呼出气一氧化氮联合肺功能及外周血嗜酸性粒细胞比例检测在咳嗽变异性哮喘诊断中的价值

目的 探讨呼出气一氧化氮（FeNO）联合肺功能及外周血嗜酸性粒细胞比例检测在咳嗽变异性哮喘（CVA）诊断中的价值。方法 选取2016年3月-2017年11月于川北医学院附属医院呼吸内科门诊诊断为慢性咳嗽的患者267例[分为CVA组（_n=60）与非咳嗽变异性哮喘组（非CVA组，_n=207）]，另选择同期该院健康体检者30名作为对照组。对所有受试者行FeNO、常规肺功能、脉冲振荡肺功能、支气管舒张试验、外周血嗜酸性粒细胞比例检测，并分析CVA患者FeNO值与肺功能及外周血嗜酸性粒细胞比例的相关性。结果 CVA组FeNO值、外周血嗜酸性粒细胞比例明显高于非CVA组及对照组[45（34.3，74.8） μg/L _vs.14（10.0，19.0） μg/L _vs.10（7.0，18.0） μg/L，_P<0.001；5.9%±2.3% _vs.2.3%±1.6% _vs.2.6%±1.3%，_P<0.001]。CVA组...     

青蒿琥酯对乳腺癌细胞的生长抑制作用及其机制

目的探讨青蒿琥酯对乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长抑制作用及其可能机制。方法利用CCK-8法检测青蒿琥酯对MDA-MB-231细胞的生长抑制作用,并计算IC₅₀值。根据IC₅₀值选择后续实验的青蒿琥酯浓度(0、25、50、100 μg/ml),0 μg/ml青蒿琥酯组作为对照组。采用不同浓度(0、25、50、100 μg/ml)的青蒿琥酯干预MDA-MB-231细胞24 h,利用流式细胞术检测细胞凋亡情况及线粒体膜电位;0、25 μg/ml青蒿琥酯干预MDA-MB-231细胞24 h,利用细胞划痕试验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果青蒿琥酯对MDA-MB-231细胞具有增殖抑制作用,且呈浓度依赖性,对MDA-MB-231细胞的IC₅₀为54.24μg/ml。不同浓度的青蒿琥酯干预MDA-MB-231细胞24 h,MDA-MB-231细胞凋亡率显著增高(P<0.01);与对照组相比,青蒿琥酯组细胞线粒体膜电位显著降低(P<0.01),且呈浓度依赖性。细胞划痕实验结果显示,青蒿琥...     

survivin在肝癌细胞株Hep G2表达与化疗药物敏感性的关系

 目的 探讨肝癌细胞株Hep G₂中凋亡抑制因子survivin与化疗药物敏感性的关系。方法 通过MTT检测肝癌细胞株Hep G₂对于1.0 μg/ml顺铂, 1 μmol/L阿霉素,及1.0 μg/ml吉西他滨的敏感程度;通过Western blot 检测Hep G₂中survivin 蛋白在顺铂、阿霉素、吉西他滨处理后不同时间段表达水平的变化。结果 在药物作用72 h后,10%~20%的肝癌细胞仍然存活并具有代谢活性。顺铂和吉西他滨处理48 h后survivin蛋白表达升高(2.04±0.05 vs 1.25±0.05;1.84±0.02 vs 1.25±0.05;1.92±0.05 vs 1.55±0.04;1.88±0.11 vs 1.55±0.04,差异有统计意义(P<0.05)。阿霉素处理48 h后survivin 蛋白表达并未见明显变化(1.73±0.11 vs 1.52±0.02;1.66±0.12 vs 1.52±0.02),差异无统计学意义。结论 survivin 蛋白水平升高与肝癌细胞株Hep G2部分化疗药物敏感性相关。     

