子宫颈癌组织中微小RNA的差异表达

宫颈癌的发病率在女性恶性肿瘤中仅次于乳腺癌.据国际癌症研究中心(IARC)统计,世界范围内每年有近50万的宫颈癌新发病例,占所有恶性肿瘤新发病例的10%;每年因宫颈癌死亡的人数高达27万人,其中80%在发展中国家[1].新疆尤其是南疆维吾尔族妇女宫颈癌发病率很高(527/10万),是北京市的210多倍,是该民族妇女死亡的主要原因之一[2 ];且患病年龄早,平均年龄为45.0岁(汉族为50.8岁);就诊时约80%已为中晚期[3].     

大鼠肺发育过程中肽类生长因子表达变化

目的探讨胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor,IGF)Ⅰ、Ⅱ、血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)AA、BB和角化细胞生长因子(keratinocgte growth fac- tor,KGF)在大鼠肺发育过程中的作用。方法于胚胎18、20和21 d以及出生后1、4、7、10和21 d 留取SD大鼠肺组织标本,采用免疫组织化学法和Western blot对IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ、PDGF-AA、PDGF- BB表达进行定位、定量检测,采用RT-PCR方法对IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ、PDGF-A、PDGF-B和KGF mR- NA表达水平进行半定量分析。结果 IGF-Ⅰ表达高峰期为出生后4、7和10．d;IGF-Ⅱ在胎肺阶段即有丰富表达,出生后呈下降趋势,且两者在蛋白与mRNA水平的变化情况基本一致。PDGF-A、 PDGF-B mRNA在胎肺期即有明显表达,除出生后7 d时升高外(0．97±0．23,P<0．01),其余各时间点间PDGF-A mRNA表达差异无统计学意义(P>0．05);PDGF-B mRNA表达在生后4 d时有所增强(0．42±0．16,P<0．05),10 d时有所下降(0．12±0．02,P<0．05),其余各时间点间差异均无统计学意义(P>0．05)。Western blot检测结果提示PDGF-AA在胎肺组织有较强表达,出生后1、4和7 d 为其高峰期;而PDGF-BB在胎肺期表达较弱,出生后4、7和10 d时达到峰值。KGF mRNA表达以胎肺组织最强,出生后各时间点间无明显差异(P>0．05)。结论肽类生长因子表达动态改变在肺组织正常发育过程中扮演重要角色。     

应用三维超声VOCAL旋转技术评估正常胎肺发育

目的:探讨妊娠中晚期正常胎儿肺体积、肺质量-体质量比(FLB)正常参考值范围及胎肺体积随孕周和胎儿体质量的变化关系。方法:选取妊娠18~39+6周的正常胎儿198例,应用三维超声VOCAL旋转技术测量胎儿左肺体积、右肺体积及肺总体积,应用二维超声测量的胎儿生物参数,经Hadlock方程系统获得胎儿体质量,计算FLB值,计算胎肺体积及FLB的正常参考值范围,应用Pearson相关分析来分析胎儿肺体积与孕周和胎儿体质量的关系。结果:胎儿左肺、右肺及总肺体积三维VOCAL技术测值随孕周和胎儿体质量的增加呈上升趋势。左肺、右肺及总肺体积与孕周呈高度正相关(左肺体积:r=0.970,P<0.001;右肺体积:r=0.972,P<0.001;总肺体积:r=0.970,P<0.001);左肺、右肺及总肺体积与体质量也呈高度正相关(左肺体积:r=0.978,P<0.001;右肺体积:r=0.984,P<0.001;总肺体积:r=0.979,P<0.001)。FLB值不随孕周变化,正常值范围约0.026~0.032。结论:妊娠中晚期正常胎儿的肺体积随妊娠周数及胎儿体质量的增加而增大,胎肺体积及FLB参考值范围可对评估胎肺发育提供重要理论依据。     

