玉竹提取物B诱导人结肠癌CL-187细胞凋亡的实验研究

目的 研究中药玉竹提取物B(EB—PAOA)诱导人结肠癌CL—187细胞凋亡的作用。方法 将体外培养的人结肠癌CL—187细胞与不同浓度的EB—PAOA共育，通过倒置显微镜和透射电镜对活细胞及固定染色后的细胞进行了观察，确认有无凋亡细胞；通过流式细胞仪检测了CL—187细胞周期的变化和凋亡率。结果 在倒置显微镜和透射电镜下，可见到大量具有典型特征的凋亡细胞；流式细胞仪DNA直方图上出现了凋亡峰，凋亡率呈时间--剂量依赖性。细胞周期分析结果显示，G0／G1期细胞减少，S期细胞减少，G2／M期细胞增多。结论 EB-PAOA能够诱导人结肠癌CL—187细胞凋亡，这可能是EB—PAOA抗肿瘤的作用机制之一。     

脾不统血证大鼠模型子宫内膜细胞凋亡及细胞周期的研究

观察比较泻下加劳倦的脾气虚证模型、出血因素、两者复合的脾不统血证模型和卵巢摘除各组大鼠卵巢、子宫重量和子宫内膜细胞凋亡及细胞周期的变化,以及益气止血中药对卵巢摘除组的影响.结果表明,复合因素的脾不统血证模型卵巢、子宫重量的下降较脾气虚模型显著,细胞周期中G1期细胞较正常组显著增多,而中药治疗组G1期细胞显著减少,S期、G2期增多,说明益气止血中药能促进子宫内膜细胞的增殖.     

塞来昔布抑制人舌鳞癌Tca8113细胞周期进程及诱导凋亡的作用

目的观察选择性COX-2抑制剂塞莱昔布抑制人舌鳞癌Tca8113细胞周期进程及诱导凋亡的作用。方法采用不同浓度塞来昔布处理Tca8113细胞后,采用流式细胞仪检测细胞周期变化;应用Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞早期凋亡,透射电镜观察细胞的超微结构变化。结果塞来昔布抑制Tca8113细胞生长增殖的作用,与阻滞细胞周期进程有关,其主要阻滞Tca8113细胞从G1期细胞向S期细胞进程,导致G0/G1期细胞的数量增加,S期和G2/M期细胞数量减少。Annexin V-FITC/PI双标记法结果显示,塞来昔布组与对照组相比,早期凋亡细胞增多有显著性意义。透射电镜观察显示,随着塞来昔布浓度的增加及作用时间的延长,Tca8113细胞出早期凋亡细胞至中后期凋亡细胞的变换。结论COX-2抑制剂塞来昔布以剂量依赖的方式,通过抑制细胞周期进程、诱导凋亡抑制Tca8113细胞生长、增殖,其作用机制有待进一步研究。     

钼酸盐对人肝癌细胞抑制增殖和诱导凋亡作用的实验研究

目的 观察钼酸氨对体外培养人肝癌细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用.方法 应用CCK-8法检测不同浓度钼酸氨对HepG2细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率.结果 钼酸氨能明显抑制HepG2细胞增殖、诱导细胞凋亡、影响细胞周期,并存在剂量-效应关系和时间-效应关系,随着钼酸氨浓度升高和作用时间延长,凋亡细胞和G0/G1期细胞比例逐渐增加,S期及G2/M期细胞减少,并出现凋亡峰.结论 钼酸氨能抑制HepG2细胞增殖,诱导细胞凋亡,影响细胞周期,将细胞特异性地阻滞在G1期.     

丙戊酸钠对慢性粒细胞白血病细胞株K562增殖 和凋亡的影响

 【目的】 探讨丙戊酸钠(VPA)对慢性粒细胞白血病细胞株(K562细胞)增殖的影响及其可能机制?【方法】 利用CCK-8法检测药物对细胞生长的影响;利用流式细胞仪检测药物处理后的细胞凋亡和细胞周期情况?【结果】 VPA对K562细胞生长具有浓度-时间依赖性抑制作用;同时引起细胞凋亡增加(11.47% ± 0.25%),与正常对照组(4.77% ± 0.40%)比差异有统计学意义(P < 0.05);G0/G1期细胞增多(82.30% ± 9.41%),S期细胞减少(12.88% ± 6.99%),细胞被阻滞在在G0/G1期(P < 0.05)?【结论】 VPA能够阻滞K562细胞于G0/G1期,最终抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡?     

