基质金属蛋白酶抑制剂抑制兔晶状体后囊膜混浊的研究

目的 观察基质金属蛋白酶(MMP)抑制剂对兔晶状体后囊膜混浊的抑制作用和对眼内组织的毒性.方法 实验研究.选用新西兰白兔行超声乳化晶状体吸除术,用不同浓度的MMP抑制剂GM6001溶液(实验1组:100 μmol/L,实验2组:200 μmol/L,实验3组:500 μmol/L)和GM6001阴性对照液(500 μmol/L)进行术毕及术后隔日晶状体囊袋内灌注3次,观察术后第12周内后囊膜混浊情况,同时观察药物对眼前房反应、眼压、角膜内皮、虹膜、睫状体和视网膜的影响和毒性.采用四格表确切概率法分析使用GM6001后前房反应和对后囊膜混浊的抑制作用;采用单因素方差分析法分析GM6001对眼压的影响.结果 裂隙灯显微镜下观察,可见术后12周对照组后囊膜混浊明显,实验1组后囊膜混浊较对照组轻,实验2组和3组均无后囊膜混浊(P=0.007);病理学结果显示:对照组和实验1组后囊膜表面有多层排列紊乱的上皮细胞和成纤维细胞,而实验2组和3组后囊膜表面几乎无细胞生长;前房反应轻:用药2 d实验组和对照组兔眼前房闪光情况比较,差异无统计学意义(P=0.380);对眼压的影响:实验组与对照组用药2 d(F=0.642,P=0.597)、7 d(F=0.179,P=0.909)眼压比较,差异均无统计学意义;用药7 d,实验3组角膜内皮细胞呈规则的六边形,无变形脱落,与对照组眼角膜内皮细胞形态无明显差别;光镜观察发现对虹膜、睫状体和视网膜均无明显毒性.结论 MMP抑制剂可明显抑制兔眼超声乳化晶状体吸除术后晶状体后囊膜混浊的发生,对眼内组织无明显毒性,安全有效.

Abstract：

Objective To determine whether matrix metalloproteinase (MMP) inhibitor can provide therapeutic effects for rabbits posterior capsule opacification in vivo and to observe the side effects of this drug on surrounding intraocular structures. Methods Experimental research. New Zealand white rabbits were undertaken phacoemulsification operation. GM6001 at different concentrations ( 100,200 and 500 μmol/L)and GM6001 negative control liqueur were infused into the capsule bags of the rabbits at the end of operation and two days after the operation. The incidence of posterior capsule opacification was assessed and the histological sections of posterior capsules were observed under microscope 12 weeks after the surgery. The anterior chamber response was observed on day 2 post-operatively. The changes of intraocular pressure were measured by day 2 and day 7. Corneal endothelial cells were observed under scanning electron microscopeand iris, ciliary body and retina were observed under microscope on day 7. Results GM6001 significantly prevented posterior capsule opacification (P=0. 007 ). No opacification occurred on the rabbit posterior capsule in eyes with 200 and 500μmol/L GM6001 on week 12 post-operatively in vivo. No cells were found on posterior capsule in 500 μmol/L group, whereas lens epithelial cells and fibroblasts were found in the controls under microscope. No difference of anterior chamber flare between the eyes with GM6001 at different concentrations and the control group (P=0. 380) by day 2 after the operation. The intraocular pressure in eyes with GM6001 was the same as that in the control 2-days ( F = 0. 642, P = 0. 597 ) and 7-days ( F =0. 179 ,P =0. 909) post-operation. The corneal endothelial cells in eyes with 500 μ mol/L GM6001 arranged regularly and did not show any difference from that in the control eyes under scanning electron microscope 7-day after the operation. The iris, ciliary body and retina in eyes with 500 μmol/L GM6001 were normal in appearance 7-day after the operation. Conclusions MMP inhibitor can prevent posterior capsule opacification effectively in rabbits in vivo and does not cause damage to surrounding intraocular structures,suggesting that MMP inhibitor may become a medication used for the prevention of lens posterior capsule opacification.     

