下调lncRNASNHG3表达对人胃癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及机制

目的探讨下调长链非编码RNA核仁小分子RNA宿主基因3（lncRNASNHG3）的表达对人胃癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及可能的机制。方法采用qRT-PCR法检测不同胃癌细胞株（BGC-823、MGC-803和SGC-7901）和正常胃黏膜细胞株GES-1中lncRNASNHG3的相对表达量。选取lncRNASNHG3表达水平最高的胃癌BGC-823细胞系,建立lncRNASNHG3下调模型,实验分为SNHG3-siRNA组（转染lncRNASNHG3-siRNA）、阴性对照组（转染阴性对照序列）、空白对照组（不予转染）。行CCK-8法、克隆形成实验、Transwell迁移和侵袭实验、流式细胞术检测、观察下调lncRNASNHG3对人胃癌细胞BGC-823增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。Westernblot法检测下调lncRNASNHG3表达后胃癌增殖和转移相关信号传导与活化转录因子3（STAT3）、p-STAT3蛋白和细胞基质金属蛋白酶-2（MMP-2）蛋白的表达水平。结果与胃正常黏膜上皮细胞GES1相比,人胃癌细胞株BGC-823、MGC803的lncRNASNHG3的相对表达量均明显增高（均P＜0.05）。BGC-823细胞中,SNHG3-siRNA组lncRNASNHG3相对表达量、光密度值、克隆形成率、细胞迁移数及细胞侵袭数均明显低于阴性对照组、空白对照组（均P＜0.05）;SNHG3-siRNA组细胞G1期百分比均明显高于空白对照组、阴性对照组（均P＜0.05）,3组S期细胞百分比比较差异则无统计学意义（P＞0.05）;SNHG3-siRNA组细胞G2期百分比均明显低于空白对照组、阴性对照组（均P＜0.05）;SNHG3-siRNA组细胞凋亡率均明显高于空白对照组、阴性对照组（均P＜0.05）。与阴性对照组和空白对照组比较,SNHG3-siRNA组的STAT3、p-STAT3和MMP-2蛋白的表达水平均明显下降,p-STAT3/STAT3的比值明显降低（均P＜0.05）。结论下调lncRNASNHG3的表达,可抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,阻滞细胞周期,并诱导细胞凋亡,可能与抑制STAT3、MMP-2的表达和STAT3的磷酸化水平有关。     

LncRNA MEG3对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

目的 本研究旨在探究LncRNA MEG3在口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma, OSCC）组织和细胞中的表达水平及对OSCC细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。 方法 qRT-PCR法检测OSCC患者口腔粘膜组织、肿瘤组织、及Tca8113细胞系中LncRNA MEG3的表达水平。构建pcDNA3.1-MEG3重组质粒转染Tca8113细胞,分为3组：转染过表达pcDNA3.1-MEG3的质粒（MEG3组）和空质粒pcDNA3.1-NC （NC组）;空白对照组（BLANK组）加入PBS。分别采用qRT-PCR法、CCK-8法、流式细胞术和Transwell检测LncRNA MEG3表达、细胞增殖、凋亡率和侵袭能力。结果 与正常口腔粘膜组织和细胞相比,LncRNA MEG3在OSCC组织和细胞中的表达下调（P<0.05）。体外实验发现,与空白对照组和NC组相比,过表达LncRNA MEG3组细胞增殖和侵袭能力受到抑制,凋亡率明显升高（P<0.05）。结论 LncRNA MEG3在OSCC组织和细胞中低表达;LncRNA MEG3过表达可抑制OCSS细胞的增殖和侵袭,促进凋亡。     

