胃癌高发区人群幽门螺杆菌感染与慢性萎缩性胃炎病变分布的关系

目的研究幽门螺杆菌(H.pylori)感染与慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)在胃内分布范围的关系。方法1989—1990年,采用整群随机抽样方法,对胃癌高发区山东省临朐县35~64岁人群中的3400人进行横断面研究。在全部受检者的胃体、胃角和胃窦等部位取7块黏膜组织标本进行病理诊断。采用酶联免疫(ELISA)方法检测其血清中H.pylori抗体,分析H.pylori感染与CAG病变在胃内分布和弥漫程度的关系。结果在1428例CAG患者中,H.pylori血清抗体阳性801人(56.1%),其中CAG病变在胃内呈弥漫分布(胃体、胃角和胃窦三部位均受累及)的比例为52.2%(745/1428),明显高于未感染人群(36.2%,714/1972,P<0.0001)。调整性别、年龄后,以CAG局限性分布(累及胃体、胃角和胃窦中的任一部位)为参照,H.pylori感染阳性人群发生弥漫性CAG的相对危险度为3.2(95%CI:2.4~4.4)。结论在山东临朐县胃癌高发人群中CAG病变多呈弥漫性分布,其比例在H.pylori感染人群中显著高于未感染人群。提示H.pylori感染在CAG由局限性分布发展成弥漫性分布的过程中起重要作用。     

两种样品制备方法对血清蛋白质双向凝胶电泳分离效果的影响

目的 评价两种样品制备方法对血清蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)分离效果的影响,建立高分辨率、高重复性的血清2-DE图谱,为鉴定疾病相关血清蛋白质奠定基础.方法 分别用热SDS法和直接溶解法处理大肠癌血清样品,采用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离总蛋白质,图像软件分析后,对其中3个差异蛋白质点行基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱鉴定.结果 应用热SDS法处理血清总蛋白质进行双向电泳,可获得分辨率高、重复性好的人血清双向电泳图谱.对直接溶解和热SDS法处理的蛋白样品进行3次重复性检测,凝胶的平均蛋白质点数为675±46和702±49,平均匹配点数为573±42和623±52,匹配率为85.3%和89.6%,分析3块不同胶间蛋白质点在IEF方向的位置偏差为(0.85±0.30)mm和(0.81±0.28)mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为(1.02±0.18)mm和(0.97±0.12)mm.热SDS处理的2-DE胶蛋白质点质谱可获得高质量质谱图,并可以检测到相对低丰度的血清蛋白质.结论 热SDS法是一种更有效的血清蛋白质样品制备方法,我们利用热SDS法处理血清样品建立了分辨率较高且重复性好的人血清蛋白质双向凝胶电泳图谱.     

食管癌淋巴结转移的蛋白质组学

目的:对河南省林州地区食管癌高发区食管鳞癌患者(食管癌组)和健康人血清(对照组)蛋白质组进行比较研究,确立食管癌的蛋白质指纹诊断模型,并筛选与食管癌淋巴结转移相关的蛋白质.方法:采用IMAC3芯片及表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)检测61例食管癌患者和50例健康人血清,用Bio-Marker Wizard软件对芯片检测得到的蛋白质相对含量进行处理及方差分析.并对25例发生淋巴结转移的食管癌患者(转移组),36例无淋巴结转移患者(未转移组)与对照组进行了对比分析.结果:以相对分子质量(Mr)为9 439.58、6 627.21、2 867.65、4 494.08、7 762.68、6 835.32、4 095.94 7种蛋白质组建立的决策树模型,对食管癌测试的准确率、敏感度和特异度分别为85.6%、88.5%和82.0%.转移组、未转移组与对照组3组相比,有15种蛋白差异有统计学意义.其中转移组和未转移组相比有2种蛋白差异有统计学意义(Mr分别为11 742.48、9 294.44).结论:以上述7种蛋白质建立的诊断模型用于食管癌的诊断,具有较高灵敏度和特异度;筛选出2种与食管癌转移密切相关蛋白质,后者为进一步建立食管癌转移相关肿瘤标志物提供了重要线索.     

