红色毛癣菌菌落表型和基因型的分型研究

目的:确定红色毛癣菌菌落表型和基因型的相关性以及与感染部位的关系。方法:收集红色毛癣菌临床分离株138株,采用传统培养方法对红色毛癣菌进行表型分型,利用红色毛癣菌特异性引物扩增TRS-1区重复序列进行种内基因分型,并分析检测结果与感染部位的相关性。结果:138株红色毛癣菌共分离出3种菌落表型:绒毛型、沟纹型和粉末型;分离出5型基因型,其中Type1 64株,Type2 18株,Type3 19株,Type4 12株,Type5 25株。红色毛癣菌的表型和基因型与感染部位均无相关性(均P0.05),红色毛癣菌的菌落表型与基因型有一定的相关性(P0.05)。结论:红色毛癣菌基因型与菌株来源有关而与感染部位无关,可为判断复发和再感染提供依据。     

红色毛癣菌随机扩增DNA多态性分型研究

红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)是皮肤癣菌中最常见的病原菌,我国大多数地区的检出率在30%以上^[1],传统的表型分型法将其分为五型,但是,由于红色毛癣菌大多数为不典型株,而且传代过程中表型特征可发生转变或丧失,因此,表型分型的不稳定性导致它不能准确反映红色毛癣菌的遗传特征。我们应用随机扩增DNA多态性(RAPD)分析法对46株分别从广州、香港、雅加达(印尼)3个城市浅部真菌感染患者获得的红色毛癣菌进行DNA分型,对三地红色毛癣菌的表型特征与基因型别关系进行了初步探讨。     

红色毛癣菌表型稳定性研究

为探讨红色毛癣菌表型的稳定性,所有菌株采用沙堡琼脂试管培养基(SDA)培养。菌株鉴定及分型依据菌落的特征及色素,大小分生孢子的形态,尿素酶试验和毛发穿孔试验。对近期临床分离的10株红色毛癣菌和1株标准株,间隔4周传代1次,共传4次。207株红色毛癣菌共分离出4个表型,其中绒毛型占首位(45.4%),沟纹型(24.1%),羊毛型(20.8%),粉末型(9.7%),未见颗粒型。保存1年后207株有54株发生形态变异,变异率为26.1%,沟纹型变异最小,相对稳定。11株红色毛癣菌传代后菌落形态或色素发生变异。红色毛癣菌表型不稳定,保存和传代后的菌落形态或产色均易发生变异;沟纹型变异率最低。     

红色毛癣菌和须癣毛癣菌的PCR指纹分析

红色毛癣菌和须癣毛癣菌的传统鉴别主要依据培养形态、生理生化等方法,但红色毛癣菌的菌落产红现象受培养基类型、 pH、培养温度等因素的影响 [1],我们应用 PCR方法,以微小卫星 DNA引物,对这 2种癣菌的基因组 DNA进行扩增,可以在很短时间内把它们区分开来。 泳道 1为 Markerλ DNA/EcoRⅠ＋ HindⅢ,泳道 2、 7、 8、 9为红色毛癣菌,泳道 3～ 6为须癣毛癣菌 图 1 (GACA)4作引物的 PCR扩增结果 一、材料与方法 (一 )实验菌株：本研究采用红色毛癣菌临床分离株 23株 ,须癣毛癣菌临床分离株 11株。红色毛癣菌中 11株来自上海…     

传代对红色毛癣菌表型和核糖体基因影响的研究

目的通过对传代前后红色毛癣菌表型和核糖体基因的分析,探讨传代对表型变异和核糖体基因的影响。方法采用传统方法鉴定原代及传代后的5株红色毛癣菌临床菌株及1株标准菌株;对原代及20代的菌株核糖体保守区(5.8S和ITS2)和非转录间隔区(NTS)进行PCR扩增和基因测序,比较原代与传代后表型及核糖体基因有无变化。结果红色毛癣菌菌株在传代过程中发生多次表型变异,且变异可逆转。同一菌株的原代与20代PCR扩增指纹图一致,基因序列亦基本一致,其中20代标准株菌株在TRS-1区可见个别碱基的突变。结论红色毛癣菌传代过程中表型极易发生变异和逆转,而核糖体基因相对稳定。     