过表达PDCD5对人胃癌BGC823细胞增殖活性的影响

目的通过体外实验研究过表达程序性细胞死亡5(PDCD5)因子对人胃癌BGC823细胞增殖抑制和顺铂敏感性的影响,探讨PDCD5因子与顺铂联合治疗胃癌的可行性。方法采用MTT法检测顺铂对实验组(过表达PDCD5)、阴性对照组(转染空载体)和BGC823细胞组的增殖抑制作用,荧光观察吖啶橙染色的各组细胞形态学变化,流式细胞仪检测顺铂对咅组细胞凋亡率和细胞周期的影响。结果顺铂对BGCS23细胞的生长有抑制作用,且呈时间-剂量依赖性,48 h顺铂抑制实验组、阴性对照组和BGC823细胞组的IC50分别为(14.25±1.68)、(20.85±2.01)和(22.03±1.85)μmol/L,实验组显著低于BGC823细胞组和阴性对照组(t=2.765,2.903;P0.05);16μmol/L顺铂作用实验组细胞48h,可诱导其产生明显的细胞凋亡特征,将细胞阻滞在G2/M期;实验组G2/M期细胞[(42.98±2.34)%]显著高于BGC823细胞组[(23.96±1.51)%]和阴性对照组[(2497±1.82)%],差异具有统计学意义(F=77.45d,P0.05);实验组G0/G1期细胞[(31.13±2.01)%]较BGC823细胞[(49.53±2.87)%]和阴性对照组[(47.58±1.86)%]显著下降(F=98.973,P0.05)。结论过表达PDCD5因子可以增强BGC823细胞对顺铂的敏感性,促进细胞凋亡。     

EGFR通过IL-6/STAT3信号通路对肺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探究表皮生长因子受体（EGFR）对肺癌细胞增殖、凋亡的影响及相关机制。方法 以人正常支气管上皮细胞16HBE及肺癌细胞A549、H1299、MSTO-211H为研究对象,qRT-PCR、western blot分别检测细胞中EGFR mRNA、蛋白水平。将MSTO-211H细胞分为NG组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-EGFR组、pcDNA3.1-EGFR+anti-IL-6组、pcDNA3.1-EGFR+JSI-124组;qRT-PCR检测EGFR mRNA水平;CCK-8法及平板克隆实验、Hoechst33342染色法及流式细胞仪分别检测细胞增殖、凋亡情况;western blot检测EGFR、细胞周期素D1（CyclinD1）、凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）及白介素-6/Janus蛋白酪氨酸激酶/信号转导子与转录激活子3（IL-6/JAK/STAT）通路相关蛋白表达。结果 与16HBE细胞比较,A549、H1299、MSTO-211H中EGFR mRNA及蛋白表达水平显著升高,且MSTO-211H细胞中EGFR mRNA及蛋白表达水平最低,因此选择MSTO-211H细胞进行后续实验;与NG组、pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-EGFR组MSTO-211H细胞凋亡活动明显减弱,且细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达显著降低（P＜0.05）,克隆形成率、EGFR、CyclinD1、Bcl-2、IL-6、p-JAK/JAK、p-STAT/STAT蛋白表达显著升高（P＜0.05）;与pcDNA3.1-EGFR组比较,pcDNA3.1-EGFR+anti-IL-6组、pcDNA3.1-EGFR+JSI-124组MSTO-211H细胞凋亡活动明显增强,细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达显著升高（P＜0.05）,克隆形成率、CyclinD1、Bcl-2、IL-6、p-JAK/JAK、p-STAT/STAT蛋白表达显著降低（P＜0.05）。结论 过表达EGFR可促进MSTO-211H细胞增殖并抑制细胞凋亡,可能是通过促进IL-6/JAK/STAT信号通路活化实现的。     

