牙髓干细胞的体外分离培养与鉴定

干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞,具有两个基本性质:(1)自我更新能力;(2)分化能力.干细胞包括胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)和成体干细胞(adult stem cells,AS细胞).牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)存在于牙髓中,是AS细胞的一种,现已成为牙组织工程新的种子细胞.本文综述了DPSCs的提出、分离培养、鉴别、影响因素及研究前景.     

IGF-1、bFGF对人牙髓干细胞的体外诱导分化的影响

目的研究IGF-1、bFGF对人牙髓干细胞分化的影响.方法酶消化法获得人牙髓干细胞,形态学观察,计算细胞克隆形成率;第3代牙髓干细胞,以IGF-1、bFGF细胞因子诱导,免疫组化染色和RT-PCR方法检测牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein, DSP)、牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1, DMP-1)和牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein, DSPP)的mRNA的表达.结果人牙髓干细胞呈集落状生长,在体外具有一定的克隆形成能力,经细胞因子刺激后细胞表达DSP、DMP-1蛋白和DSPP的mRNA.结论人牙髓组织中有呈克隆样生长的成体干细胞,IGF-1、bFGF可诱导人牙髓干细胞定向分化.     

大鼠牙髓干细胞的分离培养与鉴定

目的:分离培养大鼠牙髓干细胞并对其进行生物学鉴定.方法:采用酶消化法分离获得大鼠牙髓干细胞,有限稀释法纯化细胞,测定细胞克隆形成率,细胞计数法测生长曲线,抗波形丝蛋白及角蛋白、抗STRO-1免疫化学染色.体外分化诱导实验检测细胞的多向分化能力.结果:分离纯化获得的大鼠牙髓干细胞在体外具有一定的克隆形成能力,波形丝蛋白、STRO-1均有表达.诱导条件下部分牙髓干细胞具有多向分化的潜力,符合干细胞特征.结论:成功从大鼠牙髓中获取牙髓干细胞.     

人牙髓干细胞体外二维和三维培养的实验研究

目的分离人牙髓干细胞并在体外进行二维和三维培养.方法从健康成人拔除的第二前磨牙获得牙髓,酶消化法分离获得牙髓干细胞,并进行鉴定.体外对牙髓干细胞在二维和三维空间里进行培养,并比较其增殖效率.结果人牙髓干细胞在体外呈克隆样生长,诱导条件下可向肌细胞和成牙本质细胞方向分化.在二维空间里培养,细胞密度提高了4.12倍,而在三维空间里培养,细胞密度提高了11.06倍.培养后细胞生物学特性未发生改变.结论成功地从人第二前磨牙中分离到了牙髓干细胞;三维培养是扩增牙髓干细胞的有效方法.     

体外诱导牙髓干细胞成牙本质向分化的研究进展

牙髓干细胞在体内牙髓组织特殊的微环境中,能保持干细胞未分化状态,有分化形成多种细胞的功能特性. 在某些条件下,牙髓干细胞可以向成牙本质样细胞方向分化. 目前众多研究表明,在体外培养下不同的诱导因子,可以作为调控器通过相关的信号通路在一定程度上参与调控牙髓干细胞成牙本质向分化和定向诱导. 本文对近年来诱导因子与牙髓干细胞成牙本质分化的关系研究做一综述.     

诱导牙髓干细胞神经向分化的研究进展

牙髓干细胞来源于神经嵴细胞,与其他来源的干细胞相比,具有更高的神经源性潜能。牙髓干细胞可以分化为雪旺细胞、胶质细胞以及神经元前体细胞,弥补了神经元细胞缺乏再生能力的缺陷。牙髓干细胞还可分泌神经营养因子,修复和保护神经。本文就目前诱导牙髓干细胞神经向分化的研究进展作一综述。     

氯化锂对牙髓干细胞增殖与分化的影响

目的 检测氯化锂对人牙髓干细胞（dental pulp stem cells, DPSCs)细胞增殖与分化的影响。方法 收集18~25岁患者因正畸拔除的健康完整前磨牙或智齿,用改良组织块法分离培养牙髓干细胞;利用免疫荧光染色与流式细胞术对分离培养的细胞进行细胞来源鉴定;利用细胞计数试剂盒（CCK-8）测定不同浓度氯化锂对牙髓干细胞增殖的影响,选择适宜浓度的氯化锂对牙髓干细胞进行矿化诱导培养,利用茜素红染色观察矿化结节形成以及荧光定量PCR实验研究氯化锂对牙髓干细胞分化的影响。结果 流式细胞术及免疫组化染色结果显示原代人牙髓干细胞来源与标志物与间充质干细胞表现一致;CCK-8法检测结果表明2.5mmol/L的氯化锂对牙髓干细胞增殖具有促进作用;选用该浓度下的氯化锂对牙髓干细胞进行矿化诱导培养,茜素红染色与荧光定量PCR结果显示,氯化锂对牙髓干细胞牙向分化具有促进作用。结论 一定浓度的氯化锂对牙髓干细胞细胞增殖与细胞分化具有促进作用。     