miR-205在宫颈鳞癌中的表达及其对癌细胞迁移、侵袭能力的影响

目的 筛选宫颈癌中差异表达的微小RNA（miRNA,miR）,探讨关键miRNA对宫颈癌发生发展的作用及其机制。方法 采用生物信息学方法分析并以差异倍数>2.5及_P<0.01为条件筛选宫颈鳞癌中差异表达的miRNA;采用原位杂交和qRT-PCR分别检测miR-205及白细胞介素（IL）-32的表达;采用CCK-8法检测细胞增殖活力;应用Transwell模型评价细胞迁移及侵袭能力;利用Western blotting检测侵袭相关基质金属蛋白酶（MMP）-2及MMP-9蛋白的表达量。结果 生物信息学分析获得宫颈鳞癌中差异表达的miRNA 106个,其中70个上调,36个下调;其中miR-205的表达量变化最大。原位杂交及qRT-PCR结果表明,miR-205在宫颈鳞癌细胞中的表达量明显高于癌旁组织（_P<0.05）。miR-205可明显提升宫颈癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力（_P<0.05）。在宫颈癌细胞系HeLa及SiHa细胞中,过表达miR-205可增强IL-32的表达,降低_{miR-205表...}     

猕猴桃根提取物抗肝细胞癌作用及相关机制研究

目的探讨猕猴桃根提取物抗肝细胞癌(HCC)的作用及相关机制。方法选取HCC细胞系HepG2和HUH7,根据猕猴桃根浓度分为0μg/ml(对照组)、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml组。采用噻唑蓝(MTT)和克隆实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;划痕实验和Transwell实验研究细胞的侵袭和转移;Real-time PCR和Western blot检测相关基因和蛋白表达。结果猕猴桃根对HCC增殖的抑制作用存在剂量和时间依赖性。克隆实验发现,与对照组比较,不同浓度猕猴桃根抑制HepG2和HUH7细胞增殖,且随浓度的增加,抑制作用逐渐增强,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测结果发现,与对照组比较,50μg/ml、100μg/ml猕猴桃根促进细胞由G1期进入S期,抑制DNA复制,促进HepG2和HUH7细胞凋亡,差异均有统计学意义(P<0.05)。划痕实验结果发现,与对照组比较,猕猴桃根显著促进HepG2和HUH7细胞迁移,具有剂量依懒性(P<0.05)。猕猴桃根促进Akt基因和蛋白表达,抑制p-Akt表达,抑制Akt磷酸化比例,促进PTEN基因和蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论猕猴桃根通过p-Akt/PTEN调控HCC细胞增殖、周期停滞及细胞凋亡。     

逆转录病毒介导的对原代培养成年大鼠成肌细胞基因转染的研究

目的　探索成年大鼠成肌细胞的原代培养方法以及逆转录病毒对其的基因转染。方法　取成年SD大鼠的胸大肌 ,利用组织块法进行培养 ,并对培养细胞进行形态学研究和免疫细胞化学鉴定。以逆转录病毒为载体 ,将绿色荧光蛋白基因导入成年大鼠成肌细胞 ,利用倒置荧光显微镜及流式细胞仪对转染细胞进行观察。结果　采用组织块培养法 ,2周后成肌细胞的密度可达 10 7/ml,免疫细胞化学分析显示 90 %以上的细胞呈骨骼肌特异的myogenin抗体染色阳性。荧光显微镜和流式细胞仪检测发现eGFP基因可在成年大鼠成肌细胞中有效地表达 ,其转染效率约为 12 82 %。结论　利用组织块法成功培养成年大鼠原代成肌细胞 ,该方法实用性强 ,所得成肌细胞纯度高 ;逆转录病毒可介导成肌细胞的基因转导 ,为深入研究心肌梗死瘢痕中转基因成肌细胞自体移植奠定了基础。     

