NaOH消蚀法制备胎儿脱细胞真皮基质的研究

目的：探索NaOH消蚀法对胎儿真皮基质的成分及其形态结构的影响。方法：使用NaOH消蚀法制备胎儿皮肤的脱细胞真皮基质(ADM)，应用组织化学和免疫组织化学染色方法检测细胞的余留及细胞外基质成分的破坏情况，应用扫描电镜观察ADM的构筑。结果：NaOH消蚀处理16h即可去除真皮细胞成分。制备的ADM韧性好，勿需戊二醛交联。弹性纤维的含量有所减少而胶原纤维形态完整，排列正常，保留了基本的真皮构筑。HLA—DR呈阴性，Fibronectin(FN)呈弱阳性，Laminin(LN)和Ⅳ型胶原均呈阴性。结论：NaOH消蚀法简易经济，去除细胞成分较彻底，所制备的ADM韧性好，胶原纤维形态完整，排列正常，但对基膜的成分及结构破坏较重。     

戊二醛交联时间对人脱细胞真皮基质生物学性质的影响

目的:探讨戊二醛交联时间对人脱细胞真皮基质(ADM)生物学性质的影响.方法:用低浓度戊二醛交联高渗盐-NaOH消蚀法制备的人ADM,根据交联时间的不同分为交联10、 15、 20、 30 min组,大体观察各组的物理性状;免疫组织化学检测各组Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达;MTT细胞毒性实验评价4组ADM的细胞毒性反应;将NIH3T3细胞接种于各组ADM上,比较24 h细胞贴壁数并观察细胞生长情况;将人成纤维细胞与交联10、 15 min组ADM体外复合培养,观察细胞生长和增殖情况.结果:随着交联时间延长,ADM的韧性逐渐增加;各组ADMⅠ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达阳性;ADM细胞毒性反应交联10和15 min组0～1级、20 min组1～2级、30 min组1～3级;交联10、 15 min组分别与20 min组24 h 3T3细胞贴壁数比较有统计学意义;而交联10、 15 min两组间无统计学意义;3T3细胞能够在交联10、 15 min组ADM表面贴附、增殖;免疫荧光法显示鼠抗人波形蛋白抗体呈阳性,有较多的人成纤维细胞黏附于交联10和15 min组ADM上,生长和增殖良好.结论:戊二醛化学交联10～15 min的人ADM蕴涵丰富的生物信息,细胞毒性小,生物相容性好,是一种很好的生物支架材料.     

NaOH消蚀法制备脱细胞真皮基质修补腹壁疝

背景：与其他疝修补材料相比,脱细胞真皮基质具有易血管化、抗感染、从而可用替代传统补片用于感染腹壁缺损重建等特点。 目的：观察NaOH消蚀法制备的脱细胞真皮基质作为修补材料应用于腹疝的应用价值。 方法：以全厚猪皮制成脱细胞真皮基质,45只SD雄性大鼠制备腹壁疝模型,随机数字表法分为腹壁疝组：直接缝合皮肤,Marlex网组和脱细胞真皮基质组：分别应用大小为3.5 cm×4.0 cm的Marlex网和脱细胞真皮基质缝合皮肤;观察修复后1周时有无腹壁疝发生,脱细胞真皮基质组修复后1,2,3,5,10周分别取材,其中每周各组取4只用于苏木精-伊红染色,光镜观察。修复后第5周Marlex网组和脱细胞真皮基质组各取6只用于抗张力试验。 结果与结论：术后1周脱细胞真皮基质组与Marlex网组腹壁疝发生率均显著低于腹壁疝组(P < 0.001)。脱细胞真皮基质的胶原纤维无明显变化,即有少量成纤维细胞植入,术后2周可见新生血管,术后5周脱细胞真皮基质内部血管密度基本稳定。将单独脱细胞真皮基质片与Marlex网行抗张力试验,Marlex网的抗张力显著高于脱细胞真皮基质(P < 0.001)。但植入体内5周后,脱细胞真皮基质筋膜组织的抗张力高于Marlex-筋膜组织(P < 0.05)。提示复合消蚀制备的脱细胞真皮基质可以作为良好的疝修补材料。     