结核病患者血清蛋白质/多肽谱的初步研究

目的 了解结核病患者血清蛋白质/多肽的表达,为新型结核病血清学诊断方法的研究提供基础依据.方法 (1)应用WCX蛋白质芯片和表面增强激光解析-电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术对99例肺结核患者和18例肺外结核患者进行了血清蛋白质/多肽谱检测,采用ClinProTools分析软件进行比较分析.(2)以"结核"、"双向电泳"、"表面增强激光解析-电离飞行时间质谱"、"血清学"、"蛋白质组学"及相应英文为检索词在万方医学数据库、PUBMED中检索中、外文献进行文献复习.结果 WCX蛋白质芯片从血清中捕获到99种蛋白质/多肽,其中m/z为5 753.76的蛋白质在肺结核与肺外结核两组间差异有显著性,在肺外结核患者血清中表达上调,其平均质谱峰面积在肺结核患者和肺外结核患者中分别为15.42±4.86、28.29±14.08.结论 结核病的发生可产生大致相同的血清蛋白质/多肽谱,在不同类型结核结核病患者血清中可以找到共同的血清学诊断标志物.     

基于液相色谱-质谱联用的血清代谢组学在中医上火研究中的应用

[目的]利用代谢组学表征上火人群血清代谢组的特异性变化,为进一步探索上火的发病机制提供参考依据。[方法]采集30例上火和24例非上火人群血清样本,采用液相色谱-质谱联用(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)技术对血清中代谢物进行检测,并结合正交信号校正-偏最小二乘法判别分析(orthogonal signal correction-partial least squares discriminant analysis,OSC-PLS DA)和t检验挖掘上火后发生显著变化的血清代谢物,进一步进行结构鉴定,解释上火状态下的人体代谢变化的病理生理机制。[结果]结合单变量和多变量统计分析手段筛选出上火与非上火人群中存在显著差异的代谢物,部分代谢物结构已经确认,主要是脂类物质,包括2种磷脂酰胆碱(34:1和38:7)、2种溶血磷脂酰胆碱(18:1和16:0)、1种磷脂酰乙醇胺(34:2)、1种溶血磷脂酰乙醇胺(18:2)、2种鞘脂(44:2和40:2)、1种甘油三酯(53:3)及胆红素等。[结论]利用LC-MS技术从整体水平上探讨上火人群血清代谢谱的变化,发现多种脂质和胆红素有一定程度地下降,可能与上火人群体内炎性反应和氧化应激的发生有关。     

肝癌高发区高危人群HBsAg阴转随访观察

目的 :了解广西肝癌高发区高危人群 HBs Ag阴转情况。方法 :在广西肝癌高发区筛查高危人群 ,采用放射免疫法 (RIA)检测血清 HBs Ag,2年后随访复查。结果 :肝癌高危人群 HBs Ag年阴转率为 3.0 % ,在该人群中 HBs Ag年阴转率的年龄分布为低年龄组 (2 5～ 2 9岁 )和高年龄组 (5 0～ 5 4岁 )较高 ,中间各年龄组较低 ,除了 4 0岁组与 5 0岁组之间差异有统计学意义外(χ2 =3.87,P <0 .0 5 ) ,各年龄组之间差异无统计学意义。结论 :肝癌高危人群 HBs Ag阴转率不高 ,该人群 HBs Ag转阴率存在一定的年龄差异     

双向电泳联合串联质谱技术筛查人胃癌血清蛋白质标记物

目的:通过血清蛋白质组学技术寻找胃癌标记物,是目前肿瘤研究的热点.文中比较胃癌患者与正常人血清蛋白质的差异,以寻找候选血清标记物. 方法:①随机选取20例胃癌患者(胃癌组)血清,pTNM分期(Ⅰ～Ⅳ期)各5例,10例正常人(对照组)血清作对照.②血清样品处理:通过蛋白亲和柱去除血清清蛋白和IgG两种高丰度蛋白.③通过双向电泳进行差异比较,利用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI/TOF/TOF/MS)鉴定差异蛋白点.④利用免疫印记方法对筛选的标记物蛋白质进行验证. 结果:发现胃癌患者较正常人存在多个蛋白质点差异,差异蛋白质点质谱鉴定结果显示,补体 C4-B 前体在胃癌血清中含量明显增高;补体因子Ⅰ前体和血清结合珠蛋白前体则含量显著降低(P＜0.01). 结论:利用血清蛋白质组学技术可筛选出胃癌血清蛋白标记物,为胃癌的血清学诊断提供依据.     

