基于卵泡液代谢组学的卵巢低反应生物标志物研究*

目的 通过卵泡液代谢组学探寻与卵巢低反应相关的生物标志物。方法 采用超高液相色谱-高分辨质谱联用仪对行体外受精-胚胎移植/单精子卵泡浆内显微注射-胚胎移植（IVF-ET/ICSI-ET）的卵巢低反应组30例,以及同时仅因男方因素行IVF-ET/ICSI-ET的对照组49例进行卵泡液代谢组学分析。对比两组的差异代谢物。结果 与卵巢低反应相关的潜在生物标志物有30种,其上调的代谢物有9种,包括L-苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、1-羟基-2-氧代丙基四氢蝶呤、水杨酸镁、尿苷二磷酸、LysoPC（18∶1）、LysoPC（18∶2）及LysoPC（18∶3）;下调的代谢物有21种,包括6-氧代己酸酯、亚油酸酯、油酸、十六烷、花生四烯酸、二十二碳六烯酸、13,14-二氢视黄醇、石胆酸、7-脱氢甾醇、硬脂酰肉碱、25-羟基维生素D3、27-羟基胆固醇、3α,7α,12α-三羟基-5β-胆甾烷、13-羟基-α-生育酚、强啡肽A、LysoPC（16∶1）、LysoPC（16∶0）、LysoPC（18∶0）、LysoPC（20∶5）、LysoPC（20∶4）、LysoPC（20∶3）。结论 卵巢低反应患者在卵巢储备、卵巢反应、卵子数目、质量方面比正常女性低;卵巢低反应患者卵泡液代谢物与正常女性比较,差异有统计学意义（P?<0.05）。这些差异代谢物可以作为卵巢低反应的生物标志物。     

卵泡液代谢组学与相关疾病的研究进展

卵泡液为卵母细胞的发育提供了生物微环境,卵泡液中大量蛋白质以不同的蛋白表达方式影响卵泡的发育。卵泡液中蛋白表达水平的改变可能反映了女性卵泡发育过程的分子缺陷。测定卵泡液不同蛋白质含量以及鉴定某些具有疾病标志物蛋白质可为不孕症等相关疾病的早期诊断与治疗提供帮助,并对预测体外受精结果、评价胚胎质量以及评估妊娠率具有重大意义。卵泡液的代谢组学研究为生殖技术应用结果预测及妇科疾病的诊断提供了新的方向。     

卵泡液代谢组学预测卵母细胞发育潜能的研究现状

卵泡液是由颗粒细胞、卵泡膜细胞等分泌物共同形成的,可作为卵母细胞生长发育的微环境或培养基。卵泡液中含有细胞、蛋白质、激素等物质,可以促进卵母细胞完成生长、发育、成熟等一系列生理活动。卵母细胞的质量是影响辅助生殖结局的关键因素,对提高临床妊娠率有重要价值。代谢组学分为靶向和非靶向分析技术,现如今通常利用磁共振成像、质谱检测技术等来检测卵泡液中的代谢物,包括葡萄糖、氨基酸、胆固醇,维生素等成份,进而评估与预测卵母细胞的发育和成熟。本文就卵泡液代谢组学预测卵母细胞发育潜能的研究现状做一综述。     

卵泡液成分与卵母细胞质量相关性研究进展

在辅助生殖治疗过程中,正确评估卵母细胞的质量对于治疗结局具有重要意义。对卵母细胞质量的评估方法有许多种,卵泡液获取方便,是目前对卵母细胞质量评估的最理想非侵入性指标。所以,卵泡液因子在评估卵母细胞质量中备受关注。大量研究表明,卵泡液中的甾体激素水平、促性腺激素水平及卵泡液中一些细胞因子均与卵母细胞质量具有相关性。近年来,卵泡液蛋白组学、代谢组学的研究成为主要趋势,也有望成为卵母细胞评估的重要工具。     

人卵泡液中干细胞因子水平及其对卵泡发育的影响

目的 :探讨人卵泡液中是否存在干细胞因子 (SCF)及其与卵泡发育的关系 .方法 :采用夹心ELISA方法检测 3 0例进行体外受精 胚胎移植 (IVF ET)患者超促排卵前、取卵时血清与卵泡液中SCF的水平 .结果 :①取卵时卵泡液中SCF水平 (5 14± 67)ng·L 1,显著高于同期血清水平 (3 95± 4 9)ng·L 1,差别有显著性 (P <0 .0 5 ) ;②取卵时血清中SCF水平与超促排卵前血清中SCF水平相比 ,差别无显著性 [(3 95± 4 9)ng·L 1,(3 74± 3 6)ng·L 1,P >0 .0 5 ];③高、中反应型组卵泡中SCF水平 [(5 64± 64)ng·L 1,(5 3 2± 5 5 )ng·L 1]与低反应型 (3 5 2± 78)ng·L 1相比 ,差别有显著性 (P <0 .0 1) ,且与卵泡发育数目之间呈正相关 (r =0 .4 12 ,P <0 .0 5 ) .结论 :卵泡液中SCF可能来自于卵泡本身 ,而非血浆渗透 .SCF参与人卵泡发育的调控     

