表阿霉素诱导血管通透性改变的机制

目的:观察乳腺癌常规化疗药物表阿霉素(EPI)对血管内皮细胞通透性的影响,探讨其在静脉注射时造成血管渗漏的机制。方法:用0、0.1、1.0、10、100μg/mlEPI处理人脐静脉内皮细胞株HUVEC-CRL-1730,光学显微镜观察细胞形态改变,Transwell小室检测单层内皮细胞的通透性,MTT法检测细胞增殖效率,RT-PCR和Western blotting检测血管扩张刺激磷蛋白(VASP)mRNA和蛋白表达水平。结果:10μg/mlEPI处理内皮细胞24h后,与对照组相比,EPI能显著抑制内皮细胞增殖(P<0.05),细胞收缩、变形,单层内皮细胞通透性增加(P<0.05);同时,VASP mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论:EPI静脉注射造成的血管渗漏可能与EPI抑制细胞增殖以及通过降低VASP蛋白表达导致的内皮细胞通透性增加有关。     

炎性环境下内皮微粒介导单核细胞促内皮细胞增殖的作用

目的 探讨炎性环境中内皮微粒(EMPs)在单核细胞参与的促内皮细胞增殖中的作用,并探讨EMPs对单核细胞表达内皮细胞标志物的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激内皮细胞,超速离心法获取EMPs;用透射电镜观察其形态和结构;运用酶联免疫吸附法(ELISA)检测经EMPs激活的单核细胞株THP-1对血管内皮生长因子(VEGF)中VEGF-A、VEGF-C的表达情况;将HUVECs和THP-1细胞或者经EMPs诱导的THP-1细胞共培养,检测HUVECs的增殖情况;运用RT-PCR和免疫荧光细胞化学技术,观察经EMPs激活的THP-1细胞对内皮细胞标志物vWF和血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)的表达情况.结果 内皮细胞经炎性因子刺激后释放EMPs,EMPs刺激的THP-1细胞上清中VEGF-A和VEGF-C蛋白水平明显升高;HUVECs细胞增殖实验中,与THP-1细胞或者经EMPs诱导的THP-1共培养的两种情况下,HUVECs均显著增多;与EMPs共培养3d后,THP-1中vWF和VEGFR-2蛋白表达为阳性,基因表达为阴性,共培养8d后,vWF和VEGFR-2的蛋白和基因表达均为阴性.结论 炎性环境中内皮细胞释放EMPs可以促使单核细胞分泌VEGF-A和VEGF-C,后两者可使HUVECs增殖,EMPs仅能使单核细胞一过性呈现内皮表型,而不能将其转分化为内皮细胞.     

RhoA介导凝血酶或脂多糖诱导内皮细胞株单层通透性增高

目的探讨RhoA在凝血酶或脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)单层通透性改变中的作用。方法用免疫荧光和改良的Boydon小室分别检测HUVECs F-肌动蛋白和单层通透性;用Western blot和免疫组化分析HUVECs内RhoA的表达;用RT-PCR检测RhoA mRNA表达。结果HUVECs经凝血酶或LPS处理后,F-肌动蛋白解聚,细胞周边形成应力纤维,HUVECs单层通透性增高;RhoA蛋白和mRNA表达上调;Rho激酶抑制剂Y-27632能明显缓解上述变化。结论RhoA参与凝血酶或LPS诱导的HUVECs的F-肌动蛋白的重构和单层通透性的改变。     

CD47-SIRPα在人类红细胞老化与吞噬过程中的作用

探讨CD47-SIRPα在人类红细胞衰老与吞噬过程中的作用。采用Western blot检测体外4℃和37℃保存红细胞(RBC)及老化过程中红细胞膜上CD47的表达量;用单核细胞单层分析试验(monocyte monolayer assay,MMA)观察人THP-1单核细胞系对不同年龄段红细胞和CD47抗体F(ab’)2端封闭红细胞的吞噬情况及Western blot检测THP-1细胞上SIRPα磷酸化情况。结果发现,无论是在体内老化还是体外老化过程中,红细胞膜上CD47的表达量均出现显著下降趋势,随着保存时间的延长,CD47的表达量最大可下降82.64%(4℃保存情况下);THP-1细胞对不同年龄段红细胞的吞噬情况存在差异性,更易吞噬年老红细胞,吞噬率为35.32%,对年轻红细胞的吞噬率为13.72%(n=7,P<0.02);对新鲜红细胞的吞噬率为2.22%,对CD47抗体F(ab’)2端封闭红细胞的吞噬率为31.51%(n=7,P<0.02);吞噬不同年龄段红细胞后,THP-1细胞上磷酸化SIRPα量不同,与吞噬年轻红细胞相比,吞噬年老红细胞后,磷酸化SIRPα的量下降了57.12%。表明人类红细胞的老化与吞噬过程和CD47-SIRPα相互作用存在密切关系。     