基质金属蛋白酶抑制剂抑制兔晶状体后囊膜混浊的研究

Objective To determine whether matrix metalloproteinase (MMP) inhibitor can provide therapeutic effects for rabbits posterior capsule opacification in vivo and to observe the side effects of this drug on surrounding intraocular structures. Methods Experimental research. New Zealand white rabbits were undertaken phacoemulsification operation. GM6001 at different concentrations ( 100,200 and 500 μmol/L)and GM6001 negative control liqueur were infused into the capsule bags of the rabbits at the end of operation and two days after the operation. The incidence of posterior capsule opacification was assessed and the histological sections of posterior capsules were observed under microscope 12 weeks after the surgery. The anterior chamber response was observed on day 2 post-operatively. The changes of intraocular pressure were measured by day 2 and day 7. Corneal endothelial cells were observed under scanning electron microscopeand iris, ciliary body and retina were observed under microscope on day 7. Results GM6001 significantly prevented posterior capsule opacification (P=0. 007 ). No opacification occurred on the rabbit posterior capsule in eyes with 200 and 500μmol/L GM6001 on week 12 post-operatively in vivo. No cells were found on posterior capsule in 500 μmol/L group, whereas lens epithelial cells and fibroblasts were found in the controls under microscope. No difference of anterior chamber flare between the eyes with GM6001 at different concentrations and the control group (P=0. 380) by day 2 after the operation. The intraocular pressure in eyes with GM6001 was the same as that in the control 2-days ( F = 0. 642, P = 0. 597 ) and 7-days ( F =0. 179 ,P =0. 909) post-operation. The corneal endothelial cells in eyes with 500 μ mol/L GM6001 arranged regularly and did not show any difference from that in the control eyes under scanning electron microscope 7-day after the operation. The iris, ciliary body and retina in eyes with 500 μmol/L GM6001 were normal in appearance 7-day after the operation. Conclusions MMP inhibitor can prevent posterior capsule opacification effectively in rabbits in vivo and does not cause damage to surrounding intraocular structures,suggesting that MMP inhibitor may become a medication used for the prevention of lens posterior capsule opacification.     

基质金属蛋白酶抑制剂抑制兔晶状体后囊膜混浊的研究

Objective To determine whether matrix metalloproteinase (MMP) inhibitor can provide therapeutic effects for rabbits posterior capsule opacification in vivo and to observe the side effects of this drug on surrounding intraocular structures. Methods Experimental research. New Zealand white rabbits were undertaken phacoemulsification operation. GM6001 at different concentrations ( 100,200 and 500 μmol/L)and GM6001 negative control liqueur were infused into the capsule bags of the rabbits at the end of operation and two days after the operation. The incidence of posterior capsule opacification was assessed and the histological sections of posterior capsules were observed under microscope 12 weeks after the surgery. The anterior chamber response was observed on day 2 post-operatively. The changes of intraocular pressure were measured by day 2 and day 7. Corneal endothelial cells were observed under scanning electron microscopeand iris, ciliary body and retina were observed under microscope on day 7. Results GM6001 significantly prevented posterior capsule opacification (P=0. 007 ). No opacification occurred on the rabbit posterior capsule in eyes with 200 and 500μmol/L GM6001 on week 12 post-operatively in vivo. No cells were found on posterior capsule in 500 μmol/L group, whereas lens epithelial cells and fibroblasts were found in the controls under microscope. No difference of anterior chamber flare between the eyes with GM6001 at different concentrations and the control group (P=0. 380) by day 2 after the operation. The intraocular pressure in eyes with GM6001 was the same as that in the control 2-days ( F = 0. 642, P = 0. 597 ) and 7-days ( F =0. 179 ,P =0. 909) post-operation. The corneal endothelial cells in eyes with 500 μ mol/L GM6001 arranged regularly and did not show any difference from that in the control eyes under scanning electron microscope 7-day after the operation. The iris, ciliary body and retina in eyes with 500 μmol/L GM6001 were normal in appearance 7-day after the operation. Conclusions MMP inhibitor can prevent posterior capsule opacification effectively in rabbits in vivo and does not cause damage to surrounding intraocular structures,suggesting that MMP inhibitor may become a medication used for the prevention of lens posterior capsule opacification.     

