芍药苷对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察芍药苷对血管紧张素Ⅱ刺激下离体大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响和基质金属蛋白酶-2活性的影响.方法 体外培养大鼠胸主动脉VSMC,使用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、芍药苷干预血管平滑肌细胞,采用MMT法检测细胞增殖,硝酸还原酶及化学比色法测定细胞上清液中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平,应用酶谱法测基质金属蛋白酶-2活性的变化.结果 AngⅡ能明显促进平滑肌增殖、提高基质金属蛋白酶-2活性,芍药苷在125～1000 μg/mL能显著提高NO、NOS、iNOS水平,抑制平滑肌增殖,并呈剂量及时间依赖性;能显著抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌基质金属蛋自酶-2活性的升高.结论 芍药苷可能通过升高NO和NOS水平抑制AngⅡ诱导的平滑肌胞增殖.     

毛茛总苷对肾性高血压大鼠血压、NO、AngⅡ及A7r5细胞内钙的影响

目的:探讨毛茛总苷对肾性高血压大鼠的血压、血清一氧化氮(NO)、血浆和心肾组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)以及血管平滑肌细胞内钙的影响。方法:采用二肾一夹(2K1C)肾性高血压大鼠模型,连续灌胃给药5 w,5w末测定血压,检测血清中一氧化氮、血浆和心、肾组织中AngⅡ含量;采用新一代Ca2+荧光探针Fluo-3/AM标记培养的血管平滑肌细胞内钙,荧光倒置显微镜观察荧光成像和荧光分光光度计测量细胞内钙荧光强度,观察毛茛总苷对大鼠血管平滑肌细胞内Ca2+水平的影响。结果:毛茛总苷高、中剂量能降低肾性高血压大鼠血压水平(P0.05),其各剂量均能显著的升高大鼠血清中NO含量(P0.01),但对大鼠体内的AngⅡ含量无显著影响;毛茛总苷各剂量均能降低由AngⅡ引起的细胞内钙离子浓度升高。结论:毛茛总苷能降低肾性高血压大鼠的血压,其降压作用可能与其能显著的升高大鼠NO水平及拮抗AngⅡ引起的血管平滑肌细胞内钙升高有关。     

通脉宁胶囊对LPC诱导的血管平滑肌细胞增殖及钙超载的影响

通脉宁胶囊是陈淑长教授多年来应用于临床治疗周围血管疾病血瘀证的有效方药,具有益气活血、通络止痛的作用.由黄芪、党参、丹参、当归、赤芍等组成.本实验室前期采用兔颈动脉球囊损伤模型研究通脉宁胶囊对PTA术后RS的预防作用,结果显示通脉宁可明显降低内膜及中膜厚度,减少管壁胶原,使管壁血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达下降,提示抑制VSMC的bFGF及ⅥEGF表达可能是通脉宁胶囊减轻PTA后RS程度的作用机制之一[1],从而为通脉宁胶囊治疗气虚血瘀所致的PTA术后RS提供了一定的理论依据.本实验应用细胞培养技术观察通脉宁胶囊全方及拆方药物血清对LPC诱导VSMC增殖及钙超载的影响.     

解毒活血益气方药物血清对兔血管平滑肌细胞增殖及脂质过氧化的影响

目的:研究解毒活血益气方药物血清对血管平滑肌细胞(vascular smooth musclecell,VSMC)增殖、脂质过氧化的影响.方法:首先建立颈动脉粥样硬化狭窄模型,运用球囊原位扩张和喂饲高脂饲料致经皮动脉腔内成形术(percutaneous transluminal angioplasty,PTA)后再狭窄模型,造模成功后给予含解毒活血益气组方和阳性对照药(普伐他汀、巴米尔)的饲料进行治疗4周,获取模型动物和给药动物血清;采用MTT法、黄嘌呤氧化酶法和MDA测试盒观察药物血清作用12、24h时,对VSMC增殖、总SOD活力和MDA含量的影响.结果:解毒活血益气方在不同时相均能显著抑制VSMC的增殖;解毒活血益气方显著降低MDA的含量和增加总SOD活力,并呈现出良好的时效性.结论:解毒活血益气方可能通过抑制VSMC增殖,对抗脂质过氧化损伤等机制,干预PTCA术后再狭窄.     