Chk1和Chk2高表达人胃癌BGC823细胞的建立与鉴定

细胞周期检测点Chkl和Chk2在参与G2/M期起着重要作用,本研究构建Chk1/2的真核表达载体和建立高表达Chk1/2基因人胃癌BGC823细胞,进一步证明Chk1/2高表达对BGC823细胞G2/M期的影响。根据NCBI GenBank Chk1/2基因全序列,在cDNA两端各设计一条对应引物,并引入各自的酶切位点。从人胃癌细胞中提取mRNA作为模板合成Chk1/2 cDNA第一链,并扩增目的基因全表达序列片断,双酶切后定向克隆至pcDNA3.1真核表达载体,经氨苄青霉素筛选阳性重组质粒,菌液PCR及测序对重组质粒进行鉴定。用脂质体将重组质粒转染BGC823细胞,经G418筛选后,RT-PCR及Western blot检测表达产物。结果显示,菌落特异性PCR表明克隆的基因片断分别为1.4 kb和1.6 kb,经测序与NCBIBLAST分析证实为Chk1和Chk2基因。稳定转染空载体pcDNA3.1 的细胞克隆株和稳定转染重组质粒的BGC823细胞,经RT-PCR及Western blot鉴定,Chk1/2在BGC823细胞中的表达较对照组与空载体组明显增加(P<0.05)。流式细胞术检测显示,Chk1转染组G2/M细胞较对照组与空载体组明显增加 (P<0.05),而Chk2转染组G2/M细胞无明显差异 (P>0.05)。上述结果表明,成功构建pcDNA3.1/Chk1与pcDNA3.1/Chk2真核表达载体和Chk1与Chk2高表达的BGC823细胞,Chk1高表达可阻滞BGC823细胞于G2/M。     

miR-431-5p抑制MDM2表达影响白血病细胞增殖、凋亡的机制研究

目的探讨miR-431-5p靶向MDM2对白血病细胞增殖、凋亡的影响。方法 qRT-PCR检测白血病患者、正常人骨髓细胞和白血病细胞HL-60、K562中miR-431-5p的表达。以K562细胞为研究对象,将其随机分为miR-NC组（转染miR-NC）、miR-431-5p组（转染miR-431-5p）、miR-431-5p+pcDNA3.1组（miR-431-5p和pcDNA3.1共转染）和miR-431-5p+pcDNA3.1-MDM2组（miR-431-5p和pcDNA3.1-MDM2共转染）。MTT法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测MDM2、CyclinD1、P21、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。采用双荧光素酶报告基因法和Western blot验证miR-431-5p和MDM2的靶向关系。结果与正常人骨髓细胞相比,白血病患者骨髓细胞和白血病细胞HL-60、K562中miR-431-5p的表达显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）。与miR-NC组相比,miR-431-5p组K562细胞MDM2、Cyclin D1和Bcl-2蛋白的表达明显下调,P21和Bax蛋白的表达明显上调,细胞的增殖活力显著减弱,凋亡率显著升高,差异有统计学意义（P<0.05）。与miR-431-5p+pcDNA3.1组比较,miR-431-5p+pcDNA3.1-MDM2组K562细胞MDM2、Cyclin D1和Bcl-2蛋白的表达明显升高,P21和Bax蛋白的表达明显降低,细胞的增殖活力显著升高,凋亡率显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-431-5p通过靶向下调MDM2可抑制白血病细胞增殖,促进白血病细胞凋亡。     

转染Smac增强非小细胞肺癌细胞株A549对顺铂的化疗敏感性

[摘要] 目的 探讨转染Smac对非小细胞肺癌细胞株A549化疗敏感性的影响。方法 利用脂质体将PcDNA3.1/Smac重组体转染到非小细胞肺癌细胞株A549,并联合顺铂作用于A549,western blot检测转染后细胞内Smac 蛋白表达。Annexin V/PI 双染经流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率。结果 （1）western blot检测结果：可见转染PcDNA3.1/Smac重组体后细胞内Smac蛋白表达明显高于未转染组（P＜0.05）。（2） 单独转染PcDNA 3.1/Smac仅能诱导较少细胞凋亡,但与空载体PcDNA3.1转染组及未处理组比较有显著差异（P＜0.05）。（3）转染PcDNA 3.1/Smac并顺铂（5ug/mL）联合作用,细胞凋亡率明显较单独使用顺铂组升高（P＜0.05）。结论 转染Smac能增强非小细胞肺癌细胞株A549对顺铂的化疗敏感性。 [关键词] Smac;非小细胞肺癌;转染;凋亡;顺铂     