双向电泳分离技术的比较和优化

目的:比较优化人血清蛋白双向电泳(2-DE)分离技术,提高2-DE对血清蛋白的分辨能力.方法:收集健康人群标本,分别进行多次双向电泳,比较高丰度蛋白的去除前后及传统的考马斯亮蓝染色和SYPRO-ruby荧光染色两种不同的染色方法等因素对双向电泳图谱质量的影响.结果:考马斯亮蓝染色和SYPRO-ruby荧光染色相比,血清2-DE图谱检测到平均蛋白质点数分别是(324±25)(n=3)和(785±30)(n=3);去除高丰度蛋白前后比较,未做处理的血清、去除蛋白和IgG血清的2-DE图谱检测到平均蛋白点数分别是(501±25)(n=3)和(813±22)(n=3).结论:去除高丰度蛋白并结合SYPRO-ruby荧光染色可以大大提高血清低丰度蛋白的解析能力.此方法优化了血清蛋白质2-DE技术,为进一步开展疾病血清蛋白质组研究奠定了基础.     

蛋白质芯片筛选儿童急性淋巴细胞白血病血清标志蛋白质的临床研究

目的 利用蛋白质芯片和生物信息学方法从急性淋巴细胞白血病(ALL)息儿血清中筛选标志蛋白质,为临床提供分子诊断学方法.方法 采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术和弱阳离子交换(WCX2)蛋白质芯片对44例ALL初诊患儿血清和35例健康儿童血清的蛋白质谱图进行检测,使用PBSII-C型蛋白质芯片阅读机读取数据,获得的结果采用Ciphergen公司的Biomarker Wizard和Biomarker Patterns System软件分析.结果 ALL初诊患儿与正常儿童血清蛋白质谱相比有7个显著差异蛋白质(P＜0.00001),其中3个蛋白质在患儿血清中高表达,4个蛋白质低表达.Biomarker Patterns system软件用上述标志分子建立儿童ALL诊断的分类树模型,检测灵敏度为88.6%(39/44).特异性为82.9%(29/35).结论 实验证明利用蛋白质组学和生物信息学方法可以从血清中筛选出儿童ALL相关的标志蛋白质.而且蛋白质芯片技术对于发现和筛选血清中的ALL标志蛋白质是一种有效、快速的工具.     

胃癌癌前病变、病变转化及影响因素的研究

1989年以来,我们在胃癌高发区山东省临朐县有代表性人群共3400人中进行了胃癌癌前病变、病变转化及影响因素的研究。研究结果表明: 1.当地中年以上居民中慢性萎缩性胃炎(CAG)患病十分普遍,其中有50％的人伴有肠上皮化生(IM),20％的人伴有异型性增生(DYS)。男性中DYS较女性高60％,随年龄增长.IM检出率逐渐增高。多数DYS发生在IM病变中。     

