTPs参与As₂O₃触发的钙池操纵性Ca²⁺内流。Ca²⁺通道阻滞剂参与了As₂O₃触发的电压门控性Ca²⁺内流。     

三氧化二砷对豚鼠心室肌细胞钾电流的影响

 目的研究三氧化二砷(arsen ic trioxide,As₂O₃)对豚鼠心室肌细胞钾电流的影响,旨在探讨As₂O₃诱导QT间期延长的离子靶点。方法酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术深入研究As₂O₃对豚鼠单个心室肌细胞动作电位时程(APD)、延迟整流钾电流(IK)和内向整流钾电流(I_K1)的影响。结果As₂O₃50和100μmol·L^-1分别使APD50从对照组的(273±78)m s增加到(456±35)m s(P<0.01)和(513±41)m s(P<0.01),使APD90从对照组的(286±82)m s增加到(468±36)m s(P<0.01)和(524±40)m s(P<0.01);实验电压为+70 mV时,50和100μmol·L^-1As₂O₃分别使I_K从对照组的(6.7±1.7)pA/pF减少至(4.9±1.6)pA/pF(P<0.05)和(4.5±1.8)pA/pF(P<0.05);在实验电压为-120 mV时,As₂O₃50和100μmol·L^-1分别使IK1从对照组的(-20±5)pA/pF减少至(-13±3)pA/pF(P<0.05)和(-11±2)pA/pF(P<0.05)。结论As₂O₃诱导QT间期延长的离子机制可能与其扰乱了心肌细胞膜离子通道间的平衡,抑制I_K和I_K1,从而导致APD延长有关。     

桂皮醛对NIH3T3细胞周期及相关蛋白表达的影响

目的：观察肉桂主要成分桂皮醛对小鼠成纤维瘤细胞株NIH3T3细胞周期及相关蛋白的影响。方法：采用流式细胞仪检测桂皮醛(5.5 ng ·mL^-1)对NIH3T3细胞周期分布的影响；用免疫细胞化学法检测桂皮醛对NIH3T3细胞的细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和增殖细胞核抗 原(PCNA)蛋白表达的影响。结果：流式细胞仪检测显示,桂皮醛作用24 h后NIH3T3细胞S期比例上升了3%(P<0.05),G₂/M期比 例无明显升高,细胞增殖指数(PrI)增加了3.5%(P<0.01)。经桂皮醛刺激后,NIH3T3细胞Cyclin D1和PCNA蛋白表达量明显增加,与对照组 比较,有极显著差异(P<0.01)。结论：桂皮醛可推动NIH3T3细胞周期向前进展,这种正向调控作用与桂皮醛能促进Cyclin D1和PCNA蛋白 表达有关。     

神经节苷脂对染砷人脑皮层神经元的保护作用

 目的研究神经节苷脂对As2O3体外干预的皮质神经元的保护作用及可能机制。方法将人原代脑皮质神经细胞分为 5组,空白对照组、5 μmol·L^-1 As₂O₃干预组和5μmol·L^-1 As₂O₃加神经节苷脂50,100,200 μg·L^-1组,Fluo-3/AM荧光探针标记皮质神经元胞浆钙([Ca²⁺]i),激光共聚焦显微镜实时测定[Ca²⁺]_i的变化。磷基转移法测定细胞膜和胞浆的蛋白激酶C(PKC) 的活性。流式细胞仪检测细胞凋亡百分比。结果 5 μol·L^-1的As₂O₃,作用3 min,[Ca²⁺]_i开始升高,并随时间延长逐渐明显,As₂O₃加神经节苷脂200 μg·L^-1,作用9 min,[Ca²⁺]i才开始升高,且程度远没有As2O3组明显。5 μmol·L^-1的As₂O₃组的 PKC活化程度明显高于As₂O₃加神经节苷脂组,以细胞膜相明显。24 h凋亡率分别为:As₂O₃组78.5%,As₂O₃加神经节苷脂 200μg·L^-1组13.5%。结论神经节苷脂抑制As₂O₃引起的皮质神经元的[Ca²⁺]i升高和PKC活化,抑制细胞凋亡。并通过对细胞膜靶点的保护来实现对神经细胞的保护作用,这进一步证明砷剂最初的作用靶点是细胞膜。     