光辉霉素A对人胃癌BGC823细胞增殖、凋亡、迁移的影响及其机制

目的观察光辉霉素A（MIT）对人低分化胃癌BGC823细胞增殖、凋亡、迁移的作用,以及对转录因子Sp1和乙酰肝素酶（heparanase,Hpa）表达的影响,并探讨其可能的机制。方法采用不同浓度的MIT作用于胃癌BGC823细胞,以Cell Counting Kit-8（CCK8）法测定对细胞增殖的影响;以流式细胞仪测定对细胞凋亡的影响;以细胞划痕法观察对细胞迁移能力的影响;以实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）法定量测定细胞内Sp1和Hpa mRNA表达的变化。结果 MIT抑制胃癌BGC823细胞增殖的效应呈浓度和时间依赖性（P均〈0.05）;不同浓度（0、0.15、0.30、0.60μmol/L）的MIT作用于胃癌BGC823细胞24 h后,细胞的凋亡率随药物浓度的增加而增加,分别为（2.100±0.985）、（13.533±0.777）、（21.533±0.874）、（27.500±0.964）%,即MIT促进胃癌BGC823细胞的凋亡呈浓度依赖性（P〈0.05）;MIT对胃癌BGC823细胞迁移的抑制作用具有量效和时效性;胃癌BGC823细胞Sp1和Hpa mRNA表达量随MIT浓度的增加而降低（P均〈0.05）。结论 MIT对胃癌BGC823细胞增殖、凋亡、迁移影响可能通过抑制Sp1、Hpa的表达而实现。     

circ_ACAP2对胃癌细胞BGC–823增殖 凋亡的影响及作用机制

目的 分析环状RNA–ACAP2（circular RNA–ACAP2,circ_ACAP2）对胃癌细胞株BGC–823增殖凋亡的影响及作用机制。方法 将体外培养的细胞分为si–NC组[不做处理的人胃上皮细胞（human gastric epithelial cells,GES–1）],si–circ_ACAP2（circ_ACAP2干扰的BGC–823细胞）、miR–NC组（转染miR–488–3p mimics）的阴性对照）、miR–488–3p组（转染miR–204–5p mimics）、si–circ_ACAP2+anti–miR–NC组（转染miR–488–3p inhibitor阴性对照）,si–circ_ACAP2+anti–miR–488–3p组（转染miR–488–3p inhibitor）,采用实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real–time polymerase chain reaction,qRT–PCR）法检测GES–1细胞、胃癌细胞（BGC–823）中circ_ACAP2、微小RNA–488–3p（miR–488–3p）、肌成束蛋白（fascin–1,FSCN1）的表达量,构建抑制circ_ACAP2表达的BGC–823细胞,采用四甲基偶氮唑盐（Tetramethylazo salt,MTT）比色法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、B细胞淋巴瘤–2（B–cell lymphoma–2,Bcl–2）、p21、Bcl–2相关性蛋白X（Bcl–2–correlation protein X,Bax）表达情况。结果 与GES–1组相比,BGC–823细胞中circ_ACAP、FSCN1表达水平升高,miR–488–3p表达水平降低,差异均有统计学意义（P<0.05）。与si–NC组相比,si–circ_ACAP2组circ_ACAP2表达水平降低,差异均有统计学意义（P<0.05）,表明抑制circ_ACAP2表达的BGC–823细胞株构建成功。与si–NC组相比,si–circ_ACAP2组CyclinD1、OD值、Bcl–2降低,p21、Bax及凋亡率升高,差异均具有统计学意义（P<0.05）。与miR–NC组相比,miR–488–3p组miR–488–3p表达水平升高,差异有统计学意义（P<0.05）,表明miR–488–3p过表达的BGC–823细胞株构建成功。与miR–NC组相比,miR–488–3p组CyclinD1、OD值、Bcl–2降低,p21、Bax、凋亡率升高,差异均有统计学意义（P<0.05）。双萤光素酶报告试验显示,与miR–NC组相比,过表达miR–488–3p可使WT–circ_ACAP2荧光素酶活性降低（P<0.05）,对MUT–circ_ACAP2荧光素酶活性影响较小（P>0.05）。与si–NC组相比,抑制circ_ACAP2表达可使BGC–823细胞中miR–488–3p表达升高,差异均有统计学意义（P<0.05）;与si–circ_ACAP2+anti–miR–NC组相比,si–circ_ACAP2+anti–miR–488–3p组CyclinD1、OD值、Bcl–2升高,p21、Bax及凋亡率降低,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 干扰circ_ACAP2表达可通过调控miR–488–3p/FSCN1表达,抑制胃癌细胞增殖,促进其凋亡。     

