妊娠高血压综合征患者与正常妊娠妇女胎盘组织蛋白质双向凝胶电泳分析

目的：观察妊娠高血压综合征(妊高征)患者胎盘组织中蛋白质的差异表达，筛选出与该病相关的特异性表达的蛋白质分子，从而为阐明该病发病机制奠定基础。方法：应用双向电泳技术，对10例正常妊娠妇女及10例妊高征患者胎盘组织总蛋白质进行分离，得到蛋白质图谱。利用相关软件进行图像分析，筛选出妊高征患者差异表达的蛋白质，并利用质谱指纹对差异蛋白加以分析。结果：提取胎盘组织总蛋白，运用双向凝胶电泳方法展示了妊高征患者胎盘中的差异蛋白，电泳图谱显示共有505种蛋白质，其中，有16种蛋白从质和量上在妊高征患者胎盘组织中表达增高。结论：妊高征患者胎盘组织中存在一些差异蛋白，这些蛋白质分子与磷脂酶C有关，PLC介导的信号传导途径在妊高征的发生过程中可能有重要作用；双向电泳是适合筛选差异蛋白的技术。     

子痫前期蜕膜组织差异蛋白的筛选与鉴定

目的应用蛋白质组学方法筛选子痫前期差异蛋白,探讨差异蛋白与子痫前期发生的可能关系.方法收集5例正常足月妊娠妇女和5例足月子痫前期重度患者胎盘母面及宫壁上的蜕膜组织,提取总蛋白.双向凝胶电泳技术对总蛋白进行分离,考马斯亮兰染色,获得蛋白质图谱.用PDQuest软件进行图像分析,寻找差异蛋白,随机选取8个差异蛋白质点进行胶内酶解,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术获得肽质量指纹谱,搜寻蛋白质数据库鉴定蛋白质并进行初步分析.结果获得了正常妊娠及子痫前期重度患者蜕膜组织双向电泳凝胶图谱,蛋白质点子痫前期组为(436±13)个点,正常妊娠组为(425±16)个点,图像分析结果显示表达丰度相差2倍以上的差异蛋白质点有14个,它们在子痫前期中均表现下调.随机选取的8个蛋白质点均成功得到鉴定,它们分别是膜联蛋白-V,血红蛋白β链,Rho-GDP解离抑制剂1,氯离子细胞内通道蛋白1,原肌球蛋白4,平滑肌蛋白2202,α1-抗胰蛋白酶和纤维蛋白原β链.结论子痫前期重度患者蜕膜组织中存在差异蛋白,这些蛋白质在子痫前期的发病过程可能起重要作用.     

胎盘组织KiSS-1 mRNA及其蛋白肽metastin表达在子癎前期发病中的意义

目的:探讨胎盘组织中KiSS-1mRNA及其蛋白肽metastin表达在早发重度子癎前期发病中的作用。方法:采用RT-PCR、Western blot、免疫组化方法检测57例子癎前期患者(轻度15例和重度42例,其中早发重度12例,晚发重度30例)和30例正常晚期妊娠者胎盘组织中KiSS-1mRNA及其蛋白肽metastin的表达水平和定位。结果:胎盘组织中蛋白肽metastin主要表达在绒毛的合体滋养细胞和细胞滋养细胞。子癎前期组胎盘组织中KiSS-1mRNA及蛋白肽metastin表达分别为(1.73±0.24)和(78.41±7.96)μg/100μg总蛋白,显著高于正常晚期妊娠组(P均<0.01),以早发重度子癎前期组尤为显著。结论:子癎前期存在KiSS-1mRNA及其蛋白肽metastin表达增强,且早发重度子癎前期组表达显著增高,可能是早发重度子癎前期发病的主要原因之一。     