大黄素对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察大黄素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及机制。方法:斑贴法培养大鼠主动脉VSMC,AngⅡ刺激VSMC建立细胞增殖模型。采用MTT法检测细胞增殖,观察大黄素(10,20,40,80μmol.L^-1)、亚硝基-精氨酸甲酯(L-NAME,100μmol.L^-1)对AngⅡ诱导VSMC增殖的影响。免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达;硝酸还原酶及化学比色法测细胞上清液中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平。半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测VSMC iNOS mRNA的表达。结果:大黄素在10~80μmol.L^-1呈剂量及时间依赖性抑制VSMC增殖,但可被100μmol.L^-1的L-NAME部分抵消;大黄素能减少PCNA阳性细胞表达,升高NO,NOS,iNOS水平,增加iNOS mRNA的表达。结论:大黄素对AngⅡ诱导的VSMC增殖有抑制作用,抑制VSMC PCNA的表达,上调iNOS基因表达,升高NO水平可能是其发挥作用的机制。     

补肾益气方及其拆方对ox-LDL所致"AS"症血管平滑肌细胞病理模型的影响

目的:研究补肾益气方及其拆方(黄芪、首乌)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)所致动脉粥样硬化(AS)症血管平滑肌(VSMC)病理模型细胞的增殖及其调控基因的影响。方法:用ox-LDL处理VSMC复制"AS"细胞病理模型,用MTT法、流式细胞仪、RT-PCR法观察含受试药物血清对模型细胞增殖、泡沫细胞形成、增殖周期及相关基因表达影响。结果:补肾益气方及其拆方(黄芪、首乌)能降低模型细胞的增殖率及泡沫细胞形成率;降低S期细胞的百分率,下调VSMC增殖促进基因PDGF-a、c-MYC,上调增殖抑制基因P27的表达。结论:补肾益气方及其拆方具有抑制AS症的血管平滑肌细胞增殖和泡沫细胞的形成。     

通脉I号抑制自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的机理探讨

目的 探讨通脉I号抑制自发性高血压大鼠（SHR）血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的可能机理。方法 细胞计数、逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）及放射免疫等细胞、分子生物学方法。结果 通脉I号显著地抑制VSMC的增殖；15mg/L的浓度可极显著地抑制VSMC上AngⅡ受体AT1 mRNA的表达，并可降低SHR－VSMC内AngⅡ含量。结论 通脉I号对SHR的VSMC增殖的抑制作用机理之一系降低了AT1受体的mRNA表达，拮抗AngⅡ受体。     

活血益气方药物血清对转染VEGF165脐静脉内皮细胞分泌NO、eNOS的影响

目的探讨活血益气方及其拆方含药动物血清对pcDNA3.1-VEGF165质粒转染人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分泌一氧化氮（NO）、内皮型一氧化氮合成酶（eNOS）的影响。方法通过构建pcDNA3.1-VEGF165重组质粒,并瞬时转染至HUVEC,制备血管内皮生长因子（VEGF）信号通路激活细胞模型。同时,制备活血益气方及其拆方含药动物血清,作用于转染后的HUVEC,采用Western blot法检测VEGF蛋白的表达,Griess反应法测定细胞上清NO的表达,ELISA法测定细胞上清eNOS的表达。结果活血益气方不仅可以促进转染后HUVEC表达VEGF蛋白,还可以促进其分泌NO及eNOS。活血方和益气方单用均可以促进转染后HUVEC细胞分泌NO,但对eNOS的分泌未见明显影响。结论活血益气方对VEGF信号通路具有促进作用。活血方药和益气方药在这方面均起主要作用,全方作用优于拆方各组。活血益气方治疗性血管生成作用机制可能与其促进内皮细胞分泌NO,从而促进内皮细胞迁移,提高血管通透性有关。其具体作用机制还有待进一步研究。     

通脉Ⅰ号抑制自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的机理探讨

目的 探讨通脉Ⅰ号抑制自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的可能机理。方法细胞计数、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及放射免疫等细胞、分子生物学方法。结果通脉Ⅰ号显著地抑制CSMC的增殖；15mg／L的浓度可极显著地抑制VSMC上AngⅡ受体AT1 mRNA的表达，并可降低SHR-VSMC内AngⅡ含量。结论 通脉Ⅰ号对SHR的VSMC增殖的抑制作用机理之一系降低了AT1受体的mRNA表达，拮抗AngⅡ受体。     