纳米银/脱细胞真皮基质的制备及抗菌效果评价

目的探讨含纳米银的脱细胞真皮基质的制备方法,以解决脱细胞真皮基质无抗菌活性的缺点;通过各种方法评价新型复合敷料的抗菌效果。方法通过倍比稀释法和基内接种法测定纳米银溶液的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度;将脱细胞真皮基质浸渍在不同浓度的纳米银溶液中一定时间,制备出含不同浓度纳米银的复合敷料;通过Kirby-Baucer方法比较不同浓度浸渍的脱细胞真皮基质的抑菌效果。结果纳米银溶液对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度是8mg/L,最低杀菌浓度是64mg/L;纳米银溶液对铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度8mg/L,最低杀菌浓度是32mg/L。浸渍吸附法制备出含有不同浓度纳米银的脱细胞真皮基质。纳米银/脱细胞真皮基质对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的抑菌效果优于纳米银医用抗菌敷料。结论纳米银/脱细胞真皮基质拥有良好的抗菌和杀菌效果,可望成为具有抗菌活性的生物敷料。     

异体脱细胞真皮基质的研究进展

异体脱细胞真皮基质是天然真皮的脱细胞基质，经过冷冻干燥形成的三维支架结构。作为一种新兴的生物工程支架，它通过空间诱导和组织替代作用修复组织缺损。由于其源于人体正常组织，经临床应用证实，异体脱细胞真皮基质拥有优秀的组织相容性，现已广泛地应用于临床各科的创伤修复。     

异体脱细胞真皮基质的研究进展

异体脱细胞真皮基质是天然真皮的脱细胞基质,经过冷冻干燥形成的三维支架结构。作为一种新兴的生物工程支架,它通过空间诱导和组织替代作用修复组织缺损。由于其源于人体正常组织,经临床应用证实,异体脱细胞真皮基质拥有优秀的组织相容性,现已广泛地应用于临床各科的创伤修复。     

脱细胞真皮基质修复组织缺损研究进展

脱细胞真皮基质(ADM)是一类经过特殊方法分离皮肤表皮与真皮,去除真皮层内的朗格汉斯细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞等附件细胞以及抗原成公主要组织相容性复合物(MHC)而仅保留胶原纤维、弹力蛋白等细胞外基质的特殊生物材料.ADM不引起机体排斥反应,为组织修复提供了良好支架,便于血管化和宿主细胞植入.其制备过程包括分离表皮与真皮、脱细胞成分及打孔、冷冻干燥等.根据分类方法的不同,ADM可分为同种异体ADM和异种ADM、补片型及注射型ADM、交联型与非交联型ADM,同时已有产品相继问世,可根据临床需要进行选择.ADM现已广泛应用于各外科领域,如深度皮肤烧伤、乳腺癌术后乳腺重建、修复口腔黏膜、腹壁疝及声带麻痹等.因其自身特点,临床应用前景广阔.就ADM近年来的研究进展作一综述.     

基因修饰牙龈成纤维细胞及脱细胞真皮基质制备牙周组织工程复合物

背景：前期研究发现人血小板源性生长因子B基因转染的牙龈成纤维细胞能够在体外快速增殖,且能够向胞外分泌血小板源性生长因子BB蛋白。目的：了解人血小板源性生长因子B基因修饰牙龈成纤维细胞植入脱细胞真皮基质后,在体内形成牙周组织工程化复合物的能力。方法：将人血小板源性生长因子B基因转染与未转染的Beagle犬牙龈成纤维细胞分别接种于脱细胞真皮基质上,观察细胞在脱细胞真皮基质上的生长情况。将人血小板源性生长因子B基因转染犬牙龈成纤维细胞-脱细胞真皮基质复合物(实验组)、犬牙龈成纤维细胞-脱细胞真皮基质复合物(对照组)及脱细胞真皮基质(空白组)分别植入裸鼠背部皮下,植入后2,4,8周,取背部标本进行组织学观察。结果与结论：人血小板源性生长因子B基因转染与未转染的犬牙龈成纤维细胞均能在脱细胞真皮基质上良好生长。植入后8周,空白组周围的细胞大面积进入脱细胞真皮基质内,部分脱细胞真皮基质出现完全自体化,尽管细胞进入较多,但新生成的胶原纤维较少,细胞只是占据原有的胶原支架生长;对照组开始出现大面积新生胶原纤维,脱细胞真皮基质上原有的胶原纤维逐步被新生的胶原替代,但原有的胶原结构得到保留;实验组出现大面积完全矿化,可见沿原有胶原支架排列的矿化颗粒。表明接种人血小板源性生长因子B基因修饰牙龈成纤维细胞的脱细胞真皮基质在体内获得了成骨性能。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程     