子宫内膜异位症合并不孕患者卵泡液中细胞因子表达水平的研究

目的 评价子宫内膜异位症(endometriosis,EM)对卵泡液中细胞因子表达的影响.方法 选取2017年3月至2018年10月首都医科大学附属北京妇产医院接受体外受精(in vitro fertilization,IVF)治疗的患者76例,其中EM组41例,对照组35例.在取卵过程中,收集优势卵泡的卵泡液(fol...     

人卵泡液中重金属铅对女性生殖毒性的研究

目的:研究重金属铅对女性生殖系统的影响,分析铅含量与获卵率?卵子成熟率?正常受精率?正常卵裂率?可移植胚胎率?优质胚胎率?妊娠率的相关性?方法:测定36例行体外受精(IVF)治疗的患者卵泡液中铅的浓度,并观察这些患者的卵泡数?获卵率?卵子成熟率?正常受精率及发育情况? 结果:获卵率?卵子成熟率?正常受精率?正常卵裂率?可移植胚胎率?优质胚胎率和卵泡液中铅的检出均无显著差异,但随着铅含量浓度的逐渐增高,卵子成熟率?正常卵裂率?优质胚胎率均有下降趋势?结论:重金属铅对女性生殖系统是有毒性损害的,但由于本研究的样本量较少,两者之间无显著性关联,应再加大样本量继续研究?     

卵泡液中颗粒细胞 FSHR 的表达与体外受精-胚胎移植的相关研究

目的：检测超促排卵治疗过程中卵泡液内颗粒细胞卵泡刺激素受体（ FSHR ）的表达水平,探讨FSHR表达与体外受精-胚胎移植（ IVF-ET）中卵子质量和临床妊娠率的关系。方法随机选择在本中心行第一周期IVF-ET的患者35例。采卵日收集卵泡液中的颗粒细胞,检测FSHR的表达。结果卵子的卵裂率随颗粒细胞FSHR表达强度的增加而升高（r＝0．681,P＜0．05）;卵子的受精率随颗粒细胞中FSHR表达的增加而升高（r＝0．647,P＜0．05）;与临床妊娠组相比,非妊娠组患者卵泡液中颗粒细胞FSHR表达水平显著降低,差异有统计学意义（P＜0．05）,年龄、不孕年限、获卵率、卵子成熟度、优胚率差异无统计学意义。结论在IVF-ET中,卵泡液中颗粒细胞FSHR的表达水平将会影响卵子的质量,进而影响临床妊娠率。     

702对自然流产夫妇的染色体核型分析

目的探讨流产患者染色体异常的原因和频率,揭示异常染色体携带者对生育的影响。方法对702对(1 404例)有自然流产史夫妇进行染色体核型分析。结果检出流产患者异常染色体73例(占总例数的5.20%),男和女分别为40例(占总例数的2.85%)和33例(占总例数的2.35%)。其中平衡易位是最主要的异常核型,检出33例(占异常总数的45.21%)、倒位15例(占异常总数的20.55%)、大Y13例(占异常总数的17.81%)、罗伯逊易位5例(占异常总数的6.85%)、P+5例(占异常总数的6.85%)和2例特纳综合征(嵌合体)。结论流产患者中其染色体异常率显著增加,应进行遗传咨询和产前诊断。     

ENA-78在子宫内膜异位症患者卵泡液中的表达

目的：了解子宫内膜异位症患者卵泡液微环境变化。方法：选择2009年12月至2011年8月于深圳市妇幼保健院行IVF／ICSI-ET的36例子宫内膜畀位症患者作为研究组,同期输卵管因素不孕患者46例作为对照组。采用酶联免疫吸附法测定两组患者卵泡液中上皮中性粒细胞活化肽-78（ENA-78）水平。结果：研究组患者卵泡液ENA-78水平（184．59±65．10）pg／mL明显高于对照组（139．62±58．38）pg／mL,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：子宫内膜异位症患者卵泡液中ENA-78水平较输卵管因素不孕患者升高,其高水平的ENA-78可能是子宫内膜异住症患者卵母细胞质量下降、受精能力受损的原因之一。     