基质金属蛋白酶抑制剂治疗碱烧伤后兔角膜融解的研究

目的研究基质金属蛋白酶抑制剂(GM 6001)在治疗兔角膜碱烧伤后角膜融解中的作用.方法将28只兔随机分为A、B组,将浸有2 mol/L(16只)及1 mol/L(12只)氢氧化钠的滤纸片分别置于A、B组兔右眼角膜上制备角膜重和中度碱烧伤模型;每组均设治疗和对照组,A、B治疗组术眼分别滴浓度为400及200 mg/L的GM 6001滴眼液,对照组滴药物基质液;均治疗30 d,然后处死动物.观察其角膜融解及混浊等情况,并进行病理组织学检查.结果 A组对照组8只兔眼角膜自伤后(13±5) d开始全部发生融解,2只兔眼发生角膜穿孔;治疗组,仅有2只兔眼烧伤后(19±4) d发生角膜融解,无角膜穿孔;两组角膜融解发生率及角膜穿孔率比较,差异有显著意义(P<0.05).治疗组角膜融解开始的时间亦明显迟于对照组(P＜0.05).B组对照组6只兔角膜自伤后(14±6) d全部融解,1只兔眼角膜穿孔;治疗组2只兔眼角膜自伤后(19±4) d融解,无角膜穿孔;两组角膜融解发生率间比较,差异有显著意义(P＜0.05);治疗组角膜混浊程度明显低于对照组(P＜0.01).病理检查结果显示治疗组角膜胶原纤维破坏轻,炎性细胞浸润明显少于对照组.结论 GM 6001可抑制和延迟碱烧伤后角膜融解的发生和发展,降低角膜胶原纤维的破坏及角膜组织中炎性细胞的浸润.     

基质金属蛋白酶及其抑制剂与后发性白内障发生的关系

基质金属蛋白酶(MMPs)是一类依赖金属锌离子存在而获得催化活性的锌金属蛋白酶超家族,由正常组织细胞或肿瘤细胞合成、分泌,其作用较为广泛,在创伤愈合和肿瘤发生中起降解细胞外基质的作用.正常机体存在内源性的基质金属蛋白酶抑制剂(TIMPs),可以调节MMPs的活性.根据来源不同,MMPs抑制剂分为:TIMPs、天然MMPs抑制剂和人工合成的MMPs抑制剂.MMPs与TIMPs的表达失衡参与了肿瘤、类风湿性关节炎、后发性白内障(PCO)等病理过程,已有研究证实PCO患者MMP-2和MMP-9表达增加.现将MMPs及其抑制剂的分类、功能特点进行归纳总结,并对其与PCO发生的关系进行综述.     

基质金属蛋白酶及其组织抑制剂与白内障

基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)是一类金属依赖的水解酶家族,是细胞外基质(extracelluarmatrix,ECM)降解的主要介质,其主要功能是降解细胞外基质,在细胞迁移、组织重建和修复等病理生理过程中发挥作用。MMPs的蛋白水解活性主要靠与其抑制剂(tissueinhibitorofMMPs,TIMPs)之间平衡来调节。近年来研究表明,MMPs/TIMPs功能异常同眼部许多疾病有关,如原发开角型青光眼、白内障、翼状胬肉、年龄相关性黄斑变性等有关。     

氧化损伤对视网膜色素上皮细胞中基质金属蛋白酶表达的影响

目的探讨氧化损伤对体外培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞金属蛋白酶(MMP-2,9)及其组织抑制剂(TIMP-1)表达的影响。方法将不同浓度的H2O2处理传代的细胞，检测活力后，采用明胶酶谱法和RT—PCR技术定量分析RPE细胞中MMP-2，9的蛋白水平和mRNA含量。采用RT—PCR和ELISA分别测定TIMP-1的mRNA表达和培养液中的浓度。结果不同浓度H2O2对RPE细胞增殖没有影响，MMP-2均呈高表达，但mRNA和蛋白均没有变化；MMP-9表达相对弱，且随着H2O2浓度的升高而增强，ELISA法检测不同浓度H2O2处理的RPE细胞培养液中TIMP-1浓度无显著差别。结论不同H2O2浓度下MMP-2、TIMP表达无明显差异，MMP-9随着H2O2浓度增加表达增强，表明糖尿病视网膜病变中存在的氧化损伤导致MMP-9表达升高。     

基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶2组织抑制因子及转化生长因子β_1在糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞的表达及意义

