早孕胎盘滋养层细胞的免疫组化研究

目的：研究早孕胎盘绒毛和子宫蜕膜中合体滋养层细胞、细胞滋养层细胞和中间滋养层细胞的免疫组化特征。方法：对２０例妊娠头３个月的刮宫标本进行Ｋｅｒａｆｉｎ、ｈＣＧ、ＨＰＬ、ＰＬＡＰ、ＥＭＡ和Ｐｒｏｌｅｃｔｉｎ等免疫组化染色。结果：角蛋白是各种滋养层细胞最可靠和最敏感的标记物，但其特异性差。合体滋养层细胞的ｈＣＧ和ＰＬＡＰ染色强于中间滋养层细胞，而中间滋养层细胞的ＨＰＬ和ＥＭＡ染色强于合体滋养层细胞。除角蛋白外，细胞滋养层细胞免疫组化染色均阴性。结论；早孕时三种滋养层细胞在免疫组化方面有其共性，也有各自不同的特点。     

胎盘组织KiSS-1 mRNA及其蛋白肽metastin表达在子癎前期发病中的意义

目的:探讨胎盘组织中KiSS-1mRNA及其蛋白肽metastin表达在早发重度子癎前期发病中的作用。方法:采用RT-PCR、Western blot、免疫组化方法检测57例子癎前期患者(轻度15例和重度42例,其中早发重度12例,晚发重度30例)和30例正常晚期妊娠者胎盘组织中KiSS-1mRNA及其蛋白肽metastin的表达水平和定位。结果:胎盘组织中蛋白肽metastin主要表达在绒毛的合体滋养细胞和细胞滋养细胞。子癎前期组胎盘组织中KiSS-1mRNA及蛋白肽metastin表达分别为(1.73±0.24)和(78.41±7.96)μg/100μg总蛋白,显著高于正常晚期妊娠组(P均<0.01),以早发重度子癎前期组尤为显著。结论:子癎前期存在KiSS-1mRNA及其蛋白肽metastin表达增强,且早发重度子癎前期组表达显著增高,可能是早发重度子癎前期发病的主要原因之一。     

早孕胎盘滋养层细胞的免疫组化研究

目的：研究早孕胎盘绒毛和子宫蜕膜中合体滋养层细胞、细胞滋养层细胞和中间滋养层细胞的免疫组化特征。方法：对２０例妊娠头３个月的刮宫标本进行Ｋｅｒａｆｉｎ、ｈＣＧ、ＨＰＬ、ＰＬＡＰ、ＥＭＡ和Ｐｒｏｌｅｃｔｉｎ等免疫组化染色。结果：角蛋白是各种滋养层细胞最可靠和最敏感的标记物,但其特异性差。合体滋养层细胞的ｈＣＧ和ＰＬＡＰ染色强于中间滋养层细胞,而中间滋养层细胞的ＨＰＬ和ＥＭＡ染色强于合体滋养层细胞。除     

抵抗素及葡萄糖转运蛋白-1在妊娠期糖尿病患者胎盘滋养层细胞中的表达及意义

目的:检测抵抗素及葡萄糖转运蛋白(GLUT)-1在正常及妊娠期糖尿病患者胎盘滋养层细胞中的表达,探讨其差异表达的临床意义。方法:取足月妊娠的正常及妊娠期糖尿病患者的胎盘组织,分为对照组(正常组)和实验组(妊娠糖尿病组),常规固定、石蜡包埋、切片、HE染色观察两组滋养层细胞的形态学变化;免疫组织化学SP法检测抵抗素及GLUT-1在两组滋养层细胞中的表达;图像分析技术计量胎盘滋养层细胞中免疫组化阳性结果的平均光密度值。结果:两组胎盘组织的HE染色切片未见明显形态学的改变;免疫组织化学结果显示:抵抗素在妊娠糖尿病组胎盘滋养层细胞中表达(44 960.70±4 077.40)较正常组(26 683.02±2 421.22)明显增高,差异具有显著性(P<0.01);GLUT-1在妊娠糖尿病组胎盘滋养层细胞中的表达(63 817.00±24 160.45)较正常组(110 460±11 395.80)明显降低,差异具有显著性(P<0.01)。结论:抵抗素可能通过下调胎盘滋养层细胞中GLUT-1的表达,影响母胎之间的葡萄糖的转运,进而影响胎儿的生长发育。     