干扰素诱导跨膜蛋白3 在结肠癌组织中的表达及对结肠癌细胞凋亡的调控作用研究

目的 探讨干扰素诱导跨膜蛋白3（IFITM 3）在结肠癌组织中的表达及对结肠癌细胞凋亡的调控作用。方法 实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测结肠癌组织和对应的癌旁组织中IFITM 3 的表达水平。细胞转染si-IFITM 3 抑制IFITM 3 的表达,同时转染si-control 作为对照,MTT 检测转染后48 h的细胞增殖情况。流式细胞术检测细胞凋亡情况。Western blot 检测细胞中Bcl-2、Bax、p-STAT3、STAT3蛋白表达水平。结果 IFITM 3 在结肠癌组织中的表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义（P <0.05）。si-IFITM 3 组结肠癌细胞HT29 和HCT116 的存活率与si-control 组相比下降,差异有统计学意义（均P <0.05）。转染si-IFITM 3 后的结肠癌细胞HT29 和HCT116 凋亡率高于si-control 组,差异有统计学意义（均P <0.05）。转染si-IFITM 3 后的结肠癌细胞HT29 和HCT116 中STAT3 蛋白表达水平没有变化,p-STAT3、Bcl-2 蛋白表达水平低于si-control 组,Bax 蛋白表达水平高于si-control 组。结论 干扰素诱导跨膜蛋白3在结肠癌组织中过度表达。抑制干扰素诱导跨膜蛋白3 的表达,可以抑制结肠癌细胞的增殖,促进癌细胞凋亡,其作用机制与Bcl-2、Bax、STAT3 有关。     

Hsa_circ_0001947对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

［摘要］目的: 探讨环状RNA hsa_circ_0001947(circ_0001947)在胃腺癌细胞和组织中的表达及其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法: 通过高通量测序筛选出5例临床胃腺癌、癌旁组织标本中差异表达的5种环状RNA,挑选升高表达最明显的circ_0001947继续研究。实时荧光定量PCR检测circ_0001947在75例临床胃腺癌、癌旁组织以及胃癌BGC-823,HGC-27,MGC-803,SGC-7901细胞株、正常人胃黏膜上皮GES-1细胞株中的表达。将细胞株BGC 823、SGC 7901各分为两组,设si circ_0001947组(转染si RNA)和si NC组(转染无关序列)。细胞培养0、12、24、48、72 h后,采用CCK 8实验测定细胞活力。采用克隆形成实验测定细胞增殖能力;流式细胞术测定细胞凋亡率,蛋白印迹测定凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3,Bcl-2和Bax表达水平。结果： 高通量测序筛选出的胃腺癌组织中差异表达的环状RNA为hsa_circ_0000033,hsa_circ_0000038,hsa_circ_0004916,hsa_circ_0058092,hsa_circ_0001947。circ_0001947在胃腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.01),在胃癌BGC-823,HGC-27,MGC-803,SGC-7901细胞株中表达量明显高于正常胃黏膜上皮GES-1细胞株(P均<0.05)。si RNA能够明显抑制BGC 823、SGC-7901细胞中circ_0001947表达。si-circ_0001947组BGC 823,SGC-7901细胞光密度值明显低于si-NC组(P均<0.01);si circ_0001947组BGC 823,SGC-7901细胞克隆形成率和细胞凋亡率明显低于si NC组(P均<0.01)。与si-NC组相比,si-circ_0001947组BGC 823,SGC 7901细胞中Cleaved caspase-3 及Bax表达明显上调,Bcl 2表达明显下调(P均<0.05)。结论： circ_0001947在胃癌细胞和组织中呈高表达,干扰circ_0001947表达可抑制胃癌细胞增殖并诱导其凋亡。     