Sema3A-Fc真核表达载体构建及诱导少突胶质细胞祖细胞迁移作用观察

目的 构建真核表达载体pIGSema3A-Fc,并观察Sema3A-Fc融合蛋白对少突胶质细胞祖细胞(OPCs)迁移的作用.方法 运用DNA重组技术自原核表达载体上将鸡来源的Sema3A基因克隆到真核表达载体pIGIsG1Fc上,并用双酶切、测序法进行鉴定.采用脂质体法转染非洲绿猴肾细胞株(COS-7)细胞进行融合蛋白表达,培养3天后提取上清液,经蛋白A亲和纯化,Western blotting进行鉴定.利用插入式细胞迁移小室(millicell-PCF)细胞迁移仓观察其对OPCs细胞迁移的诱导作用.结果 重组质粒双酶切产生了2.24kb目的 片段及5.7kb载体片段.测序证实构建的Sema3A膜外区与Sema3A-Fc cDNA阅读框完整,连接部位序列正确;Western blotting证实有Sema3A-Fc融合蛋白表达.迁移试验证明其对少突胶质细胞祖细胞迁移具有推斥作用.结论 成功构建了Sema3A-Fc真核表达载体,并使有生物学活性的Sema3A-Fc融合蛋白在COS-7细胞上获得了稳定表达,为进一步研究OPCs细胞定向迁移奠定了基础.     

AHSG对胰岛素刺激下的HL-7702细胞中FAS、SREBP-1基因表达的影响

目的研究纯化后的人胎球蛋白A（AHSG）对HL-7702细胞胰岛素信号通路下游基因FAS、SREBP-1表达的影响。方法通过硫酸铵沉淀、PEG沉淀、DEAE离子交换和鱼精蛋白（protamine）亲和层析方法纯化血浆中的AHSG蛋白;单用胰岛素或胰岛素与AHSG共同处理HL-7702细胞后,提取细胞的RNA并且逆转录成cDNA,通过实时PCR（real-time PCR）方法分析细胞中FAS、SREBP-1基因mRNA的含量。结果 100 nmol/L胰岛素在1、2、3、4、5、6 h都可刺激HL-7702细胞中FAS、SREBP-1的基因表达量增加;在胰岛素刺激HL-7702细胞5 h时,FAS、SREBP-1基因表达量随胰岛素浓度的增加而升高;当HL-7702细胞用20 nmol/L胰岛素与100、300和600μg/ml的AHSG蛋白分别共同处理时,AHSG能抑制FAS、SREBP-1基因的表达,并且在600μg/ml时抑制作用较强。结论胰岛素能刺激HL-7702细胞中FAS、SREBP-1基因表达量的增加,但AHSG蛋白抑制由胰岛素刺激引起的FAS、SREBP-1基因表达量的增加。     

AHSG对胰岛素刺激下的HL-7702细胞中FAS、SREBP-1基因表达的影响

目的研究纯化后的人胎球蛋白A(AHSG)对HL-7702细胞胰岛素信号通路下游基因FAS、SREBP-1表达的影响。方法通过硫酸铵沉淀、PEG沉淀、DEAE离子交换和鱼精蛋白(protamine)亲和层析方法纯化血浆中的AHSG蛋白;单用胰岛素或胰岛素与AHSG共同处理HL-7702细胞后,提取细胞的RNA并且逆转录成cDNA,通过实时PCR(real-time PCR)方法分析细胞中FAS、SREBP-1基因mRNA的含量。结果 100 nmol/L胰岛素在1、2、3、4、5、6 h都可刺激HL-7702细胞中FAS、SREBP-1的基因表达量增加;在胰岛素刺激HL-7702细胞5 h时,FAS、SREBP-1基因表达量随胰岛素浓度的增加而升高;当HL-7702细胞用20 nmol/L胰岛素与100、300和600μg/ml的AHSG蛋白分别共同处理时,AHSG能抑制FAS、SREBP-1基因的表达,并且在600μg/ml时抑制作用较强。结论胰岛素能刺激HL-7702细胞中FAS、SREBP-1基因表达量的增加,但AHSG蛋白抑制由胰岛素刺激引起的FAS、SREBP-1基因表达量的增加。     