不同细胞标记物对大鼠牙髓干细胞体外标记的生物学影响

目的 通过体外实验,对比氯甲基苯甲酰氨(CM-DiI)和4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)这两种不同细胞标记物对大鼠牙髓干细胞生物学性能的影响,为需要进行细胞标记的实验研究提供理论参考依据.方法 采用酶解组织块法培养大鼠牙髓细胞并对其进行纯化,通过免疫组化鉴定细胞来源,并进行细胞体外多向诱导分化能力实验.利用5...     

人类年轻恒牙牙髓干细胞体外多向分化的能力

目的:从人类的年轻恒牙中分离、培养牙髓间充质细胞,并探讨其基本的干细胞生物学特性及体外的多向分化能力.方法:对人类的正畸减数年轻恒前磨牙中分离培养的牙髓细胞进行相差显微镜和透射电镜观察,利用流式细胞仪分析牙髓间充质细胞表型特征和细胞周期时相,并在体外进行定向诱导.结果:从年轻恒牙牙髓中分离培养得到的牙髓间充质细胞为成纤维样;细胞器发育较好;有间充质干细胞的表面特征:CD90,CD44和CD147阳性细胞的比例很高,CD34,CD38,CD45和 HLA-DR的阳性比例很低;有很强的增殖生长能力;经体外诱导年轻牙髓细胞可在体外向成骨细胞、脂肪细胞和神经细胞分化,但不能被诱导成为软骨细胞.结论:从人类年轻恒牙牙髓中可以分离培养得到的牙髓间充质干细胞,具有较高的增殖能力和间充质干细胞表面特征,在体外诱导下能分化为成骨细胞、脂肪细胞和神经元,具有多向分化的潜能.     

牙髓炎症中白细胞介素-17调节单核细胞功能和分化的研究

目的 探讨牙髓炎症中白细胞介素(IL)-17募集单核细胞并调节其分化的作用。方法 肿瘤坏死因子(TNF-α)刺激牙髓细胞,模拟炎症状态,实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)、酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-17的表达;IL-17重组蛋白刺激牙髓细胞,收集培养基上清,通过Transwell小室实验检测IL-17或受IL-17刺激的牙髓细胞培养基上清对单核细胞的趋化作用;采用结晶紫染色和吞噬实验分别检测IL-17或受IL-17刺激的牙髓细胞培养基上清对单核细胞贴壁和吞噬的影响;IL-17刺激人单核细胞系(THP-1)细胞,RT-qPCR和ELISA分别检测TNF-α、IL-1β的表达,流式细胞检测THP-1细胞表面标志物分子簇80(CD80)的表达变化。结果 牙髓炎症中IL-17表达上调,IL-17使单核细胞贴壁增多,吞噬功能增强,TNF-α、IL-1β及CD80表达上调。结论 IL-17在牙髓炎症中高表达,其本身对单核细胞有趋化作用,并可通过刺激牙髓细胞产生趋化因子2(CCL2)放大趋化作用;IL-17可以调控单核细胞向巨噬细胞分化。     

免疫磁珠法筛选人乳牙牙髓干细胞及其培养鉴定

摘要：目的应用免疫磁珠法分离筛选人乳牙牙髓干细胞,并做培养鉴定。方法采用STRO-1为标记物以免疫磁珠分离
筛选人乳牙牙髓干细胞,观察细胞形态及生长情况,流式细胞仪检测细胞表型,并检测细胞体外多向分化能力。结果应
用免疫磁珠法筛选人乳牙牙髓细胞可获得乳牙牙髓干细胞,经统计学处理证明看其生长速度慢于牙髓细胞,细胞表型分
析证实CD29、CD105高表达,CD34、CD45低表达。矿化诱导和成脂诱导证实STRO-1+乳牙牙髓细胞具有干细胞多向分
化的能力。结论免疫磁珠法是有效的分离纯化人乳牙牙髓干细胞的方法。所分离的细胞具有干细胞的表型特点及多向
分化能力。     

