抗原负载树突状细胞对胃癌患者自身肿瘤细胞体外杀伤作用研究

目的探讨用冻融的自身胃癌抗原冲击树突状细胞(DC),体外观察其对自身细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对自身肿瘤细胞杀伤作用的研究。方法从胃癌手术切除肿瘤周围转移引流淋巴结,提取单个核细胞,将贴壁生长的细胞用细胞因子基因重组粒巨集落和生长因子(rhGM-CSF)、基因重组白介素4(rhIL-4)、以及基因重组α-肿瘤坏死因子(rhTNF-α)联合诱导培养DC,然后用经冻融制备的自身肿瘤细胞抗原冲击DC并作用CIK细胞,最后检测CIK细胞体外杀伤三种靶细胞(自身胃癌细胞、K562和SGC-7901细胞)的活性。结果经细胞因子联合诱导培养后,DC含量明显增高,CD1a/CD14和CD80/CD86阳性细胞比刚分离的单个核细胞明显增多。DC和CIK细胞共同培养后,CIK细胞高表达CD3+CD56+。负载胃癌抗原冲击的引流淋巴结DC活化的CIK细胞,杀伤自身肿瘤细胞活性达78.6%,而单纯CIK细胞为35.2%,两者比较有显著性差异p<0.01;而对K562和SGC-7901细胞杀伤活性二者间无明显差异。结论肿瘤周围转移引流淋巴结贴壁细胞在体外能定向诱导扩增出大量DC;胃癌抗原负载的DC和CIK细胞共同培养,可明显提高CIK细胞对自身肿瘤细胞的杀伤活性。     

LSC-DC-CIK对慢性粒细胞白血病干细胞杀伤作用的体外试验研究

目的 研究慢性粒细胞白血病(CML)患者来源的干细胞体外扩增诱导生成树突细胞(DC),与同来源的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养,对慢性粒细胞白血病细胞株K562干细胞的杀伤作用.方法 提取CML患者的骨髓单个核细胞(BMMC),利用流式细胞术(FCM)分选纯化白血病干细胞(LSC)CD34+CD38-CD44+,体外扩增诱导生成LSC-DC.取同一患者骨髓的BMMC诱导出CIK.LSC-DC与CIK共培养,用光学显微镜观察细胞形态,FCM分析LSC-DC和CIK细胞免疫表型,荧光原位杂交(FISH)检测BCR/ABL融合基因在LSC及LSC-DC中的表达,FCM检测LSC-DC-CIK对慢性粒细胞白血病细胞株K562干细胞的杀伤及凋亡情况.结果 白血病干细胞能成功诱导为LSC-DC,其DC成熟免疫表型CD40、CD80、CD83、CD86及受体(HLA-DR)的表达均高于诱导前;共培养后CIK表面标志CD3、CDs、CD56的表达率高于单独培养CIK,差异有统计学意义(P＜0.01).LSC-DC与CIK共培养后对慢性粒细胞白血病细胞株K562干细胞的杀伤率(66.94％)明显高于单独培养的CIK(31.89％),差异有统计学意义(P＜0.01).LSC-DC-CIK可诱导K562细胞凋亡,凋亡率为52.28％±3.71％,与CIK组(37.51％±1.89％)相比,差异有统计学意义(P＜0.01);但对其中白血病干细胞无明显的诱导凋亡作用.结论 CML来源LSC-DC保留有干细胞特征,其与CIK共培养能杀伤慢性粒细胞白血病细胞株干细胞,但无明显的诱导干细胞凋亡作用.     

宫颈癌细胞冻融抗原负载树突状细胞激发细胞毒性T淋巴细胞杀伤宫颈癌细胞的体外研究

目的研究HeLa、SiHa两种宫颈癌细胞株冻融抗原负载的树突状细胞(dendritic cells,DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)体外抗原特异性杀伤官颈癌细胞的能力.方法利用免疫磁珠分离法(MACS)分离纯化脐血CD34 细胞并在体外诱导分化为DC,用反复冻融法分别从两种宫颈癌细胞株(HeLa利SiHa)中提取可溶性冻融抗原并负载DC.流式细胞学检测负载两种抗原后DC表面分子的表达,ELISA法检测DC上清中IL-12的表达,MLR测定DC刺激T细胞增殖的能力,MTT法检测DC经抗原负载后激活的CTL分别对HeLa和SiHa细胞的杀伤作用.结果与未经抗原负载的DC相比,经HeLa和SiHa冻融抗原负载的DC能更好的表达各种DC分化相关抗原(CD1a、CD83、CD80、HLA-DR以及CD54),刺激T淋巴细胞增殖和IL-12分泌的能力也显著加强(P＜0.05).与未经抗原负载相比,两种宫颈癌细胞冻融抗原负载DC后激发的CTL在体外对官颈癌细胞的杀伤能力也明显加强.此外,HeLa细胞抗原负载DC诱导的CTL在体外对HeLa细胞的杀伤率为72.2%,显著高于它对SiHa细胞的杀伤率(22.3%);而SiHa细胞抗原负载DC诱导的CTL对SiHa细胞的杀伤率为69.5%,也明显高于它对HeLa细胞的杀伤率(28.1%),具有显著的抗原特异性.结论经宫颈癌细胞冻融抗原负载DC激活的CTL在体外具有更强的增殖能力,并具有抗原特异性杀伤宫颈癌细胞的作用.     