播散型红色毛癣菌肉芽肿5例

通过对1998～2004年我院5例播散型红色毛癣菌肉芽肿患者的临床资料回顾性分析,探讨播散型红色毛癣菌肉芽肿的临床特征、病理表现及治疗方案。5例均口服伊曲康唑治疗,4例随诊未见复发,1例经常复发,与其疗程不足有关。     

某些皮肤癣菌凝集素结合形式

我们采用凝集素ＡＢＣ组织化学染色方法对１４种皮肤癣菌的凝集素糖基受体进行了检测，结果报道如下。一、材料和方法１．菌种：红色毛癣菌、须癣毛癣菌、断发毛癣菌、马类毛癣菌、犬小孢子菌、铁锈色小孢子菌、石膏样小孢子菌、絮状表皮癣菌均为本科真菌室保存菌种；紫色...     

红色毛癣菌的基因分型研究

目的 探讨探针与DNA印迹杂交法对红色毛癣菌的基因分型并分析其基因型与来源地区的相关性。方法 用溴化十六烷基三甲铵（CTAB）法提取DNA，以皮肤癣菌的特异性引物NS5[5′-AACTAAAGGAATTGACGGAAG-3′]与ITS4[5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′]为引物，以红色毛癣菌的标准菌株为模板，用PCR法扩增出其rDNA部分18S区，ITSI区，5.8S区和ITSⅡ区为探针，用随机引物法将探针标记^32P，用EcoRI酶切基因组DNA，采用DNA印迹的标准流程将酶切的基因组DNA与探针杂交；显示的不同带型，以此作为红色毛癣菌基因分型的依据。结果 所试49株红色毛癣菌（南京21株，大连26株，北京2株）分为20型（A-T型），其中A-C型占48.98%。南京株绝大多数为3条带，大连株大部分为4条带。结论 用ITS区域探针与DNA印迹杂交法对红色毛癣菌基因组分型敏感性强，分辨力高；南京与大连两地区红色毛癣菌DNA分型具有明显差异，DNA分型对红色毛癣菌病的流行病学，临床疗效的判定以及指导用药均具有重要价值。     

皮肤癣菌的分子生物学研究进展

皮肤癣菌是浅部真菌病的致病菌 ,对其分子生物学研究主要集中于基因结构的分析、基因诊断、基因分类等方面。目前 ,已在红色毛癣菌等某些癣菌的线粒体DNA上发现了重要的呼吸链酶 ,如细胞色素氧化酶、NADH脱氢酶的结构基因 ,以及诸多氨基酸的tRNA基因簇 ;建立了用真菌特异性通用引物或癣菌特异性引物聚合酶链反应诊断皮肤癣菌病的方法 ;应用限制性酶切片段多态性研究、随机扩增多态DNA分析、聚合酶链反应等方法进行皮肤癣菌的基因分类 ,分析癣菌的种间差异 ,对一些重要的皮肤癣菌 (如红色毛癣菌、须癣毛癣菌 )还进行了种内的分型研究。     

尿素-吲哚培养液快速鉴别石膏样毛癣菌和红色毛癣菌

石膏样毛癣菌（石毛）和红色毛癣菌（红毛）是最常见的皮肤癣菌［１］，因菌落形态及显微结构相近，常不易鉴别。我们用尿素－吲哚培养液对医学真菌中心保藏的３个属１７种皮肤癣菌标准株和临床分离的３个属７种１３８株皮肤癣菌进行实验观察，现总结报告如下。一、菌种标准株为中国微生物菌种保藏管理委员会医学真菌中心保藏的菌种，分别是：毛癣菌属：红毛（ＩＤ００００１），石毛（ＩＤ０００１２），许兰氏毛癣菌（许兰：ＩＤ００００２），紫色毛癣菌（紫毛：ＩＤ００００４），断发毛癣菌（断毛：ＩＤ０００１８），猴类毛癣菌（猴毛…     

红色毛癣菌对动物毛发降解的实验研究

目的:研究红色毛癣菌对动物毛发的降解作用.方法:采用体外液体培养红色毛癣菌,加入数根小鼠或豚鼠毛发,以低浓度的酵母浸膏提供菌株生存所必需的营养,菌株生长所需的碳源和氮源由菌株分解动物毛发获得,培养2周后观察菌落的生长情况及动物毛发结构的改变,须癣毛癣菌作为阳性对照.结果:2周后,红色毛癣菌和须癣毛癣菌在豚鼠和小鼠毛发上均能生长,菌落生长后,光镜下可见动物毛发正常结构破坏,横纹变模糊消失.结论:红色毛癣菌能在体外分解豚鼠或小鼠的毛发作为营养,维持菌落的生长.     