河南贲门癌高、低发区人群贲门粘膜组织活检结果分析

目的：通过贲门癌高、低发区1975例无症状居民普查，进一步了解贲门上皮病变的特征及其与性别、年龄的关系，加深对贲门癌变多阶段演进的形态学变化特征的了解。方法：对食管癌高发区1006无症状居民，低发区208无症状居民进行纷纷内镜检查、粘膜活检和组织病理检查。结果：高发区1006例活检标本中，共发现9例早期贲门腺癌患者（GCA，0．9％），33例间变患者（DYS，3．3％），102例慢性萎缩性贲门炎患者（CAG，10．1％）和269例慢性浅表性贲门炎患者（CSG，26．7％），以及593例正常贲门上皮（NOR，58．9％）。9例早期GCA均发生在男性，间变患者男性明显高于女性；低发区：208例普查对象中，未发现早期GCA，但发现2例DYS（1．0％），7例CAG（3．4％），118例CSG（56．7％）和81例正常贲门上皮（38．9％）。男性CAG较女性常见，2例DYS中，男女各1例。结论：贲门癌高发区居民GCA、DYS、CAG的发现率明显高于低发区，进一步证实贲门癌的地域性分布特征，提示DYS和CAG是贲门癌重要的癌前病变。     

SELDI-TOF-MS技术在贲门癌诊断中的初步研究

目的寻找贲门癌肿瘤标记物并建立诊断模型。筛选提示发生淋巴转移的差异蛋白,为临床早期诊断贲门癌及判断预后提供新方法。方法 CM10蛋白芯片结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)检测101例贲门癌患者及118例正常对照者血清蛋白,Biomarker Wizard软件和Biomarker Patterns System(BPS)分析得差异蛋白并建立贲门癌诊断分类树,双盲法验证其准确性。进一步分析对比有、无淋巴转移的贲门癌患者血清蛋白指纹图谱,得到差异蛋白。结果对照分析贲门癌患者和正常对照组的血清蛋白指纹图谱得56个差异蛋白(P<0.05),经BPS软件筛选,以质荷比为5 480.49(P<10-8)的蛋白为主根结点建立贲门癌诊断模型,其灵敏度为95.05%,特异度为95.76%。得到可提示淋巴转移的差异蛋白3 820.87(P<0.05),其灵敏度为84.4%,特异度为82.1%。结论 SELDI-TOF-MS技术可建立有较高灵敏度和特异度的贲门癌诊断模型,筛选出能够提示发生淋巴转移的差异蛋白,有助于贲门癌的早期筛查、诊断和预后判断。     

河南食管癌高发区居民食管和贲门上皮癌变过程中G-erbB2和c-myc表达的变化

目的：探讨河南食管癌高发区居民食管和贲门上皮癌变过程中C-erbB2和c-myc的表达变化特征及其与病变的关系。方法：采用纤维内镜活检、组织病理学和免疫组织化学方法，对84例无症状人群食管和贲门粘膜活检组织以及30例食管鳞癌患者和30例贲门腺癌患者的癌组织进行C-erbB2和c-myc的表达变化以及病理学的研究。结果：58例食管粘膜活检组织中，共检出16例正常食管上皮，34例基底细胞过度增生（BCH）和8例间变（DYS）；26例贲门活检组织中，共检出7例正常，6例慢性浅表性胃炎（CSG），10例慢性萎缩性胃炎（CAG）和3例DYS。食管正常组织，BCH和DYS组织均未发现C-erbB2阳性反应，但鳞状细胞癌（SCC）组织C-erbB2阳性率为50％；食管上皮各级病变组织均出现不同程度的c-myc免疫阳性率均出现明显的升高，其中间变组织阳性率最高，而卉门癌组织中其阳性率略低于间变组织。结论：c-myc过度表达是食管和贲门癌变过程中频发的分子事件，并与病变进展密切相关。C-erbB2过度表达与贲门上皮癌变密切相关，并可能是食管癌变晚期的重要分子事件。     

应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱筛选大肠癌血清特异标志物

目的 采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测大肠癌患者与健康对照者血清中蛋白的差异,为大肠癌的早期诊断提供理论依据.方法 应用SELDI-TOF-MS技术及弱阳离子蛋白质芯片(WCX2)检测36例健康成人(对照组)和36例大肠癌患者(大肠组)血清中蛋白含量.结果 在质荷比为2 000Da～30 000Da的范围内,两组样本检测到了对照组82个蛋白峰.其中3 604.240 Da蛋白峰大肠癌组明显高于对照组(P＜0.05),而12 861.368 Da的蛋白峰对照组明显高于大肠癌组(P＜0.05).利用这两个蛋白筛查大肠癌的特异度为86.11%(31/36),敏感度为77.78%(28,36),阳性预测值为87.5%.结论 质荷比为3 604.240 Da与12 861.368 Da的两个蛋白峰可以作为大肠癌早期诊断的备选标志物.     