知母总皂苷对β淀粉样蛋白诱导的PC12细胞Bcl-2表达的影响

目的: 观察知母总皂苷对β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)Aβ_25-35诱导的PC12细胞中抗凋亡基因Bcl-2表达的影 响。方法: 培养PC12细胞,分为6组:正常组、模型组、知母低、中、高剂量组、盐酸多奈哌齐组。模型组加入终浓度为20 μmol·L^-1 Aβ_25-35 的培养基,作用48 h;知母低、中、高剂量组和盐酸多奈哌齐分别加入含有低、中、高剂量知母总皂苷 (5,10,20 mg·L^-1) 及盐酸多奈哌齐(1 μmol·L^-1)和Aβ_25-35(终浓度为20 μmol·L^-1)的培养基共同作用于PC12细胞48 h。然后采用MTT检测各组细胞活力的变化;采用RT-PCR检测各组细胞中Bcl-2的mRNA表达变化;采用Western blotting技术检测各组细胞中Bcl-2蛋白的表达变化。结果: 和正常组比较,模型组细胞活力降低(P<0.01);和模型组比较,高、中、低剂量知母总皂苷能显著升高PC12细胞活力(P<0.05);和正常组比较(0.476±0.072,0.14±0.02),模型组抗凋亡基因Bcl-2的mRNA(0.316±0.026)和蛋白(0.08±0.01)表达水平降低(P<0.01);和模型组比较,高、中、低剂量知母总皂苷能显著性升高抗凋亡基因Bcl-2的mRNA(0.447±0.016,0.465±0.043,0.472±0.023)和蛋白(0.17±0.01,0.19±0.02,0.13±0.01)的表达水平(P<0.05)。结论: 知母总皂苷能升高Aβ_25-35诱导的PC12细胞的活力降低,其机制可能是升高Bcl-2的表达水平。     

As2O3 不同给药方式对 NB4 细胞侵袭力和 MMPs 活性的影响

 目的 对比 As₂O₃ 不同干预方式对白血病细胞株 NB4 的侵袭力和基质金属蛋白酶 2,9(MMP-2 、 MMP-9) 活性的影响。 方法 噻唑蓝（ MTT ）法检测 As₂O₃ 恒定和变化两种体系体外干预对 NB4 细胞的增殖抑制, ELISA 检测 2 种体系中处理的 NB4 细胞的 MMP-2 和 MMP-9 蛋白含量的变化。明胶酶谱法检测 2 种 As₂O₃ 处理前后 NB4 细胞 MMP-2 活性变化, Westen blot 检测活性 MMP-9 蛋白表达, Transwell 小室穿透实验检测两种 As₂O₃ 处理方式对 NB4 细胞穿透力的影响。 结果 ①与平行对照组比较 0.1 μmol·L^-1 As₂O₃ 恒定浓度体系中持续作用 72 h ,对 MMP-2 、 MMP-9 的活性和 NB4 细胞侵袭力影响不显著。 0.5 μmol·L^-1 As₂O₃ 持续作用 24 h 与对照组比较无明显差异, 48 h 以后 MMP-2 、 MMP-9 的活性和 NB4 侵袭力降低,与对照组比较差异显著。 1.0 μmol·L^-1 以上浓度 As₂O₃ 处理 24 h , MMP-2 、 MMP-9 活性和 NB4 细胞侵袭力下降,并呈时间依赖性。② 2.0 μmol·L^-1 As₂O₃ 恒定浓度体系与峰浓度为 5.0 μmol·L^-1 ,终质量浓度为 0 μmol·L^-1 的变化浓度体系比较,前者对 NB4 的侵袭力和 MMPs 活性的抑制程度比后者更显著。 结论 NB4 细胞的侵袭力与其 MMP-2 、 MMP-9 活性有关,促分化有效的低浓度 As₂O₃ 对 NB4 细胞侵袭力和 MMP-2 、 MMP-9 活性抑制作用不明显。在干预时间相同的情况下,促凋亡有效的恒定浓度 As₂O₃ 持续作用,对 NB4 细胞侵袭力和 MMP-2 、 MMP-9 活性的抑制强度大于峰浓度很高但持续时间很短的变化浓度体系 , 这可能是临床上 As₂O₃ 持续缓慢输注法较常规给药法更能有效降低急性早幼粒细胞白血病（ APL ）中枢神经系统浸润和早期的致死性脑出血发生率的机制之一。     