Biolog微生物自动分析系统建立六种皮肤癣菌的鉴定数据库

目的 探讨Biolog微生物自动分析系统鉴定皮肤癣菌的应用前景。 方法 采用表型及DNA测序的方法,将临床收集的菌株鉴定至种;选取红色毛癣菌、须癣毛癣菌、断发毛癣菌、犬小孢子菌、石膏样小孢子菌和絮状表皮癣菌6种常见皮肤癣菌接种于FF微量板,记录皮肤癣菌对95种不同碳源的利用情况,描述其各自的生长反应谱,建立鉴定数据库。结果 6种皮肤癣菌对一些碳源的利用具有明显的差别,通过是否利用棉子糖可以将须癣毛癣菌、断发毛癣菌同其他4种毛癣菌进行区分;而葵二酸可以区分须癣毛癣菌、断发毛癣菌;通过延胡索酸和琥珀酸可以将红色毛癣菌同石膏样小孢子菌、絮状表皮癣菌和犬小孢子菌进行区分;通过是否利用丙氨酸和苯丙氨酸可以对石膏样小孢子菌进行鉴定。而糊精的利用可以区分絮状表皮癣菌和犬小孢子菌。结论 Biolog微生物鉴定系统采用一种特殊的表型鉴定方法,可以对常见皮肤癣菌进行鉴定。     

海南地区红色毛癣菌对5种抗真菌药敏感性检测

目的:检测本地区红色毛癣菌对常用抗真菌药物的敏感性,为临床诊疗提供依据.方法:依据CLSIM38-A2方案的微量稀释法,对本地区浅部感染分离的103株红色毛癣菌进行5种抗真菌药物体外敏感性测定,每株菌每个药物浓度均同时重复2孔.结果:体外药敏实验结果显示,红色毛癣菌对5种药物表现出良好的体外药物敏感性,其中特比萘芬(G...     

地塞米松干预下红色毛癣菌对特比萘芬敏感性的影响

目的:探讨地塞米松干预下分离自不同部位的红色毛癣菌对特比萘芬的敏感性。方法:收集不同部位红色毛癣菌共20株,其中体癣、股癣、手足癣和甲癣各5株,采用(NCCLS)M38-A方案微量稀释法,测定不含地塞米松与含不同浓度地塞米松影响下特比萘芬对红色毛癣菌的最小抑菌浓度(MIC)。结果:当地塞米松的浓度为0.05%、0.1%、0.2%时,红色毛癣菌的MIC几何均值分别为0.081μg/mL、0.092μg/mL和0.109μg/mL,与空白组比较无显著性差异(P>0.05);当其浓度为0.4%、0.8%时,红色毛癣菌的MIC几何均值分别为0.196μg/mL、0.319μg/mL,与空白组比较有显著性差异(P<0.05)。分离自四个不同部位的红色毛癣菌MIC几何均值间无显著性差异(P>0.05)。结论:当地塞米松浓度为0.4%、0.8%时可显著降低红色毛癣菌对特比萘芬的敏感性;不同部位红色毛癣菌对特比萘芬敏感性无显著性差异。     

播散性红色毛癣菌肉芽肿一例

目的报道1例播散性红色毛癣菌肉芽肿。方法对患者的临床资料、真菌学检查、组织病理及疗效进行分析。结果患者为46岁女性,手足、躯干红斑、脱屑30年,头皮、躯干、上肢结节、溃破2年。检查见头皮、颈、躯干和上肢有紫红色浸润性斑块、结节,部分皮损表面破溃、渗液、结痂。皮损内穿刺液及甲直接镜检菌丝阳性,培养为红色毛癣菌生长。皮损病理检查:真皮内可见上皮细胞样肉芽肿,其中央大片坏死,周围见结节样上皮样细胞团块,伴少许多核巨细胞、淋巴细胞及嗜酸粒细胞浸润。PAS染色真皮内见真菌菌丝。诊断为播散性红色毛癣菌肉芽肿。伊曲康唑治疗3个月后皮损消退,遗留萎缩性瘢痕。用药期间未见不良反应。结论播散性红色毛癣菌肉芽肿临床少见,伊曲康唑疗效满意。     