基于非靶向代谢组学检测探讨肾精亏虚型颈动脉粥样硬化患者的代谢特征

目的:筛选肾精亏虚型颈动脉粥样硬化患者与健康人群之间的差异代谢物,为其诊断及发病机制研究提供科学依据。方法:纳入肾精亏虚型颈动脉粥样硬化患者及健康志愿者各8例,采集所有受试者的血浆样本。应用超高压液相色谱-电喷雾-四级杆飞行时间串联质谱分析法(UHPLC-Q-TOF MS)对血浆样本进行全谱分析,采用XCMS软件对数据进行峰提取和代谢物鉴定;运用主成分分析、判别分析等统计方法筛选差异代谢物,再将差异代谢物提交到KEGG网站,进行相关通路分析。结果:正、负离子模式下,肾精亏虚型颈动脉粥样硬化患者与健康志愿者间具有显著性差异的代谢物共17种:精胺、焦谷氨酸、肉碱、精氨酸、肌酐、肌酸、三甲基甘氨酸、牛磺鹅胆酸盐、泛酸酯、硫酸犬尿素、左旋瓜氨酸、甘氨胆酸、γ-谷酰基-L-苯基丙氨酸、雌素酮-3-硫酸盐、D-阿洛糖、柠檬酸盐、乙酰-DL-亮氨酸;所有差异性代谢物共参与78条代谢通路,其中3种及以上差异性代谢物同时参与的代谢通路共19条。结论:肾精亏虚型颈动脉粥样硬化患者较健康志愿者的代谢物谱发生了显著性改变,这些差异代谢物及其所涉及的代谢通路可能成为未来证型和药物靶点研究的方向。     

人卵泡液中白血病抑制因子浓度及其对卵母细胞发育的影响

目的: 探讨人卵泡液中是否存在白血病抑制因子(LIF)及其对卵母细胞发育的影响. 方法: 采用ELISA法检测66例体外受精-胚胎移植患者取卵日卵泡液及其血清中LIF浓度,分析卵泡液中LIF浓度与卵母细胞发育的关系. 结果: 66份卵泡液中LIF浓度为(28.5±13.1) ng/L, 血清LIF浓度为(3.0±1.5) ng/L ,差异非常显著(P＜0.01),而且两者间无相关性(r=0.1915, P＞0.05). 含成熟卵母细胞的卵泡液中LIF浓度为(33.7±11.1)ng/L,含未成熟卵母细胞的卵泡液LIF浓度为(18.0±10.5)ng/L,两者比较差异非常显著(P＜0.01). 结论: 卵泡液中存在较高浓度的LIF,其对卵母细胞发育有促进作用.     

不同年龄不孕患者卵泡液中CFTR水平与卵子及胚胎发育结局的关系

目的 探讨囊性纤维化跨膜转导调节因子（cystic fibrosis transmembrane conductance regulator, CFTR）在不同年龄不孕患者卵泡液中表达的变化与卵子及胚胎发育结局的相关性。方法 采用全自动电化学发光仪测定血清中卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone, FSH),黄体生成素(luteotropic hormone, LH),雌二醇(estradiol, E2),孕激素(progesterone, P)水平;采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定卵泡液中CFTR的浓度;收集取卵日卵丘颗粒细胞,采用间接免疫荧光染色法检测卵丘颗粒细胞上CFTR蛋白的定位及表达;Real-time PCR测定卵丘颗粒细胞CFTR mRNA的表达。结果 CFTR在不同年龄段不孕患者卵泡液中均有表达,不同年龄段患者卵泡液中CFTR浓度差异有统计学意义（P<0.05）,卵泡液中CFTR水平与年龄呈明显正相关(r=0.497,P<0.05)。不同年龄组胚胎培养结局中获卵数和优质胚胎率与卵泡液中CFTR含量呈反比。不同年龄组胚胎培养结局中2PN形成率与卵泡液中CFTR含量呈正比。免疫荧光染色表明颗粒细胞胞浆和胞膜上均有CFTR蛋白的表达。不同年龄患者的卵丘颗粒细胞上均有一定量的CFTR mRNA表达;不同年龄患者卵丘颗粒细胞中CFTR mRNA表达与年龄呈正相关（r=0.440）。不同年龄可用胚胎率与CFTR mRNA表达量呈反比趋势。结论 CFTR可能参与人卵泡正常生长的调控,与不孕患者年龄有密切的相关性,直接影响获卵数、2PN形成率、优质胚胎率等卵子及胚胎的发育结局,CFTR有可能作为预测体外受精患者卵子及胚胎发育结局的一种无创、定量的标记分子。     