自噬在劳力性热射病大鼠急性肺损伤中的作用

目的 探讨自噬在劳力性热射病（EHS）大鼠急性肺损伤中的作用。方法 将60只雄性Wistar大鼠随机分成4组：正常对照组、EHS组、EHS+巴弗洛霉素A1（Baf A1）组、EHS+雷帕霉素（RAPA）组,每组15只。后两组大鼠分别在建模前连续腹腔注射Baf A1及RAPA（1 mg/kg,1次/d,连续4 d）。建立大鼠EHS模型,观察5 h后麻醉取材,比较各组肺组织形态学变化,行动脉血气分析,测定肺系数及伊文思蓝（EB）渗出量,HE染色观察肺组织病理学变化,原位末端转移酶标记法（TUNEL）观察肺组织凋亡情况,Western blotting检测肺组织中微管相关蛋白1轻链3（LC3）-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及p62蛋白表达水平。结果 与正常对照组比较,EHS组大鼠肺组织肿胀明显,液体渗出较多;动脉血氧分压（PaO₂）下降,动脉血二氧化碳分压（PaCO₂）升高;肺系数、EB渗出量明显增加;HE染色及凋亡染色显示肺泡间隔及肺泡壁增厚不均,肺泡渗出及凋亡细胞数增多,差异有统计学意义（_P<0.05）。与EHS组比较,EHS...     

丹参酮ⅡA对肝细胞癌保护作用与机制研究

目的探讨丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对肝细胞癌的保护作用,并阐明其可能的机制。方法分别用5μg/ml、10μg/ml Tan ⅡA处理肝癌细胞HepG2 24、48 h后,采用噻唑兰法、克隆实验、流式细胞术、划痕实验与Transwell实验检测细胞增殖、周期、侵袭和转移情况,采用Western blot法检测相关通路蛋白表达。结果与对照组比较,Tan ⅡA对肝癌细胞HepG2细胞的增殖具有明显的抑制作用,随浓度增加抑制作用逐渐增强,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,Tan ⅡA显著抑制肝癌细胞HepG2的侵袭和迁移,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,Tan ⅡA显著抑制p-Akt表达,降低p-Akt/Akt比率,促进PTEN蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Tan ⅡA抑制肝癌细胞增殖、周期停滞与迁移,其调控机制可能与Akt/PTEN通路有关。     

甘西鼠尾草总酚酸提取物对电离辐射血管内皮细胞损伤的保护作用及机制研究

目的 研究甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)对电离辐射血管内皮细胞损伤的保护作用,探讨其抗电离辐射作用机制.方法 人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分别给予10000、1000、500、250、125、62.5、30、15、5、1μg/ml SPE溶液处理24 h;HUVEC细胞暴露于10 Gy60Co γ射线照射后培养30 h,分别给予125、250、500 μg/ml SPE溶液处理24 h;HUVEC暴露于10 Gy 60Coγ射线照射后培养1h,加入100 μl组织细胞淋巴瘤细胞(U937细胞)溶液,1h后除去未黏附的细胞,分别给予125、250、500 μg/ml SPE溶液处理3h.采用MTS法检测以上溶液细胞活力变化.HUVEC暴露于10 Gy60Coγ射线照射后培养6h,分别给予125、250、500 μg/ml SPE溶液处理3h后,测定活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)含量,继续培养6h后,采用Western印迹检测Bcl-2、Bax、THBD、γH2AX、ICAM-1、VCAM-1等蛋白表达.结果 HUVEC可耐受1000 μg/ml以下的SPE溶液.对10000 μg/ml SPE溶液,其细胞活力下降极显著(P＜0.0001).与辐射模型组相比,250和500 μg/ml SPE剂量组的辐射HUVEC活力显著升高(P＜0.01)、与U937细胞间黏附比例显著降低(P＜0.01);SPE各组的ROS、MDA水平显著降低(P＜0.01),SOD、GSH水平显著升高(P＜0.01),且效应强度与剂量均呈正相关.SPE各组Bcl-2、THBD蛋白表达显著升高,Bax、γH2AX、ICAM-1及VCAM-1蛋白表达显著降低.结论 SPE可通过调节凋亡及细胞周期相关蛋白,增强血管内皮细胞抗凋亡能力和细胞活力,通过抑制单核细胞黏附、降低脂质过氧化、减轻血管内皮细胞氧化应激及炎症损伤等机制,对电离辐射血管内皮细胞损伤具有保护作用.     

