HIF-1α基因沉默对人肺腺癌细胞A549裸鼠移植瘤生长及survivin表达的影响

目的观察缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因沉默对肺癌的抑瘤效应和survivin表达的影响。方法将实验用肺腺癌A549细胞分为空白对照组、无意义序列转染组和实验组,接种裸鼠,建立裸鼠荷瘤模型,观测HIF-1α-MiRNA对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用和对survivin表达的影响。采用免疫组化SP法,检测HIF-1α和survivin蛋白在裸鼠移植瘤中的表达。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测HIF-1α和survivin mRNA的表达。采用原位末端标记（TUNEL）法检测肿瘤组织中细胞凋亡。结果实验组裸鼠肿瘤的生长速度较空白对照组、无意义序列转染组明显减慢（P〈0.05）。接种60 d后处死裸鼠,实验组裸鼠的肿瘤重量为（0.59±0.28）g,明显轻于空白对照组[（1.90±0.18）g]和无意义序列转染组[（1.66±0.24）g,P〈0.01]。实验组肿瘤组织中HIF-1αmRNA和蛋白的相对表达量分别为（0.45±0.04）%和（24.56±5.83）%,survivin mRNA和蛋白的相对表达量分别为（0.32±0.02）%和（29.08±3.99）%,均明显低于空白对照组、无意义序列转染组（P均〈0.05）。但实验组肿瘤组织中凋亡细胞的数量显著高于对照组。结论以HIF-1α为靶点的基因治疗,可能通过下调靶基因survivin的表达促进肺癌细胞凋亡,发挥抑制肿瘤生长的作用。     

奥希替尼联合贝伐珠单抗治疗伴EGFR T790M突变肺腺癌的疗效与机制研究

  目的  通过移植瘤动物实验探讨奥希替尼联合抗VEGF单克隆抗体靶向药物贝伐珠单抗的疗效及作用机制,为进一步临床试验提供理论依据。  方法  构建EGFR T790M突变的H1975人肺腺癌细胞移植瘤动物模型。实验分组:低剂量奥希替尼组、高剂量奥希替尼组、低剂量奥希替尼联合贝伐珠单抗组、高剂量奥希替尼联合贝伐珠单抗组。每组各5只小鼠,给药  方法  奥希替尼2.5 mg/kg/d或5 mg/kg/d,采用每天灌胃处理;贝伐珠单抗5 mg/kg,每周2次腹腔注射。接种后和给药期间绘制肿瘤生长曲线,给药2周后处死裸鼠,活检整个肿瘤。免疫组织化学SP法检测肿瘤HIF-1α、VEGF和微血管密度（microvessel density,MVD）。应用Western blot法检测EGFR及其下游AKT和ERK信号通路蛋白的表达。  结果  给药2周后,高剂量奥希替尼单药组较低剂量奥希替尼单药组肿瘤体积明显缩小,HIF-1α、VEGF表达率和MVD显著降低（P < 0.05）,p-EGFR、p-AKT和p-ERK表达减少（P < 0.05）。低剂量奥希替尼联合贝伐珠单抗组肿瘤体积明显小于低剂量奥希替尼单药组（P < 0.05）,上述因子均明显降低（P < 0.05）。低剂量奥希替尼联合组与高剂量奥希替尼单药组比较,肿瘤体积差异无统计学意义（P=0.178）,p-EGFR、p-AKT、p-ERK表达差异无统计学意义（P＞0.05）。高剂量奥希替尼联合组与高剂量奥希替尼单药组体积差异无统计学意义（P=0.642）。两个联合组之间,体积差异均无统计学意义（P=0.072）,上述因子表达差异均无统计学意义（P＞0.05）。  结论  贝伐珠单抗能够显著增加奥希替尼对伴EGFR T790M突变的肺腺癌移植瘤的杀伤能力。贝伐珠单抗与奥希替尼协同作用是通过降低肿瘤中VEGF表达,改善肿瘤微环境,增强抑制EGFR下游信号通路激活而实现的。      