抵抗素及葡萄糖转运蛋白-1在妊娠期糖尿病患者胎盘滋养层细胞中的表达及意义

目的:检测抵抗素及葡萄糖转运蛋白(GLUT)-1在正常及妊娠期糖尿病患者胎盘滋养层细胞中的表达,探讨其差异表达的临床意义。方法:取足月妊娠的正常及妊娠期糖尿病患者的胎盘组织,分为对照组(正常组)和实验组(妊娠糖尿病组),常规固定、石蜡包埋、切片、HE染色观察两组滋养层细胞的形态学变化;免疫组织化学SP法检测抵抗素及GLUT-1在两组滋养层细胞中的表达;图像分析技术计量胎盘滋养层细胞中免疫组化阳性结果的平均光密度值。结果:两组胎盘组织的HE染色切片未见明显形态学的改变;免疫组织化学结果显示:抵抗素在妊娠糖尿病组胎盘滋养层细胞中表达(44 960.70±4 077.40)较正常组(26 683.02±2 421.22)明显增高,差异具有显著性(P<0.01);GLUT-1在妊娠糖尿病组胎盘滋养层细胞中的表达(63 817.00±24 160.45)较正常组(110 460±11 395.80)明显降低,差异具有显著性(P<0.01)。结论:抵抗素可能通过下调胎盘滋养层细胞中GLUT-1的表达,影响母胎之间的葡萄糖的转运,进而影响胎儿的生长发育。     

肺癌相关蛋白的筛选与鉴定

目的:应用蛋白质组学方法筛选肺癌相关蛋白,为阐明肺癌发生的分子机制和预后研究提供理论依据. 方法: 收集8例手术切除的新鲜肺癌组织及同一患者手术切缘的癌旁组织,提取可溶性总蛋白. 应用等电聚焦(IEF)电泳和十二烷基磺酸钠聚丙烯酰凝胶电泳(SDS-PAGE)技术将可溶性总蛋白分离,得到肺癌的蛋白质组分析型双向电泳图谱,经PDQuest凝胶图像分析软件分析后找出差异蛋白点. 胶内酶解差异表达的蛋白点,基质辅助电离解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获得肽质量指纹图谱(PMF),搜寻蛋白质数据库,并运用生物信息学鉴定蛋白质,分析蛋白的生物学意义和生物学功能,作为肺癌标志物的候选蛋白. 结果: 分别将8例肺癌组织及配对的癌旁组织可溶性总蛋白经过重复3次双向电泳,建立了肺癌组织蛋白质表达谱. 经PDQuest凝胶图像分析软件进行分析后, 12个蛋白质斑点只在肺癌组织有表达;6个蛋白质斑点只在癌旁表达. 对高丰度的肺癌特异表达的蛋白点进行鉴定,结果表明这些特异蛋白分别为钙粒蛋白B,Calgizzarin,载脂蛋白A-I,载脂蛋白E,Ras相关蛋白Rab-14,亲环素. 结论: 建立了人肺癌组织和癌旁组织的双向电泳图谱,为建立相应的蛋白质数据库提供了基础数据;鉴定了钙粒蛋白B等肺癌相关蛋白质,为进一步寻找肺癌蛋白标志物奠定了基础,对阐明肺癌发生的分子机制和预后研究有重要理论意义.     

C型凝集素受体和Toll样受体在子(癎)前期重度患者胎盘中的表达

目的 分析子(癎)前期(PE)患者胎盘组织中C型凝集素样受体家族中DC-SIGN和甘露糖受体(MR)以及Toll样受体(TLR)家族中TLR-2和TLR-4的表达情况.方法 采集PE重度患者(PE组,n=20)及正常妊娠妇女(NP组,n=20)的新鲜胎盘标本；采用免疫组织化学技术对胎盘组织中DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4的表达进行定位分析；采用Western blotting法检测胎盘组织中的DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4的蛋白表达.结果 两组胎盘组织中均有DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4的表达,主要位于胎盘合体滋养层细胞,在细胞滋养层细胞中亦有少量表达.PE组与NP组比较,胎盘组织TLR-4阳性细胞表达率明显升高(P ＜0.01)；DC-S1GN、MR阳性细胞表达率明显降低(P＜0.01,P＜0.05),TLR-2阳性细胞表达率的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 相对于正常晚期妊娠妇女,PE患者胎盘组织中C型凝集素受体DC-SIGN和MR表达减少,TLR-4过度表达；两种受体家族活化平衡失调可能是PE发病机制中的关键环节之一.     