硝酸镓对胃癌细胞增殖与凋亡的作用

目的通过硝酸镓、顺铂单药及二者联合用药对胃癌BGC823细胞作用,观察其对胃癌BGC823细胞诱导凋亡、抑制增殖的影响。方法通过对胃腺癌BGC823细胞培养及干预,采用流式细胞仪技术对凋亡细胞进行测定;MTT技术对肿瘤细胞增殖进行测定。结果MTT及流式细胞仪检测结果显示：硝酸镓对BGC823细胞作用呈剂量一时间依赖效应;小剂量硝酸镓与顺铂配伍应用能大大提高顺铂作用效应,配伍高浓度组在24h、48h、72h的抑制率为70．0％、71．4％、72．3％。结论硝酸镓对胃癌细胞的作用与顺铂无明显差异,为肿瘤治疗及制备抗肿瘤药物提供新的途径。     

不同pH值条件下多柔比星对胃癌BGC823细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的 探讨在不同pH值培养条件下多柔比星(doxorubicin,ADM)对胃癌BGC823细胞增殖、凋亡能力的影响及初步机制研究。 方法 采用细胞活性测定试剂盒(CCK-8)法检测不同pH值培养条件下多柔比星对胃癌细胞BGC823增殖活性的影响;应用Annexin V/PI双染法,在荧光显微镜下观察凋亡细胞的形态,用流式细胞仪检测胃癌细胞凋亡率;采用qRT-PCR法检测p-AKT、BCL-2和NF-κB基因在胃癌细胞中的表达。 结果 ①ADM对胃癌BGC823细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)值为5.277 μg/mL,考虑化疗药物毒性及后续实验,ADM剂量选择该细胞株IC₅₀值1/4的浓度(即1.319 μg/mL)用于进行后续实验;②随着pH值升高,ADM对BGC823细胞增殖活性的抑制作用增强,当pH达到7.4时,抑制增殖作用最明显;③随着pH值升高,ADM对BGC823细胞凋亡水平明显增加,当pH达到7.4时,促凋亡作用最明显,再提高pH浓度,促凋亡作用能力不明显;④不同pH(pH 6.8～7.6)环境下,ADM处理后,随着pH升高,BCL-2、NF-κB和p-AKT基因表达水平明显降低。 结论 升高细胞外pH值能明显提高ADM对BGC823细胞抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的能力,这种与pH值相关的ADM抗肿瘤效果可能是通过抑制AKT的磷酸化,阻止NF-κB、Bcl-2等抗凋亡基因表达来实现的。      