目的　探讨基质金属蛋白酶 2 (matrixmetalloproteinase 2 ,MMP 2 )、金属蛋白酶 2组织抑制因子 (tissueinhibitorofmetalloproteinase 2 ,TIMP 2 )及转化生长因子 β1(transforminggrowthfoctorbeta ,TGF β1)在糖尿病性白内障患者的晶状体上皮细胞中的表达及意义。方法　应用免疫组化技术检测 2 3例糖尿病性白内障患者和 7例正常人的晶状体上皮细胞中MMP 2、TIMP 2及TGF β1的表达 ,并进行比较。结果　糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞中MMP 2和TGF β1的阳性表达率与正常人比较 ,差异均有非常显著意义 (χ2 =2 4 5 48,16 78;P <0 0 1) ,而糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞中TIMP 2的阳性表达率与正常人比较 ,差异无显著意义 (χ2 =0 6 2 1,P >0 0 5 )。经Spearman等级相关分析 ,晶状体上皮细胞中 ,MMP 2和TGF β1的阳性表达率存在正相关 (r =0 5 16 ,P <0 0 1) ;MMP 2和TGF β1与TIMP 2阳性表达率间均无相关 (r =- 0 0 45 ,0 0 42 ;P >0 0 5 )。结论TGF β1介导的MMP 2和TIMP 2表达失衡在糖尿病性白内障患者晶状体前、后囊膜下纤维化的发生和发展过程中起重要作用。     

基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶组织抑制剂系统与糖尿病眼部并发症

基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶组织抑制剂（MMPs/TIMPs）系统是降解和重塑细胞外基质（ECM）最重要的酶系统,它参与调节眼的一些生理和病理过程,如眼的发育、炎症、伤口愈合、新生血管形成、肿瘤转移等,与多种眼病,如增生性玻璃体视网膜病变、增生型糖尿病视网膜病变、糖尿病性白内障、孔源性视网膜脱离、视网膜母细胞瘤、年龄相关性黄斑变性、眼外伤、青光跟等的发生密切相关.就MMPs/TIMPs系统的生物学特性及其在糖尿病眼部并发症研究方面的应用进行综述.     

体外培养猴眼小梁细胞及睫状肌细胞中组织金属蛋白酶抑制剂的表达

目的：观察体外培养的正常猴眼小梁细胞及睫状肌细胞中组织金属蛋白酶抑制剂（tissue inhibitors of metalloproteinase,TIMP)的表达,探讨生理状态下基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP)及TIMP在小梁网房水流出及葡萄膜－巩膜房水流出的通道中的作用。方法：采用Reverse-zymography技术,检测猴眼小梁细胞及睫状肌细胞中TIMP及MMP的表达。结果;猴眼小梁细胞及睫状肌细胞培养液中均可见TMIP－1、TIMP－2及TIMP－3表达,小梁细胞中MMP／TIMP比值明显高于睫状肌细胞。结论：正常状态下小梁细胞外基质的降解能力明显高于睫状肌细胞,可能是由于传统的小梁网房水流出通道作用强于葡萄膜－巩膜房水流出通道 的作用。     

榄香烯抑制人晶状体上皮细胞增殖的蛋白质组研究

目的 探讨中药单体榄香烯对碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF)诱导的人晶状体上皮细胞(HLE-B3)增殖的抑制作用及其蛋白质组学规律.方法 实验研究.共分为3组:正常组、rhbFGF组及榄香烯组.正常组为培养的HLE-B3,rhbFGF组加入终浓度为10 μg/L rhbFGF,榄香烯组加入终浓度为10μg/L rhbFGF和80 mg/L榄香烯.24 h后四甲基偶氮唑蓝法检测榄香烯对HLE-B3增殖的抑制作用;蛋白质芯片联合表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术检测分析榄香烯作用于HLE-B3后蛋白质表达谱的改变、寻求差异蛋白.采用单因素方差分析,并通过Dunnett-t检验进行正常组、rhbFGF组、榄香烯组吸光度值的两两比较;对每个质荷比峰值做Kruskal-Wallis秩和检验,采用Nemenyi检验对正常组、rhbFGF组、榄香烯组中每个特定质荷比的蛋白质峰值进行两两比较.结果 (1)四甲基偶氮唑蓝法检测显示:rhbFGF组HLE-B3吸光度A值(0.599±0.053)比正常组(0.409±0.042)显著升高,榄香烯组HLE-B3吸光度A值(0.450±0.061)比rhbFGF组显著降低,抑制率达24.90%,差异有统计学意义(F=28.886,P=0.000).(2)用rhbFGF诱导HLE-B3增殖后,出现了5个差异表达的蛋白点,其中质荷比为8093和9516的2个蛋白点表达上调,质荷比为5361、9666及13 767的3个蛋白点表达下调;榄香烯作用于增殖的HLE-B3后,出现10个差异表达的蛋白点,其中质荷比为2487、4392、8566及11 600的4个蛋白点表达上调,质荷比为3679、4826、6861、9516、9557和9672的6个蛋白点表达下调.结论 榄香烯能有效抑制rhbFGF诱导的HLE-B3增殖,质荷比为9516的蛋白点可能是榄香烯抑制rhbFGF诱导的HLE-B3增殖的作用靶点.     