VEGF蛋白在子痫前期胎盘中的表达及意义

目的：检测子痫前期胎盘的VEGF蛋白表达水平,探讨子痫前期的发病机制。方法：采用免疫组织化学方法结合病理图像分析技术,定量分析10例正常妊娠组、17例轻度子痫前期组和13例重度子痫前期组胎盘VEGF蛋白表达。结果：VEGF蛋白主要表达与胎盘绒毛滋养细胞的胞膜及胞浆内。与正常妊娠组比较,子痫前期组胎盘VEGF蛋白表达显著减少,轻度、重度子痫前期组比较,有显著性差异。结论：子痫前期患者胎盘滋养层细胞VEGF蛋白表达减少可能是子痫前期的发病机制之一,从而为临床治疗子痫前期提供新的方向。     

血清蛋白双向凝胶电泳-质谱分析诊断早期肺腺癌的临床研究

目的分析肺腺癌患者与正常人血清双向凝胶电泳的差异蛋白质,从而寻找肺腺癌早期特异性的诊断指标。方法用固相IPG梯度双向凝胶电泳分离肺腺癌患者及正常人血清总蛋白,用PDQuest凝胶图像软件分析,以识别差异蛋白质点。用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪（MALDI—TOF—MS）分析获得肽质量指纹图,然后利用Mascot查询软件搜寻数据库鉴定蛋白质。结果①获得了重复性较好的双向电泳银染图谱。②经PDQuest7．1软件匹配分析,共筛选出22个差异的蛋白点,对7个差异蛋白点进行胶内原位酶解-质谱指纹图分析,获得了7张肽质量指纹图谱,查询数据库鉴定出1个蛋白质-血清淀粉样蛋白A（SAA）。结论①固相pH梯度双向凝胶电泳分离血清总蛋白获得了重复性较好的双向电泳凝胶图谱。②肺腺癌患者血清和正常人血清的蛋白质组表达存在明显差异,这些差异蛋白点为进一步建立人肺癌的2-DE数据库奠定了基础。③SAA蛋白很可能是肺癌的一个潜在标志物。     

子宫内膜异位症血瘀证患者在位内膜差异蛋白质组学研究

目的通过蛋白组学技术分离并鉴定子宫内膜异位症(EMT)血瘀证、气滞血瘀证、肾虚血瘀证患者在位内膜的差异蛋白质,寻找EMT证候特异性蛋白质。方法分别取6例子宫内膜异位症血瘀证、气滞血瘀证、肾虚血瘀证患者增生期在位内膜组织和6例增生期正常子宫内膜组织标本,配对分为6组。提取组织总蛋白,通过双向电泳技术分离总蛋白,并得到6组双向电泳凝胶图谱。通过PDQuest7.1.1软件对图像进行分析,并检测出表达差异点。通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF/MS)及蛋白质数据库检索进行蛋白质鉴定。结果根据蛋白质的不同等电点和分子量,通过双向凝胶电泳和质谱分析技术可以分离人EMT患者及健康妇女在位内膜,发现EMT血瘀证患者与健康妇女在位内膜之间有差异蛋白表达,这些差异蛋白可能成为EMT发病的候选生物标志物。结论 EMT血瘀证、气滞血瘀证、肾虚血瘀证患者在位内膜之间蛋白质组成分存在差异,这些差异可能是证候实质的内在根源。     