维生素K2对K562细胞生长抑制作用的实验研究

目的:研究维生素K2(VK2)对慢性粒细胞白血病急性变细胞株K562细胞的生长抑制作用及其机制。方法:采用形态学检测VK2作用后的细胞形态改变,MTT方法检测VK2对K562细胞的生长抑制作用,流式细胞仪Annexin-VFITC/PI分析细胞凋亡,PI染色分析细胞周期变化,RT-PCR技术检测抗凋亡基因bcl-2、促凋亡基因bax的表达。结果:经VK2作用后细胞出现明显的形态学改变:细胞变小,核固缩,核染色质聚集边挤于核膜内侧呈新月形以及典型凋亡小体形成等;MTT结果显示VK2对K562细胞有明显的抑制作用,作用72 h半数抑制浓度为25.1μmol.L-1;流式细胞仪检测结果显示随着VK2浓度的增加凋亡率逐渐增高(P<0.05),随着作用时间的延长凋亡率也逐渐增高(P<0.05);VK2作用72 h,S期细胞逐渐减少(r=-0.99,P<0.05),G0/G1期细胞逐渐增加(r=1.00),细胞被阻滞在G0/G1期;随着VK2浓度的增高抗凋亡基因bcl-2表达明显下调,而促凋亡基因bax表达无明显差异。结论:VK2通过诱导K562细胞凋亡抑制其增殖,并呈浓度和时间依赖性;抗凋亡基因bcl-2下调可能是VK2诱导K562细胞发生凋亡的机制之一。     

生长激素对结肠癌肿瘤细胞体外影响

目的: 检测生长激素对体外培养的结直肠癌细胞的影响,并探讨其作用机制?方法:结肠癌细胞株Lovo细胞随机分组,加或不加不同浓度的生长激素孵育不同时间后,以MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术分析细胞周期,Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡情况?结果:MTT法测定表明,生长激素对Lovo细胞有明显的促进增殖效应,12~24 h起效,48 h时达高峰,生长激素达到一定浓度后,其促增殖作用不再增加?流式细胞仪检测生长激素对结肠癌细胞的影响显示:浓度为200 ng/ml的生长激素作用Lovo细胞24 h后,G0/G1细胞比例下降,S期细胞比例明显上升,G2/M期细胞比例稍上升,凋亡指数无明显变化(P=0.187);72 h时, G0/G1期细胞下降更为明显,S期细胞比例上升亦更为明显,G2/M期细胞上升明显,凋亡细胞比例明显增高(P < 0.01)?结论:生长激素对Lovo细胞有明显的促增殖作用,并有受体饱和效应?该作用是通过改变细胞周期分布,促进G0/G1期细胞向S期?G2/M期细胞转变实现的?     

化痰散结中药对甲状腺细胞增殖与凋亡影响的实验研究

目的:研究化痰散结中药甲肿消对甲状腺FRTL细胞增殖与凋亡的影响.方法:用水煮浸渍提取方法制备甲肿消提取液,甲状腺FRTL细胞株采用含6H的F12培养基培养.中药提取液作用培养细胞,以MTT法测定不同浓度甲肿消对FRTL细胞的增殖影响;采用Annexin V/PI双染法,应用流式细胞仪检测细胞凋亡;P1单染,流式DNA定量法检测细胞周期.结果:甲肿消作用24 h,细胞半数抑制浓度IC50=0.8 mg/ml(含生药浓度),最大抑制率浓度为4.0 mg/ml.甲肿消作用后G0/G1期细胞增多,S和G2/M期细胞减少,增值指数(PI)显著降低,细胞凋亡增加;同时发现甲肿消对细胞增殖与凋亡的影响与作用剂量、作用时间成正相关.结论:甲肿消通过阻滞细胞从G0/G1期向S期转换,从而抑制细胞增殖,同时可诱导FRTL细胞的凋亡,并与作用剂量和作用时间正相关.     

新型靶向药物厄洛替尼对人卵巢癌细胞株SKOV3的影响

目的:探讨新型靶向治疗药物厄洛替尼对人卵巢癌细胞株SKOV3的作用。方法:体外培养人卵巢癌细胞株SKOV-3,采用MTT(噻唑蓝)检测不同浓度(0,10,15,20,40,50,60,70,80μmol/L)的厄洛替尼作用不同时间(24,48,72h)的细胞增殖活力变化,应用流式细胞仪对不同药物浓度作用后细胞凋亡、细胞周期情况进行分析。结果:厄洛替尼对人卵巢癌SKOV3细胞有抑制作用,且呈现时间及剂量依赖性。对照组与实验组比较,差异有统计学意义。随着药物浓度的增加,正常细胞逐渐减少,早期凋亡及晚期凋亡细胞呈现上升趋势,不同浓度组间比较有差异,差异有统计学意义。不同浓度的厄洛替尼作用于SKOV-3后,各浓度组相比较,随着药物浓度的增加,G0/G1期细胞数量明显增加,S期及G2/M期细胞数量呈减少趋势,差异有统计学意义。结论:厄洛替尼具有明显抑制卵巢癌细胞的增殖活力,促进细胞凋亡的作用,将SK0V3细胞周期阻滞于G0/G1期。其在卵巢癌的治疗中,可能具有一定的临床意义。     