健心颗粒及拆方对心力衰竭大鼠细胞凋亡的影响

目的:探讨健心颗粒及拆方对慢性心力衰竭(CHF)心肌细胞凋亡的影响,为分析此方中医药组方原理和临床应用提供实验依据。方法:以老龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)的CHF模型作为研究对象,根据中医治法将健心颗粒拆分为益气组、活血组、温阳组和利水组,观察全方及各拆方组对CHF大鼠左室压力上升和下降最大速率(±dp/dtmax)、血管紧张素Ⅱ和凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达的影响。结果:健心颗粒全方及各拆方组均可以改善CHF大鼠心功能和下调Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达(P0.05或P0.01),全方组优于各拆方组;各拆方组间比较,益气组、利水组改善±dp/dtmax、抑制AngⅡ作用优于温阳组、活血组(P0.05);益气组、活血组下调Bax、上调Bcl-2蛋白表达作用优于温阳组、利水组(P0.05)。结论:在改善心功能、抑制AngⅡ水平和抑制心肌细胞凋亡方面,健心颗粒各拆方组作用略有侧重,而健心颗粒全方作用最全面、显著,说明益气、温阳、活血、利水四种治法配伍有协同作用。     

冠通方及其拆方含药血清对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的:通过冠通方及其拆方含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响研究,探讨冠通方防治再狭窄的部分作用机制.方法:每组SD大鼠每天给药剂量分别为冠通方组23.75 g·kg-1,活血祛瘀组8.75 g·kg-1,益气养阴组5 g·kg-1,清热化痰组10 g'kg-1,连续给药7d,制备冠通方及其各拆方含药血清,将大鼠VSMC分为6组(每组6个复孔),空白组加5％正常大鼠血清,模型组加5％正常大鼠血清及10-6mol· L-1的AngⅡ,冠通方及各拆方组在每组分别加入5％含药血清及10-6mol·L-1的AngⅡ,孵育48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;结果:血管平滑肌细胞模型组早期细胞凋亡率(0.36 ±0.14)％,晚期细胞凋亡率(1.02±0.86)％与空白对照组早期细胞凋亡率(2.22±0.43)％,晚期细胞凋亡率(1.29±0.57)％相比,细胞凋亡率均明显降低(P＜0.01).与模型组相比早期、晚期细胞凋亡率冠通方组为(23.4±0.95)％,(9.1±0.69)％、活血祛瘀组为(8.08±0.54)％,(18.6±1.48)％、益气养阴组(16.9±0.79)％,(4.38±0.90)％、清热化痰组(5.9±0.99)％,(11.5±0.71)％,早期及晚期凋亡率均明显升高(P＜0.05);结论:冠通方抑制VSMC的增殖与影响其周期、诱导其凋亡有关;且冠通方组作用优于其拆方组.     

冠心平对动脉粥样硬化金黄地鼠NO、NOS、ET、AngⅡ水平的影响

目的:观察冠心平对血管内皮分泌因子NO、NOS、ET、AngⅡ水平的影响,探讨冠心平治疗冠心病的相关机制。方法:采用金黄地鼠喂饲以高脂饲料,建立动脉粥样硬化模型,模型建立后,随机分成正常对照组、模型对照组、阳性药对照组、冠心平大、小剂量组,各组给予相应药物,8周后,检测金黄地鼠外周血清中NO、NOS、AngⅡ含量和血浆中ET的水平。结果:冠心平具有升高高脂饲料致金黄地鼠冠状动脉粥样硬化后血清NO水平和降低血浆ET含量的作用,同时也可以降低血清AngⅡ水平和调节NOS水平。结论:冠心平通过对血管内皮因子NO、NOS、ET、AngⅡ水平的调节,达到改善动脉粥样硬化症状,保护冠心病患者心脏和血管的作用。     

天钩方治疗肾性高血压大鼠的实验研究

目的 观察天钩方对肾性高血压大鼠的降压作用,并探讨其可能的作用机制.方法 应用"两肾一夹法"(2K1C)建立大鼠肾性高血压模型,观察不同剂量天钩方对模型大鼠血压、血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和血清血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)的影响.结果 天麻钩藤制剂各剂量组均能明显降低模型大鼠的血压,显著升高模型大鼠血清SOD、GSH-Px和NO水平,明显降低血清中AngⅡ和MDA含量,NOS水平.结论 天麻钩藤制剂降压作用确切,其作用机制可能与其具有显著的抗氧化作用改善内皮功能有关.     