RASSF1A表达或缺失的两类早期肺腺癌组织差显蛋白的筛选与鉴定

目的:建立RASSFlA表达或表达缺失的两类不同早期肺腺癌组织蛋白质的双向电泳凝胶图谱.筛选并鉴定存在明显表达差异的蛋白质.方法:采用Western印迹技术,从RASSFlA转录缺失和RASSFIA转录正常的早期肺腺癌标本中筛选出RASSFlA表达和表达沉默的癌组织各5例.提取组织可溶性总蛋白,采用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离总蛋白,建立两类不同早期肺腺癌组织蛋白质的双向电泳凝胶图谱;PDQuest凝胶图像分析软件比较分析,筛选出差异表达的蛋白质点;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱获得相应蛋白质点的肽质量指纹图谱;搜索蛋白质数据库鉴定差异表达的蛋白质.结果:建立了重复性较好的RASSFIA表达或表达缺失的两类不同早期肺腺癌组织蛋白质双向电泳凝胶图谱;筛选出存在明显表达差异的蛋白质点17个,挖取其中的9个进行质谱分析,9个蛋白质点均得到了满意的肽质量指纹图谱;搜索蛋白质数据库鉴定出5种蛋白质,分别是:细胞色素b5(cytochrome b5),60S磷酸核楮体蛋白P2(60S acidic ribosomal protein P2),碳酸酐酶1(carbonic anhydrase-1),5-吡咯啉羧酸还原酶1(pyrroline-5-carboxylate reductase-1)和载脂蛋白A-I前体蛋白(apolipoprorein A-I precursor).结论:成功建立了RASSFlA表达或表达缺失的两类不同早期肺腺癌组织蛋白质的双向电泳凝胶图谱,从中鉴定出5种存在明显表达差异的蛋白质,为进一步研究RASSFIA作用的信号转导途径奠定了初步的基础.     

尿道下裂大鼠与正常大鼠睾丸蛋白质二维电泳图谱分析

目的:探讨二维电泳技术在尿道下裂大鼠与正常大鼠睾丸差异表达蛋白研究中的应用.方法:孕SD大鼠10只,随机分为2组,妊娠12～19天,实验组和对照组分别予邻苯二甲酸二丁酯(DBP)500mg/(kg·d)、大豆油5 ml/d灌胃,第2l天取出仔鼠睾丸,提取总蛋白,进行二维凝胶电泳分离和图像分析.结果:按照5倍的表达量计算,发现有差异表达的蛋白质点9个,5个点在尿道下裂大鼠睾丸中高表达,而在正常大鼠睾丸为低表达;相反,在正常大鼠睾丸中高表达的4个点,在尿道下裂者为低表达.结论:初步建立了正常和尿道下裂大鼠睾丸的二维电泳图谱,并发现两者之间存在一些差异表达蛋白,为进一步进行尿道下裂大鼠睾丸差异表达蛋白的分离及鉴定奠定了良好基础.     

酒精性肝损伤大鼠血清蛋白质组学的研究

通过对比分析酒精性肝损伤模型大鼠与正常对照组大鼠的血清蛋白质组表达谱,探讨参与酒精性肝损伤病理生理过程的分子机制。方法：采用双向电泳技术结合生物信息学分析方法对造模成功的酒精性肝损伤模型大鼠及正常对照组大鼠的血清全蛋白进行比较蛋白质组学分析。结果：获得了11个有明显规律性变化的差异表达蛋白点,其中有7个蛋白点表达升高,4个差异蛋白点表现为明显下调趋势。结论：本研究发现的这些差异表达蛋白质可能直接或间接参与了酒精性肝损伤病理生理过程的分子机制。     

Differential analysis of two-dimensional gel electrophoresis profiles of spermatozoa protein in human normal motility sperm and idiopathic asthenospermia

Objective: To evaluate the application of two-dimensional electrophoresis in the research of differentially expressed proteins in the human asthenospermia. Methods: Two-dimensional gel electrophoresis was performed on 4 normal sperm samples from healthy men and 4 sperm samples from 4 asthenospermia patients. After silver staining, the differential expression proteins were analyzed by PDQuest 2D analysis software. Results: Six differential protein spots were identified. Four spots showed increased expression in the control gels compared with the patient gels. Conclusion: The protein profiles of differential expression between the normal spermatozoa and idiopathic asthenospermia were established and some differential proteins were found. The data of this study would establish the better fundament for further isolation and identification of differentially expressed proteins in human asthenospermia sperm.     