基于ROS/HIF-1通路探讨白花蛇舌草多糖对鼻咽癌裸小鼠肿瘤的抑制作用及机制

目的:基于活性氧（ROS）/缺氧诱导因子-1（HIF-1）通路探讨白花蛇舌草多糖对鼻咽癌裸小鼠肿瘤的抑制作用及其可能作用机制。方法:56只BALB/c裸小鼠于右侧腋下接种CNE-2细胞悬液诱导鼻咽癌成瘤,成瘤后的裸小鼠随机分为:模型组、顺铂组（DDP,5 mg/kg）、白花蛇舌草多糖低剂量组（50 mg/kg）、白花蛇舌草多糖中剂量组（100 mg/kg）、白花蛇舌草多糖高剂量组（200 mg/kg）、阴性对照组（NC-siRNA）、si-HIF-1α组、si-HIF-1α+白花蛇舌草多糖组,每组6只,剩余6只裸小鼠作为空白组。各组按相应剂量分别腹腔注射给药,连续14天。测定裸小鼠瘤重及肿瘤体积［苏木素-伊红（HE）染色观察肿瘤组织病理学变化［流式细胞术检测肿瘤组织Treg细胞数量［免疫组化染色检测肿瘤组织Foxp3表达［荧光TUNEL染色检测肿瘤组织细胞凋亡［酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肿瘤组织中ROS含量［实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测肿瘤组织HIF-1α、GLUT1、HK2 mRNA及蛋白表达。结果:与模型组比较,白花蛇舌草多糖高剂量组可明显降低肿瘤重量,降低Foxp3、HIF-1α、GLUT1、HK2表达,明显缩小瘤体积,降低Treg细胞数量,明显增加细胞凋亡及ROS含量（P＜0.01）。与si-HIF-1α组比较,si-HIF-1α+白花蛇舌草多糖组HIF-1α、GLUT1、HK2表达明显降低（P＜0.05）。与模型组比较,si-HIF-1α+白花蛇舌草多糖组ROS含量明显升高,瘤重及肿瘤体积明显减小（P＜0.05）。结论:白花蛇舌草多糖对鼻咽癌裸小鼠肿瘤具有抑制作用,其作用机制可能与降低HIF-1α、GLUT1、HK2表达有关。     

125I粒子植入联合放射治疗对A549裸鼠移植瘤生长及HIF-1表达的影响

 【摘要】　目的　研究125I粒子植入联合放射治疗对A549裸鼠移植瘤生长及乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的影响。方法　应用裸鼠建立肺腺癌A549移植瘤模型,待平均瘤体积达到（300±50）mm3时40只裸鼠随机分成4组（每组10只）,对照组 ：不做任何处理;单纯放射治疗组 ：第1天予单次外照射,6 MV-X线,10 Gy;125I粒子植入组 ：肿瘤中心植入1枚活度27.75 MBq的125I粒子;放疗加125I粒子植入组（联合治疗组）：第1天在肿瘤中心植入1枚活度27.75 MBq的125I粒子的同时予单次外照射,6MV-X线,10 Gy。治疗后共观察15 d,绘制肿瘤生长曲线,测量各组肿瘤体积并计算抑瘤率,分别用免疫组织化学及蛋白免疫印迹方法测定HIF-1α的表达。结果　治疗第8天起,瘤体积联合治疗组（209±21）mm3与对照组（322±30）mm3相比差异有统计学意义（t＝46.4,P＝0.000）。第15天后,单纯放射治疗组、125I粒子植入组、联合治疗组抑瘤率依次为45.9 %、44.4 %、69.4 %,联合治疗组与单纯放射治疗组比较差异有统计学意义（t＝52.03,P＝0.000）,联合治疗组与125I粒子植入组比较差异有统计学意义（t＝53.98,P＝0.000）,单纯放射治疗组和125I粒子植入组相比,差异无统计学意义（t＝0.591,P＝0.596）。联合治疗组与其他各组相比HIF-1α改变差异均无统计学意义（P＝0.342）。结论　放射治疗联合125I粒子植入能显著抑制转染人类肺腺癌A549裸鼠移植肿瘤的生长,但未抑制肿瘤细胞HIF-1α的表达。     