5-氮杂胞苷诱导间充质干细胞分化为成肌细胞的实验研究

目的：探讨5－氮杂胞苷（5－Aza）诱导间充质干细胞（MSCs)分化为成肌细胞的相关机制。方法：分离纯化4－6周龄Balb/C小鼠骨髓MSCs，以不同浓度5－Aza作用，用四唑盐（MTT）法测定细胞生长活力；逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）鉴定肌形成调节因子5（Myf5)，成肌素（myogenin)表达，免疫组织化学染色鉴定结蛋白（desmin)，肌凝蛋白（myosin)表达；观察细胞形态变化。结果：1，3umol/L5－Aza对细胞增殖无明显影响，20umol/L 5-Aza对细胞有毒性作用，影响其增殖，10umol/L 5-Aza对细胞增殖无明显影响。20umol/L 5-Aza对细胞有毒性作用，影响其增殖，10umol/L5-Aza诱导后6h,MSCs表达Myf5,9h达最高；5umol/L 5-Aza诱导后9h，MSCs表达Myf5,12h达高峰。10umol/L 5-Aza诱导后24h，MSCs表达myogenin,48h达最高；5umol/L5-Aza诱导后6d，MSCs表达myogenin,且为高峰。10umol/L 5-Aza诱导后7d，部分细胞表达desmin;14d部分细胞表达myosin.10umol/L 5-Aza诱导后9d，部分细胞体明显增粗，14－16d后可见有肌管样细胞,出现。结论：5－Aza诱导MSCs向成肌细胞定向分化，可能是因其产生的去甲基化作用使MSCs中处于转录失活阶段的肌分化调控基因Myf5等得以表达，从而调控MSCs向肌细胞系定向分化并逐步表达myogenin，最后分化为肌管样细胞的过程。     

EGCG对A549细胞炎性反应模型UBC9表达的影响

 目的 观察泛素连接酶9(ubiquitin conjugating enzyme 9,UBC9)在表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)作用的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导A549细胞中的表达,探讨UBC9与EGCG抗炎性反应机制的相关性。方法 根据筛选结果随机分为对照组、EGCG组、LPS组、EGCG＋LPS组4个组,MTT检测不同浓度的EGCG(50～400 μg/ml)和LPS(10～50 μg/ml)对A549细胞增殖活性的影响,筛选最佳作用浓度,进一步通过免疫组化染色法、蛋白质印迹法和Realtime-PCR检测分析各处理组UBC9蛋白及其mRNA的相对表达量。结果 MTT显示,200 μg/ml的EGCG细胞增殖抑制作用最强(F=1618.18,P＜0.001),LPS 25μg/ml细胞增殖活性最明显(F=237.38,P＜0.001)。免疫组化与蛋白质印迹检测均显示,与对照组比较,EGCG下调A549细胞UBC9蛋白表达(P＜0.001),LPS则上调UBC9表达量(P＜0.001),与LPS组比较,EGCG＋LPS组UBC9蛋白表达明显降低(P＜0.001)。同样,Realtime-PCR显示,与对照组比较,EGCG组UBC9 mRNA表达下调(F=89.34,P＜0.001),LPS组UBC9 mRNA表达上调(F=225.00,P＜0.001),与LPS组比较,EGCG＋LPS组UBC9 mRNA的表达受到抑制,显著降低(F=625.00,P＜0.001)。结论 EGCG下调LPS刺激的炎性反应模型的UBC9的表达,其抗炎机制可能与抑制UBC9蛋白与mRNA表达有关。     

