基于报告基因的胰岛素受体蛋白酪氨酸激酶激动剂细胞筛选模型的建立

目的建立用于大规模筛选胰岛素受体蛋白酪氨酸激酶(IRTK)激动剂的细胞模型。方法将含有编码胰岛素受体(IR)基因、转录激活因子5B(STAT5B)基因和STAT5应答元件调控的荧光素酶基因的质粒瞬时共转染仓鼠卵巢(CHO)细胞,人肝癌细胞HepG2和小鼠骨骼肌成肌细胞C2C12,将具有较高的胰岛素诱导表达荧光素酶活性的细胞经G418筛选,获得具有胰岛素诱导表达荧光素酶活性的细胞克隆。RT-PCR检测外源基因的表达的稳定性。荧光素酶活性分析和MTT法检测胰岛素处理后荧光素酶诱导表达的量效关系,以及AG1024和AG490处理后胰岛素诱导荧光素酶表达的特异性。并在96孔板上优化荧光素酶的检测条件。结果共转染的CHO细胞较HepG2和C2C12表现出更高胰岛素诱导的荧光素酶活性,经G418筛选得到一株具有较高诱导表达率的细胞克隆。RT-PCR表明,该细胞克隆表达外源胰岛素受体和STAT5B。该细胞中荧光素酶的诱导表达对于胰岛素具有剂量依赖性。IRTK抑制剂AG1024能阻断胰岛素诱导荧光素酶的表达,而Jak激酶抑制剂AG490无此作用。在96孔板上的荧光素酶的优化检测条件为:接种量每孔15×103个细胞,受试物诱导表达8h,Promega荧光素酶检测试剂按推荐量进行4倍稀释使用。结论在转基因CHO细胞中,IRTK的激活能灵敏、特异地诱导荧光素酶的表达。因此,该细胞模型可用于IRTK激动剂的高通量筛选。     

GAD-Ab、ICA和IAA联合检测对成人隐匿性自身免疫性糖尿病的诊断价值（附138例分析）

目的 评价血清谷氨酸脱羧酶抗体(GAD—Ab)、胰岛细胞抗体(ICA)和胰岛素自身抗体(IAA)联合测定对成人隐匿性自身免疫性糖尿病(LADA)的诊断价值。方法 利用ELISA法测定138例临床诊断为2型糖尿病患者及46例健康者的血清GAD—Ab、ICA和IAA，并比较抗体阳性和阴性患者的临床特征。结果 临床诊断为2型糖尿病患者GAD-Ab和ICA的阳性率分别为20．3％和11．6％，与对照组比较差异有显著性(X^2=8．528，P=0．003；X^2=5．841，P=0．016)；IAA的阳性率8．0％。与对照组比较无显著性差异(X^2=1．902，P=0．168)。抗体阳性患者血清C肽水平较低。结论 胰岛自身抗体联合检测可提高LADA患者的检出率；LADA患者胰岛储备功能较差。     

胰蛋白酶原激活肽酶联免疫吸附检测法的建立与应用

目的建立灵敏、特异地检测胰蛋白酶原激活肽(TAP)的酶联免疫吸附(ELISA)方法。方法利用杂交瘤技术制备抗TAPmAb，建立检测TAP的ELISA测定法，并初步用于16例急性胰腺炎患者及20例其他急腹症患者尿液标本的检测。结果本法灵敏度为0．69ng／ml，可测范围为0．69～1000ng/ml，批内变异系数为9．10％，批间变异系数为10．33％，回收率为97．7％。轻型、重型急性胰腺炎患者及对照组患者尿TAP含量(中位值)分别为57．35ng/ml、18．68ng/ml、8．86ng/ml。结论本法具有良好的灵敏度、特异性、稳定性，经进一步研究，可望用于急性胰腺炎的诊断及病情预测。     

尿微量转铁蛋白酶免疫测定的临床意义

为了及时对糖尿病肾病进行早期诊断，建立了一种敏感、简便、可靠的尿微量转铁蛋白（TRF)酶免疫测定法。工怍范围0．5～12μg／L，检出限0．28μg/L．批内变异系数(CV)66％，批间CV8.6％，50例正常健康的入尿TRF值以μg／mmcr表示，100列疾病组中尿TRF值均较正常对照组明显增高(P<0．01)。因此尿TRF是一种肾小球滤过功能不全的敏感指标。尿Cr测定采用jaffe’s法。     