单独使用沐舒坦对大鼠胎肺表面活性物质及胎肺形态发育的影响

目的研究单独使用沐舒坦对大鼠胎肺表面活性物质及胎肺形态发育的影响。方法选择健康清洁级妊娠的SD大鼠18只分为3组,沐舒坦治疗组、地塞米松治疗组和对照组各6只。各组大鼠于妊娠第16、17、18天尾静脉分别注射沐舒坦75mg／kg(按成人15mg／kg计算),地塞米松0．8mg／kg(按成人0．2mg／kg计算),生理盐水2ml／只。于妊娠第19天剖宫取出胎肺,通过光镜图像分析和电镜技术观察胎肺的形态结构,并测定胎肺的磷脂含量。结果在光镜下,沐舒坦和地塞米松治疗组的肺泡扩张比对照组明显,肺泡腔结构大且较规则;呼吸膜周径比对照组大;肺泡间质比对照组薄(P<0．01),但沐舒坦组与地塞米松组之间无差异(P>0．05)。电镜下,两个治疗组的板层小体数量明显多于对照组,且板层小体深染、致密。而对照组肺内难见板层小体,胞浆内糖原沉积却非常丰富。此外,沐舒坦治疗组肺磷脂含量为(0．72±0．06)mmol／g湿肺,地塞米松治疗组为(0．73±0．19)mmol／g湿肺,对照组为(0．62±0．09)mmol／g湿肺,沐舒坦、地塞米松治疗组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0．01),沐舒坦治疗组与地塞米松治疗组两者之间无统计学差异(P>0．05)。结论单独使用沐舒坦能促进胎肺发育,效果类似于地塞米松。沐舒坦可能成为临床上用于产前促胎肺成熟的一种更好的选择。     

地塞米松与倍他米松对大鼠胎肺形态发育影响的对比

目的 比较产前小剂量应用地塞米松、倍他米松对大鼠胎肺形态发育的影响.方法 15只孕鼠随机分成对照组、地塞米松治疗1 d组、3 d组和倍他米松治疗1 d组及3 d组,每组3只.地塞米松及倍他米松3 d组分别于妊娠第16、17、18天连续腹腔注射地塞米松或倍他米松,剂量为0.2 mg/(kg·d);地塞米松及倍他米松1 d组于妊娠第16、17天腹腔注射4 m1生理盐水,妊娠第18天给予相应剂量药物.对照组大鼠于妊娠第16、17、18天连续注射4 ml生理盐水.光镜及电镜观察各组孕鼠的胎仔肺组织形态发育变化. 结果 (1)与对照组相比,倍他米松3 d、1 d组及地塞米松3 d组肺泡结构发育较为成熟.(2)倍他米松3 d组的肺泡间隔为(23.38±7.77)μm,地塞米松3 d组为(30.82±5.32)μm,倍他米松1 d组为(33.37±9.30)μm,均小于对照组[(71.15±48.72)μm](P＜0.01);倍他米松1 d组的呼吸膜周径为(43.24±18.20)μm、肺泡表面积为(412.71±298.45)μm2,倍他米松3 d组分别为(61.22±23.58)μm和(780.23±428.34)μm2,地塞米松3 d组分别为(40.31±15.20)μm和(471.08±324.63)μm2,均大于对照组[分别为(32.06±11.40)μm和(285.70土175.77)μm2](P＜0.01);倍他米松1 d组与地塞米松1 d组相比肺泡间隔薄,呼吸膜周径及肺泡表面积增大(P＜0.01).倍他米松3 d组与地塞米松3 d组相比肺泡间隔薄(P＜0.01),呼吸膜周径及肺泡表面积增大(P＜0.01).(3)透射电镜观察发现,倍他米松1 d、3 d及地塞米松3 d组肺泡Ⅱ型上皮细胞内可见板层小体,以倍他米松和地塞米松3 d组改变最为明显,而对照组未见板层小体.结论 小剂量地塞米松、倍他米松均能促进胎肺发育,但倍他米松效果更好.     