1-磷酸鞘氨醇受体2在LPS介导的内皮细胞高通透性中的作用

目的观察1-磷酸鞘氨醇受体2（S1PR2）在脂多糖（LPS）刺激后表达的变化,探讨其在LPS介导的内皮细胞高通透性中的作用。方法用不同浓度和时间的LPS刺激培养的ECV304细胞,采用RT-PCR方法检测S1PR2mRNA的变化,Western blot方法检测S1PR2蛋白的变化,TRITC荧光标记白蛋白漏出法测定单层内皮细胞的通透系数Pa值。结果与对照组相比,S1PR2mRNA和S1PR2蛋白在LPS（500ng/ml）刺激24h后以及在LPS（1000ng/ml）刺激12h显著增加（P〈0.01）;S1PR2拮抗剂JTE-013能显著降低LPS引起的内皮细胞通透性增高（P〈0.05）。结论 S1PR2在LPS引起的内皮细胞通透性增高中起着重要的作用。     

内脏脂肪素通过氧化低密度脂蛋白受体1介导血管内皮细胞炎症反应及坏死性凋亡的研究

本研究旨在探索脂肪细胞因子内脏脂肪素(Visfatin)能否诱导血管内皮细胞(VEC)发生炎症及坏死性凋亡(Necroptosis),并初步探讨其机制。体外分离培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),单独使用Visfatin刺激或在阻断氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)后给予Visfatin刺激,采用Western blot、RT-PCR、免疫细胞化学法、酶联免疫吸附法(ELISA)、MTT、流式细胞化学法等观察细胞炎症及Necroptosis的发生情况。结果显示,100 ng/mL的Visfatin作用24 h可诱导HUVECs中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和LOX-1的mRNA及蛋白水平表达显著上调;而LOX-1抑制剂聚肌苷酸预处理可明显降低Visfatin诱导的MCP-1表达。另外,100 ng/mL的Visfatin作用24 h可明显诱导HUVECs中出现坏死样特征,且Necroptosis特异性基因BMF的mRNA表达显著增加,细胞增殖率降低;而聚肌苷酸预处理后,细胞增殖率升高,BMF的基因表达下调。实验结果提示,Visfatin通过LOX-1介导,引起了血管内皮细胞炎症反应及Necroptosis,在动脉粥样硬化的发生与发展中起着重要的作用。     

IL-35对sCD40L刺激后的人脐静脉血管内皮细胞黏附功能的影响

目的 探讨白细胞介素(IL)-35对可溶性CD40配体(sCD40L)刺激后血管内皮细胞黏附功能的影响。方法 选取2020年1月至12月于滨海县人民医院诊治的30例下肢深静脉血栓急性期患者(DVT组)和30例健康体检者(HC组)。采集外周静脉血，ELISA检测血清IL-35、sCD40L、血管细胞间黏附分子(VCAM-1)、细胞间黏附分子(ICAM-1)、P-选择素和血管性血友病因子(vWF)的水平。体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),分为对照组、sCD40L组和IL-35组。ELISA检测细胞培养上清液中VCAM-1、ICAM-1、P-选择素和vWF的水平；Western blot检测细胞VCAM-1、ICAM-1、P-选择素和vWF蛋白的表达；免疫荧光法检测血小板和外周血单个核细胞对HUVECs的黏附。结果 DVT组血清中IL-35表达显著低于对照组(P<0.05),sCD40L、VCAM-1、ICAM-1、P-选择素和vWF的表达显著高于对照组(P<0.05)。体外实验表明，IL-35能显著抑制sCD40L刺激后HUVECs VCAM-1、ICAM-1、P-...     