负载乳腺癌抗原的脐血树突细胞外泌体抗肿瘤免疫作用

目的:探讨负载乳腺癌抗原的人脐带血树突状细胞(DCs)分泌的外泌体的抗肿瘤免疫效应。方法:提取新鲜脐血单个核细胞,体外诱导分化为DCs,提取乳腺癌细胞MCF-7肿瘤抗原,并冲击脐血DCs,加入LPS诱导其成熟,利用流式细胞仪检测表型;超速离心法收获负载抗原的脐血DC外泌体;MTT法检测外泌体诱导的T淋巴细胞增殖反应及其激活的CTL对肿瘤细胞的杀伤效应。结果:脐血DC表面标志CD34、CD80、CD86、CD11c阳性细胞数与新鲜脐血单个核细胞相比明显增加(P<0.05);Western-Blot结果显示,负载乳腺癌的脐血DC外泌体携带有MHC-Ⅱ类、CD40、CD80、CD86分子;成熟脐血DC组及负载乳腺癌抗原脐血DC外泌体对同种异体来源的T细胞均有明显促增殖作用;负载乳腺癌抗原的脐血DC及其外泌体激活的CTL均能对乳腺癌细胞MCF-7产生显著地杀伤作用(P<0.05)。且在效靶比100∶1时,外泌体的杀伤作用高于负载抗原的脐血DC(P<0.05)。结论:负载乳腺癌抗原脐血DC分泌大量外泌体,可促进同种异体T细胞增殖,并能诱导特异性抗乳腺癌的免疫效应。     

恶性肿瘤患者的靶向肿瘤干细胞免疫治疗疗效观察

目的探讨肿瘤干细胞（CSC）抗原负载树突细胞（DC）活化同源的细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）,形成CSC-DCCIK效应细胞,治疗恶性肿瘤的临床疗效。方法选取32例2011年1-12月入院治疗的均经病理检查证实诊断为恶性肿瘤的患者,其中肺癌10例,膀胱癌15例,乳腺癌7例,给予CSC-DC-CIK细胞治疗。结果共培养后CIK表面标志CD3、CD8、CD56的表达率（分别为87.74%±5.23%、82.67%±6.12%、55.62%±8.33%）高于单独培养CIK（分别为61.65%±7.79%、50.21%±4.94%、22.12%±2.85%）,差异均有统计学意义（P〈0.01）。CIK组、DC-CIK组和CSC-DC-CIK组间细胞上清中干扰素、肿瘤坏死因子α和白细胞介素2水平的差异有统计学意义（P〈0.01）。32例患者中,有效患者为3例（9.4%）,显效患者为18例（56.3%）,无效患者6例（18.7%）,5例（15.6%）患者属于其他（没有坚持治疗等）。有效和显效患者共21例,治疗有效率为65.6%（21/32）。结论靶向肿瘤干细胞免疫治疗有很好的应用前景,有待进一步研究。     

树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞联合白细胞介素-2治疗肾细胞癌的临床研究

目的 评价树突状细胞(DC)-细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)即DC-CIK联合白细胞介素(IL)-2治疗肾细胞癌的临床疗效.方法 60例肾细胞癌根治术患者按随机数字表法分为两组,治疗组30例,给予DC-CIK联合IL-2治疗;对照组30例,给予IL-2治疗.观察两组患者的免疫功能、生活质量、生存率及不良反应.结果 治疗组治疗后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及CD16+CD56+较治疗前显著升高,CD8+较治疗前显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05).对照组治疗后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD16+CD56+及CD8+与治疗前比较差异无统计学意义(P＞0.05).治疗组生活质量改善率为83.3％(25/30),高于对照组的56.7％(17/30),差异有统计学意义(P＜0.05).治疗组1年生存率、1年复发率分别为93.3％(28/30)、6.7％(2/30),对照组分别为83.3％(25/30)、13.3％(4/30),两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 DC-CIK联合IL-2治疗可以提高肾细胞癌根治术患者的免疫功能,改善生活质量.     

鼻咽癌应用高效细胞因子诱导的杀伤细胞与放疗联合治疗的临床效果

目的 观察细胞因子诱导的杀伤细胞（cytoking induced killer,CIK）联合放疗对鼻咽癌的疗效.方法 入选2011年3月至2013年5月我院120例经病理确诊的鼻咽癌患者,随机分为两组,试验组60例采用CIK联合放疗,对照组60例采用单纯放疗.观察两组临床疗效及并发症的差异.结果 试验组有效率91.7％高于对照组76.7％,有统计学差异（P＜0.05）;试验组并发症发生率13.3％低于对照组28.3％,有统计学差异（P＜0.05）.结论 CIK联合放疗对鼻咽癌疗效显著,具有较高的临床有效率,消除肿瘤明显,同时患者并发症的发生率较小,能有效消除肿瘤及提高患者生活质量.     