重组人血管内皮抑制素对小鼠肿瘤和心肌中血管结构及血管生成相关因子表达的影响

目的 观察重组人血管内皮抑制素对小鼠肿瘤及心肌中微血管影响的差异.方法 40只小鼠随机分为空白对照组(未荷瘤,生理盐水100 μl/d)、药物对照组(未荷瘤,重组人血管内皮抑制素400 μg/d)、模型组(荷瘤,生理盐水100 μl/d)和实验组(荷瘤,重组人血管内皮抑制素 400 μg/d),分别处理28 d.实验前后称量小鼠体重,测量移植瘤体积.采用免疫组化法检测小鼠心脏和移植瘤组织中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)以及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达情况,计数微血管密度(MVD).以CD34与Masson双染法观察微血管结构的变化.结果 实验组小鼠肿瘤体积的增加值为(48.18±37.31)mm3,低于模型组[(113.80±73.27)mm3,P＜0.05];各组小鼠体重变化的差异无统计学意义(P＞0.05).应用重组人血管内皮抑制素后,移植瘤组织中MMP-9和VEGF蛋白的表达显著降低,移植瘤组织中MMP-2、HIF-1α以及心肌组织中MMP-2、MMP-9、HIF-1α和VEGF蛋白的表达均无显著变化;移植瘤组织的MVD显著降低,胶原覆盖血管的比例升高,而心肌组织的MVD和结构几乎无变化.结论 重组人血管内皮抑制素可通过下调移植瘤组织中MMPs和VEGF蛋白的表达,降低MVD,抑制移植瘤的生长,并可使移植瘤血管趋向成熟,但不能降低心肌组织中MMPs的表达和成熟血管的MVD.

Abstract：

Objective To compare the effect of rh-endostatin on micrangium in tumor and myocardial tissue in nude mice. Methods Nude mice were randomized into 4 groups(10 mice in each group), blank control group (without tumor burden, received NS 100 μl·d-1 injection), drug control group (without tumor burden, received rh-endostatin 400 μg·d-1 injection), model group (with tumor burden, received NS 100 μl·d-1 injection) and treatment group (with tumor burden, received rh-endostatin 400 μg·d-1 injection) for 28 days. The tumor volume and body weight of the mice were measured before and after administration. The expression of CD34, MMP-2, MMP-9, HIF-1α and VEGF in the myocardium and tumor were detected by immunohistochemistry. The vascular structure was observed by immunoenzymatic CD34 and Masson double staining. Results The increase of tumor volume of the treatment group[(48.18±37.31) mm3]was significantly lower than that in the model group [(113.80±73.27) mm3). The changes of body weight was not significant different among the four groups. After treated with rh-endostatin, the expressions of MMP-9 and VEGF in tumors were significantly down-regulated, but the expressions of MMP-2 and HIF-1α in the tumor were not. The microvessel density (MVD) in the tumors of treatment group was significantly decreased compared with that of model group. The proportion of tumor vessels covered by collagen in the treatment group was increased compared with that of the model group. However, MVD and micrangium in myocardium were not changed significantly. Conclusion Rh-endostatin can decrease the expression of MMP-9, VEGF and MVD, inhibit the tumor growth and normalize tumor micrvangium in tumor but not weaken the MMPs and MVD of mature micragium in myocadium.     