抑制OCT4-pg5与OCT4B表达对膀胱癌顺铂敏感性的影响

目的探讨八聚体结合转录因子4假基因5(OCT4-pg5)与八聚体结合转录因子4B(OCT4B)的表达对人膀胱癌细胞顺铂敏感性的影响。方法采用反转录实时定量PCR(RT-qPCR)检测OCT4-pg5、OCT4B在膀胱癌细胞及组织中的表达;选择高表达细胞株,通过RNA干扰技术下调其OCT4-pg5、OCT4B表达,细胞借此分为si-OCT4-pg5组、si-OCT4B组、si-OCT4-pg5/si-OCT4B组及对照组;采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测各组细胞顺铂半数抑制浓度(IC₅₀);RT-qPCR及Western blotting检测细胞OCT4-pg5、OCT4B表达情况;流式细胞术检测细胞凋亡及周期分布情况。结果 OCT4-pg5与OCT4B在膀胱癌T24细胞及膀胱癌组织中高表达,且两者在癌组织中的表达呈正相关关系(r=0.73,P<0.01)。干扰OCT4-pg5、OCT4B表达可显著降低T24细胞的顺铂IC₅₀,二者呈现协同效应[(29.41±3.84)μmol/L vs.(85.00±7.63)μmol/L,P&l...     

异丙酚对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移及JAK2/STAT3通路的影响

 目的 探讨异丙酚对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移及Janus激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)通路的影响。方法 采用MTT法测定不同浓度的异丙酚对胶质瘤U87细胞和人正常星型胶质细胞HEB生长抑制作用,Transwell侵袭实验测定2、5、10 μM异丙酚对胶质瘤U87细胞体外侵袭能力的影响,划痕实验测定2、5、10 μM异丙酚对胶质瘤U87细胞体外迁移能力的影响,蛋白印迹法(WB)测定10 μM异丙酚对胶质瘤U87细胞JAK2/STAT3通路的影响。结果 与对照组相比,5、10、25、50、100 μM异丙酚均能显著抑制胶质瘤U87细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.05),后续选择2、5、10 μM异丙酚进行实验。与对照组相比,胶质瘤U87细胞经2、5、10 μM异丙酚处理后,侵袭能力显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕实验说明,胶质瘤U87细胞经2、5、10 μM异丙酚处理48 h后,迁移能力分别降低了(19.69±2.67)%、(41.41±3.28)%、(59.75±2.91)%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。且胶质瘤U87细胞中JAK2蛋白磷酸化水平、STAT3蛋白磷酸化水平明显下调,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 异丙酚可能通过下调JAK2/STAT3信号传导通路相关蛋白表达,抑制胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移能力。     

脂联素对肝星状细胞抗肝纤维化及抑制细胞增殖的机制研究

目的 检测脂联素对肝星状细胞HSC-T6的抗纤维化作用,以及一氧化氮(NO)在其中的作用.方法 将HSC-T6细胞分为对照组、脂联素组(终浓度5μg/ml)、脂联素+L-NAME组(脂联素终浓度5μg/ml,L-NAME终浓度5mmol/L),分别于治疗24h后收集HSC-T6细胞,提取RNA和蛋白质行基因和蛋白表达的检测.另外,为检测脂联素与不同浓度L-NAME共同作用下iNOS基因的表达情况,将脂联素+L-NAME组根据L-NAME的浓度分为0.25、0.5、1.0、2.5、5.0和10.0mmol/L亚组,以上各组中脂联素均为5μg/ml.采用实时荧光定量PCR检测HSC内诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原蛋白(chollagen I)和转化生长因子-β(TGF-β)基因的表达;western blotting法检测iNOS蛋白的表达;采用ELISA法检测HSC-T6培养基中NO代谢产物(硝酸盐、亚硝酸盐)的浓度;采用BrdU法检测HSC-T6细胞的增殖情况.结果 与对照组比较,脂联素作用下HSC-T6细胞内iNOS基因的表达显著升高(P<0.01),α-SMA、Chollagen I、TGF-β等基因的表达均显著下调(P<0.01),iNOS蛋白表达水平显著上调(P<0.05),细胞培养基中硝酸盐、亚硝酸盐的水平显著升高(P<0.05),细胞增殖显著受抑(P<0.01),上述对细胞增殖的抑制作用在NOS抑制剂L-NAME的作用下发生逆转.结论 脂联素可下调HSC-T6细胞内纤维化指标的表达,抑制细胞增殖,这种作用至少部分由NO介导.     