过氧化氢对人晶状体上皮细胞内细胞质膜微囊蛋白的影响

目的探讨过氧化氢（H2O2）对人晶状体上皮细胞的细胞质膜微囊蛋白（CP）及磷酸化CP-1分布与表达的影响。方法给予人晶状体上皮细胞（SRA01／04）不同浓度及不同时间点的H2O2刺激。用激光共聚焦显微镜和免疫荧光显微镜观察CP及磷酸化CP-1的分布。通过免疫印迹试验观察CP表达水平的变化以及磷酸化CP—1的表达。结果通过激光共聚焦显微镜和荧光显微镜,观察到人晶状体上皮细胞的质膜和细胞质内含有丰富的CP;当给予细胞H2O2刺激后,细胞质内CP的分布增多;当刺激时间达到1h,细胞膜被破坏,但仍可观察到CP的分布情况。此外,H2O2的刺激可以使CP-1发生磷酸化。免疫印迹试验发现,随着H2O2作用时间的延长和刺激浓度的升高,细胞质膜和细胞总蛋白质的CP表达水平呈下调趋势。结论H2O2刺激人晶状体上皮细胞后,CP重新分布并可能破坏了细胞质膜微囊（caveolae）的结构,使得细胞的CP表达下调。细胞质膜微囊和CP可能在人晶状体上皮细胞中具有重要作用。     

葛根素对培养的晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的 探讨过氧亚硝基阴离子(ONOO-)对培养的兔晶状体上皮细胞(LEC)造成的影响以及葛根素(Pur)的对抗作用.方法 为实验研究.原代培养兔LEC,将其第3或第4代用作实验.实验分为:(1)对照组:加入无热源生理盐水200 μl.(2)ONOO-组:加入ONOO-200 μl使之终浓度为0.5 mmol/L.(3)Pur组:同时加入5 μg/ml ONOO- 和10μg/ml的Pur.各组加入试剂总容积为200 μl,继续培养24 h.收集细胞分别用免疫荧光技术检测ONOO-的标记物硝基酪氨酸(NT)在LEC中的抗原表达变化;免疫印迹法检测晶状体组织中NT蛋白表达变化;光学显微镜观察细胞形态;基因组DNA电泳、流式细胞仪和Fas/FasL免疫组织化学染色检测细胞凋亡.采用单因素方差分析和q检验对数据进行分析.结果 实验6～24 h期间,对照组LEC呈现绿色荧光;ONOO-组:LEC颜色逐渐由黄绿色转变为橘黄色荧光;Pur组LEC颜色逐渐由淡绿色转变为淡黄色和淡黄绿色荧光;对照组NT蛋白质表达极微弱;ONOO-组:实验各期均有NT蛋白质表达,且呈由弱到强的趋势(A值为77.22±2.44,145.00±3.94,235.78±5.97).Pur组实验6 h表达微弱(A值为72.78±2.64),12 h表达增强(A值为84.94±3.01),但至24 h表达强度减弱(A值为74.44±3.00);计算机图像分析表明,实验6、12及24 h,3组NT蛋白质平均表达水平比较,差异有统计学意义.对照组细胞形态和基因组DNA电泳正常,流式细胞仪检查可见极轻微凋亡,但细胞膜和细胞浆均未见Fas/Fas L的表达;ONOO-组出现了明显的细胞形态改变,基因组DNA电泳可见典型的"梯形条带",随时间延长细胞凋亡逐渐加重(q=78.12,82.76,69.98,P＜0.01)并可见Fas/Fas L的表达;而Pur组细胞形态、基因组DNA电泳以及流式细胞仪检查大致正常,未见Fas/Fas L的表达.结论 葛根素可减轻ONOO-所致培养的LEC凋亡.Fas/Fas L信号转导途径可能影响并加强了ONOO-介导的LEC的凋亡过程.     