莫诺苷抑制H2O2诱导的神经细胞凋亡

目的：研究莫诺苷对氧化应急诱导的神经细胞凋亡的影响。方法：培养的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)神经细胞加入莫诺苷(1,10,100 μmol·L^-1)预孵育24 h，加入H₂O₂(500 μmol·L^-1) 作用18 h诱导产生氧化损伤，测定对细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响；用Western blot方法检测caspase-3,caspase- 9，Bcl-2和Bax的表达。结果：莫诺苷(10,100 μmol·L^-1)抑制氧化损伤，与模型组相比，SOD活性分别增加了14%(P<0.01)和11%(P<0.05)；莫诺苷(1,10,100 μmol·L^-1) 与模型组相比，caspase-3的含量分别减少了31%(P<0.01)，103%(P<0.001)和95%(P<0.001)，caspase-9的含量分别减少了71%(P<0.001)，132%(P<0.001)和37%(P<0.05)，Bcl-2分别增加了88%(P<0.01),121%(P<0.001)和60%(P<0.01)，对Bax没有影响。结论：莫诺苷可通过抗氧化作用抑制H₂O₂诱导的神经细胞凋亡，具有神经保护作用。     

淫羊藿总黄酮注射液对大鼠乳鼠心肌细胞内氧化还原状态的干预

 目的观察H₂O₂作用下乳鼠心肌细胞早期凋亡和细胞内氧化还原状态的改变及淫羊藿总黄酮注射液(epimedium flavonoids injection,EFI)的干预作用。方法体外培养大鼠乳鼠心肌细胞,复制H₂O₂损伤模型,流式细胞仪检测心肌细胞早期凋亡和活性氧水平,测定心肌细胞内总抗氧化能力,免疫印迹法检测心肌细胞硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,100μmol·L^-1H₂O₂作用12h后心肌细胞早期凋亡率显著增高(P<0.001);心肌细胞平均荧光强度(MFI)明显上升(P<0.01);总抗氧化能力显著下降(P<0.01或P<0.05);Trx和SOD蛋白表达减少。EFI可剂量依赖性降低心肌细胞早期凋亡率和MFI、升高总抗氧化能力、Trx和SOD蛋白表达增加,与H₂O₂作用组比较,200和400mg·L^-1EFI组差异显著(P<0.05或P<0.01)。结论H₂O₂可诱导心肌细胞早期凋亡,促使心肌细胞处于氧化状态;EFI可促使心肌细胞处于还原状态,对H₂O₂诱导的心肌细胞损伤具有保护作用。     

三氧化二砷对豚鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度的影响

 目的 研究三氧化二砷(As₂O₃)对豚鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度的影响。方法Fluo-3／AM荧光探针标记豚鼠心室肌细胞游离钙离子,激光共聚焦显微镜实时测定不同浓度As₂O₃干预5 min后心室肌细胞的胞浆钙的变化。不同剂量的As₂O₃对正常台氏液中的豚鼠心肌细胞体外浓度递减性干预13 h后心肌细胞DNA片断化的情况。结果 不同浓度As₂O₃对心室肌细胞的胞浆钙影响不同。在正常台氏液中,低浓度As₂O₃引起一过性钙增高,高浓度的As₂O₃引起持续钙增高,并被钙通道阻滞剂维拉帕米不完全阻断。在无钙台氏液中,低浓度As₂O₃对胞浆钙无影响,高浓度的As₂O₃引起持续钙增高。10μmol·L^-1的As₂O₃体外浓度递减性干预13 h后,豚鼠心肌细胞发生DNA的片断化。低于10μmol·L^-1的As₂O₃体外浓度递减性干预13 h后,心肌细胞无明显的DNA片断化。结论 As₂O₃影响细胞外钙内流和细胞内钙库释放,导致心肌细胞内的游离钙升高,其机制可能有电压依赖性钙通道参与。低浓度引起胞内一过性钙升高;高浓度导致胞内持续性钙升高。后者可能是As₂O₃诱导细胞凋亡的机制之一。     