活血益气方及其拆方药物血清对VEGF165转染 脐静脉内皮细胞分泌MMP-9,MMP-2的影响

目的:探讨活血益气方及其拆方含药血清对含有血管内皮生长因子(VEGF) 165的重组质粒pcDNA3.1-VEGF165转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌基质金属蛋白酶(MMP)2,9的影响.方法:构建pcDNA3.1-VEGF165重组质粒,采用Fugene HD将质粒瞬时转染至HUVEC中.制备活血益气方及其拆方含药大鼠血清、生理盐水正常血清,以5％药物血清作用于转染后的HUVEC,Western blot法检测VEGF的表达,ELISA法测定MMP-2,MMP-9的表达.结果:(1)活血益气方组VEGF蛋白表达高于生理盐水组,与之比较有统计学差异(P＜0.01).拆方各组则低于活血益气方组,与之比较有统计学差异(P＜0.01).(2)活血益气方组、活血方组MMP-2含量高于生理盐水组,与之比较有统计学差异(P＜0.05,P＜0.01).拆方各组中仅益气方组MMP-2含量低于活血益气方组,与之比较有统计学差异(P＜0.01).(3)活血益气方及其拆方各组MMP-9含量均高于生理盐水组,仅活血益气方组、活血方组与之比较有统计学差异(P<0.01,P＜0.05).拆方各组MMP-9含量均低于活血益气方组,与之比较具有统计学差异(P＜0.01).结论:活血益气方可以促进转染后HUVEC表达VEGF及分泌MMP-2,MMP-9,活血方药在这方面起主要作用.推测其治疗性血管生成作用机制可能与促进内皮细胞分泌MMP,从而促进内皮细胞迁移,提高血管通透性有关.     

天麻钩藤饮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞A7r5增殖的影响

目的观察天麻钩藤饮对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(A7r5)增殖的影响及机制。方法 AngII刺激A7r5细胞建立细胞增殖模型。采用CCK-8法检测细胞增殖,观察天麻钩藤饮(0.25,0.5,1,2 mg.mL-1)、亚硝基-精氨酸甲酯(100μmo1.L-1)对AngII诱导血管平滑肌细胞增殖的影响。硝酸还原酶及化学比色法测定细胞上清液中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平。结果天麻钩藤饮在0.25～2 mg.mL-1呈剂量及时间依赖性抑制A7r5增殖;天麻钩藤饮能升高NO、NOS、iNOS水平。结论天麻钩藤饮对AngII诱导的A7r5细胞增殖有抑制作用,升高NO和NOS水平可能是其发挥作用的机制。     

心肌尔康对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的作用

目的:研究心肌尔康(XJEK)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的作用,并探讨相关的作用机制。方法:体外培养HUVECs细胞,随机分为7组,分别为空白组,AngⅡ(1×10~(-5)mol·L~(-1))组,AngⅡ(1×10~(-5)mol·L~(-1))+心肌尔康不同质量浓度组(0.1,0.2,0.4,0.8,1.6 g·L~(-1)),噻唑蓝(MTT)比色法检测HUVECs的活性;Griess法测定一氧化氮(NO)含量;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)的水平;钙成像仪测定细胞胞浆内游离钙离子(Ca~(2+))浓度;比色法及TBA法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测内皮型一氧化氮合酶(e NOS)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,AngⅡ组内皮细胞活力,NO释放,e NOS蛋白表达及SOD活力明显降低,MDA,ROS含量和内皮细胞胞浆内Ca~(2+)浓度明显升高(P0.05,P0.01);与AngⅡ组比较,心肌尔康可剂量依赖性提高内皮细胞活力,促进NO释放、增加e NOS蛋白的表达;升高SOD活力,抑制MDA,ROS含量和内皮细胞胞浆内Ca~(2+)浓度的升高,各指标差异均具有显著性(P0.05,P0.01)。结论:心肌尔康对AngⅡ诱导的内皮损伤具有明显的保护作用,其可能机制为抑制细胞内Ca~(2+)超载和降低氧化应激水平。     