无防腐剂的1%利多卡因对年龄相关性白内障患者晶状体上皮细胞影响的病理学研究

目的 探讨无防腐剂的1%利多卡因对年龄相关性白内障(ARC)患者晶状体上皮细胞(LEC)的作用及其作用机制.方法 自身配对设计.收集75例(82只眼)ARC患者的晶状体前囊膜,其中男性40例(44只眼),女性35例(38只眼);年龄41～85岁,平均67.97岁;皮质性白内障34只眼,核性22只眼,后囊膜下性26只眼.对超声乳化白内障吸除术中撕下的82只前囊膜标本分别用1%利多卡因溶液浸泡1 min(利多卡因组)或用平衡液(BSS)浸泡1 min(BSS Ⅰ、Ⅱ组)或不加入任何药物处理(对照组),然后行锥虫蓝-茜素红活性染色,显微镜照相,计数LEC及坏死细胞;并通过HE染色及电镜观察LEC的病理及超微结构改变.采用配对设计t检验和单因素方差分析对数据进行统计学分析.结果 LEC坏死率对照组和BSS Ⅰ组分别为(56.19±2.71)%和(57.23±1.98)%,两组间差异无统计学意义(t:2.0693,P=0.0505),利多卡因组和BSSⅡ组分别为(99.86±8.22)%和(57.64±7.00)%,二者比较差异有统计学意义(t=27.6781,P=0.0000),但利多卡因组内不同年龄组、不同性别、不同类型白内障患者LEC坏死率差异均无统计学意义(F值分别为0.03、2.37、0.71,P0.05).HE染色显示利多卡因组LEC空泡变性明显,细胞与囊膜间出现空隙,胞核浓缩、碎裂、溶解.对照组和BSS组LEC结构基本正常,仍贴附于囊膜上.电镜下利多卡因组LEC形态不规则,细胞与细胞及细胞与囊膜间的连接崩解断裂,细胞膜内陷,细胞器严重变性,结构破坏,染色质凝聚、边集、裂解,不少细胞皱缩、脱落、消失.结论 无防腐剂的1%利多卡因能松解ARC患者LEC间及细胞与囊膜间的连接,并可破坏细胞结构,导致细胞变性、坏死.     

三氧化二砷诱导人晶状体上皮细胞凋亡的机制研究

目的 研究三氧化二砷(As2O3)对离体培养的人晶状体上皮细胞(FHL124)的凋亡及其作用机制.方法 实验研究.四甲基偶氮唑盐比色法观察As2O3对FHL124细胞的抑制作用;原位缺口末端标记(TUNEL)法测定细胞凋亡;Taqman实时荧光定量PCR检测基因表达的变化;荧光显微镜动态监测细胞内Ca2+浓度的变化.As2O3对FHL124细胞的生长抑制和细胞内Ca2+浓度的变化采用t检验进行分析;3种基因不同处理组间表达水平差异的比较采用Wilks'λ检验;单个基因比较采用LSD-t检验.结果 As2O3(3×10-7～1×10-4mol/L)对FHL124细胞的作用呈浓度依赖性,1 μmol/L As2O3即可显著抑制FHL124细胞的生长,半效抑制量(IC50)为1.5 μmol/L.TUNEL检测证实As2O3诱导FHL124细胞凋亡,引起FHL12A细胞DNA断裂.实时定量荧光PCR结果显示,As2O3可以引起FHL124细胞与内质网应激信号传导有关的基因产物EIF2A,ERN1和ATF6显著增加(F=8.51,P=0.0005).细胞内Ca2+测定显示As2O3降低细胞内Ca2+浓度,从而降低了Ca2+信号的峰值.20 μmol/L As2O3孵育30 min后,峰值降低了(66.34±4.47)%(P=0.0018),60 min则降低了(96.95±7.98)%(P=0.0002).20 μmol/L As2O3使Ca2+内流幅值及速度分别降低了(22.59±2.98)%和(39.69±6.01)%.结论 As2O3抑制FHL124细胞的生长并诱导细胞凋亡,诱导内质网应激可能是其重要作用机制之一.     