人胎盘滋养层细胞超微结构的动态研究

国外对胎盘滋养层细胞的超微结构,已有一些研究。国内仅见研究胎盘病变对照组中地零星报道。将胎盘滋养层细胞超微结构分作胚眙早期和足月期,并认为两者区别不大。虽然国外有人注意到胎盘滋养细胞的成熟和老化现象,但观察材料仅限于8～12周,缺少妊娠全程地研究。本文对妊娠周期中胎盘滋养层细胞,作了较系统地动态观察。发现了滋养层细胞动态发展中的亚型、融合形态及动态变化的形态特征,报道如下。     

子(癎)前期重度胎盘细胞凋亡与血清一氧化氮的关系研究

妊娠期高血压疾病是妊娠期所特有的疾病,该病严重危害母婴健康,尤其是子(癎)前期重度母婴并发症高,其发病原因目前尚不完全清楚。     

胎盘滋养层细胞的功能

胎盘滋养层细胞对妊娠与胚胎发育具有非常重要的作用,侵袭功能和内分泌功能是滋养层细胞的两大主要功能。侵袭性迁移行为是胎盘形成、胚胎发育、妊娠顺利完成的基本要素,滋养层细胞在侵袭血管方面上与癌细胞非常相似。同时滋养层细胞也发挥着极其复杂的内分泌功能,能分泌甾体类激素、神经肽类激素、生长因子、细胞因子等多种生物活性物质,构成了复杂的脐血造血微环境。滋养层细胞所分泌的激素、神经肽等活性物质对母婴之间能量代谢转运、维持早孕、营养黄体等方面起到重要的作用。同时,滋养层细胞是胎盘屏障的重要组成部分和母血进入胎儿的第一道屏障,所分泌的各种细胞因子发挥了极其重要的免疫功能。在本文中作者旨在微环境的层面上阐述胎盘滋养层细胞的功能。     

人胎盘滋养层细胞的超微结构及凋亡

目的：观察不同孕期胎盘滋养层细胞的超微结构和凋亡现象。方法：取早、中、晚各期胎盘组织,制备成透射电镜标本并观察,结果：细胞滋养层细胞（CT）在各妊娠时期形态结构相似。呈代分化细胞的特点,细胞核常染色质丰富,细胞质中有大量散在游离核糖体,内质网较少,高尔基复合体不发达。合体滋养层细胞（ST）为分化良好的细胞,细胞质内含丰富的扩张内质网,高尔基复合体发达。CT核数／ST核数随妊娠时间增加而减少。中、晚期有些ST核染色质呈边集、固缩等凋亡表现,且多发生丰合体结,足月胎盘ST的凋亡指数AI在于中期（P＜0．05）。结论：妊娠过程中滋养层细胞的形态学变化与ST的凋亡有关。     

HLA-G蛋白在滋养层细胞的表达及意义

目的 探讨人类白细胞抗原G（HLA-G）蛋白在妊娠不同阶段和不同种类滋养细胞的表达差异及生物学意义。方法 应用免疫组化法（SP）检测30例早孕绒毛、30例中孕胎盘、36例晚孕胎盘中HLA-G蛋白的表达情况。结果 在表达的时间上，HLA-G蛋白强表达于早期绒毛和中期妊娠胎盘中，而在晚期胎盘为弱表达，差异显著（P〈0．01）；在表达的部位上，HLA-G蛋白仅表达于绒毛外滋养层细胞。结论 HLA-G蛋白在不同孕期及不同种类滋养层细胞表达的差异．提示其可能参与了滋养细胞的有节制侵袭。     

蛋白质组学技术分析银屑病皮损组织中的蛋白质表达

目的:分析银屑病皮损组织中的蛋白质表达.方法:对研究蛋白质组学的关键技术二维凝胶电泳(2-DE)过程进行改良.结果:建立了寻常型银屑病皮损和非皮损组织的蛋白质组2-DE方法.结论:本实验为研究影响银屑病的表皮细胞增生差异蛋白质组学奠定了技术基础.     

不同分化喉鳞状细胞癌蛋白质组差异表达的研究

目的 研究不同分化程度喉鳞状细胞癌黏膜组织蛋白质组的差异表达.方法 用固相pH梯度双向凝胶电泳分离不同分化程度喉癌黏膜组织总蛋白质,行考马斯亮蓝染色,Image Master 2D软件分析所获得的双向凝胶电泳图谱,找出差异表达的蛋白质点.结果 获得分辨率和重复性均较好的双向凝胶电泳图谱,发现13种蛋白质与喉癌分化密切相关.其中有7种蛋白质在高分化喉癌组织中表达上调,6种蛋白质表达明显下调.结论 利用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离不同分化喉鳞状细胞癌黏膜组织总蛋白质,建立了重复性较强的不同分化喉鳞状细胞癌黏膜组织蛋白质组表达图谱,且两者蛋白质的表达明显不同,可能与喉癌不同分化程度的发病机制有关.     