益气化瘀法对体外培养子宫肌瘤细胞增殖凋亡相关蛋白表达影响的研究

目的:研究具有益气化瘀功效的中药复方化瘤方对体外培养子宫肌瘤细胞增殖相关蛋白(PCNA)、凋亡相关蛋白(Bcl-2、Fas/Fas-L)表达的影响。方法:制备化瘤方、宫瘤宁、米非司酮药物血清,采用免疫细胞化学方法检测药物作用后增殖细胞核抗原(PCNA),凋亡相关基因(Bcl-2)蛋白、Fas及其配体Fas-L变化。结果:3种药物血清均能明显下调PCNA、Bcl-2、Fas及其配体Fas-L蛋白在肌瘤细胞中的表达(P<0.001)。结论:中药复方化瘤方通过降低PCNA蛋白表达,直接抑制子宫肌瘤细胞增殖;调节Bcl-2、Fas-L蛋白表达诱导子宫肌瘤细胞凋亡。     

疏血通脉胶囊含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响

目的:探讨疏血通脉胶囊含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)凋亡的影响以及作用机制。方法:体外培养大鼠BMSCs,以不同浓度双氧水(H2O2)诱导BMSCs凋亡,取最适宜浓度1.0 mmol·L~(-1)用于实验。疏血通脉胶囊低、中、高剂量(含生药1.81,3.62,7.24 g·kg~(-1))灌胃给药制备大鼠含药血清。选择第3代BMSCs,随机分正常组(不做处理,加入体积分数为15%正常大鼠血清培养液),模型组(H2O2诱导细胞凋亡,加入体积分数为15%正常大鼠血清培养液)和疏血通脉胶囊低、中、高剂量含药血清组(H2O2诱导细胞凋亡,分别加入对应剂量、体积分数为15%的疏血通脉胶囊含药血清培养液),共5组,作用24 h后噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞相对存活率,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)mRNA的表达。结果:H2O2能体外模拟缺血缺氧环境诱导BMSCs凋亡。MTT结果显示疏血通脉胶囊低、中、高剂量含药血清组细胞存活率较模型组有明显提高(P0.01),且存活率随剂量增加而增高(P0.05);Annexin V-FITC/PI流式细胞术结果显示疏血通脉胶囊含药血清可以降低H2O2诱导的BMSCs凋亡率(P0.01)。Real-time PCR结果显示H2O2诱导可以增加BMSCs的Caspase-3 mRNA表达,降低Bcl-2 mRNA表达。疏血通脉胶囊含药血清处理下调了Caspase-3 mRNA的表达(P0.01),上调了Bcl-2 mRNA的表达(P0.01)。结论:疏血通脉胶囊含药血清可通过上调Bcl-2基因表达,负性调控Caspase-3基因,从而抑制H2O2导致的BMSCs凋亡。     

黄酮醇类化合物对心肌细胞凋亡过程caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达影响

 目的研究槲皮素、杨梅素、桑色素和芦丁对大鼠心肌细胞凋亡的保护作用。方法体外培养Wistar乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞凋亡模型;随机分组:正常组,损伤组和用药组。用药组分别加入30μmol·L^-1的4种黄酮醇类化合物,孵育1h后,除正常组之外,加入H₂O₂诱导细胞凋亡。加入不同浓度的药物后,采用MTT法观察细胞存活情况,来进行药物有效浓度的筛选。采用TUNEL、流式细胞仪法检测心肌细胞凋亡情况,免疫组化法检测caspase-3蛋白、Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果MTT结果显示,4种黄酮醇类在5和30μmol·L^-1时对细胞没有毒性。4种黄酮醇类化合物与损伤组比较,槲皮素、杨梅素、桑色素的心肌细胞凋亡率降低、Bcl-2/Bax比值增大、抑制caspase-3蛋白的活化。结论槲皮素、杨梅素和桑色素对心肌细胞凋亡有保护作用,可以通过抑制caspase-3蛋白的活化、上调Bcl-2蛋白的表达或是降低Bax的表达来发挥作用,槲皮素表现出较强的抗凋亡活性。     