病理性瘢痕与正常皮肤的蛋白质组学研究

目的：利用蛋白质组学的研究方法,找出增生性瘢痕、瘢痕疙瘩与正常皮肤组织成纤维细胞的差异蛋白质,为防治病理性瘢痕提供新思路.方法：应用2-DE技术建立三种组织细胞的蛋白质图谱,分析后找到差异蛋白点,用质谱分析仪及数据库确定蛋白质的种类.结果：选择增生性瘢痕、瘢痕疙瘩和正常皮肤表达的差异蛋白9个,鉴定出差异蛋白5个,分别为：磷脂酰胆碱结合蛋白、银屑病型脂肪酸结合蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型前胶原蛋白、Ⅰ型前胶原蛋白.结论：共找出增生性瘢痕、瘢痕疙瘩与正常皮肤间5种差异蛋白,为研究病理性瘢痕的发病机制提供了一种新方法,也为临床用药研究提供了新方向.     

大鼠栓塞肺组织的比较蛋白质组学研究

目的研究大鼠血栓栓塞肺组织和正常肺组织的蛋白差异表达。方法采用血栓颈静脉注入法制备大鼠急性肺栓塞模型，采用双向电泳技术（2-DE）找出差异蛋白，用MALDI-TOF技术和生物信息学技术鉴定差异蛋白，并对部分差异表达蛋白采用Westernblot技术作进一步验证。结果肺组织蛋白的2-DE胶银染可分离出2800多个点，考染可达到2400个点以上。经图像分析得到的46个差异表达蛋白中有32个蛋白得到鉴定。对部分差异蛋白采用Westernblot方法在蛋白水平的验证结果与2-DE结果基本相符。结论采用比较蛋白质组学的方法可以发现大量栓塞肺组织的差异表达蛋白，这些差异表达蛋白将为研究肺栓塞发病的分子机制和病理生理学研究提供重要的线索和依据。     

脾肾虚型重症肌无力患者血清双向电泳图谱的建立及分析

目的:建立脾肾虚型重症肌无力患者血清蛋白质双向电泳图谱,观察脾肾虚型重症肌无力患者与正常人血清蛋白质差异表达情况。方法:采用反复冻融法抽提血清蛋白质,以优化的双向电泳技术分离血清蛋白质,建立脾肾虚型重症肌无力患者与正常人血清蛋白质双向电泳图谱,并采用二维电泳图谱专用软件对所得结果进行图谱分析。采用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法对两组间比较所得目标蛋白质点进行质谱鉴定。结果:通过双向电泳,建立血清蛋白质双向电泳图谱,选取具有明显差异的蛋白点21个进行质谱鉴定,共鉴定出8种蛋白质。结论:通过蛋白质组技术快速建立脾肾虚型重症肌无力患者血清蛋白表达图谱及质谱分析,可为进一步研究其发病机制及治疗手段提供实验基础。     

吗啡成瘾和正常大鼠前额叶皮质差异表达蛋白的比较研究

目的：比较吗啡成瘾与正常大鼠前额叶皮质（prefrontal cortex,PFC）蛋白质双向电泳图谱,寻找和鉴定吗啡成瘾大鼠PFC中的差异表达蛋白质。方法：以固相pH梯度等电聚焦为第一向和垂直SDS-PAGE为第二向,分别对正常对照大鼠和吗啡成瘾大鼠的PFC蛋白质样品进行二维分离,2-DE图谱经ImageMaster 2D Platinum v5.0软件分析,选取4个差异蛋白点用基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）进行鉴定。结果：通过对2-DE图谱蛋白斑点的匹配及对比分析,与吗啡成瘾相关的差异表达蛋白斑点为87个;经质谱鉴定出2个有意义的差异表达的蛋白斑点：snap25亚型β-snap25突触相关蛋白25、核不均一核糖核蛋白U。结论：吗啡成瘾组与正常对照组大鼠PFC蛋白质组存在差异;初步鉴定出了2种大鼠前额叶皮质中与吗啡成瘾相关的差异蛋白,其表达的变化可能通过多种途径影响PFC神经元功能,为研究阿片类物质依赖作用机制提出了新的思路和方向。     