玉竹提取物B对Hela细胞凋亡的影响

目的 观察中药玉竹提取物B(EB—PAOA)是否能引起人宫颈癌Hela细胞的凋亡。方法 将体外培养的人宫颈癌Hela细胞与不同浓度的EB—PAOA共育，通过倒置显微镜和透射电镜进行形态学观察，确认凋亡细胞；通过流式细胞仪检测凋亡率和细胞周期的分布。结果 经过EB—PAOA处理后，在倒置显微镜和透射电镜下可观察到EB—PAOA引起的典型的凋亡形态学变化；流式细胞仪测定显示经EB—PAOA处理后的Hela细胞凋亡率呈时间-剂量依赖性，G0／G1期细胞减少，S期细胞减少，G2／M期细胞增多。结论 EB—PAOA能够诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡，EB—PAOA抑制Hela细胞生长的机制之一是诱导该细胞凋亡。     

造血干细胞移植后免疫重建及其意义的研究进展

本文对造血干细胞移植后的免疫重建及其意义的研究进展作一综述,着重介绍移植后宿主体内T细胞、自然杀伤(NK)细胞及树突细胞(DC)数量和功能的变化。     

大鼠胃壁细胞的分离及培养

目的　完成胃壁细胞分离及纯化 ,建立原代培养胃壁细胞的方法 .方法　制备大鼠翻转的胃囊用含链霉蛋白酶E的消化液注入胃囊内孵育 ,并用磁力搅拌器轻轻搅拌而制备单个的胃底腺细胞 ,Percoll梯度离心富集胃壁细胞 ,用含10 0 m L· L- 1 血清的 PBS或培养液 ,时差贴壁去除成纤维细胞 ,然后 ,将壁细胞接种于培养板中 ,培养液用无血清的 1∶ 1Harm's F- 12 / DMEM培养 ,内含胰岛素 5 mg· L- 1 ,氢化可地松 4μg· L- 1 ,转铁蛋白 5 mg· L- 1 ,硒酸钠 5μg· L- 1 ,牛血清白蛋白 2 g· L- 1 ,表皮生长因子 2 5 μg· L- 1 ,葡萄糖 1.98g· L- 1持续培养可达 1wk以上 .结果　获得的壁细胞经吖啶橙 (acridine orange,AO)鉴定纯度达 80 %以上 ,原代培养经HE染色可见壁细胞呈分散小组式生长 ,且生长状态良好 .结论　此方法适宜于大鼠胃壁细胞的分离及体外培养 ,为体外进一步研究壁细胞的功能打下基础 .     

细胞培养技术的研究进展

随着现代科学的发展,体外细胞培养技术已成为多个领域必不可少的研究工具,并且其新技术和方法也在不断涌现。本文就细胞培养技术的发展、支架材料以及细胞培养的影响因素作一综述。     

内毒素对睾丸功能影响的研究进展

众所周知生殖道感染、炎症和其他疾病可抑制雄性生殖功能,但对系统性炎症和疾病引起男性不育的具体机制却所知甚少。内毒素是一种高效炎症激活物,可诱导炎症感染、内毒素血症、败血症休克及多组织器官损伤等,虽然内毒素广泛用于其他系统的炎症研究,但对其在生殖系统炎症的研究较少,因而深入了解内毒素对睾丸功能的影响,有助于进一步理解内毒素所致疾病对雄性生殖功能的影响。本文就内毒素的结构和生物学功能及其对睾丸生精细胞、Sertoli细胞和Leydig细胞功能的影响进行了相关研究。     