人脐静脉内皮细胞单层通透性改变的效应因子

背景：外源性刺激引起血管屏障功能损伤的分子机制是血管病理生理学尚未阐明的热点问题之一。 目的：探讨炎症递质脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞单层通透性改变的效应分子,寻找有效治疗靶点。 方法：应用脂多糖刺激并观察人脐静脉内皮细胞骨架蛋白F-actin和细胞单层通透性的改变。应用荧光免疫组化和Western blot方法检测脂多糖刺激前后细胞中RhoA和SRF等信号分子的改变。并通过阻断实验证实RhoA-SRF信号通路的作用。 结果与结论：100 µg/L脂多糖刺激6 h可引起人脐静脉内皮细胞中F-actin快速重构并形成大量应力纤维,细胞单层通透性明显增强。细胞中活化RhoA的表达明显增加,SRF发生明显的入核转位现象。应用特异性分子抑制剂Y27632抑制RhoA的活化后,细胞中F-actin重构现象消失,细胞单层通透性增加也受到明显抑制,SRF蛋白发生明显的出现转位。而应用Latrunculin B抑制脂多糖刺激的人脐静脉内皮细胞中F-actin应力纤维形成,对抗通透性增加,但RhoA活化未受到干扰,SRF入核现象则受到抑制。提示RhoA-SRF通路的活化介导了脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞中F-actin重构和内皮单层通透性增加,特异性抑制F-actin也可以阻断脂多糖引起的血管内皮单层通透性增加,同时反馈抑制SRF的入核活化现象。     

肿瘤相关M2型巨噬细胞通过Toll样受体增强卵巢癌细胞MMP-9的表达

目的 探讨M2型巨噬细胞在卵巢癌侵袭转移中的作用及其可能涉及的Toll样受体(TLRs)信号通路机制.方法 用320 nmol/L佛波醇酯(PMA)诱导THP-1细胞,直接免疫荧光技术鉴定M2型巨噬细胞;Transwell小室建立M2细胞与卵巢癌细胞SKOV3体外非接触式共培养模型;24和48 h共培养后,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测SKOV3内TLR1、2、6和基质金属蛋白酶MMP-9水平,蛋白免疫印记(Western blot)检测MyD88、TRAF6 、P-NF-κB和MMP-9表达;TLR1、2和6激动剂分别作用SKOV3 6、12和24h后评价MMP-9的变化.结果 PMA可诱导THP-1成为M2型巨噬细胞;M2型巨噬细胞与SKOV3共培养24和48 h后,MMP-9的表达水平显著高于对照组(P ＜0.05);TLR1、2、和6于共培养24和48 h后在SKOV3有较高表达(P＜0.05);共培养24和48 h后,TLRs信号通路蛋白MyD88、TRAF6和P-NF-κB在SKOV3也同步表达增高(P ＜0.05);TLR1、2和6激动剂Pam3CSK4、HKLM和FSL-1分别刺激SKOV3 6、12和24 h后MMP-9 mRNA水平有显著高表达(P＜0.05).结论 分化诱导后的M2型巨噬细胞,可能通过刺激和活化TLR1、2、6信号途径,引起卵巢癌细胞SKOV3内基质金属蛋白酶MMP-9水平增加,增强肿瘤的侵袭转移能力.     

血必净注射液通过降低细胞紧密连接的通透性减轻LPS诱导的脓毒症大鼠肺微血管内皮细胞损伤

目的 探究血必净注射液(XBJ)对脂多糖诱导的脓毒症大鼠肺微血管内皮细胞损伤的作用及其对细胞紧密连接通透性的影响。方法 选择大鼠肺微血管内皮细胞，利用5μg/mL的脂多糖(LPS)处理大鼠肺微血管内皮细胞24 h,构建大鼠脓毒症肺损伤细胞模型，XBJ治疗组采用生药浓度2.5、5、10、25、50 mg/mL的XBJ共同进行干预24 h。CCK-8检测各组细胞活性，筛选最佳XBJ浓度；Hoechst染色检测各组细胞凋亡率；Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和cleaved caspase3的表达；Transwell小室检测单层大鼠肺微血管内皮细胞通透性；Western blot检测紧密连接相关蛋白ZO-1、ZO-2和occludin的表达。结果 CCK8实验结果显示，XBJ的最佳浓度为10mg/mL。LPS处理后，大鼠细胞凋亡率明显升高，凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的比值和cleaved caspase3的表达水平增加；而XBJ治疗后，细胞凋亡率下降。LPS处理导致FITC-dextran含量显著增加，ZO-1、ZO-2和Occludin的蛋白表达水平降...     