人原代晶体上皮细胞bFGF多肽和mRNA的表达

目的 为研究后发性白内障的发生机理,检测生长中人晶体上皮细胞（ＨＬＥＣｓ）自身是否表达碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）。方法 体外培养人晶体上皮细胞,用免疫细胞化学和原位核酸分子杂交的方法,检测ＨＬＥＣｓ中ｂＦＧＦ多肽和其ｍＲＮＡ的表达。结果 用免疫细胞化学和原位核酸分子杂交方法,可检测到生长中的人晶体上皮细胞自身表达碱性成纤维细胞生长因子。结论 结合碱性成纤维细胞生长因子促进人晶体上皮细胞生长     

端粒酶活性在兔后囊膜混浊晶状体上皮细胞中的表达及意义

目的 探讨端粒酶活性在兔后囊膜混浊晶状体上皮细胞中的表达及意义.方法 对新西兰大白兔11只(22只眼)行超声乳化晶状体吸除术法,术后3个月所有实验动物的晶状体后囊膜均已混浊.20只眼分别取赤道部囊膜、混浊后囊膜组织,采用端粒重复序列扩增-聚丙烯酰胺凝胶电泳法定性和端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附定量法检测其晶状体上皮细胞端粒酶活性.两者端粒酶活性比较采用成组设计t检验.结果 以HepG2细胞作为端粒酶检测阳性对照,兔晶状体赤道部囊膜组织、后囊膜均可检测到端粒酶活性,表现为自50 bp开始多个模糊梯度条带状电泳图谱,其吸光度A450-690值分别为0.85±0.23、0.67±0.19,两者比较差异有统计学意义(t=2.526,0.021;P＜0.05).结论 在兔后囊膜混浊晶状体上皮细胞中存在端粒酶活性,其活性较晶状体赤道部囊膜上皮细胞低.     

人及小鼠白内障晶状体上皮细胞凋亡的超微结构

目的 探讨人老年性白内障及小鼠先天性白内障与其晶状体上皮细胞凋亡的关系。方法 用透射电镜观察４例老年性白内障患者及２例先天性白内障小鼠晶状体上皮细胞凋亡的超微结构,并分别与同类正常晶状体上皮细胞超微结构进行比较。结果 老年性白内障患者及先天性白内障小鼠晶状体上皮细胞中均可见凋亡细胞,而正常晶状体未见凋亡细胞。结论 人老年性白内障及小鼠先天性白内障的发生均与其晶体上皮细胞的凋亡有关。     

外源性细胞周期蛋白激酶抑制因子p21基因对人晶状体上皮细胞周期的影响

目的 研究细胞周期蛋白激酶抑制因子p21基因转染对人晶状体上皮细胞(1ens epithelial cells,LEC)周期调控的影响,在基因水平探讨防治后发性白内障的可能性。方法 构建含人p21基因真核表达的载体质粒pcDNA3／p21,采用基因转染技术将质粒DNA转染至永生性人LEC系HLE-B3,使用流式细胞仪观察细胞生长和周期的变化,并采用逆转录聚合酶链式反应方法检测p21mRNA的表达;分别采用免疫组化和免疫印迹(western blotting,WB)方法检测p21蛋白的表达。结果 体外构建的载体质粒pcDNA3／p21经酶切鉴定含有人p21基因全长cDNA片段。基因转染后细胞HLE—B3经传代培养,48h后出现缓慢生长且部分细胞漂浮死亡的现象,G1期细胞明显增多。与对照细胞比较,转染后细胞的p21mRNA表达明显增多;p21蛋白表达明显增强,在经筛选的阳性克隆细胞中WB方法可检测到相对分子质量为21000的阳性蛋白带。结论 外源性p21基因可在人LEC系HLE．B3中过度表达,并对细胞周期调控产生抑制作用。基因转染抑制LEC增殖可能成为防治后发性白内障的新途径。