红色毛癣菌菌落表型和基因型的分型研究

目的:确定红色毛癣菌菌落表型和基因型的相关性以及与感染部位的关系。方法:收集红色毛癣菌临床分离株138株,采用传统培养方法对红色毛癣菌进行表型分型,利用红色毛癣菌特异性引物扩增TRS-1区重复序列进行种内基因分型,并分析检测结果与感染部位的相关性。结果:138株红色毛癣菌共分离出3种菌落表型:绒毛型、沟纹型和粉末型;分离出5型基因型,其中Type1 64株,Type2 18株,Type3 19株,Type4 12株,Type5 25株。红色毛癣菌的表型和基因型与感染部位均无相关性(均P0.05),红色毛癣菌的菌落表型与基因型有一定的相关性(P0.05)。结论:红色毛癣菌基因型与菌株来源有关而与感染部位无关,可为判断复发和再感染提供依据。     

红色毛癣菌表型稳定性研究

为探讨红色毛癣菌表型的稳定性,所有菌株采用沙堡琼脂试管培养基(SDA)培养。菌株鉴定及分型依据菌落的特征及色素,大小分生孢子的形态,尿素酶试验和毛发穿孔试验。对近期临床分离的10株红色毛癣菌和1株标准株,间隔4周传代1次,共传4次。207株红色毛癣菌共分离出4个表型,其中绒毛型占首位(45.4%),沟纹型(24.1%),羊毛型(20.8%),粉末型(9.7%),未见颗粒型。保存1年后207株有54株发生形态变异,变异率为26.1%,沟纹型变异最小,相对稳定。11株红色毛癣菌传代后菌落形态或色素发生变异。红色毛癣菌表型不稳定,保存和传代后的菌落形态或产色均易发生变异;沟纹型变异率最低。     

一株耐热红色毛癣菌临床分离株的基因型鉴定

目的 探讨1株引起特殊皮肤肉芽肿损害的红色毛癣菌菌株的真菌学特点及其基因序列的变化。方法 常规真菌学鉴定法和使用PCR方法测定菌株的核糖体保守区及非转录区(NTS)内trs-1区基因序列。结果 耐热菌株经真菌学鉴定及核糖体保守区基因序列测定均证实为红色毛癣菌,但其核糖体基因非转录区(NTS)内trs-1(串联重复亚单位)区基因序列测定显示有明显的不同。结论 核糖体基因NTS区内trs-1区基因序列的改变可能的解释为此株耐热红色毛癣菌为红色毛癣菌的一个同型变种,这一变种具有较强的侵袭力,能导致特殊的皮肤损害;亦或为菌株为适应外界环境条件改变发生的基因水平的变异。     

红色毛癣菌基因型稳定性的研究

目的探讨红色毛癣菌基因型的稳定性。方法采用随机引物PCR法和探针与DNA印迹杂交法。以CTAB法提取DNA。随机引物为OPAA11[5-′ACCCGACCTG-3′],印迹法以NS5和ITS4(真菌的特异性引物)为引物,以红色毛癣菌的标准株为模板,扩增出rDNA的部分18S区、ITSⅠ区、5.8S区和ITSⅡ区为探针,并用随机引物法将探针用P32标记,与EcoRⅠ酶切的基因组DNA杂交。结果①AP-PCR法:红色毛癣菌扩增的主要带型是2.2,1.7,1.3,0.9,0.7 kb,所试红色毛癣菌传代前后扩增带型均无变化。②探针与DNA印迹杂交法:原代(1代)与传代后的(2,3,4代)杂交带型一致,11株红色毛癣菌均表现为3条带,分两型(分子量分别为2.4,3.9,5.9 kb和2.4,4.4,6.5 kb)。结论红色毛癣菌基因型稳定。     