血清纤维结合蛋白的酶免疫检测法

目的建立血清纤维结合蛋白(Fn)含量的酶免疫分析(EIA)检测方法。方法利用现有Fn检测试剂盒建立Fn的EIA测定法,并对所建立的方法从灵敏度、精密度、特异性、重复性等方面进行方法学评价。结果该法灵敏度为11．69ml／L,线性范围为50～300mg／L,批内变异系数为 3．82％,批间变异系数为5．10％,回收率97．7％。肺结核组及正常对照组血清Fn含量分别为 (188．82±5．51)mg／L和(275．25±18．11)mg／L,两组间差异有显著性意义(P<0．01);肺结核稳定期患者血清Fn显著高于进展期及好转期(P<0．05)。结论该方法线性范围适宜,准确度、精密度较好,符合临床检验工作要求。     

2型糖尿病患者β3肾上腺能受体基因型及其与胰岛素抵抗的相关性研究

目的研究2型糖尿病患者β3肾上腺能受体基因型及其与胰岛素抵抗的相关性。方法选取151例中老年2型糖尿病患者,80例健康体检成年人作为对照。比较糖尿病患者与非糖尿病患者之间的各种生化指标及基因型的差异,胰岛素抵抗患者和非胰岛素抵抗患者各种生化指标及基因型的差异。结果2型糖尿病患者较年龄匹配的非糖尿患者群BMI、SBP、TG、TC、LDL—C、FPG、HbA1c明显升高,而HDL-C显著降低（P〈0．05,P〈0．01）;中老年2型糖尿病组β3 AR 64Arg等位基因频率为：17％,β3ARTrp／Arg等位基因频率为：32．5％,Arg／Arg等位基因频率为：0．6％;对照组β3 AR64Arg等位基因频率为：15％,β3ARTrp／Arg等位基因频率为：30％,无Arg／Arg基因型,两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。胰岛素相对抵抗组BMI、DBP、WHR、三酰甘油、FPG、FINS比明胰岛素相对敏感组显升高（P〈0．05,P〈0．01）;胰岛素相对抵抗组Trp／Arg基因型频率为45．6％,β3AR64Arg等位基因频率为23．5％;胰岛素相对敏感组Trp／Arg基因型频率为26．9％,β3AR64Arg等位基因频率为13．5％;两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论2型糖尿病患者β3肾上腺能受体基因型与发病无关,但是β3肾上腺能受体基因型与胰岛素抵抗的密切相关。     

阿卡波糖对2型糖尿病病人胰岛素抵抗的影响

目的 :探讨阿卡波糖对 2型糖尿病病人胰岛素抵抗的影响。方法 :16 0例 2型糖尿病病人随机分为 2组 ,治疗组 80例口服阿卡波糖治疗 ,前 2wk ,5 0mg ,po ,tid ,2wk后 ,10 0mg ,po ,tid ;安慰剂组 80例口服安慰剂 ,方法同治疗组 ,疗程为 2 4wk。同时观察空腹及餐后 2h血糖、血清胰岛素水平、体重指数、糖化血红蛋白、空腹时的红细胞胰岛素受体和红细胞膜流动性治疗前后变化。结果 :(1)wk 4时 ,阿卡波糖明显降低病人的空腹血糖、餐后 2h血糖、糖化血红蛋白 ,下降值分别为 :(2 .9±s 0 .8)mmol·L- 1,(4.0± 1.8)mmol·L- 1,(1.2± 2 .1) % ,P<0 .0 1;(2 ) 2 4wk后 ,阿卡波糖降低病人的体重、空腹血清胰岛素、餐后 2h血清胰岛素 ,下降值分别为 :(6± 4 )kg·m- 2 ,(10± 6 )MIU·L- 1,(14± 10 )MIU·L- 1,增加红细胞胰岛素受体 ,升高值为 :(80± 71)sites·RBC- 1,降低膜流动性 ,下降值为 :(1.5± 1.3) ,P <0 .0 1。结论 :阿卡波糖能改善 2型糖尿病病人的胰岛素抵抗     