莪术醇联合5-氟尿嘧啶对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨莪术醇(curcumol)联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对大肠癌Lo Vo细胞增殖和凋亡作用的影响,以及药物处理后,Lo Vo细胞中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)表达量的变化情况。方法:莪术醇(50 mg·L-1)单独或联合5-Fu(2 mg·L-1)作用大肠癌Lo Vo细胞,用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组药物对细胞增殖的抑制作用,采用流式细胞术分析各组对细胞凋亡作用的影响,应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中,增殖和凋亡相关蛋白PCNA,Bcl-2蛋白表达的变化情况。结果:与空白组比较,莪术醇,5-Fu单独给药以及联合用药,均可以有效抑制大肠癌Lo Vo细胞的增殖,促进细胞凋亡(P0.05),同时可以降低PCNA,Bcl-2蛋白的表达(P0.05);与单独给药组比较,联合用药后,凋亡的促进作用更为明显(P0.05)。与空白组比较,各药物组可以更有效的抑制PCNA,Bcl-2蛋白的表达(P0.05)。结论:莪术醇联合5-氟尿嘧啶能有效抑制人大肠癌Lo Vo细胞的增殖和凋亡,与单独用药组比较,联合用药可以使癌细胞的敏感性增强,极大程度的促进人大肠癌Lo Vo细胞凋亡,且这些机制可能与下调PCNA,Bcl-2蛋白表达有关。     

清燥救肺汤对肺癌JAK2/STAT3信号通路及其下游凋亡相关蛋白表达的影响

目的:观察清燥救肺汤对肺癌细胞凋亡和Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录活化因子3(STAT3)信号通路及其下游凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax),细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达的影响。方法:雄性C57BL/6J小鼠50只,随机分为环磷酰胺(CTX)组,模型组,清燥救肺汤高、中、低剂量组,共5组,每组10只。在小鼠右腋下注射Lewis肺癌细胞建立肺癌荷瘤模型,清燥救肺汤高、中、低剂量组分别以清燥救肺汤11,5.5,2.75 g·kg^-1·d^-1,造模前2周开始灌胃给药,CTX组以CTX 50 mg·kg^-1·(2 d)-1腹腔注射给药,模型组以等体积的生理盐水灌胃给药,接种后继续给药,2周后处死各组小鼠并取瘤组织;免疫组化法(IHC)检测肺癌组织JAK2蛋白磷酸化水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测STAT3,Bax,Cyclin D1的表达;透射电镜(TEM)观察肺癌细胞的凋亡情况。结果:与模型组比较,清燥救肺汤高、中剂量组,CTX组肺癌细胞JAK2,STAT3蛋白磷酸化水平明显降低,Bax蛋白表达明显升高,Cyclin D1蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。透射电镜结果显示,与模型组比较,清燥救肺汤高、中、低剂量组和CTX组均出现显著的凋亡现象。结论:清燥救肺汤能明显促进肺癌细胞凋亡,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路,上调其下游Bax蛋白表达,下调其下游Cyclin D1蛋白表达有关。     

甘草苷对中波紫外线诱导人皮肤角质形成细胞凋亡的影响

目的:研究甘草苷对中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞(Ha Ca T)凋亡的影响。方法:以不同浓度的甘草苷作用于Ha Ca T细胞,噻唑蓝(MTT)比色法筛选甘草苷的有效安全浓度;用30 m J·cm-2的UVB作用于Ha Ca T细胞,建立光老化模型,MTT比色法检测光老化Ha Ca T细胞增殖率;流式细胞术检测各组细胞中活性氧自由基(ROS)含量和总凋亡率;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测光老化Ha Ca T细胞中半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3),半胱氨酸天冬氨酸-9(Caspase-9)mRNA表达水平;蛋白免疫印记法(Western blot)检测光老化Ha Ca T细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量。结果:筛选出甘草苷的最佳有效安全浓度为1×10-7,1×10-6,1×10-5mol·L-1。与空白组比较,UVB组细胞增殖率显著降低(P0.01),细胞中ROS含量和总凋亡率显著升高(P0.01),Caspase-3,Caspase-9 mRNA表达水平显著升高(P0.01);Bcl-2蛋白表达量显著降低(P0.01),Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量显著升高(P0.01)。与UVB组比较,1×10-7,1×10-6,1×10-5mol·L-1甘草苷+UVB组细胞增殖率显著升高(P0.01);细胞中ROS含量和总凋亡率显著降低(P0.05,P0.01),Caspase-3,Caspase-9 mRNA表达水平显著降低(P0.05,P0.01);Bcl-2蛋白表达量显著升高(P0.05,P0.01),Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量显著降低(P0.05,P0.01)。结论:甘草苷能通过促进抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,减少促凋亡相关细胞因子Caspase-3,Caspase-9 mRNA和蛋白的表达,从而抑制UVB诱导的Ha Ca T细胞凋亡。