非小细胞肺癌(NSCLC)癌组织HIF-1α及MMP表达的实验研究

目的:探讨HIF-1α、MMP-2、MMP-9等易感基因在非小细胞肺癌(NSCLC)癌组织中的表达水平。方法:98只通过化学诱导的方法诱导为NSCLC模型的SD大鼠,作为观察组;同时选择60只肺部良性病变的SD成年雄性大鼠作为对照组。测定上述易感基因在良性组织以及肿瘤组织中的阳性表达率,以及随着病情的加重上述基因阳性表达率的变化情况。HIF-1α表达采用HIF-1α试剂盒对单克隆抗体HIF-1α进行检测;MMP表达采用免疫组化的方法在高倍显微镜下进行检测。结果:HIF-1α、MMP-9、MMP-2在对照组组织中阳性表达率分别为5.0%、8.3%、10.0%,在观察组中阳性表达率分别为79.6%、78.6%、74.5%（P均<0.05)。随着病情的加重HIF-1α、MMP-9、MMP-2在肿瘤组织的阳性表达率有逐渐升高的趋势。结论:与良性组织相比,HIF-1α、MMP-9 、MMP-2在肿瘤组织中显著高表达,因此有必要对上述基因进行进一步研究。     

HIF-1α对人结直肠癌细胞裸小鼠成瘤性的影响

背景与目的:目前对于中晚期结直肠癌患者尚无统一有效的治疗方法,探索影响结直肠肿瘤发生、发展的因子,有利于提高老年患者的治疗效果.通过裸小鼠移植瘤实验探究缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)对人结直肠癌细胞增殖及成瘤性的影响.方法:采用RNA干扰技术下调HIF-1α的...     

白桦酯醇对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤组织中MMP-2和MMP-9表达的影响及意义

目的 探讨白桦酯醇对卵巢癌SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤组织中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响和意义。方法 建立卵巢癌SKOV3细胞裸鼠移植瘤模型,将30只裸鼠随机分为白桦酯醇高剂量组（80mg／kg）、中剂量组（40mg／kg）、低剂量组（20mg／kg）以及对照组（生理盐水）和紫杉醇组（135mg／m2）,每组6只,腹腔给药02ml/只,隔日1次,连续21d。停药后第2d处死裸鼠,测量其移植瘤体积和瘤重;用免疫组织化学法检测移植瘤组织中MMP-2和MMP-9蛋白的表达并计算表达率。结果 白桦酯醇处理组和紫杉醇组的移植瘤体积和瘤重均小于对照组（P＜0.05）;白桦酯醇中、高剂量组的抑瘤率分别为44.5％和51.4％,均高于其低剂量组的17.5%（P＜0.05）。与对照组比较,白桦酯醇处理组和紫杉醇组移植瘤组织中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均减弱;白桦酯醇低、中、高剂量组移植瘤组织中MMP-2和MMP-9蛋白的表达率（％）分别为47.13±8.67和53.82±7.41、38.29±4.37和48.79±4.63、26.88±5.12和38.93±2.82,均低于对照组的56.78±6.42和69.35±5.03,且白桦酯醇3组之间的差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 白桦酯醇对卵巢癌SKOV3细胞皮下移植瘤的生长有抑制作用,其机制可能与下调MMP-2和MMP-9蛋白的表达有关。     