胎肺发育过程中炎性介质和细胞因子在急性肺损伤中的作用

急性肺损伤(acute lung injury,ALI)指机体遭受严重感染、创伤、休克等打击后发生的急性炎症反应,以弥漫性肺泡、毛细血管膜损伤为主要病理变化,以进行性呼吸困难和缺氧为主要临床表现,是新生儿临床常见的危重症[1-2].促炎因子与抗炎因子之间的动态平衡是影响ALI预后的重要因素[3].新生儿肺发育欠成熟,对内源性细胞因子的变化易感,尤其是低出生体重及小胎龄的早产儿更容易发生炎症介导的ALI[4].炎性介质网络的平衡以及转录因子的调控,目前已经成为ALI发病机制的研究重点.现就炎性介质与新生儿ALI的关系进行综述.     

子宫内膜癌中微小RNA的研究进展

MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性非编码小RNA,其在转录后水平负调节靶基因的表达。研究证实,miRNAs在肿瘤发生和发展中起关键作用,分析miRNAs表达谱有助于早期诊断子宫内膜癌和判断预后,进一步研究miRNAs及其靶基因的功能可为子宫内膜癌的治疗提供新思路。现就miRNAs的生物起源,作用机制及其在子宫内膜癌中的研究进展做一综述。     

宫内炎性因子暴露与胎肺发育

宫内炎性因子暴露主要指细菌或其他病原体宫内感染时,羊水、胎盘及胎膜中出现炎性细胞浸润并产生大量炎性因子,使胎儿长期暴露于炎性环境中。炎性因子可导致胎膜早破、早产、新生儿神经损伤、脑瘫、坏死性小肠结肠炎及慢性肺疾病(chroniclungdisease,CLD)等,其中起主要作用的炎性因子有IL-1、IL-6、IL-8和TNF-α等。以下就宫内炎性因子对胎肺发育的影响进行综述。     

缺氧诱导丝裂原因子对胎肺形态发育及表面活性蛋白表达的影响

目的 探讨缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF)对胎肺形态发育及表面活性蛋白B(surfactant protein B,SP-B)、表面活性蛋白C(snrfactant protein C,SP-C)表达的调控作用.方法 体外分离、培养小鼠第13.5天胎肺组织,分为HIMF处理组:在培养基中添加重组HIMF蛋白,终浓度为100 nmol/L;对照组培养基中不加任何处理.分别在培养0、48、72 h后,每组每时间点选取20例胎肺采用倒置显微镜和HE染色观察胎肺形态学和组织学的改变,采用Western印迹、免疫组化、实时逆转录-聚合酶链反应技术检测胎肺组织中SP-B和SP-C的蛋白、mRNA表达水平变化.结果 HIMF处理组培养48、72 h后,肺泡数目分别为(14.37±0.85)和(18.41±1.24)个/高倍视野,肺泡分支的数目分别为(2.51±0.35)和(3.28±0.51)个/高倍视野,均较对照组相应时间点[分别为(8.09±0.92)、(9.54±0.78)、(1.45±0.32)和(1.69±O.43)个/高倍视野]增加,差异有统计学意义(P<0.05).对照组胎肺体外培养72 h后,SP-B、SP-C蛋白表达较少,染色强度弱,主要定位于Ⅱ肺泡上皮细胞;HIMF处理组可见Ⅱ型肺泡上皮细胞内SP-B、SP-C弥漫表达,以靠近肺组织边缘为甚.HIMF处理组培养48和72 h后,胎肺组织中SP-B、SP-C蛋白和mRNA水平均较对照组相应时间点增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 HIMF可能通过上调胚胎组织中SP-B和SP-C的表达,促进胎肺形态发育,为进一步研究HIMF在胚胎肺泡发育和成熟中的作用奠定了基础.     