EPCs在MSCs向肝样细胞转化中作用的初步探讨

目的：探讨内皮前体细胞(endothelial precursor cells, EPCs)在间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)向肝样细胞转化中的作用。方法：分离培养SD大鼠MSCs和EPCs,取第3代MSCs向肝样细胞转化培养,培养过EPCs的无血清及因子的培养基(endothelial progenitor cell-conditioned medium, EPCs-CM)、无血清的α-最低必需培养基(alpha minimal essential medium, α-MEM)分别与肝细胞转化培养基按1∶1比例配置,作为实验组和模型对照组,正常α-MEM培养基为空白对照组,分别观察细胞形态及数量变化;在培养3、5、7、9 d时应用免疫荧光检测甲胎蛋白(alpha fetoprotein, AFP)、清蛋白(albumin, ALB)的表达。结果：空白对照组MSCs形态无明显变化;实验组与模型对照组细胞均出现肝样细胞形态。空白对照组未见AFP、ALB表达,模型对照组和实验组在3、5、7、9 d AFP、ALB表达水平均增高,其中实验组比模型对照组AFP、ALB水平增高明显。结论：EPCs在MSCs向肝样细胞转化中可能起一定的促进作用。     

Culture and Identification of Human Amniotic Mesenchymal Stem Cells

Objective To establish the method of isolation, purification, and identification of human amniotic mesenchymal stem cells （hAMSCs）. Methods hAMSCs were isolated from human amniotic membrane by trypsin-collagenase digestion, and cultured in Dulbecco＇s modified Eagle＇s medinm/F12 medium supplemented with 10% fetal bovine serum. Phenotypic characteristics of these cells were analyzed by means of immunocytochemistry and flow cytometry. Results The cells successfully isolated from human amniotic membrane expressed representative mesenchymal cell surface markers CD44, CD90, and vimentin, but not CD45. Conclusions This study establishes a potential method for isolation of hAMSCs from human amnion, in vitro culture, and identification. The isolated cells show phenotypic characteristics of mesenchymal stem cells.     

莪术注射液抑制K562细胞增殖及诱导其凋亡的研究

目的：探寻新的抗白血病药物。方法：采用ＭＴＴ法,以柔红霉素（ＤＮＲ）、阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）和羟基脲作对照,了解莪术注射液对Ｋ５６２细胞增殖抑制作用;通过流式细胞仪检测和ＤＮＡ凝胶电泳,观察莪术注射液诱导Ｋ５６２细胞凋亡的情况。结果：莪术注射液对Ｋ５６２细胞不仅具有强大的增殖抑制作用,功效明显强于对照ＤＮＲ、Ａｒａ－Ｃ和羟基脲;而它更主要的作用是诱导Ｋ５６２细胞不仅具有强大的增殖抑制作用,功效明显     

大鼠胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定

利用无血清培养和细胞克隆技术从孕鼠(14d)胚胎中分离出神经干细胞，并进行传代培养，采用免疫细胞化学技术检测神经巢蛋白和成熟脑细胞特异性抗原神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)的表达，同时采用H-E染色法鉴定神经细胞类型。证实从大鼠胚胎大脑皮质分离出的细胞具有连续的克隆能力，并表达神经巢蛋白，分化的细胞表达神经元和神经胶质细胞的特异性抗原，为中枢神经系统的干细胞。     

成人血源性间充质干细胞的分离和鉴定

目的建立一种分离、培养扩增成人血源性间充质干细胞(MSCs)的方法进行鉴定,并与骨髓源性MSCs比较生物学特性。方法30名成年志愿者随机平分为二组,一组直接抽静脉血,并细分为全血细胞法组和外周血密度梯度离心法组,同时抽骨髓为骨髓密度梯度离心法组;另一组为血细胞分离机法组。各组进行细胞存活率、集落形成率、形态学、流式表型分析、胶原染色等研究。结果外周血密度梯度离心法分离成人静脉血后培养,贴壁细胞呈梭形,集落形成率为(0.12±0.08)/106单个核细胞,传代扩增到第5代时每份平均细胞数达51.4674×106,表达CD44、CD54、CD105和CD166,不表达CD14、CD34、CD45和CD31,细胞分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原。全血细胞法和血细胞分离机法获得的细胞不能连续多次传代。结论外周血密度梯度离心法比全血细胞法和血细胞分离机法简单,贴壁细胞培养扩增容易,获得的血源性MSCs与骨髓源性MSCs的生物学特性相似。     

人成纤维细胞产生的抑制因子对肿瘤和转化细胞增殖与分化的影响

对人成纤维细胞产生的抑制因子(HFDI)的细胞生长抑制效应进行研究,发现HFDI对肿瘤细胞~3H—TdR掺入抑制是由于使细胞变性坏死或促使细胞有限分化所致;并证明HFDI对PHA刺激的淋巴细胞转化的抑制,也是由于使转化细胞变性坏死或促使细胞向成熟方向发展所致。