镇肝息风汤含药血清对人脐动脉平滑肌细胞增殖和凋亡作用的实验研究

目的观察镇肝息风汤含药血清对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激人脐动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、凋亡的影响。方法制备镇肝息风汤含药血清,采用组织贴块法培养VSMC,并以α-SMactin免疫细胞化学法鉴定。用10-6mol/LAngⅡ刺激VSMC,以MTT法观察含药血清对VSMC增殖的影响;Brdu免疫细胞化学法观察含药血清对VSMCsDNA合成的影响;流式细胞术AnnexinV-FITC法观察含药血清对VSMCs凋亡的影响;并以西药依那普利作为阳性对照药物。结果镇肝息风汤含药血清可抑制AngⅡ诱导的细胞增殖,Brdu标记率增加,促使凋亡率升高。结论镇肝息风汤可通过调节VSMCs增殖-凋亡失衡,从而改善血管重塑。     

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞表达血小板源生长因子的影响

目的 探讨川芎嗪对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)中血小板源生长因子(PDGF)表达的影响.方法 培养大鼠主动脉VSMC,以 10-7mol/L AngⅡ刺激作为AngⅡ组 ,AngⅡ刺激前分别应用不同浓度川芎嗪预处理做为高、中、低剂量组,以正常的VSMC为对照组,测定VSMC增殖活度,免疫细胞化学法检测培养24h时VSMC PDGF-B的表达.结果 AngⅡ组VSMC增殖活度与 PDGF-B表达显著高于对照组(P<0.01).与AngⅡ组比较,川芎嗪中、高剂量组VSMC增殖活度明显降低(P<0.05或P<0.01)、PDGF-B表达水平均显著低于AngⅡ组(P<0.05或P<0.01).结论 川芎嗪对AngⅡ诱导的VSMC增殖有显著抑制作用,其机制与抑制PDGF-B介导的信号转导有关.     

固本化痰通络方对大鼠血管平滑肌细胞粘附分子表达的影响

目的:观察固本化痰通络方含药血清对血管平滑肌细胞(VSMC)表达血管细胞粘附分子1(VCAM-1)的影响。方法:在建立血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的VSMC表达粘附分子模型的基础上,将培养的细胞分为4组:正常组、AngⅡ刺激组、固本化痰通络方高剂量组、低剂量组。镜下观察细胞生长状况,流式细胞术和免疫组化检测VCAM-1的表面表达及蛋白的表达。结果:与正常组比较,AngⅡ能够明显诱导VCAM-1的表达,GBHTTLP能降低VCAM-1的表达及蛋白的表达。结论:AngⅡ能够明显诱导VSMC中VCAM-1的表达,而GBHTTLP能够通过抑制VSMC中VCAM-1的表达从而延缓早期动脉粥样硬化的病变进程。     

活血益气方及其拆方对缺氧人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨活血益气方及其拆方促进血管新生的可能作用机制。方法建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧损伤模型,分为模型组、活血益气方组、活血方组及益气方组。另设正常对照组常规培养。活血益气方组、活血方组及益气方组给予含10%相应药物血清培养,模型组及正常对照组给予生理盐水血清培养,干预24 h。采用CCK-8法检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双染法检测HUVEC凋亡,WST-1法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力,微板法测定丙二醛(MDA)含量及细胞培养上清乳酸脱氢酶(LDH)含量,实时荧光定量PCR法检测细胞蛋白激酶C(PKC)、Ras、Raf-1 mRNA水平。结果与正常对照组比较,模型组HUVEC增殖明显减少,SOD活力及PKC、Ras、Raf-1 mRNA均显著下降,细胞凋亡及MDA、LDH含量明显增加(P0.05或P0.01)。与模型组比较,活血益气方组、活血方组及益气方组HUVEC增殖均显著增加,LDH含量均显著降低,活血益气方组SOD活力显著提高,活血益气方组、活血方组细胞凋亡显著减少,活血益气方组、益气方组MDA含量显著降低,PKC、Ras、Raf-1 mRNA水平显著升高(P0.05或P0.01)。结论活血益气方及其拆方可不同程度地促进缺氧后HUVEC增殖并抑制其凋亡,可能与增强细胞抗氧化能力和调节PKC/Ras/Raf-1信号通路有关;活血益气方对细胞的保护作用优于活血方和益气方,二者发挥协同作用。