C/EBP α在妊娠期糖尿病大鼠胎肺成熟过程中的作用

目的:探讨CCAAT/增强结合蛋白α(C/EBP α)在妊娠期糖尿病(GDM)大鼠胎肺成熟过程中的作用。方法:将SD孕鼠随机分为妊娠期糖尿病组(GDM组)和对照组。GDM组给予链脲佐菌素行腹腔注射建立GDM模型,每隔一天检测孕鼠的血糖及体重。于孕21天剖宫产取出胎鼠,记录胎鼠体重、数量及胎仔血糖。HE染色观察胎鼠肺组织病理改变,油红O染色检测胎鼠肺组织中脂质的变化情况,透射电镜观察胎鼠肺组织超微结构改变,免疫组化法检测胎鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)和C/EBP α表达情况,RT-PCR法检测SP-A和C/EBP α mRNA表达。Western blot法检测SP-A和C/EBP α蛋白表达。结果:GDM组孕鼠和胎鼠血糖均显著高于对照组,孕鼠体重、胎鼠体重及胎仔量均显著低于对照组,差异均有统计学意义(P均0.000)。GDM组胎鼠肺泡数和肺泡面积均显著低于对照组,肺泡间隔大于对照组,差异均有统计学意义(P0.000)。GDM组胎鼠肺组织中AECⅡ内的板层小体数明显减少,大量糖原颗粒聚集,细胞表面的微绒毛明显减少。油红O染色见胎鼠肺组织中脂滴数明显减少。SP-A和C/EBP α的mRNA和蛋白表达水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P均0.05)。结论:GDM胎肺组织中C/EBP α表达降低,抑制了SP-A和脂质生成,阻碍了细胞内糖原转化成脂质。胎肺组织中C/EBP α表达降低可能是GDM胎鼠肺发育延迟的发病机制之一。     

重度子(癎)前期和正常妊娠胎盘中微小RNA-155及富含半胱氨酸蛋白61的差异表达

目的 探讨微小RNA-155(microRNA-155,miR-155)和富含半胱氨酸蛋白61(cysteine-rich 61,CYR61)在重度子(癎)前期和正常妊娠胎盘中差异表达的意义. 方法取18例重度子(癎)前期患者(孕36～40周)胎盘和同期分娩且孕周匹配的18例正常产妇胎盘,从mRNA水平检测miR-155和CYR61 mRNA的表达情况,并在蛋白水平检测CYR61的表达情况. 结果 与正常产妇胎盘相比,重度子(癎)前期组胎盘的miR-155表达水平明显增高(165.7±16.4和527.9±49.1,t=7.00,P＜0.01);而CYR61 mRNA表达水平及蛋白表达水平均降低(31.7±2.7和16.4±1.2,t=5.10,P＜0.01;36.4±1.5和19.7±1.2,t=36.26,P＜0.01).重度子(癎)前期和正常妊娠胎盘组织中的miR-155与CYR61 mRNA的检测结果的相关性分析显示,两组内两者表达均呈负相关(r=-0.52,P＜0.05;r=-0.57,P＜0.05). 结论重度子(癎)前期患者胎盘中miR-155的上调,可能与促血管生成因子-CYR61的表达下降有关.miR-155、CYR61可能共同参与了子(癎)前期胎盘血管缺陷的发生.     

趋化因子在正常妊娠母胎界面的表达及功能

趋化因子广泛表达于母胎界面,并呈现多种特定的表达模式。滋养细胞、蜕膜淋巴细胞、基质纤维母细胞、血管内皮细胞均表达多种趋化因子及其受体。目前发现,趋化因子主要有4种表达模式:(1)散布于蜕膜基质细胞中;(2)集中表达于聚集成团的淋巴细胞或纤维母细胞;(3)表达于浸润性的细胞滋养细胞;(4)表达于子宫血管内皮细胞。部分趋化因子有多种表达模式。趋化因子通过与特异性受体结合,参与蜕膜淋巴细胞募集、血管重铸以及在胎盘分化过程中决定滋养细胞的增殖、分化、迁移和浸润。     

子痫前期相关微小RNA的研究进展

子痫前期(preeclampsia,PE)是妊娠20周后出现的特发性高血压综合征,其病因和发病机制至今仍未完全阐明。微小RNA(microRNA,miRNA)是一类内源性的单链非编码RNA。新近研究证实,PE胎盘中存在异常表达的miRNA,分析母体血清miRNA表达谱有助于PE的早期预测,进一步研究PE相关miRNA及其靶基因的功能可能有助于阐明PE的发病机制,进而为PE的预防和治疗提供新思路。综述新近发现的与PE密切相关的miRNA的研究进展。     