采用血清蛋白指纹图谱技术筛选食管鳞状细胞癌特异相关性蛋白的研究

目的应用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术检测食管鳞状细胞癌患者血清蛋白指纹图谱,筛选候选肿瘤标志物并建立诊断模型,初步探讨所建的诊断模型在食管鳞癌诊断中的临床意义。方法144例经手术后病理证实的食管鳞状细胞癌患者和50例健康人血清,用SELDI—TOF—MS检测各血清标本获得血清蛋白指纹图谱。用Biomarker Wizard筛选差异峰。扩大样本量,采用SPSS12．0中ROC曲线分析入选差异峰用于食管癌诊断的灵敏度和特异性。结果在分子量1500～30000范围内,共检测到93个蛋白峰,其中10个差异峰有统计学意义（P〈0．01）。ROC曲线面积超过08的有2768、2745、3403、6638、5972、6440、3321和3978m/z差异峰。当差异峰3403m／z以3．0为临界值时,其敏感性和特异性分别为87．5％和94．0％;3978m/z以2．0为临界值时,其敏感性和特异性分别为8417％和72．0％。其诊断价值均超过CA724、CEA和CA242单独或联合检测。结论3978和3403m/z两个蛋白对区分食管鳞癌患者和健康人群具有较好的诊断价值。     

应用SELDI-TOF-MS技术研究急性胰腺炎特异性血清标志物

目的 应用蛋白芯片表面加强激光解析电离-飞行时间-质谱（SELDI-TOF-MS）术揭示胰腺炎患者血清蛋白指纹特征,查找病情特异性血清标志物,探讨急性重症胰腺炎的早期诊断及评估的新方法.方法 收集急性胰腺炎患者血清标本52份,其中急性重症胰腺炎患者24份（SAP组）,急性轻型胰腺炎28份（MAP组）,同期健康人群血清52份（正常对照组）,应用SELDI检测急性胰腺炎患者及健康人群的蛋白质谱,按照临床胰腺炎分级,获得不同临床级别胰腺炎和健康人群的血清蛋白指纹图谱,应用计算机软件分析处理所有峰谱.结果 在质荷比（M/Z）1 000~20 000检出到127个蛋白峰,其中MAP组与正常对照组比较5个峰差异有明显统计学意义（P＜0.05）,MAP组与SAP组比较3个峰值差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 用SELDI-TOF-MS蛋白指纹图谱技术可筛选出有意义的生物标记差异蛋白,这对急性胰腺炎的诊断以及病情轻重的评估提供了新的路径.     

青年食管鳞癌和贲门腺癌组织中Ras相关区域家族1A蛋白的表达

目的:探讨青年食管鳞癌(SCC)和贲门腺癌(GCA)组织中Ras相关区域家族1A(RASSF1A)蛋白的表达变化特征.方法:采用免疫组织化学检测河南省林州地区青年SCC和GCA组织RASSF1A蛋白表达,将癌组织阳性结果分为弥漫型、灶性、镶嵌型,并分析其与临床病理变化的关系.结果:SCC和GCA组织中RASSF1A阳性表达频率均较高(83%(10/12)vs 89%(8/9)),与对应正常组织中的表达差异无统计学意义(P＞0.05),但表达类型并不相同.食管鳞癌以镶嵌型(4例)和灶性(4例)较多,弥漫型(2例)次之;食管正常组织以乳头性(3例)和灶性(3例)较多,镶嵌型(2例)次之,无弥漫型表达;贲门腺癌组织以灶性为主(6例),镶嵌型(2例)次之,无弥漫型表达;贲门正常组织以弥漫型(5例)较多,另有灶性(4例)表达.RASSF1A蛋白表达与SCC和GCA的转移、分化和浸润程度无相关性.结论:RASSF1A蛋白阳性表达是河南高发区青年食管鳞癌和贲门腺癌组织中常见的分子事件,可能在食管和贲门癌变过程中起一定作用.     