人牙髓干细胞的体外分离、培养及鉴定

目的 体外分离、培养及鉴定人牙髓干细胞,构建人牙髓干细胞系.方法 采用组织块酶消化法获取原代细胞,通过有限稀释克隆法纯化细胞;流式细胞仪检测细胞表面标记物;分别进行矿化诱导和成脂诱导,观察诱导后细胞矿化结节和脂滴形成情况.结果 原代培养后5～7d有细胞从组织边缘爬出,有限稀释法获得相对纯化均一的牙髓干细胞;流式细胞仪分析细胞表面抗原,CD29、CD90、CD105、CD146、STRO-1表达阳性,CD34及CD45表达阴性;矿化诱导的细胞茜素红染色镜下见矿化结节形成,成脂诱导的细胞油红O染色镜下见脂滴形成.结论 分离所得的细胞具有人牙髓干细胞的生物学特性,成功构建人牙髓干细胞系.     

CGRP影响人牙髓干细胞增殖分化的研究

目的 研究降钙素基因相关肽(CGRP)对人牙髓干细胞增殖分化的调控作用,并初步探讨CGRP的调控信号通路.方法 首先获取健康的牙髓,体外培养并筛选牙髓干细胞;采用MTT法检测不同浓度的CGRP对牙髓干细胞的增殖作用,获取适宜的作用浓度;利用茜素红染色法观察CGRP作用下牙髓干细胞形成矿化结节的效果;在实时定量RT-PCR法及免疫印迹法检测CGRP作用下牙髓干细胞中Ⅰ型胶原(Col-1)、转录因子Runx2的mRNA和蛋白表达水平;最后利用实时定量RT-PCR法检测MAPK信号通路抑制剂作用下CGRP对牙髓干细胞中Ⅰ型胶原、Runx2 mRNA表达水平的影响.结果 经过筛选培养获得生长稳定的牙髓干细胞;MTT法检测可知CGRP可促进牙髓干细胞的增殖,在CGRP的浓度达到10-7 mol/L时效果最显著;在CGRP作用牙髓干细胞28 d后,经茜素红染色可见矿化结节;经实时定量RT-PCR法和免疫印迹法检测可知CGRP作用下牙髓干细胞中Col-1、Runx2的mRNA和蛋白表达水平得到显著提高;MAPK信号通路中ERK激酶通路能够调控CGRP作用下牙髓干细胞中Runx2表达的水平,ERK激酶和p38通路能够调控CGRP作用下牙髓干细胞中Col-1表达的水平.结论 CGRP能够促进牙髓干细胞的增殖分化,这一作用受到MAPK信号通路的调控.     

巨噬细胞炎性蛋白1α mRNA在人炎症牙髓组织中的表达及意义

目的:探讨炎症牙髓中巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)的表达,揭示MIP-1α在牙髓炎发生及发展中的可能作用.方法:选择正常牙髓组织及炎症牙髓组织各4例,采用HE染色观察正常牙髓组织及牙髓炎牙髓组织形态学改变,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测正常牙髓组织及牙髓炎牙髓组织中MIP-1α的表达.结果:正常牙...     

α7烟碱型乙酰胆碱受体基因敲除小鼠牙髓炎模型的构建

目的：构建α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7 nicotine acetylcholine receptor,α7 nAChR）基因敲除小鼠牙髓炎模型,为研究α7 nAChR在牙髓炎发生发展过程中的作用机制提供实验模型。方法：取16只α7 nAChR基因敲除（knock out,KO）小鼠和16只野生型（wide type,WT）C57BL/6鼠的上颌第一磨牙的牙髓暴露法建立牙髓炎模型,分别在牙髓暴露后1、3、7 d处死小鼠,HE染色、免疫组化检测牙髓组织NOD样受体蛋白3（NOD?like receptor protein 3,NLRP3）表达情况。结果：HE染色结果显示牙髓暴露后1 d,α7 nAChR KO鼠及WT鼠的穿髓孔周围血管充血、组织水肿;牙髓暴露后3 d,炎症细胞聚集,α7 nAChR KO鼠炎症细胞聚集已达冠髓底部,WT鼠的炎症细胞主要聚集在穿髓孔周围的牙髓组织中;牙髓暴露后7 d,α7 nAChR KO鼠的牙髓炎症细胞浸润至根部牙髓,而 WT鼠的牙髓炎症细胞仍然主要聚集于冠髓底部。免疫组化染色结果显示,牙髓暴露后,α7 nAChR KO鼠牙髓NLRP3表达高于WT鼠,差异有统计学意义（P < 0.05）。结论：成功建立了α7 nAChR基因敲除鼠的牙髓炎模型,而且α7 nAChR基因敲除鼠牙髓炎症浸润明显快于WT小鼠。     