前列腺增生的尿液蛋白质组学分析

目的在临床前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)升高的情况下,特别是前列腺特异性抗原在4μg/L至10μg/L时,前列腺增生和前列腺癌的鉴别诊断很难,本实验对前列腺增生患者、前列腺癌患者和健康对照的尿液蛋白质双向凝胶电泳图谱进行对比分析,旨在较全面的分析其成分,为临床鉴别诊断提供依据。方法用丙酮沉淀蛋白的方法对前列腺增生患者、前列腺癌患者和健康对照尿液中的蛋白质进行浓缩,再用双向凝胶电泳技术分离蛋白质样品,CANON G9照相获取图像,PDQuest2D分析软件对图像进行背景消减、斑点检测、匹配、斑点位置重复性的系统分析,寻找差异表达蛋白质。在此基础上用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALIDI-TOF)进行肽指纹图谱鉴定,并进行生物信息学分析。结果通过前列腺增生、前列腺癌和健康对照尿液双向凝胶电泳图的对比分析,获得前列腺增生差异蛋白质点,选取其中20个做质谱和生物信息学分析,最终分离鉴定出血清白蛋白、视黄醇结合蛋白前体等17种有效蛋白。结论通过实验条件的优化,应用蛋白质组学方法分析前列腺增生患者尿液蛋白质的组成成分是可行的,为研究前列腺增生患者尿液检测特异标志物提供了基础资料,为今后鉴别前列腺增生和前列腺癌提供了有益的依据,同时也为解决临床误诊难题提供了思路。     

双向电泳技术分析大鼠星形细胞和C6细胞的蛋白差异

目的：建立大鼠星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞的双向电泳（2-DE）技术体系,寻找星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞的蛋白表达差异。方法：提取大鼠星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞中的总蛋白,进行第一向等电聚焦（IEF）和第二向十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离总蛋白,GS-800获得凝胶图像,并测量不同凝胶间蛋白斑点在IEF和SDS-PAGE方向上的位置偏差,使用PDQuest7.3软件对凝胶图像进行分析,找出星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞的差异表达蛋白。结果：星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞的蛋白表达谱上,分别检测到523±16和550±20个蛋白点,平均匹配点数为452±18和472±21,匹配率达86.4%和85.8%,不同凝胶间蛋白质点在IEF方向的偏差为（0.67±0.48）mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为（0.73±0.56）mm,对比分析了星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞的2-DE图谱,发现有24个点发生了明显的表达变化（P〈0.01）,在星形胶质细胞中高表达的点有8个,在C6胶质瘤细胞中高表达的点有14个,星形胶质细胞中没有发现表达的点有2个。结论：建立了大鼠星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞的双向电泳技术体系,发现两者的双向电泳图谱存在明显差异,C6胶质瘤细胞中表达上调以及星形胶质细胞中没有发现表达的蛋白可能与肿瘤的发生,神经干细胞的迁移有关,表达下调的蛋白可能与抑制肿瘤的发生有关。     

Differential analysis of two-dimensional gel electrophoresis profiles of spermatozoa protein in human normal motility sperm and idiopathic asthenospermia

Objective: To evaluate the application of two-dimensional electrophoresis in the research of differentially expressed proteins in the human asthenospermia. Methods: Two-dimensional gel electrophoresis was performed on 4 normal sperm samples from healthy men and 4 sperm samples from 4 asthenospermia patients. After silver staining, the differential expression proteins were analyzed by PDQuest 2D analysis software. Results: Six differential protein spots were identified. Four spots showed increased expression in the control gels compared with the patient gels. Conclusion: The protein profiles of differential expression between the normal spermatozoa and idiopathic asthenospermia were established and some differential proteins were found. The data of this study would establish the better fundament for further isolation and identification of differentially expressed proteins in human asthenospermia sperm.     