河南食管癌高发区林州市同一个体食管贲门双源癌p53蛋白表达变化

目的 :探讨同一个体食管贲门双源癌组织p5 3蛋白变化的特征及其意义。方法 :采用免疫组化卵白素 生物素 过氧化物酶复合物 (ABC)法和组织病理学方法 ,分析河南食管癌高发区林州市 14例双源癌患者 (同时发生食管鳞癌和贲门腺癌 )p5 3蛋白的表达状况。结果 :在 14例双源癌患者中 ,食管鳞癌和贲门腺癌p5 3阳性率分别为 72 % (10 / 14 )和 3 6% (5 / 14 ) ,统计学分析二者间阳性率无显著性差异 (χ2 =2 2 85 ,P >0 0 5 )。同一个体食管和贲门癌组织p5 3一致性变化发生率占 5 0 % (一致阳性率为 2 9% ,一致阴性率为 2 1% )。统计学分析二者呈显著相关性 (P <0 0 5 )。结论 :本研究证实食管和贲门双源癌存在较高的p5 3一致性变化 ,提示二者可能具有相似的发病因素和分子机制     

应用SELDI技术建立下咽鳞癌放疗疗效预测模型

目的 利用表面增强激光解吸电离-飞行时间-质谱技术从蛋白质组学的角度探讨下咽鳞癌的血清蛋白质组指纹图谱.方法 采集58例下咽鳞癌患者血清,采用CMIO芯片和PBS Ⅱ-C型蛋白质芯片阅读机检测.对下咽鳞癌不同组别的血清蛋白质指纹图谱进行比较,寻找潜在的相关差异蛋白,初步建立预测下咽鳞癌放疗敏感性决策分类树模型.结果 颈淋巴结转移组和无颈淋巴结转移组血清各差异蛋白峰的表达强度差别均无统计学意义(P＜0.05);分化较差组和分化较好组有1个血清差异蛋白的表达强度差别有统计学意义(P＜0.05),但区分度并不理想;化疗敏感组和化疗不敏感组差别无统计学意义(P＜0.05);放疗敏感组和放疗不敏感组比较,P≤0.05时有5个差异性表达蛋白峰,均在放疗敏感组高表达.Biomarker Pattern软件选取2个差异性蛋白峰建立的下咽鳞癌放疗敏感性分类树预测模型,灵敏度100%(13/13),特异度83.33%(10112).结论 咽鳞癌放疗敏感组患者血清中m/z为6115.75的蛋白较放疗不敏感组高表达(p=0.0019).初步建立的放疗敏感性预测模型有望用于预测下咽鳞癌的放疗敏感性.     

血清蛋白质指纹图谱筛选上皮性卵巢癌及预测肿瘤复发的应用研究

目的:建立人上皮性卵巢癌蛋白质组诊断模型,并盲法验证.方法:应用蛋白质芯片SELDI-TOF MS技术和生物信息学方法,比较40例上皮性卵巢癌患者手术前后、29例卵巢癌复发患者、22名健康人血清蛋白质谱,用45例包括良恶性卵巢病变患者和健康人的血清作肓筛验证.结果:卵巢癌和正常人血清比较,P＜0.01的差异蛋白峰有7个,用其中的质荷比4 162.69、5 804.26、6 749.37建立诊断模型,诊断的敏感度为98.3％,特异度为95.7％,阳性预测值为96.7％.卵巢癌术前、术后血清蛋白质谱比较,P＜0.01的差异蛋白峰有4个,术后化疗后复发与正常人血清差异蛋白质峰有5个,其中质荷比5 804.26蛋白峰术后下降、复发时升高.结论:应用SELDI方法建立人卵巢癌血清蛋白质谱诊断模型可用于卵巢癌的筛查,质荷比5 804.26蛋白峰有望成为卵巢癌疗效监测特异蛋白峰.