一种新型无细胞真皮基质的研制

目的：研制一种新型的无细胞真皮基质。方法：用高渗盐除去异体皮肤的表皮细胞，经戊二醛交联后以低浓度NaOH消蚀以除去真皮中的细胞成分，得到无细胞真皮基质。结果：皮肤中所有细胞成分都被消除，胶原纤维稍松散，结构完整，排列正常。结论：经高渗盐—NaOH消蚀法能完全去除皮肤中的细胞成分而不损伤胶原纤维的三维结构，制备过程简单，具有很大的临床应用价值。     

戊二醛交联优化脱细胞真皮基质的生物相容性

目的 通过体内包埋实验将优化的脱细胞真皮基质(ADM)与成纤维细胞(FB)体外培养,探讨是否具有生物相容性. 方法 用高渗盐-NaOH消蚀法制备得到大鼠ADM,用低浓度戊二醛交联ADM,未交联A组(0min)作为对照,根据交联时间不同分成B组(10min)、C组(15min)和D组(30min).通过大鼠体内包埋实验对比各组ADM 物理性状、包埋后面积、炎性反应、浸润生长的FB和毛细血管数目,选择出最佳交联时间.制备优化的人ADM,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测ADM的细胞毒性;人FB与ADM复合培养检测其细胞相容性,用免疫组织化学和透射电镜观察FB的生长和增殖情况;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测FBⅠ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达. 结果 大鼠体内包埋实验显示,4周取材,未交联组不易触及移植物,植入物和周围的软组织基本融合难以分开;未交联组ADM的面积较包埋前缩小;未交联组ADM内有少量炎性细胞,胶原纤维嗜酸性弱;交联组ADM内未见炎性细胞,浸润生长的FB数目、血管数目与戊二醛交联时间的单因素相关性分析呈负相关;最佳的交联时间为10min.体外培养显示,优化ADM的细胞毒性反应0～1级;人FB能够很好地在优化的ADM表面贴附、生长和增殖;ADM内FBⅠ型、Ⅲ型前胶原mRNA的表达降低. 结论 高渗盐-NaOH消蚀法制备ADM,工艺简单、成本低、生物相容性好,可以提供细胞生长的空间,并可在细胞间转导通讯和信号,下调细胞外基质代谢系统.     

Characterization and tissue incorporation of cross-linked human acellular dermal matrix

Here, we describe a novel human acellular dermal matrix (ADM) cross-linked using electron beam irradiation. Structural and biomechanical characteristics of the human ADM were assessed by infrared spectrometry and uni-axial tensile testing. Electron beam irradiation affects collagen secondary structure, which can be detected in the amide I spectral region (1660 cm⁻¹ and 1690 cm⁻¹). At doses exceeding 25 kGy, cross-linking of the collagen matrix results in a denser, more stratified appearance and parallel arrangement, with significantly increased tensile strength and elastic modulus. In a micropig model, the implanted ADM elicits rapid host cell infiltration and extracellular matrix deposition; however, the delayed remodeling resulted in long-term structural integrity. Furthermore, mean densities of collagen and elastin, expression of extracellular matrix proteins, and microvessel formation within the implanted ADM increased significantly, whereas the thickness of the implanted ADM did not decrease during the course of the study. Compared with normal adjacent tissue, type I collagen mRNA levels in the ADM increased 12-fold at 3 months after implantation, and transforming growth factor-β mRNA levels increased 3.3-fold at 2 months. Matrix metalloproteinase (MMP)-1 and MMP-9 mRNA levels were also elevated. Collectively, these results demonstrate that the structural and biomechanical properties of this novel cross-linked human ADM are adequate for use as a biologic tissue substitute.     