凝溶胶蛋白对胃癌细胞凋亡及细胞中活性氧水平的影响研究

目的探讨凝溶胶蛋白（GSN）对胃癌细胞凋亡及细胞中活性氧（ROS）水平的影响。方法免疫印迹法（Western blot）检测胃癌细胞SGC7901、AGS、BGC823 及胃黏膜上皮细胞GES-1 中GSN的表达水平。细胞转染GSN siRNA（GSN siRNA 组）和siRNA 对照（siRNA control 组）,同时以只加入转染试剂的细胞为对照组,培养48 h 后,噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,激光扫描共聚焦显微镜法检测ROS水平,Western blot检测细胞中GSN、Notch1 胞内段受体（NICD1）、Notch2 胞内段受体（NICD2）、DNA 结合蛋白1（HES1）多克隆抗体及活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）水平。结果GSN在 胃癌细胞SGC7901、AGS 及BGC823 中的表达水平高于胃黏膜上皮细胞GES-1（p <0.05）,且在AGS 细胞中的表达水平最高,后期选用胃癌细胞AGS 为研究对象。siRNA control 组细胞增殖、凋亡及细胞中ROS 水平、GSN、NICD1、NICD2、HES1 及Cleaved Caspase-3 水平与对照组相比均差异无统计学意义（p >0.05）。GSN siRNA 组细胞增殖能力及细胞中GSN、NICD1、NICD2 及HES1 水平低于对照组（p <0.05）,而细胞凋亡能力及细胞中ROS 水平、Cleaved Caspase-3 水平均高于对照组（p <0.05）。结论干扰GSN 表达后,胃癌细胞增殖能力减弱,凋亡增加,作用机制可能与细胞中ROS 水平及NOTCH信号通路有关。     

DADS诱导人胃癌BGC823细胞凋亡及其与$mac和survivin表达的关系

目的研究二烯丙基二硫（DADS）诱导胃癌BGC823细胞凋亡及其机制。方法实验分DADS处理组和DADS未处理组．进行体外细胞培养,通过MTr法检测DADS对胃癌BGC823细胞生长的影响、通过流式细胞术检测细胞周期的分布、通过免疫组化检测smac和survivin蛋白的表达。结果MTT实验显示DADS作用于BGC823细胞后,细胞生长抑制率呈时间、浓度依赖性增高,流式细胞术显示DADS明显将细胞周期阻滞于G2/M期,且呈浓度、时间依赖性。免疫细胞化学显示处理组较未处理组snlae表达明显增加,而survivin蛋白表达明显降低（P〈0．05）。结论DADS可体外抑制人胃癌BGC823细胞增殖,使该细胞阻滞于G2／M期,其机制可能与上调smac及下调survivin的表达有关。     

沉默circPVT1对5-氟尿嘧啶耐药胃癌细胞化疗增敏作用及机制研究

目的:研究circPVT1对胃癌细胞5-氟尿嘧啶（FU）敏感性的作用及分子机制。方法:采用RT-PCR检测胃癌组织、胃癌细胞BGC823和5-FU抵抗胃癌细胞 BGC823/5-FU 中circPVT1的相对表达水平。沉默circPVT1,采用CCK-8试剂盒检测细胞活性,观察其对细胞活性的影响。采用克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。采用TUNEL试剂盒和流式细胞仪检测细胞凋亡情况。采用RT-PCR和Western 印迹检测Bcl-2、Bax 和caspase-3基因mRNA和蛋白的表达水平。沉默circPVT1观察裸鼠皮下移植瘤生长。结果:在5-FU抵抗患者胃癌组织中circPVT1的表达水平明显高于5-FU敏感患者（P＜0.01）。与BGC823细胞相比,circPVT1在BGC823/5-FU细胞中的表达水平明显升高（P＜0.001）。下调circPVT1表达可增强5-FU的细胞毒性（P＜0.05）。与5-FU+si-NC组相比,5-FU+si-circPVT1组BGC823/5-FU细胞的克隆形成能力明显降低（P＜0.05）。5-FU+si-circPVT1组BGC823/5-FU细胞的凋亡数目明显高于5-FU+si-NC组（P＜0.01）。沉默circPVT1,与5-FU+si-NC组相比,5-FU+si-circPVT1组BGC823/5-FU细胞中Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平明显降低,Bax和caspase-3的mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。裸鼠移植瘤实验结果显示,5-FU+si-circPVT1组移植瘤体积和重量明显低于5-FU+si-NC组（P＜0.05）。结论:沉默circPVT1可以通过调控Bcl-2、Bax和caspase-3的表达,增强BGC823/5-FU细胞对5-FU的敏感性。     