脉冲电磁场对人单核细胞激活的影响

研究不同参数的脉冲电磁场(PEMF)干预对人单核(THP-1)细胞激活的影响。将体外培养的THP-1细胞分别以频率为32Hz或64Hz、强度为1mT的PEMF进行干预,2次/d,30min/次,间隔8h,共3d,以频率为0Hz作为对照组。采用计数法观察PEMF处理后THP-1细胞与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)之间的黏附变化;ELISA法检测THP-1细胞培养基中单核细胞趋化因子1(MCP-1)的分泌情况;荧光定量PCR法观察THP-1细胞MCP-1基因表达改变。结果观察到,PEMF干预能明显抑制THP-1细胞与HUVECs间黏附,降低THP-1细胞MCP-1基因表达及其蛋白分泌水平。本实验提示,频率为32Hz或64Hz、场强为1mT的PEMF干预3d后,能明显抑制THP-1细胞激活。     

恒磁场对内皮细胞凋亡、黏附分子表达及其与单核细胞黏附率的影响

目的： 初步观察恒磁场对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下人脐静脉内皮细胞(HUVEC) 凋亡、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管细胞粘附分子-1（VCAM-1）的分泌与表达及HUVEC与人单核细胞株THP-1黏附率的影响。方法： 采用体外培养第3代的HUVEC，实验分为6组：对照组、AngⅡ（10^-6 mol/L）组及AngⅡ+不同磁感应强度（1 Gs、5 Gs、10 Gs、20 Gs）的恒磁场组。各组细胞于单纯培养或磁场作用24 h后收集样品，用末端脱氧核糖核酸酶介导的dUTP末端标记法 (TUNEL)和流式细胞仪碘化丙锭染色法检测细胞凋亡，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养液中ICAM-1、VCAM-1的含量，免疫细胞化学检测ICAM-1、VCAM-1的蛋白表达，计数法观察HUVEC与THP-1的黏附率。 结果： AngⅡ10-6 mol/L可诱导HUVEC凋亡（P<0.05 vs 对照组），而1 Gs、5 Gs、10 Gs和20 Gs恒磁场组细胞凋亡率显著低于AngⅡ组（P<0.05）。AngⅡ(10^-6 mol/L)组HUVEC的ICAM-1和VCAM-1含量和表达量显著高于对照组（P<0.05），而1 Gs、5 Gs、10 Gs和20 Gs恒磁场组细胞ICAM-1的含量和表达量显著低于AngⅡ组（P<0.05）。AngⅡ (10^-6 mol/L)组HUVEC与THP-1的黏附率显著高于对照组（P<0.05），而1 Gs、5 Gs、10 Gs和20 Gs恒磁场组HUVEC与THP-1的黏附率显著低于AngⅡ组（P<0.05）。 结论： 恒磁场可拮抗AngⅡ的作用，抑制HUVEC凋亡、HUVEC的ICAM-1和VCAM-1分泌与表达及HUVEC与单核细胞的黏附率。     

内皮细胞与单核细胞相互作用对基质金属蛋白酶2和其组织抑制剂2分泌和活化的影响以及普伐他丁的作用

目的　探讨内皮细胞和单核细胞相互作用对基质金属蛋白酶2(MMP -2)和其组织抑制剂(TIMP- 2)分泌及活化的影响以及普伐他丁在上述过程中的作用。方法　建立以不同比例混合的内皮细胞和单核细胞体外共同培养体系,培养24h后取上清采用明胶酶谱法检测MMP -2活性及逆明胶酶谱法检测TIMP- 2的活性。按1∶1比例混合培养的内皮细胞和单核细胞中,加入不同浓度的普伐他丁(0、0 .1、0. 5、1 0μmol/ml)作用24h后,用同样的方法测定MMP 2和TIMP- 2的活性。结果共同培养体系的细胞与内皮细胞单独培养相比较,MMP -2酶原(proMMP- 2)活性分别增高2 .09、2. 46和2 .07倍(n=8,P<0. 01),共同培养的细胞还能够分泌MMP -2的活性形式,其中以1∶1比例共同培养的细胞分泌的proMMP -2和活化MMP- 2增加最为显著。普伐他丁对proMMP -2及活化状态MMP 2的产生均有抑制(P<0 01),并呈剂量依赖效应,浓度在1 0μmol/ml以上的普伐他丁可完全抑制活化MMP-2的分泌。逆明胶酶谱法检测结果显示,混合培养的细胞TIMP- 2活性较两种细胞单独培养均有一定程度的降低(P<0 .05),但与细胞混合的比例无关。普伐他丁对TIMP -2活性无明显影响。结论　内皮细胞与单核细胞相互作用能够促进MMP- 2的分泌和活化,并能抑制TIMP- 2的分泌,而且普伐他丁对MMP -2的分     