胎肺成熟机制及促胎肺成熟的治疗

早产是导致围生期新生儿死亡的最主要原因 ,其发生率约为 10 % ,占围生儿死亡 (除外胎儿畸形 )的 3 / 4。存活的早产儿中 ,合并症极多 ,其中新生儿呼吸窘迫综合征(ｎｅｏｎａｔａｌｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｄｉｓｔｒｅｓｓｓｙｎｄｒｏｍｅ ,ＮＲＤＳ)是早产儿最常见的合并症之一 ,其病因主要是肺表面活性物质 (ｐｕｌ ｍｏｎａｒｙｓｕｒｆａｃｔａｎｔ,ＰＳ)缺乏。自 1972年Ｌｉｇｇｉｎｓ和Ｈｏｗｉｅ首次报道产前应用糖皮质激素能促进胎肺成熟 ,减少ＮＲＤＳ及围生儿死亡 ,近年来已被广泛应用早产的治疗中。许多研究表明 :产前糖皮质激…     

重度子痫前期患者和正常孕妇外周血中差异表达基因的研究

目的 筛选和比较重度子痫前期患者和正常孕妇外周血中差异表达的基因,并分析其表达情况及分子功能.方法 应用基因微阵列技术,采用人类全基因组寡核苷酸芯片检测6例重度子痫前期患者(重度子痫前期组)和5例正常孕妇(对照组)外周血中的差异表达基因,分别计算重度子痫前期组6例患者的芯片信号值与对照组混合血芯片的信号值比值;以芯片的信号值比值≥2.0或≤0.5,且其q_value＜5.4%的标准来确定差异表达基因,层次聚类分析后用Gene Ontology软件确定这些基因所属的功能群.结果 筛选得到140个差异表达基因,其中86个基因表达上调,54个基因表达下调.重度子痫前期组上调基因主要参与半胱氨酸代谢、鸟氨酸循环、蛋白酶体、转化生长因子(TGF)B信号传导途径,其中钙联蛋白2(CNN2)、基质金属肽酶8(MMP8)、含V.set和免疫球蛋白域4(VSIG4)、蛋白酶体26S亚单位ATPase 5(PSMC5)的信号值比值均明显升高;下调基因主要参与自然杀伤细胞介导的细胞毒性作用、抗原呈递作用、细胞色素芳香化酶(P450)代谢途径,其中杀伤细胞免疫球蛋白样受体三域长细胞质尾2(KIR3DL2)、醇醛酮还原酶家族1成员C3(AKRlC3)、含Churchill域1(CHURC1)、溶质载体家族25成员13(SLC25A13)的信号值比值均明显下降.结论 重度子痫前期患者外周血的基因表达与正常孕妇存在着很大的差异;CNN2、MMP8、VSIG4、PSMC5、KIR3DL2、AKR1C3、CHURC1、SLC25A13等基因可能参与重度子痫前期的发病机制,需进一步验证.     

胎肺成熟度的判断

通过测定羊水生化指标和生物物理指标判断胎儿肺成熟度临床应用早、广泛、准确率高,但羊膜腔穿刺有创伤性和并发症。目前有报道应用超声指标判断胎肺成熟度,超声检查简单、准确、无创伤性,值得进一步研究和应用。     