M2-PK蛋白在宫颈及癌变组织中的差异表达

目的：筛选、验证肿瘤标志物M2 PK在宫颈及癌变组织中的差异表达。 方法：选择永生化的人宫颈粘膜上皮细胞株H8和人宫颈癌细胞株Caski,采用双向凝胶电泳技术通过比较二者的双向电泳图谱筛选明显差异表达的蛋白质,并行MALDI TOF MS质谱鉴定;Western blot法检测差异蛋白质M2 PK在宫颈及癌变组织中的表达。结果：获得H8和Caski细胞的双向电泳图谱;蛋白M2 PK在Caski细胞中的表达量明显高于H8细胞;M2 PK在宫颈的正常组织、癌前病变组织和癌组织中的表达逐渐增加。结论：筛选出H8细胞和Caski细胞间的差异蛋白M2 PK,M2 PK在宫颈及癌变组织中的表达量不同。     

痹肿消汤对胶原性关节炎大鼠滑膜双向电泳蛋白质表达的影响

目的:分析痹肿消汤(bizhongxiao decoction,BZXD)对胶原性关节炎大鼠滑膜双向电泳蛋白质表达谱的影响,为阐明痹肿消汤治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)作用机制提供新线索。方法:70只SD大鼠随机分为正常对照组(正常组)、模型对照组(模型组)、痹肿消汤治疗组(BZXD组),采用皮下注射牛Ⅱ型胶原与完全福氏佐剂制成实验性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型。应用双向凝胶电泳技术(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分别分离正常组、模型组、BZXD组大鼠关节滑膜的总蛋白后,胶体考马斯亮蓝染色,扫描2-DE胶获取电子图像,Pdquest图像分析软件比较分析此3组双向凝胶电泳图谱并识别差异表达的蛋白质。结果:成功复制了CIA大鼠模型;建立了正常组、模型组和BZXD组大鼠滑膜的2-DE图谱,其平均蛋白质点数分别为947±39,994±41,1031±52,其匹配率为92%,91%,94.2%;模型组的3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在等电聚焦(isoelectric focusing,IEF)方向的偏差是(0.896±0.217)mm,在十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdo-decylsufate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)方向的偏差为(1.102±0.104)mm。比较分析模型组和BZXD组大鼠滑膜的2-DE图谱,发现此2组间有328个差异点,BZXD组有174蛋白质点表达上调,147个蛋白质点表达下调,7个蛋白质点只在模型组表达。模型组与正常组之间有193个差异点,123个在模型组表达上调,70个表达下调。结论:建立了CIA大鼠关节滑膜的双向凝胶电泳图谱,识别了328个差异表达的蛋白质,对这些差异蛋白质的鉴定将为痹肿消汤治疗RA的作用机制提供新的实验依据。     

喉鳞形细胞癌比较蛋白质组的初步研究

目的:研究喉癌及癌旁喉正常黏膜组织蛋白质组的差异表达.方法:用固相pH梯度双向凝胶电泳分离喉癌及癌旁喉正常黏膜组织总蛋白质,考马斯亮蓝染色显色、ImageMaster 2D软件分析所获得的双向凝胶电泳图谱,找出差异表达的蛋白质点.取差异表达的蛋白质点进行质谱鉴定.结果:获得分辨率和重复性均较好的双向凝胶电泳图谱,并找出在喉癌和癌旁喉正常黏膜组织差异表达的33种蛋白质.其中有22种蛋白质在喉癌组织中表达上凋,11种蛋白质表达明显下调.随机取10个在喉癌组织中表达上调的蛋白点进行质谱指纹图分析,查询数据库初步鉴定出了8个蛋白质.结论:本研究建立了分辨率和重复性较强的喉癌及喉正常黏膜组织蛋白质组表达图谱,且两者蛋白质的表达明显不同,差异表达的蛋白质可能成为潜在的诊断喉癌的肿瘤标志物和治疗靶分子,对探讨喉癌的发生机制有重要意义.