盐酸小檗碱对红色毛癣菌形态学的影响

目的观察红色毛癣菌在盐酸小檗碱作用下形态学变化。方法应用美国CLSI制订的标准M38-A方案,采用MTT微量稀释法测定盐酸小檗碱对红色毛癣菌的体外抑制率。将盐酸小檗碱作用前后的红色毛癣菌制成标本,分别在扫描电子显微镜和透射电子显微镜下观察形态学变化。结果盐酸小檗碱作用于红色毛癣菌后,扫描电子显微镜下菌丝表面变粗糙,菌丝萎缩、皱瘪、粗细不一,出现多处破损、断裂和小的破坏性孔洞。透射电子显微镜下细胞变形,呈不规则形;细胞壁粗糙,厚薄不均;细胞浆结构模糊,细胞核凝固、破碎。结论盐酸小檗碱使红色毛癣菌的形态发生明显变化。     

红色毛癣菌基因型稳定性的研究

目的探讨红色毛癣菌基因型的稳定性。方法采用随机引物PCR法和探针与DNA印迹杂交法。以CTAB法提取DNA。随机引物为OPAA11[5-′ACCCGACCTG-3′],印迹法以NS5和ITS4(真菌的特异性引物)为引物,以红色毛癣菌的标准株为模板,扩增出rDNA的部分18S区、ITSⅠ区、5.8S区和ITSⅡ区为探针,并用随机引物法将探针用P32标记,与EcoRⅠ酶切的基因组DNA杂交。结果①AP-PCR法:红色毛癣菌扩增的主要带型是2.2,1.7,1.3,0.9,0.7 kb,所试红色毛癣菌传代前后扩增带型均无变化。②探针与DNA印迹杂交法:原代(1代)与传代后的(2,3,4代)杂交带型一致,11株红色毛癣菌均表现为3条带,分两型(分子量分别为2.4,3.9,5.9 kb和2.4,4.4,6.5 kb)。结论红色毛癣菌基因型稳定。     

常见皮肤癣菌代谢产物体外对人角质形成细胞免疫活性的影响

目的探讨常见致病真菌代谢产物对人角质形成细胞(HKC)产生细胞因子的影响。方法红色毛癣菌、须癣毛癣菌、絮状表皮癣菌、犬小孢子菌和白念珠菌常规培养,提取培养上清液后按不同稀释度加入体外培养的HKC中,24h后观察细胞形态变化,ELISA法检测细胞上清液IL-8,IL-6及TNF-α的浓度。结果5个组均使细胞形态发生变化。在红色毛癣菌、白念珠菌、须癣毛癣菌组1∶10,犬小孢子菌组1∶1时,HKC上清液中的IL-8及IL-6均高于空白对照(P<0.01)。结论体外培养的真菌培养上清液对HKC的活性有明显的影响。浓度较高时可直接导致HKC的死亡;浓度低时可明显刺激HKC增加细胞因子的产生,其中红色毛癣菌作用最强。     

琼脂稀释法检测6种药物抗皮肤癣菌MIC

本试验用琼脂稀释法测定了29株皮肤癣菌对两性霉素B、5-氟胞嘧啶、伊曲康唑、咪康唑、克霉唑和环吡酮胺的MIC值。材料和方法受试菌种：须癣毛癣菌12株，红色毛癣菌4株，紫色毛癣菌1株，断发毛癣菌1株，石膏样小孢子菌2株，犬小孢子菌7株，絮状表皮癣菌2株。须癣毛癣菌所有菌株均为临床分离的菌株，纯化后结合菌落和显微镜下特征鉴定菌种。     

须癣毛癣菌表型的研究

目的：采用传统方法对须癣毛癣菌进行表型的分型。方法：采用沙氏琼脂试管培养基（SDA）培养。菌株鉴定及分型依据菌落的形态，菌丝及大小分生孢子的特征，尿素酶试验，葡萄糖米粉试验和体外毛发穿孔试验。结果：36株须癣毛癣菌共分为5个表型，羊毛状、紧密状和绒毛状居多，三型占72．22％，颗粒状最少。螺旋菌丝主要见于绒毛状和粉末状；羊毛和紧密状的镜下结构相似，见大量细长菌丝及少量圆形小分生孢子；颗粒状的大分生孢子最多。结论：须癣毛癣菌分为5个表型，各型镜下结构不同。