5-氮胞苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究

目的:研究体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(mensenchymal stem cells,MSCs) 经5-氮胞苷(5-aza) 诱导定向分化为心肌样细胞形态学及分子生物学特征?方法:SD大鼠股骨骨髓经密度梯度离心及贴壁分离培养传代MSCs,体外用5-aza定向诱导向心肌样细胞分化?相差显微镜观察心肌样细胞形态学变化?免疫组化检测肌钙蛋白T(cTnT)?α-肌动蛋白和缝隙连接蛋白Cx43表达?结果:密度梯度离心及贴壁法分离培养的MSCs生长稳定,增殖快?5-aza诱导后,部分细胞形态发生变化,有肌管样结构形成?随诱导后培养时间延长MSCs中cTnT?α-肌动蛋白和缝隙连接蛋白Cx43表达逐渐增强?结论:密度梯度离心及贴壁分离培养可获得大量纯度较高的骨髓间充质干细胞?经5-aza诱导骨髓间充质干细胞体外可分化为心肌样细胞?     

牙髓干细胞研究现状

牙髓干细胞是一种具有高度增生、自我更新能力和多相分化潜能的成体干细胞,在牙髓修复和牙齿再生中发挥重要作用。近年来对牙髓干细胞的培养、细胞表型和功能等方面已进行了大量研究,本文就牙髓干细胞的研究现状作一综述。     

体外培养乳牙牙髓干细胞向血管内皮细胞 定向分化的实验研究

目的 研究体外培养乳牙牙髓干细胞向血管内皮细胞的定向分化。方法 选取南方医科大学口腔医 院29 例健康儿童的滞留乳牙，在4 h 内进行乳牙牙髓干细胞的原代提取。采用免疫磁珠分选法进行细胞分选， 并对分选出的细胞进行特定的血管内皮细胞定向诱导。对乳牙牙髓干细胞及血管内皮细胞定向诱导后的细胞进 行镜下形态观察、血管生成实验，以及免疫表型鉴定。结果 镜下形态观察显示，经过血管内皮定向诱导的乳牙 牙髓干细胞呈典型血管内皮细胞的形态特征；血管生成实验表明，经过血管内皮定向诱导的乳牙牙髓干细胞可 呈现明显的血管样结构；免疫表型鉴定显示经过血管内皮定向诱导的乳牙牙髓干细胞血管内皮细胞表面抗原呈 阳性。结论 乳牙牙髓干细胞可定向分化为血管内皮细胞。     

小鼠牙髓干细胞培养及诱导分化

目的 :分离、培养小鼠牙髓干细胞并诱导分化 .方法 :采用酶消化培养法获得小鼠的单个牙髓细胞悬液 ,细胞密度调整为 1× 10 4/孔细胞 ,用 2 0 0mL·L -1胎牛血清的α MEM培养液培养 14d ,挑出细胞克隆消化传代 ,TGF β、BMP2 、bFGF细胞因子诱导 ,PCR检测DSPP的mRNA的表达 .结果 :小鼠牙髓细胞呈集落状生长 ,克隆形成率为 1.6 -2 .5个 / 10 4细胞 ,所形成的集落细胞结合紧密 ,细胞体积小、胞核大 ,经细胞因子刺激后的细胞表达DSPP的mRNA .结论 :培养的小鼠牙髓集落状生长的细胞具有干细胞增殖快等特性 ,细胞因子可诱导小鼠牙髓干细胞定向分化     

胰岛素样细胞生长因子-1、碱性成纤维细胞生长因子及转化生长因子α对人表皮干细胞增殖的影响

目的 表皮干细胞是组织工程化皮肤的"种子细胞".文中研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、胰岛素样细胞生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)和转化生长因子α(transforming growth factor α,TGFα)对人表皮干细胞增殖的影响.方法 采用两步酶消化法和Ⅳ型胶原差速贴壁相结合的方法获得人原代表皮干细胞,将表皮干细胞分为A组(K-SFM)、B组(K-SFM+bFGF)、C组(K-SFM+IGF-1)及D组(K-SFM+TGFα)进行培养.比较不同组之间表皮干细胞的克隆形成率、生长增殖、生长曲线和细胞周期等指标.结果 B组、C组及D组培养的表皮干细胞在细胞增殖、细胞克隆率方面检测结果均明显高于A组(P<0.05);流式细胞仪检测B组、C组与A组及D组处于G0/G1细胞比例比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 IGF-1、bFGF及TGF-α均对表皮干细胞的增殖有促进作用,IGF-1及bFGF对表皮干细胞表型的维持有较好的作用.