细胞型朊蛋白在结直肠癌中的表达及其与预后的关系

目的 探讨细胞型朊蛋白(PrPC)在结直肠癌(CRC)组织中的表达及其与预后的关系。方法 收集2016年1月-2017年1月苏州大学附属太仓医院(太仓市第一人民医院)胃肠外科经手术切除的CRC标本50例及癌旁正常组织标本(距肿瘤组织2 cm以上)30例。采用免疫组化SP法检测PrPC的表达情况,Spearman检验分析CRC组织中PrPC阳性表达与临床病理特征的相关性,Kaplan-Meier法分析PrPC表达与CRC患者预后的关系,多因素Cox比例风险回归模型分析CRC预后的影响因素。结果 PrPC在CRC组织中呈高表达,其阳性表达率明显高于癌旁正常组织[68.0%(34/50) _vs.20.0%(6/30),_P<0.01],且PrPC表达水平与TNM分期、肿瘤浸润深度、肿瘤分化程度、脉管侵犯及淋巴结转移相关(_P<0.05)。随访截至2021年1月,除1例失访外,余49例获得完整随访,随访时间为6～68个月,随访期间32例死亡,中位随访时间为48个月。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,PrPC阴性表...     

Klotho激活自噬对氧化低密度脂蛋白介导的人冠状动脉内皮细胞衰老的影响

目的探讨Klotho激活自噬对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)介导的人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)衰老的影响。方法体外培养HCAEC,并将细胞分为对照组与ox-LDL处理组,Klotho (400 pmol/L)预处理2 h,以不同浓度(0、25、50、75、100 μg/ml)及不同时间(0、24、48、72、96 h)的ox-LDL继续处理细胞。CCK-8法检测HCAEC活力,SA-β-GAL染色检测衰老细胞,免疫荧光检测胞内P53及P16蛋白表达情况,Western blotting检测P53、P16、LC3及P62蛋白的表达。分别采用Klotho(400 pmol/L)、雷帕霉素(5 μmol/L)、氯喹(2 μmol/L)在正常培养条件下预处理HCAEC 2 h,再给予ox-LDL(75 μg/ml)处理并继续培养72 h。CCK-8法检测HCAEC活力,SA-β-GAL染色检测衰老细胞,转染腺病毒GFP-LC3检测细胞自噬情况,Western blotting检测P53、P16、LC3及P62蛋白的表达。结果 CCK-8法检测结果显示,Klotho减少了ox-LDL对细胞...     

小RNA干扰沉默S100A13对甲状腺细胞侵袭、迁移的影响及机制

 目的 探究干扰钙结合蛋白A13(calcium binding protein A13, S100A13)基因表达对甲状腺癌TPC-1细胞侵袭、迁移的影响及可能作用机制。方法 采用小RNA干扰敲减甲状腺癌TPC-1细胞S100A13基因的表达,通过细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测S100A13对TPC-1细胞迁移能力的影响,Transwell侵袭实验检测S100A13对TPC-1细胞侵袭能力的影响,免疫印迹试验(Western Blot)检测S100A13、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白的表达。结果 与对照组相比,采用小RNA干扰的人甲状腺癌TPC-1细胞划痕宽度显著升高(25.214±2.687 vs 69.223±5.291),侵袭(0.897±0.082 vs 0.521±0.053)、迁移(1.263±0.252 vs 0.759±0.062)能力显著降低(P<0.05),细胞中MMP-2(0.523±0.062 vs 0.246±0.033)、Vimentin(0.863±0.082 vs 0.458±0.053)蛋白表达显著降低(P<0.05),E-cadherin(0.445±0.053 vs 0.755±0.078)蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论 采用小RNA干扰S100A13表达可抑制甲状腺癌TPC-1细胞的侵袭、迁移,可能与其下调上皮间质转化和MMP-2的表达有关。