转Bt基因大米与相应亲本大米差异蛋白质组学研究

目的：利用差异蛋白质组学及生物信息学等技术方法,探讨外源Bt基因的导入对大米表达蛋白质组的影响,深化转基因大米在蛋白质组学方面的研究。方法在转基因大米“华恢1号”和亲本大米“明恢63”样品中提取大米总蛋白,通过二维聚丙烯酰胺凝胶电泳（2D-PAGE）实验方法,得到相应的蛋白质组2D-PAGE谱,再选择差异明显的蛋白质点进行质谱鉴定及生物信息学分析。结果对转Bt（cry1Ab/1Ac）基因大米和亲本大米2D-PAGE图谱的蛋白质点进行了对比匹配,识别出明显的差异蛋白质点28个,以亲本大米为参照,转Bt基因大米相对高表达的18个,相对低表达的10个;选择转基因大米凝胶上的差异蛋白质点进行了质谱鉴定和生物信息学检索,发现差异蛋白质主要参与能量代谢,蛋白质合成、氧化还原和应激响应等生物过程。结论转Bt基因“华恢1号”及其亲本大米“明恢63”表达的蛋白质组存在一定差异,但未发现这些差异蛋白质具有抗营养性和致敏性,也未发现新蛋白和毒蛋白的表达。     

肺癌性与结核性胸腔积液蛋白质组的差异

目的：建立肺癌性胸腔积液与结核性胸腔积液的双向电泳图谱,分析二者蛋白质表达的差异和特点。方法：以固相pH梯度等电聚焦为第一向,垂直板SDS-PAGE为第二向分离胸水蛋白质,银染显色,扫描仪获取凝胶图像并对其进行软件分析。应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）鉴定差异蛋白质。结果：双向电泳结果显示,肺癌性胸腔积液中表达增高2倍的差异蛋白点52个,降低50%的蛋白质点60个。有9个点仅在结核性胸腔积液表达,11个点仅在肺癌胸腔积液中表达,并通过肽指纹图分析成功鉴定了6个蛋白质。结论：肺癌性胸腔积液组与结核性胸腔积液组的双向电泳结果显示蛋白表达图谱有明显差异,这些差异蛋白可能是肺癌相关蛋白或肺癌特异性蛋白标志物。     

食管鳞癌转移淋巴结蛋白质双向凝胶电泳图谱差异分析

目的 分析食管鳞癌转移淋巴结与正常淋巴结组织蛋白质表达差异.方法 采用双向凝胶电泳(2-DE)技术和计算机辅助的图像分析方法,对食管鳞癌转移淋巴结与正常淋巴结组织蛋白质进行分离和比较分析.结果 获得了背景清晰、分辨率和重复性较好的双向凝胶电泳图谱,比较分析显示23个蛋白点的表达量存在明显差异,其中新增蛋白点4个,缺失1个,14个蛋白点表达发生明显上调,4个蛋白点表达发生明显下调.结论 食管鳞癌转移淋巴结与正常淋巴结蛋白质表达存在明显差异,可能与食管鳞癌淋巴结转移机制有关.     

血清蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立

目的建立血清蛋白质组双向凝胶电泳(2-DE)技术.方法对血清蛋白质2-DE的各种条件进行调整、优化.结果建立了稳定的2-DE技术.结论已建立的血清蛋白质2-DE技术,将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础.     

短穗鱼尾葵花粉总蛋白的双向电泳及分析

目的对短穗鱼尾葵花粉过敏原蛋白质组分进行双向电泳及其结果分析,构建短穗鱼尾葵花粉蛋白双向电泳图谱,明确短穗鱼尾葵花粉的过敏原蛋白组分的分布和构建蛋白质组学数据库。方法提取短穗鱼尾葵花粉的总蛋白,取上清液进行Bradford法定量总蛋白浓度,采用13 cm IPG胶条(p H 3~10)和12%的SDS-PAGE凝胶作为二项分离胶进行双向电泳(2D)分离,银染法分析其总蛋白组成,利用Image Master2D软件对2D胶进行检测和图像分析。结果双向电泳图谱共检测到516个短穗鱼尾葵花粉蛋白点,其蛋白相对分子质量在12~174 k D,主要在10~50 k D;等电点在p H 3~10,主要分布在p H 5~8。含量最多的蛋白质其相对分子质量和等电点分别为13 k D和p H 6.258 37。含量最低的蛋白质其相对分子质量和等电点分别为29 k D和p H 3.615 79。结论成功构建较为完整的短穗鱼尾葵花粉蛋白双向电泳图谱,为建立短穗鱼尾葵花粉蛋白质组学数据库及其过敏的诊断和治疗提供了依据。