青少年肥胖者2型糖尿病及高危因素的研究

目的调查青少年肥胖者2型糖尿病(T2DM)及其高危者的发生率,探讨其高危因素。方法对68例肥胖者(12-22岁)进行口服葡萄糖耐量试验,测定空腹和2 h血糖、胰岛素水平及计算胰岛素抵抗指数(Homa-IR)及胰岛β细胞功能指数(Homa-β),并对糖代谢异常者中的8例进行干预治疗。结果 (1)68例肥胖者中发现T2DM 2例(2．9％),糖耐量异常(IGT)11例(16．2％),高胰岛素血症(HINS)28例(41．2％); (2)肥胖组其2h血糖、胰岛素水平、2 h胰岛素与葡萄糖之比、Homa-IR及Homa-β显著高于非肥胖者(P< 0．05-P<0．01);(3)糖代谢异常者各指标明显高于单纯性肥胖者(P<0．05-P<0．01);(4)8例糖代谢异常患者经干预治疗(2．3±1．2)个月,糖代谢指标显著改善。结论对青少年肥胖者应进行糖尿病筛查,对伴有糖代谢异常者应及早干预治疗,以降低青少年,T2DM的发生率。     

甲状腺功能亢进症患儿胰岛素抵抗和胰岛素受体变化

目的:探讨甲状腺功能亢进(甲亢)患儿糖代谢紊乱的特点及发生的可能机制。方法:用血糖仪和放射免疫方法检测29例甲亢患儿餐前、餐后60分钟、120分钟血糖和餐前、餐后60分钟胰岛素、C肽、胰高糖素、皮质醇及T3、T4、TSH、抗甲状腺球蛋白抗体(TGA)、抗甲状腺微粒体抗体(TMA)(其中10例糖耐量减低为甲亢1组,另19例糖耐量正常为甲亢2组),并与20例正常健康儿童进行比较。采用放射受体分析法对其中的14例甲亢患儿餐前、餐后60分钟进行了红细胞胰岛素受体的检测,以7名健康儿童作为对照。结果:29例甲亢患儿10例出现糖代谢紊乱,病程大于1年和小于1年糖代谢紊乱发生率为50％和9％(P<0.05)。甲亢1组餐后60分钟胰岛素、胰岛素/血糖、胰岛素/胰高糖素显著升高(P<0.05);红细胞膜高、低亲和力胰岛素受体数目餐前、餐后自身对照均明显下降(P<0.05);低亲和力胰岛素受体亲和力餐前、餐后自身对照明显升高(P<0.05)。结论:甲亢儿童存在糖代谢紊乱现象,表现为葡萄糖耐量低减和胰岛素抵抗,其发生与病程有关,病程较长,发生率较高。胰岛素靶细胞受体数目减少及亲和力的改变可能是甲亢糖代谢紊乱及胰岛素抵抗的重要原因。     

胎球蛋白A与代谢性疾病

糖尿病、代谢综合征等代谢性疾病患者体内胎球蛋白A(FA)水平显著改变。FA可抑制胰岛素受体自身磷酸化和酪氨酸激酶活性。本文综述FA与代谢性疾病的关联,探讨以调节FA表达水平作为糖尿病等代谢性疾病治疗靶点的临床意义。     

三种长效基础胰岛素类似物的研究进展

糖尿病是一种威胁全世界的慢性病,其发病率高,影响人们的生活和工作。随着DNA重组技术的发展,长效基础型胰岛素类似物为糖尿病患者带来了希望,其中甘精胰岛素（IGla）、地特胰岛素（IDet）以及德谷胰岛素（IDeg）是临床上常用的3种基础型胰岛素,通过改变结构获得了缓慢的吸收和分布,以及相对较长的作用时间,更符合人体分泌胰岛素的生理模式。对这3种胰岛素制剂在分子结构以及长效作用机制、安全性评价和药效作用方面的研究进展进行总结。     

The role of the new basal insulin analogs in addressing unmet clinical needs in people with type 1 and type 2 diabetes

Background: Despite improvements in anti-hyperglycemic therapies, there are many unmet clinical needs that hinder successful glycemic control in people being treated with current basal insulin analogs.