Indirect Induction of Endothelial Cell Injury by PU- or PTFE-Mediated Activation of Monocytes

Polyurethanes (PUs) and polytetrafluoroethylene (PTFE) are widely used for making cardiovascular devices, but thrombus formation on the surfaces of these devices is inevitable. Since endothelial injury can lead to thrombosis, most of the studies on PUs or PTFE focused on their damage to endothelial cells. However, few studies have attempted to clarify whether the use of foreign objects as biomaterials can cause endothelial injury by activating the innate immune system. In this study, we aimed to investigate the roles of PU- or PTFE-stimulated immune cells in endothelial-cell injury. First, monocytes (THP-1 cells) were stimulated with PU or PTFE for 24 h and, subsequently, human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were treated with the supernatants of the stimulated cells for 24 h. We measured the generation of intracellular reactive oxygen species (ROS) from THP-1 cells treated with PU and PTFE for 24 h, meanwhile hydrogen dioxide (H₂O₂), tumor necrosis factor (TNF)-α and interleukin (IL)-1β in the supernatants were also detected. Then, we assessed the apoptosis rate of the HUVECs and determined the expression of NO, inducible nitric oxide synthase (iNOS), and apoptosis-related proteins (p53, Bax, Bcl-2) in the HUVECs. The results showed that large amounts of ROS and low levels of pro-inflammatory cytokines (TNF-α and IL-1β) were produced by the stimulated THP-1 cells. After culturing with the supernatants of the PU- or PTFE-stimulated THP-1 cells, the apoptosis rate, NO production and expression of iNOS, p53 and Bax in the HUVECs were up-regulated, while Bcl-2 expression was down-regulated. In conclusion, the release of ROS by PU- or PTFE-treated THP-1 cells may induce iNOS expression and cause apoptosis in HUVECs via the p53, Bax and Bcl-2 proteins. These data provide the interesting finding that endothelial injury in the process of biomaterial-induced thrombosis can be initiated through the release of soluble mediators by monocytes.     

蛋白激酶CβⅡ诱导上皮-间质转化及血管新生促进肝癌发展

目的 探讨蛋白激酶CβⅡ（PKCβⅡ）在肝细胞癌(HCC)发展中的作用机制。方法 免疫印迹法观察PKCβⅡ在肝细胞系L02和肝癌细胞系SK-hep1、HepG2、BEL-7404、7721、Hep3B和huh7中的表达，构建稳定高表达PKCβⅡ的细胞系，倒置相差显微镜下观察细胞形态变化，免疫荧光观察E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）表达的变化；通过免疫印迹法、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和放线菌酮（CHX）追踪实验，观察PKCβⅡ调控E-cadherin、N-cadherin和Snail表达的分子机制；小室迁移和侵袭实验(transwell assay)以及裸鼠尾静脉注射观察PKCβⅡ对肝癌细胞转移的影响；成管实验观察PKCβⅡ对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）血管形成能力的影响，酶联免疫吸附法（ELISA）观察PKCβⅡ对肝癌细胞上清中血管内皮生长因子A（VEGFA）含量的影响。结果 PKCβⅡ在肝癌细胞系中的表达高于肝细胞系L02，PKCβⅡ促进肝癌细胞形态从鹅卵石样上皮细胞向梭行间质样细胞的转变，通过mRNA水平下调E-cadherin（P<0.05）和上调N-cadherin（P<0.01）的蛋白表达，通过翻译水平上调Snail蛋白表达，PKCβⅡ还促进了肝癌细胞的迁移、侵袭（P<0.01）以及VEGFA的分泌（P<0.01）和血管新生（P<0.01）。结论 蛋白激酶CβⅡ诱导上皮-间质转化及血管新生在肝癌的发展中有重要作用。     

Paeoniflorin Attenuates Lipopolysaccharide-Induced Permeability of Endothelial Cells: Involvements of F-Actin Expression and Phosphorylations of PI3K/Akt and PKC