红色毛癣菌raubitschekii变种致Majocchi肉芽肿一例

目的 报道1例Majocchi肉芽肿,对其病原菌红色毛癣菌变种raubitschekii的形态学、生理学及分子学特征进行研究,并通过基因分型的方法分析其深在感染与浅表皮肤感染的关系.方法 进行临床和病理检查,真菌镜检和培养,尿素酶试验,内转录间隔区(ITS区)序列分析.对来源于该患者病变趾甲及组织的菌株及7株红色毛癣菌的rDNA非转录间隔区(NTS)串联重复亚单位1(TRS-1区)进行PCR.结果 48岁女性患者,背部、臀部、大腿出现红色丘疹、结节2个月.9个月前曾行肝移植术,甲癣病史3年,术后加重.经病理和真菌学检查,确诊为Majocchi肉芽肿.足趾甲和组织真菌培养菌落和显微镜下形态、尿素酶试验阳性,结合ITS区序列分析结果,证实致病菌为红色毛癣菌变种raubitschekii.TRS-1区扩增后显示,病变趾甲和组织来源的菌株基因型完全一致,与其余临床分离株有差异.结论 NTS区的TRS-1区显示基因多态性,病变趾甲和组织基因型完全一致,提示两者来源相同.     

多部位红色毛癣菌感染分离菌株DNA分型研究

目的 探讨多部位红色毛癣菌感染不同部位分离菌株基因型的差异。方法 采用巢式PCR扩增真菌rDNA非转录间隔区(NTS)中Trs-1片段,检测基因多态性。并比较同一患者不同感染部位分离菌株的基因型差异。结果 受试36株菌株按照PCR指纹图共分为10型,基因型分布与感染部位关系不大。在17例受试患者中,8例不同感染部位分离得到的菌株基因型有差异,且与不同感染部位的病程差异无关。结论 多部位红色毛癣菌感染可能为多菌株引起,提示部分多部位皮肤癣菌感染患者不同部位皮肤癣菌感梁的传染源可能来源于外界,而与机体原已存在的感梁灶关系可能不大。     

播散性红色毛癣菌肉芽肿一例

目的报道1例播散性红色毛癣菌肉芽肿。方法对患者的临床资料、真菌学检查、组织病理及疗效进行分析。结果患者为46岁女性,手足、躯干红斑、脱屑30年,头皮、躯干、上肢结节、溃破2年。检查见头皮、颈、躯干和上肢有紫红色浸润性斑块、结节,部分皮损表面破溃、渗液、结痂。皮损内穿刺液及甲直接镜检菌丝阳性,培养为红色毛癣菌生长。皮损病理检查:真皮内可见上皮细胞样肉芽肿,其中央大片坏死,周围见结节样上皮样细胞团块,伴少许多核巨细胞、淋巴细胞及嗜酸粒细胞浸润。PAS染色真皮内见真菌菌丝。诊断为播散性红色毛癣菌肉芽肿。伊曲康唑治疗3个月后皮损消退,遗留萎缩性瘢痕。用药期间未见不良反应。结论播散性红色毛癣菌肉芽肿临床少见,伊曲康唑疗效满意。     

须癣毛癣菌表型的研究

目的：采用传统方法对须癣毛癣菌进行表型的分型。方法：采用沙氏琼脂试管培养基（SDA）培养。菌株鉴定及分型依据菌落的形态，菌丝及大小分生孢子的特征，尿素酶试验，葡萄糖米粉试验和体外毛发穿孔试验。结果：36株须癣毛癣菌共分为5个表型，羊毛状、紧密状和绒毛状居多，三型占72．22％，颗粒状最少。螺旋菌丝主要见于绒毛状和粉末状；羊毛和紧密状的镜下结构相似，见大量细长菌丝及少量圆形小分生孢子；颗粒状的大分生孢子最多。结论：须癣毛癣菌分为5个表型，各型镜下结构不同。     