卵巢癌中微小RNA-210的表达及临床意义

目的：检测上皮性卵巢癌组织中微小RNA-210（miR-210）的表达水平,初步探讨miR-210在卵巢癌发病中的作用。方法：采用多聚腺苷酸加尾实时荧光定量反转录聚合酶链反应［ｐｏｌｙ（Ａ）－RT-qPCR]检测上皮性卵巢癌、良性上皮性卵巢肿瘤及正常卵巢组织标本中miR-210的表达。结果：miR-210在卵巢癌组中表达低于良性卵巢肿瘤组和正常卵巢组,3组间差异有统计学意义（F=893.213,P=0.000）;且随着卵巢癌组织临床分期及组织分化的进展,miR-210表达有下降的趋势。结论：miR-210在上皮性卵巢癌组织中低表达,在卵巢癌发生发展中发挥重要的抑癌基因作用,且与卵巢癌分期、组织分级及淋巴结转移密切相关。     

宫内炎性暴露对胎鼠及早产大鼠肺血管内皮生长因子及其受体表达的影响

目的 观察宫内炎性暴露对胎鼠及早产大鼠肺血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体-1(Fms-like tyrosine kinase receptor,Flt-1)和受体-2(fetal liver kinase receptor,Flk-1/KDR)表达的影响,探讨其与新型支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)的关系.方法 定期受孕的SD大鼠随机分为脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组(LPS组)和生理盐水组(对照组),于孕15 d分别向羊膜腔内注射LPS或无菌生理盐水.两组动物均于胚胎19 d及早产鼠出生后第1、3、5、7天各随机取8只仔鼠,采用免疫组织化学方法 和RT-PCR技术检测肺组织VEGF及Flt-1、Flk-1蛋白及mRNA表达水平.结果 对照组肺组织中VEGF及Flk-1的蛋白表达自胚胎19 d至生后7 d逐渐升高,LPS组VEGF蛋白表达在胚胎19 d(0.1550±0.0101)和生后1 d时(0.1368±0.0035)较对照组低(0.1872±0.0110和0.1812±0.0040)(P《0.05).两组生后1 d时的Flt-1蛋白表达均高于胚胎19 d时(P《0.05).LPS组Flt-1蛋白表达在各时间点均较对照组高(P《0.05),而Flk-1表达在各时间点均较对照组低(P《0.05).mRNA的表达与相应蛋白表达的强度变化基本一致.结论 宫内炎性暴露可降低胎鼠及早产大鼠出生早期肺组织中VEGF及Flk-1的表达,可能是导致新型BPD发生的重要因素.     

正常子宫中肥大细胞的表达及其临床意义

目的:了解正常子宫中肥大细胞的分布和亚型,探讨其临床意义。方法:选取37例正常子宫组织,用双重免疫组化染色法检测肥大细胞中类糜蛋白醇和类胰蛋白酶的表达。结果:正常子宫中肥大细胞以内1/2肌层最多,TC型(含类糜蛋白酶和类胰蛋白酶)肥大细胞与T型(仅含类胰蛋白酶)肥大细胞所占比例相当,而外1/2肌层中以TC型肥大细胞为主。子宫内膜的肥大细胞量少,主要为T型肥大细胞。增殖期和分泌期各个部位的肥大细胞相比均无统计学差异(t=0．475,1．699,0．648,0．797,P＞0．05)。但绝经后子宫内膜和肌层的肥大细胞均明显低于绝经前水平(t=6．749,2．796,4．913,5．298,P＜0．01)。结论:肥大细胞可能参与正常子宫内膜的局部免疫和剥脱。     

不同来源外泌体中微小RNA在子痫前期的研究进展

子痫前期（pre-eclampsia,PE）的发病机制至今尚未明确,而外泌体为PE发病机制的研究提供了新的方向。有研究表明外泌体在人体中广泛存在,红细胞、上皮细胞、间充质干细胞和胎盘细胞等细胞均可分泌外泌体。而这些不同来源外泌体中的微小RNA（microRNA,miRNA）被证明可以在PE的发生及预防、治疗中发挥一定的作用,例如胎盘来源外泌体中的miRNA可能与PE的发生息息相关,脐带血来源外泌体中的miRNA可能与胚胎发育有一定关系,而间充质干细胞来源外泌体中的miRNA则可能在PE的治疗中发挥重要作用。因此,探索这些miRNA及其外泌体来源对于明确PE的发病机制及靶向治疗具有重要意义。