This study aimed to investigate the effects of paeoniflorin, the main active ingredient of the medicinal plant Paeonia lactiflora Pall., on the permeability of endothelial cells induced by lipopolysaccharide (LPS) and the underlying mechanisms. Human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were stimulated by LPS. Extravasated FITC-dextran reflecting permeability was assessed by multimode microplate reader, and the migration of bis-carboxyethyl-carboxyfluorescein acetoxy-methyl-labeled human acute monocytic leukemia cell line and leukemia cell line cells through HUVECs were analyzed by fluorescence microscopy. The phosphorylations of phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt, protein kinase C (PKC), and cofilin in HUVECs were assessed by western blotting, and the F-actin level was detected by laser scanning confocal microscopy. After LPS stimulation, inflammatory endothelial cells exhibited significantly increased permeability. Paeoniflorin (10, 30, and 100 μM) inhibited dextran extravasation and leukocyte migration through HUVECs induced by LPS in a concentration-dependent manner. Moreover, paeoniflorin was able to suppress the phosphorylations of PI3K/Akt, PKC, and cofilin, as well as F-actin reorganization in HUVECs induced by LPS. These findings revealed that paeoniflorin partly blocked LPS-induced endothelium permeability, supporting a new explanation for its anti-inflammatory effects.     

Blau综合征细胞模型的建立

目的 建立稳定可靠的Blau综合征(BS)体外细胞模型.方法 以小鼠腹腔巨噬细胞系(RAW264.7)、原代骨髓巨噬细胞(iBMDM)和人急性单核细胞白血病细胞系(THP-1)为研究对象,用胞壁酰二肽(MDP)或MDP衍生物(L18-MDP)刺激细胞建立模型,同时设置TNF-α抑制剂依那西普(ETN)和R1P2抑制剂(...     

蛋白激酶C在脂多糖诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ表达中的作用

目的 研究蛋白激酶c(PKC)对脂多糖(LPS)诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(β-1,4-galactosyltransferase-Ⅰ,β-1,4-GalT-Ⅰ)表达的调节作用,以及对内皮细胞骨架结构改变及其黏附能力的影响.方法 分别用PKC激动剂或几种不同类型的PKC抑制剂预处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs)30 min,LPS刺激HUVECs 4 h后,RT-PCR、Western blot方法 检测β-1,4一GalT-Ⅰ表达变化,细胞荧光染色观察β-1,4-GalT-Ⅰ催化的糖链表达变化及细胞骨架结构的改变,通过内皮-单核细胞黏附试验观察HUVECs黏附能力的改变.结果 几种不同类型的PKC抑制剂均能不同程度地抑制LPS刺激HUVECs引起的β-1,4-GalT-Ⅰ表达的上调,PKC激动剂能够使上调的β-1,4-GalT-Ⅰ的表达进一步增加;在HUVECs中β-1,4-GalT-Ⅰ与细胞骨架有共同定位,PKC抑制剂显著抑制LPS诱导的内皮细胞骨架蛋白的重构和β-1,4-GalT-Ⅰ细胞内的再分布;PKC抑制剂显著抑制LPS诱导的内皮-单核细胞黏附能力的上调.结论 PKC可能参与调节LPS诱导的HUVECs β-1,4-GalT-Ⅰ的表达,可能多种类型的PKC参与了这一调节过程;PKC可能通过对β-1,4-GalT-Ⅰ的调节进而影响炎症过程中内皮细胞骨架蛋白的重构及内皮细胞与单核细胞的黏附能力.     

辛伐他汀对尼古丁诱导脐静脉 内皮细胞分泌t-PA和PAI-1的影响

目的: 研究不同浓度辛伐他汀对尼古丁诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌组织纤溶酶原激活物(t-PA)和1型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)及其基因表达的影响。方法: 将3-6代体外培养的HUVECs随机分为对照组、尼古丁组及不同浓度辛伐他汀组,辛伐他汀组分别以1、10、100 μmol/L辛伐他汀预处理细胞2 h,再以100 μmol/L尼古丁孵育24 h。酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA)检测细胞上清液t-PA和PAI-1含量;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞t-PA和PAI-1 mRNA的表达。结果: 尼古丁组PAI-1分泌和mRNA表达较对照组显著升高(P<0.05)。不同浓度辛伐他汀组PAI-1分泌和mRNA表达均较尼古丁组显著降低,且PAI-1分泌和mRNA表达的降低呈浓度依赖性(均P<0.05),以100 μmol/L辛伐他汀组最为显著。100 μmol/L辛伐他汀组PAI-1分泌和mRNA表达与对照组比较,无显著差异(P>0.05)。尼古丁组t-PA mRNA表达较对照组显著降低(P<0.05)。10、100 μmol/L辛伐他汀组t-PA mRNA表达较尼古丁组显著升高(P<0.05),各组间t-PA分泌无显著差异(均P>0.05)。结论: 在体外,辛伐他汀可降低尼古丁所致的PAI-1分泌和mRNA的表达,并升高t-PA mRNA的表达,从而逆转尼古丁介导的HUVECs纤溶活性减低。