播散型皮肤红色毛癣菌肉芽肿一例

患者男,35岁,全身出现泛发红斑、斑块、结节伴瘙痒8年。皮肤科检查：头面部及躯干四肢大片丘疹、红斑、浸润性斑块及结节,部分皮损边界清,伴少量鳞屑、结痂、萎缩性瘢痕,双眼睑肿胀,右耳廓已破坏消失,左耳廓变形,头发、眉毛、睫毛稀疏脱落,指（趾）甲甲板均肥厚、变形、断裂。真菌学检查：取皮损处皮屑直接镜检示分枝分隔菌丝阳性,真菌培养鉴定为红色毛癣菌生长。皮损组织病理检查：表皮角化过度,棘层增生肥厚,真皮浅中层可见上皮样细胞团块,伴淋巴细胞、浆细胞为主的炎细胞浸润,散在嗜酸粒细胞及多核巨噬细胞。PAS和银染色均可见真皮浅中层散在分布分枝分隔菌丝。诊断为播散性皮肤红色毛癣菌肉芽肿。伊曲康唑治疗3个月后皮损消退,留有色素沉着及萎缩性瘢痕,真菌直接镜检及培养均示阴性,服药期间未见明显不良反应。     

大连地区红色毛癣菌表型与皮肤癣菌病相关性分析

红色毛癣菌从形态学分5型^[1],对表型及其致病性的研究报道不多。本科2002年1月至2003年10月,对在我科门诊就诊的红色毛癣菌病临床分离培养出的274株红色毛癣菌的表型以及与临床所致疾病的关系进行了初步分析。     

红色毛癣菌菌落产色变异的实验研究

红色毛癣菌菌落产生红色是该菌重要鉴定特征之一，但常遇到不产生红色的菌株。了解这种产色变异的范围和频率以及影响因素，对提高鉴定正确性、更好地指导治疗有重要意义。方法：对２００株不同地区来源的临床株进行初代分离和传代培养，并观察１％葡萄糖玉米粉吐温琼脂和马铃薯葡萄糖琼脂对产色的恢复作用；比较不同培养条件对产色变异的影响，对有关数据进行统计学处理。结果：初代产色消失率为３４％，传代诱导消失率为４９％，稳定消失率达２４％。大多数传代消失为可逆的，而大多数初代变异为不可逆的；较高的ｐＨ和较低的培养温度不利于产色。北方分离株产色消失率显著高于南方分离株。结论：红色毛癣菌产色消失率发生较高，已对其鉴定产生影响，其确切的发生机理，有待深入研究     

用聚合酶链反应进行红色毛癣菌种内分型

目的 建立一种快速且可重复的方法应用于红色毛癣菌的菌株区分。方法 PCR扩增20株红色毛癣菌核糖体基因的非转录间隔区内的两个串联重复亚单位trs-1,trs-2，克隆两段PCR产物，用PGEM-T载体构建重组质粒载体进行目的基因测序。结果 特异性扩增trs-1和trs-2区产生菌株特征的条带图，两个串联重复亚单位的基因测序结果说明了PCR指纹图差异的原因。结论 这种PCR方法产生的特征性的指纹图提供了一种快速，稳定的分子分型方法，可应用于红色毛癣菌感染的流行病学和致病性的进一步研究。     

Asthma induced by allergy to Trichophyton rubrum

The worldwide incidence of asthma and of allergic respiratory diseases is increasing (Akiyama K. 'Environmental allergens and allergic diseases.' Rinsho Byori 1997;45(1):13. D'Amato G, Liccardi G, D'Amato M. Environment and development of respiratory allergy. II. Indoors. Monaldi Arch Chest Dis 1994;49(5):412. Weeke AR. Epidemiology of allergic diseases in children. Rhinol Suppl 1992;13:5. Ulrik CS, Backer V, Hesse B, Dirksen A. Risk factors for development of asthma in children and adolescents: findings from a longitudinal population study. Respir Med 1996;90(10):623.) This has been attributed to several factors, including lifestyle changes and an expanding variety of potential causative allergens. Management of asthma entails preventive and acute medications, immunologic therapies, and removal of the identified allergen(s) from the patient's environment. Without the latter, patients may not experience full symptomatic relief. This case report describes a patient who developed bronchial asthma subsequent to an infection of tinea pedis and pedal onychomycosis; antifungal management resulted in full resolution of his tinea pedis, onychomycosis and asthma.     