胃癌围手术期血清IL-10、IL-12浓度的变化及其对CIK细胞的影响

目的检测胃癌患者围手术期血清白细胞介素(IL)-10、IL-12的浓度变化及其对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)表型和活性的影响,并探讨其意义。方法用ELISA法检测22例胃癌患者(胃癌组)围手术期血清IL-10、IL-12的浓度;用MTT法测定其围手术期血清对CIK细胞活性的影响;用流式细胞术对其围手术期血清培养的CIK细胞表型(CD3、CD56分子)进行分析,以16例健康人作为对照组。结果胃癌组患者血清IL-10浓度升高,术后血清IL-10浓度逐渐下降,但仍高于对照组;血清IL-12浓度降低,术后血清IL-12浓度逐渐升高,但仍低于对照组;其血清培养的CIK细胞活性及CD3+CD5+6CIK细胞表型平均百分率术后高于术前,均低于对照组。结论胃癌细胞可分泌IL-10,抑制IL-12,进而对CIK细胞表型的表达产生影响,活性产生抑制。术后血清IL-10浓度逐渐下降,IL-12浓度逐渐上升,CIK细胞活性逐渐增高。     

异体CIK细胞治疗放化疗后肝癌患者的临床观察

目的观察异体细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）治疗放化疗后肝癌患者的临床疗效。方法对32例放化疗后肝癌患者进行异体CIK细胞治疗,同时选取32例健康成人为对照组。观察治疗前后外周血免疫指标的变化及其与对照组的比较。比较CIK细胞治疗前后患者肝功能、甲胎蛋白及腹同等指标的变化。结果CIK细胞治疗后,CD3＋、CD4＋T细胞百分牢上升,CD8＋T细胞百分率下调,CD4＋／CD8＋比值上调,较放化疗后有明显改善（P〈0．05）,腹围明显缩小（P〈0．05）;各项生化指标较治疗前有明显改善（P〈0．05）。结论异体CIK细胞治疗安全、可行,可提高放化疗后肝癌患者的免疫功能,减轻肝细胞损伤,改善临床症状,改善生活质量。     

CIK细胞的诱导及其对肝癌细胞毒作用的体外研究

目的体外诱导细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK),并研究其生物学活性。方法从外周血和脐血分离单个核细胞(PBMC),经过细胞因子诱导、培养并扩增CIK细胞,以LAK作比较,流式细胞仪检测CIK细胞表面标志CD3、CD56。3H-TdR释放法检测CIK的增殖能力,MTT法检测对肝癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402,正常胎肝细胞L-02的杀伤活性。结果CIK细胞第二周进入快速增殖期,到第31d扩增倍数超过60倍,CD3+CD56+细胞扩增倍数达800倍以上;CIK对肝癌细胞的杀伤能力明显优于LAK细胞(65%～81%);对正常胎肝细胞的细胞毒作用(<5%)。结论CIK细胞是一种具有很强杀瘤活性的免疫活性细胞,具有临床应用前景。     

血常规检验中全自动血细胞分析仪、血细胞涂片细胞形态学的应用效果

目的:深入研究血常规检验中全自动血细胞分析仪、血细胞涂片细胞形态学的应用效果。方法:随机选择2017年4月~2018年4月到本院进行血常规检验的100例患者作为本次的观察对象,在其他条件相同的情况下,使用全自动血细胞分析仪和血细胞涂片形态学检验的方法对100例患者进行血常规检验,比较两种检验方法的血常规检查结果。结果:单核细胞、淋巴细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞阳性检出率在这两种检验方法的结果中不存在较大差异,只有嗜碱性粒细胞以及异常细胞的指标的阳性检出率存在着较大的差异,全自动血细胞分析仪和血细胞涂片细胞形态学检验差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:在血常规检验过程中应用全自动血细胞分析仪和血细胞涂片细胞形态学检验方法均能够检验出异常的细胞,但检验结果存在着一定的偏差,如果将两组方法结合起来使用能够促进检验准确性的提升。     

Merkel Cell Polyomavirus Strains in Patients with Merkel Cell Carcinoma

We investigated whether Merkel cell carcinoma (MCC) patients in France carry Merkel cell polyomavirus (MCPyV) and then identified strain variations. All frozen MCC specimens and 45% of formalin-fixed and paraffin-embedded specimens, but none of the non-MCC neuroendocrine carcinomas specimens, had MCPyV. Strains from France and the United States were similar.     

Merkel Cell Polyomavirus DNA in Persons without Merkel Cell Carcinoma

Merkel cell polyomavirus (MCPyV) DNA was detected in 88% of Merkel cell carcinomas in contrast to 16% of other skin tumors. MCPyV was also found in anogenital and oral samples (31%) and eyebrow hairs (50%) of HIV-positive men and in forehead swabs (62%) of healthy controls. MCPyV thus appears to be widespread.