Objective: This paper reviews the unmet needs associated with current basal insulin therapy and describes the most recent basal insulins for the treatment of diabetes.

Methods: PubMed was searched for articles on basal insulin analogs published between 2000 and April 2016.

Results: Although long-acting insulin analogs, such as insulin glargine 100 units/mL and insulin detemir, have come towards approximating physiologic basal insulin levels, limitations such as hypoglycemia and intra- and inter-individual variability are associated with their use resulting in glycemic fluctuations. Some basal insulins lack 24?hour coverage, requiring some patients to split their dose, increasing the number of injections required to maintain glycemic control. Fear of hypoglycemia and the need for additional injections often leads to poor compliance and suboptimal glycemic control. Long-acting insulin analogs, such as insulin glargine 300 units/mL and insulin degludec, have improved upon the shortcomings of the current basal insulin analogs. Improved pharmacodynamic/pharmacokinetic profiles afford lower intra-patient variability and an extended duration of action, providing full and stable 24?hour basal insulin coverage with once daily dosing, and comparable efficacy to insulin glargine with lower rates of hypoglycemia.

Conclusion: The improved pharmacodynamic/pharmacokinetic profiles of new long-acting insulin formulations provide greater glycemic control with once daily dosing. With the growing number of therapeutic choices available, physicians have more scope to individualize patient options for basal insulin therapy.     

Insulin analogues and other developments in insulin therapy for diabetes

Diabetes mellitus is a common chronic disorder, which is increasing in prevalence on a global scale. Insulin replacement therapy is required for all people with Type 1 diabetes and for many with Type 2 diabetes, to correct the metabolic abnormalities of these disorders. However, the pharmacokinetics and glucodynamics of available insulins have numerous limitations. Problems include delayed absorption from subcutaneous absorption sites (soluble [regular] insulin), and wide variability of absorption characteristics (insulin isophane suspension [NPH] and insulin lente) that is influenced by the adequacy of resuspension, and by a variable and insufficient duration of action, which usually requires intermediate-acting insulins to be administered twice-daily. All insulin preparations are associated with the common side effect of hypoglycaemia, and encourage weight gain.     

HPLC法测定各型胰岛素注射液中脱酰胺胰岛素的变化

目的 对酸性胰岛素注射液、中性胰岛素注射液、精蛋白锌胰岛素注射液以及低精蛋白锌胰岛素注射液中的脱酰胺胰岛素进行检查，并对不同储存时间的这几种制剂中的脱酰胺胰岛素进行比较。方法 利用高效液相色谱分析仪，对胰岛素制剂中的脱酰胺胰岛素进行检测。结果 酸性胰岛素注射液中的脱酰胺胰岛素的含量随储存时间的延长而增大；中性胰岛素注射液、精蛋白锌胰岛素注射液以及低精蛋白锌胰岛素注射液中的脱酰胺胰岛素含量很少，而且储存时间的长短对其影响很小。结论 本试验对酸性胰岛素注射液的不宜应用提供依据，也为其他剂型提高质量标准提供简易方法。     

Non-invasive routes for insulin administration: current state and perspectives

Diabetes mellitus is a chronic disease that usually requires multiple insulin injections to achieve adequate glycaemic control. This represents a major cause of reduced compliance to treatment. Consequently, other routes for insulin administration have been explored. During recent years, much progress in the development of inhaled insulin has been made. Inhaled insulin has shown favourable properties, such as a rapid onset of action, improved bioavailability and good tolerability; thereby providing satisfaction and ease of administration. However, long-term safety of inhaled insulin needs to be assessed, and the cost would be higher than injectable insulin. Nasal, oral and transdermal insulins are undergoing early phases of pharmacological development. The purpose of this review is to describe the latest developments in the area of non-invasive routes for insulin delivery.     