异种(猪)脱细胞真皮基质粉对表皮细胞和成纤维细胞的促进作用

目的观察冷冻研磨获得的脱细胞真皮基质粉(ADMP)生物学性状,探索高纯度且保留生物活性的异种(猪)ADMP对表皮细胞和成纤维细胞生长的支持及在皮肤创伤修复中的应用。 方法选取幼龄长白猪背部皮肤,经生物酶法脱细胞、冷冻干燥后经过不同冷冻研磨程序得到异种(猪)ADMP,再由⁶⁰钴辐照获得无菌异种(猪)ADMP;通过扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察异种(猪)ADMP颗粒大小及胶原形态,确定适合应用的研磨程序;通过MTT法检测HaCaT细胞和BJ人皮肤成纤维细胞在不同浓度异种(猪)ADMP包被下的黏附作用,确定异种(猪)ADMP实现细胞最大黏附的浓度范围;DMEM培养液基添加异种(猪)ADMP为实验组,单纯DMEM培养液基为对照组,使用实时细胞分析技术分析BJ人皮肤成纤维细胞迁移指数,验证异种(猪)ADMP对成纤维细胞的促迁移作用;原代表皮细胞接种在异种(猪)ADMP培养液8 d,绘制增殖曲线,检测异种(猪)ADMP对原代表皮细胞的促增殖作用,同时免疫荧光检测原代表皮细胞表面成熟与分化蛋白的表达。对数据进行Student′s t－检验。 结果1、2、3、5、7、10次循环研磨获得异种(猪)ADMP,肉眼可见全部为白色、无块状,其中1、2、3次循环呈较粗颗粒;5、7、10次循环呈现集中均匀趋势,粒径分布在0～12 μm之间。其中5次循环粒径(13.00±2.10) μm与7次循环[(6.00±0.96) μm比较,差异有统计学意义(t＝6.093,P＝0.0002)。异种(猪)ADMP透射电子显微镜下发现,不同循环次数获得的异种(猪)ADMP均能保留大量胶原分子。BJ人成纤维细胞和HaCaT细胞随包被浓度的增加,细胞黏附作用不断增强,浓度高于750 μg/cm²,无明显变化。实时细胞分析技术检测BJ人皮肤成纤维细胞在DMEM培养液基对照组培养液72 h后的迁移指数为1.21±0.10,而异种(猪)ADMP培养液基试验组的迁移指数为3.66±0.11,两组比较差异有统计学意义(t＝22.24,P＝0.002)。在异种(猪)ADMP培养液的原代表皮细胞形态统一增殖迅速,对照组出现一定比例的分化细胞,试验组与对照组第5天细胞数分别为(4.11±0.28)×10⁵、(1.10±0.12)×10⁵个,两组比较差异有统计学意义(t＝13.51,P＝0.005);第8天细胞数分别为(5.00±0.48)×10⁵、(3.05±0.30)×10⁵个,两组比较差异有统计学意义(t＝4.87,P＝0.039),增殖曲线显示试验组在接种即日培养液至第5天,一直处于指数增长期。荧光染色中异种(猪)ADMP培养液的原代表皮细胞E-cad全部表达,少量表达角蛋白10,整合素α6几乎全部强阳性,角蛋白14全部表达并有部分强阳性,Ki-67抗原表达率高。 结论通过生物酶解和冷冻研磨获得的异种(猪)ADMP对参与皮肤创伤修复最重要的表皮细胞和成纤维细胞,具有促进其增殖和迁移的作用,未来可进一步应用于皮肤创伤修复。     

异种(猪)脱细胞真皮基质在糖尿病足溃疡修复中的应用效果

目的探讨异种(猪)脱细胞真皮基质(ADM)在糖尿病足溃疡修复中的应用效果。 方法选取宁夏回族自治区石嘴山市第一人民医院烧伤整形外科2015年3月至2017年6月收治的76例糖尿病足溃疡患者,采用电脑随机分组法将患者随机分为两组,每组38例,实验组患者应用异种(猪)ADM覆盖治疗,对照组应用磺胺嘧啶银乳膏包扎治疗,观察创面的愈合疗效、愈合时间、换药次数、换药2 h后疼痛视觉模拟评分、愈后患者满意度评分和创面病原菌检出率。对数据行χ²检验、t检验。 结果治疗2周后实验组治疗总有效率(94.74%)高于对照组(78.95%),差异有统计学意义(χ²＝4.145,P<0.05);实验组创面愈合时间[(24.21±3.21)d]短于对照组[(31.89±4.64)d],实验组创面换药次数[(8.34±1.12)次]少于对照组[(15.11±1.69)次],实验组疼痛视觉模拟评分[(3.29±0.25)分]低于对照组[(4.79±0.74)分],实验组愈后患者满意度评分[(9.08±0.49)分]高于对照组[(8.16±0.72)分],差异均有统计学意义(t＝8.359、20.560、10.364、6.548,P值均小于0.05);治疗1周后,两组创面分泌物病原菌检出率比较差异无统计学意义(χ²＝2.657,P>0.05)。 结论异种(猪)ADM作为糖尿病足创面覆盖物,改善局部微环境,促进创面肉芽组织生长,缩短创面愈合时间,减少细菌侵入,减轻患者心理和经济负担。     