靶向EGFR基因RNA干扰对胃癌细胞BGC823细胞增殖和凋亡的影响

目的利用R NA干扰技术下调表皮生长因子受体(EGFR)基因的表达,观察其对胃癌BGC823细胞增殖和凋亡的影响。方法将细胞分为3组,空白对照组、空载体组和实验组(转染EGFRshRNA组)。构建针对EGFR基因的s和R NA真核表达载体,转染入胃癌BGC823细胞中,运用R T-PCR和Western blot检测EGFR在mRNA和蛋白水平的变化;WST-1法检测细胞增殖的影响:Hoechst33258染色观察细胞核形态学变化。实验重复3次。结果成功构建表达质粒pGenSil-EGFR并转染BGC823细胞,shRNA下调EGFR的表达后,与空白对照组相比EGFR在mR NA和蛋白水平的表达均下降,抑制率分别为58.6%和75.2%。shR NA转染24、48、72 h,WST-1法检测胃癌细胞BGC823的增殖情况,与空白对照组相比,24 h后三组差异不明显(F=0.326,P>0.05),48 h及72 h后,细胞增殖明显下降(F=68.25及274.45,P<0.001),有统计学意义。EGFR shR NA作用BGC823细胞72 h后,经Hoechst33258染色发现,实验组细胞核染色质边集,出现凋亡小体。结论靶向EGFR基因RNA干扰能够阻抑胃癌细胞BGC823细胞的EGFR表达,诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,EGFR基因有望成为胃癌基因治疗靶点。     

转染反义MIF对人胃癌细胞的影响

目的 探讨反义巨噬细胞移动抑制因子(MIF)对人胃癌MGC-803细胞的影响.方法 将胃癌MGC-803细胞分为pcDNA3.1-Anti MIF组与空白对照组.pcDNA3.1-Anti MIF组采用转染技术将MIF反义RNA真核表达质粒(pcDNA3.1-AntiMIF)转入MGC-803细胞;空白对照组转染pcDNA3.1-sh-MIF质粒.qRT-PCR与蛋白质印迹法检测转染效率;采用MTT法、侵袭实验、AnnexinV-FITC和PI染色法分别检测反义MIF对MGC-803细胞增殖、侵袭、凋亡的影响.结果 qRT-PCR结果显示,pcDNA3.1-Anti MIF组MIF mRNA表达量(2.086±0.248)较空白对照组(6.992±0.342)明显下调;Western blot显示,pcDNA3.1vAntiMIF组MIF蛋白表达水平量(0.361±0.043)较空白对照组(1.171±0.091)明显下调;MTT实验结果显示,pcDNA3.1-AntiMIF组MGC-803细胞的OD值(0.436±0.017)较空白对照组(0.563±0.019)明显下降;侵袭实验结果显示,pcDNA3.1-AntiMIF组穿过基质胶的MGC-803细胞数(73.67±8.54)较空白对照组(137.30±11.91)明显减少;AnnexinV-FITC和PI染色法结果显示,pcDNA3.1-AntiMIF组MGC-803细胞的凋亡率(21.61±4.62)%较空白对照组(7.67±0.63)%明显增加.以上各项指标比较差异均具有显著统计学意义(P<0.01).结论 反义MIF能抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖与侵袭,并能诱导凋亡.     

乙醇对胃癌细胞缺氧与抗凋亡蛋白的影响

目的探讨乙醇对胃癌细胞缺氧诱导因子与抗凋亡蛋白Survivin的影响。方法将人胃癌细胞BGC823分组培养,加入5%-30%终浓度的乙醇培养1-4h,并设空白对照组,提取蛋白后采用免疫印迹法检测HIF-1α蛋白及Survivin蛋白的表达。结果在BGC823细胞中HIF-1α蛋白的表达随着乙醇浓度和时间的加大而增加;Survivin蛋白表达在乙醇处理1h后随着乙醇浓度的增加表现为先增加后减少,在乙醇处理4h后随着乙醇浓度的增加反而减少。结论在胃癌细胞BGC823中乙醇通过HIF-1α途径引起细胞缺氧,通过抑制抗凋亡蛋白Survivin促进细胞凋亡。