德谷胰岛素

德谷胰岛素是一种新型超长效胰岛素类似物,其作用时间长,药动学稳定,目前的临床试验结果表明德谷胰岛素可有效控制血糖并降低低血糖发生率。     

HPLC法测定各型胰岛素注射液中脱酰胺胰岛素的变化

目的对酸性胰岛素注射液、中性胰岛素注射液、精蛋白锌胰岛素注射液以及低精蛋白锌胰岛素注射液中的脱酰胺胰岛素进行检查,并对不同储存时间的这几种制剂中的脱酰胺胰岛素进行比较。方法利用高效液相色谱分析仪,对胰岛素制剂中的脱酰胺胰岛素进行检测。结果酸性胰岛素注射液中的脱酰胺胰岛素的含量随储存时间的延长而增大;中性胰岛素注射液、精蛋白锌胰岛素注射液以及低精蛋白锌胰岛素注射液中的脱酰胺胰岛素含量很少,而且储存时间的长短对其影响很小。结论本试验对酸性胰岛素注射液的不宜应用提供依据,也为其他剂型提高质量标准提供简易方法。     

Insulin lispro: a useful advance in insulin therapy

Insulin lispro, the first insulin analogue to be used clinically, was engineered to incorporate the pharmacological advantages of insulin-like growth factor-1 (IGF-1), which has a reduced tendency to self associate, compared to conventional soluble insulin. It is absorbed more quickly following a subcutaneous injection, reaching peak concentrations (approximately twice as much as conventional insulin) and then falls more rapidly. These more physiological insulin profiles are reflected in the results of clinical trials involving patients with Type 1 diabetes, which generally show comparable glycaemic control but reduced rates of hypoglycaemia, particularly at night. The reduction in the rate of hypoglycaemia in the early trials has been generally fairly modest, but more recent publications suggest that increasing experience and more individualised insulin adjustment may lead to a greater impact. Other indications include its use in continuous subcutaneous insulin infusion and postprandially in young children.     

吡格列酮对自发性IGT-OLETF大鼠胰岛素抵抗的改善作用

目的研究胰岛素增敏剂吡格列酮（pioglitazone）对自发性IGT-OLETF大鼠胰岛素抵抗的改善作用。方法血糖测定采用葡糖氧化酶法，血胰岛素测定采用放射免疫法，游离脂肪酸（FFA）采用铜试剂显色法。结果 IGT-OLETF大鼠具有明显糖耐量、胰岛素耐量异常，脂代谢紊乱，胰岛素敏感指数显著降低等特征。吡格列酮可明显提高IGT-OLETF大鼠对外源性胰岛素的反应性，改善其高胰岛素血症，降低血甘油三酯（TG）、FFA水平，降低肝脂含量及骨骼肌TG含量，使胰岛素敏感指数基本恢复正常。结论吡格列酮可明显改善IGT-OLETF大鼠的胰岛素抵抗。     

门冬胰岛素在青少年1型糖尿病胰岛素泵中的应用

目的:评价新型速效胰岛素类似物门冬胰 岛素注射液在中国青少年1型糖尿病胰岛素泵治疗 中的有效性和安全性并与常规人胰岛素泵治疗比 较。方法:10例正在使用胰岛素泵的青少年1型糖 尿病病人,年龄(13±s3)a,进行4wk的纳入期(继 续常规人胰岛素治疗)和8wk的治疗期(改用门冬 胰岛素治疗),共12wk的研究,观察治疗前后餐后 2h血糖(PBG)、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白 (HbA1c)和不良反应。结果:治疗8wk后,FBG, PBG和HbA1c分别由(9±3)mmol·L-1,(11.6± 2.7)mmol·L-1和(9.1±2.0)%下降至(6± 3)mmol·L-1,(7±3)mmol·L-1和(7.6± 1.2)%。PBG和HbA1c与治疗前比较差异有非常 显著和显著意(P<0.01,P<0.05)。治疗过程中 低血糖事件无明显增加。结论:门冬胰岛素能有效 降低青少年1型糖尿病病人PBG和HbA1c,无明显 不良反应,是目前胰岛素泵治疗中满意的胰岛素类 型。