超排卵周期人血清及卵泡液中IGF-II测定及其临床意义

目的了解超排卵周期人血清及卵泡液中胰岛素样生长因子II(IGF-II)水平,探讨IGF-II在生殖内分泌中的作用。方法采用放射免疫法(RIA)测定45例超排卵周期取卵日人血清及卵泡液中IGF-II、雌二醇(E2)、孕酮(P)、睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平,分析IGF-II与卵泡发育、生殖激素及为超排卵而使用r-FSH、人绝经期促性腺激素(hMG)的剂量之间的相关性及意义。结果卵泡液IGF-II(0.60±0.69)μgL,低于血清IGF-II(1.09±1.21)μgL(z=1.975,P<0.05);卵泡液中IGF-II与E2、P水平呈正相关(r=0.620、0.509,均P<0.01);与TE2比值呈负相关(r=0.514,P<0.01),与FSH、LH水平及LHFSH比值无相关性(r=0.033、0.044、0.062,均P>0.05);与直径14mm以上的卵泡数及获卵数呈正相关(r=0.393、0.324,均P<0.05)。血清IGF-II与E2、P、T、FSH、LH水平及TE2均无相关性(均P>0.05),与直径14mm以上的卵泡数及获卵数亦无相关性(r=0.099、0.185,均P>0.05)。血清及卵泡液IGF-II水平与超排卵而使用的r-FSH、hMG剂量均无显著相关性(均P>0.05)。结论IGF-II在卵巢内调节卵巢功能中起了重要作用,可能具有促进卵泡发育、形成优势卵泡的作用,并可能促进卵泡E2、P的分泌。     

轻微肝性脑病患者血清中代谢物组的研究

目的 检测轻微肝性脑病(minimal hepatic encephalopathy,MHE)患者血清中的代谢物组,初步建立MHE诊断模型.方法 采用核磁共振(NMR)方法检测25例肝硬化患者(肝硬化组)、25例轻微肝性脑病患者(MHE组)和30例健康对照(对照组)血清中的代谢物,应用主成分分析(PCA)和正交偏最小二...     

卵泡液中TGF β1和性激素水平的测定及临床意义

目的探讨控制性超排卵(COH)周期取卵(OPU)日卵泡液中转化生长因子β1(TGFβ1)及性激素的含量与卵母细胞成熟、受精和妊娠结局的关系。方法酶联免疫反应法测定90例COH周期OPU日卵泡液中TGFβ1和性激素的含量,卵泡液按相应卵母细胞的成熟度、受精情况和妊娠结局分组。结果成熟组卵泡液中TGFβ1、促黄体生成素(LH)和孕酮水平高于未成熟组[(2824.4±1414.4)pg/mlvs(2015.0±1191.7)pg/ml,(0.71±0.35)mIU/mlvs(0.54±0.21)mIU/ml,(3837.1±942.8)ng/mlvs(3188.1±617.4)ng/ml,均为P<0.05];受精组卵泡液中TGFβ1、LH和孕酮浓度均明显高于非受精组;妊娠组卵泡液中TGFβ1和LH浓度明显高于非妊娠组[(3547.4±1536.3)pg/mlvs(2169.2±1180.4)pg/ml,(0.74±0.25)mIU/mlvs(0.52±0.29)mIU/ml,均为P<0.05]。雌二醇浓度各组间无显著差异。结论COH周期OPU日卵泡液中适量的LH和孕酮促进卵母细胞的成熟;TGFβ1和LH浓度与相应卵泡的卵母细胞成熟及其后的受精和妊娠结局有关。     

高脂血症大鼠病程进展的尿液代谢组学研究

目的 采用超高效液相色谱-飞行时间质谱代谢组学法动态观察高脂血症大鼠造模过程中尿液的代谢轮廓的改变,寻找高脂血症演进过程中的生物标志物.方法 将SD大鼠分成正常对照组和模型组,运用高脂乳剂灌胃法复制高脂血症大鼠模型,并收集不同时间点的尿样,采用超高效液相色谱-飞行时间质谱仪检测并进行多元数据分析.结果 随着造模时间的延长,高脂血症大鼠血浆代谢轮廓呈现动态演变,与正常组相比,模型组3-羟基丁酸、乙酸乙酰、丙酮酸、肌酐、Ⅳ-氧化烟酰胺明显升高,而柠檬酸、马尿酸、牛磺酸以及3-吲哚硫酸、肌酸、乌头酸明显下降.结论 在高脂血症大鼠病程进展过程中,出现了能量代谢紊乱、炎症和氧化应激.该研究加深了对高脂血症发病机制的认识,为研发有效防控高脂血症策略提供科学依据.