异种羊脱细胞真皮基质与白体微粒皮复合移植后创面愈合及COX-2、VEGF的表达研究

目的制备异种羊脱细胞真皮基质（ADM）,观察异种羊ADM与白体微粒皮复合移植的组织学变化,以及免疫组化法检测环氧化酶-2（COX-2）、血管内皮生长因子（VEGF）在复合移植过程中的表达。方法用0．25％胰蛋白酶和O．5％曲拉通（TritonX-100）溶液联合脱细胞法制备异种羊ADM。以48只Wistar大鼠为动物模型随机分为2组,每组各24只,背部做4cm×3cm全层皮肤缺损,分组采用羊ADM＋自体微粒皮＋异体皮（实验组）及自体微粒皮＋异体皮（对照组）覆盖,术后2、4、6周观察植皮区愈合情况,检测创面收缩率;同时,在以上不同时间段处死大鼠做组织病理学观察及免疫组化检查。结果（1）通过实验可成功制备出合格的异种羊ADM,脱细胞异种皮的镜下观察可见基质中的表皮已经完全除去,胶原纤维粗细均匀,排列规则,没有细胞成份存在。（2）进行移植术后,观察6周,两组皮片创面基本愈合,两组创面收缩率差异具有统计学意义（P〈0．05）,实验组术区收缩程度低,组织学检查可见成纤维细胞和血管长入,胶原纤维、弹力纤维结构排列规则;对照组创面收缩明显,组织学检查见成纤维细胞和血管无规则生长,胶原纤维、弹力纤维结构排列紊乱。两组大鼠创面COX-2、VEGF表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论异种羊ADM在彻底脱除了基质中有免疫原性的细胞成分的同时,义保留了组织的基本结构,成为极低抗原性的真皮支架,是一种良好的真皮替代物;异种羊ADM与自体微粒皮复合移植后外观和功能优于白体微粒皮移植;COX-2,VEGF可能参与了创面的修复。     

人脱细胞真皮基质在乳房切除术后即刻乳房重建术中应用的研究进展

乳房切除术后即刻进行乳房重建术可以重塑乳房的外形,恢复女性第二性征,对患者的心理健康有利,可以增加其作为女性的自信心.人脱细胞异体真皮基质(HADM)是一种同种异体脱细胞真皮基质材料,在乳房切除术后即刻乳房重建术中的应用对术后结果有着积极作用.HADM具有强大的再生能力,能为基于植入物的乳房重建提供牢固的组织支持,改善...     

Second-harmonic generation microscopy for assessment of mesenchymal stem cell-seeded acellular dermal matrix in wound-healing

Direct intra-skin injection of mesenchymal stem cells (MSCs) and the use of biomaterial scaffolds for grafts are both promising approaches of skin wound repair, however they still cannot generate skin that completely resembles the natural skin structures. In this study, we combined these two approaches by using acellular dermal matrix (ADM) recellularized with MSCs to repair cutaneous wounds in a murine model and two-photon fluorescence (TPF) microscopy and second-harmonic generation (SHG) microscopy to assess the effects of this therapy on wound healing. Bone marrow-derived mesenchymal stem cells (BM-MSCs) were tagged with GFP and seeded into ADM (ADM-MSC) via MSC and ADM co-culture. ADM-MSC, ADM or saline was applied to murine excisional skin wounds and wound-healing was evaluated by histological examination on days 7, 14, 21 and TFP microscopy on days 1, 3, 5 and 21 post-treatment. ADM-MSC promoted healing significantly more than treatment with ADM or saline alone, as it led to substantial neovascularization and complete skin appendage regeneration. Furthermore, the SHG microscopic imaging technique proved to be a useful tool for monitoring changes in the collagen network at the wound site during the healing process and assessing the effects of different therapies.     

异种脱细胞真皮基质修复膜在喉肿瘤切除术后黏膜缺损修复中的临床研究

目的探讨应用异种（牛）脱细胞真皮基质修复膜修复喉部手术后黏膜缺损的I临床使用价值。方法对20例喉癌术后的黏膜缺损应用异种脱细胞真皮基质修复膜1期修复，其中声门区癌18例，其中T2NoMo8例，T3N1MO5例，T3N2MO4例，T4N2MO1例。声门上区癌2例，T3N1MO1例，T3N2MO1例。结果20例患者黏膜缺损修复均1期愈合。患者术后3-6个月应用电子喉镜复查，修复膜均已替代缺损黏膜组织，局部功能恢复；20例喉癌中6月生存率100％（11／11）；一年生存率100％（3／3），其余9例术后不足6月，正在观察之中。讨论异种脱细胞基质修复膜为修复喉肿瘤术后的黏膜缺损提供了一种新的方法，手术操作简便，有很好的临床应用价值。