HaCaT细胞对红色毛癣菌生长的抑制作用

目的 探讨角质形成细胞对红色毛癣菌生长的抑制作用.方法 将HaCaT细胞采用含10%小牛血清的DMEM培养液,5%CO2环境下,37 ℃孵育至80%融合时,弃去培养液,加入用无血清DMEM配制的菌丝段悬液共孵育(浓度0.1×105/mL～1.0×105/mL),并以菌丝段悬液作为阴性对照.分别于4 h、8 h、16 h和24 h制备共孵育后的菌丝段悬液,进行台盼蓝染色计数和菌落计数,对真菌生长状况进行评价并计算真菌生长抑制率.结果 在细胞和菌丝段共孵育4 h、8 h、16 h和24 h,台盼蓝染色法测得的菌生长抑制百分数分别为46.8%±8.0%、64.0%±5.5%、76.3%±7.7%和39.5%±4.9%;菌落计数法测得菌生长抑制百分数分别为39.7%±4.9%、58.0%±8.9%、68.3%±7.4%和39.9%±5.5%.结论 HaCaT细胞对体外培养的红色毛癣菌有一定的抑制作用.     

First report on autochthonous urease-positive Trichophyton rubrum (T. raubitschekii) from South-east Europe

BACKGROUND: Trichophyton raubitschekii is a dermatophyte belonging to the T. rubrum complex and is differentiated principally by its positive urease activity and production of profuse macroconidia and microconidia in culture. It is classically isolated from African, South-east Asian and Australian aboriginal patients with tinea corporis or tinea cruris. OBJECTIVES: This study was undertaken to screen Greek and Bulgarian clinical isolates identified as T. rubrum for T. raubitschekii and to delineate these strains by two molecular methods used for the first time in T. rubrum epidemiological studies. METHODS: Ninety-five Greek and 10 Bulgarian strains, originating from various body sites, initially identified as T. rubrum, were screened for urease activity. The biochemical properties and morphology of the urease-positive strains were determined. Strains were delineated with polymerase chain reaction (PCR)-ribotyping amplifying repeat elements of the intergenic spacer region and by PCR fingerprinting. RESULTS: Five Greek and one Bulgarian T. raubitschekii strains were identified comprising isolates from patients with tinea manuum (one), tinea corporis (one), tinea cruris (one) and tinea unguium (three). Only one strain had the classical T. raubitschekii microscopic morphology, whereas the remaining five presented a dominant arthroconidial phenotype. Both typing methods clustered all T. raubitschekii and T. rubrum isolates together in the same group, indicating strain homogeneity in the genetic regions examined. CONCLUSIONS: The reported isolation of T. raubitschekii in the Balkan and South-eastern Mediterranean regions extends the geographical distribution of this species. As the more primitive T. raubitschekii probably represents the parental population of T. rubrum, the Greek and Bulgarian T. raubitschekii strains could represent a remnant of the T. rubrum spread that took place after the First World War, rather than being a recent epidemiological event.     

Deep dermatophytosis caused by Trichophyton rubrum in immunocompromised patients

In immunosuppressed patients, dermatophytosis can be more invasive, affecting the dermis and subcutaneous tissues. The authors describe the cases of two patients with kidney and heart transplanted, respectively, that developed a deep dermatophytosis caused by Trichophyton rubrum, confirmed by culture and DNA sequencing. Both patients had concomitant onychomycosis, and both were treated with itraconazole for about two months, which was interrupted due to pharmacological interactions with the immunosuppressive drugs and switched to terbinafine, leading to clinical resolution within four months. Deep dermatophytosis should be considered when dealing with immunocompromised patients, especially when a superficial dermatophytosis is present. Oral treatment is necessary and terbinafine is a preferable option in solid organ transplant recipients because it has less pharmacological interactions.