STAT-3介导的非依赖VEGFR-2通路对NSCLC细胞放射敏感性影响的研究

目的 研究抑制STAT-3对非依赖VEGFR-2通路的NSCLC细胞放射敏感性的影响,并探讨其可能机制。 方法 采用Q-PCR及蛋白印迹法检测各组中VEGFR-2、STAT-3相关信号分子及HIF-1α、CyclinD₁ mRNA与蛋白表达变化;克隆形成实验检测各组细胞放射敏感性,流式细胞术检测细胞凋亡及周期分布。 结果 经VEGFR-2抑制剂Apatinib处理后,Calu-1细胞中VEGFR-2、STAT-3 mRNA无显著变化,HIF-1α、CyclinD₁ mRNA表达降低;联合STAT-3抑制剂S3I-201后,VEGFR-2、STAT-3及下游相关基因mRNA表达降低(F=304.54、118.99,P<0.01);VEGFR-2、STAT-3及下游相关靶蛋白磷酸化水平均降低(F=144.34、529.66,P<0.01);细胞凋亡率与G₂+M期阻滞增加,同时抑制STAT-3和VEGFR-2组更明显(F=72.37,P<0.01)。与Calu-1细胞相比,A549细胞加Apatinib抑制VEGFR-2细胞放射增敏效果有限,SER=1.39;联合S3I-201抑制STAT-3后,放射增敏效果显著,SER=1.72(t=-48.61,P=0.000)。 结论 NSCLC细胞VEGFR-2被抑制时,旁路活化的STAT-3直接和间接调控CyclinD₁表达,进而影响肺癌细胞的放射敏感性,联合抑制肺癌细胞VEGFR-2和STAT-3,具有良好的放射增敏效果。     

黄芪多糖对气阴两虚Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长、转移及细胞周期的影响

目的 观察黄芪多糖抑制气阴两虚Lewis肺癌荷瘤小鼠的生长、转移及对肺癌细胞周期的影响。方法 体外培养Lewis肺癌细胞,随机分为对照组和中药组,流式细胞术检测细胞周期;C57BL/6J小鼠90只,设空白组10只,余80只刨花烟熏并灌胃温热性的中药,移植Lewis肺癌实体肿瘤建立气阴两虚荷瘤小鼠模型并随机分为8组,比较各组小鼠抑瘤率及q值,计数外周血细胞及骨髓细胞,ELISA测定血清IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-10、HIF-1α、VEGF、MMP-2的含量。结果 黄芪多糖将Lewis 肺癌细胞阻滞于S期,随着药物浓度的增加,细胞凋亡逐渐增加;联合用药各组的抑瘤率高于黄芪多糖各组和顺铂组,q值均在0.85~1.15之间;与顺铂组比较,联合用药中、高剂量组小鼠外周血细胞及骨髓细胞的数量,IL-2、INF-γ、TNF-α均显著升高,IL-10、 HIF-1α、VEGF、MMP-2均显著降低（P<0.05, P<0.01）。结论 黄芪多糖在体外对Lewis肺癌细胞有抑制作用,体内与顺铂联合能抑制气阴两虚Lewis荷瘤小鼠肺癌细胞的生长、转移,提高外周血细胞和骨髓细胞的细胞数量,提高IL-2、INF-γ、TNF-α的含量,减少IL-10、HIF-1α、VEGF、MMP-2的含量。     

YC-1对人肝细胞癌裸鼠移植瘤的影响及其机制

目的探讨缺氧诱导因子抑制剂（YC-1）对人肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤的影响及其相关机制。方法用人肝癌细胞株SMMC-7721建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,待肿瘤生长至约（100~150）mm3时,将荷瘤裸鼠随机分为两组：实验组和对照组,分别给予YC-1和二甲基亚砜,观察两组裸鼠肿瘤生长情况;应用RT-PCR、Western blot及免疫组织化学方法检测移植瘤组织HIF-1α和VEGF表达。结果YC-1治疗组各时点肿瘤体积显著低于对照组(P<0. 05 );与对照组比较,实验组移植瘤组织HIF-1α mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),而HIF-1α蛋白的表达显著降低 (P<0. 05 );移植瘤组织VEGFmRNA及蛋白表达均显著低于对照组 (P<0. 05 )。结论YC-1可能通过下调HIF-1α和VEGF的表达来抑制肝癌的生长。     

HIF-1α siRNA and cisplatin in combination suppress tumor growth in a nude mice model of esophageal squamous cell carcinoma

Introduction: The esophagus squamous cell carcinoma (ESCC) is one of the most deadly malignances, and a current challenge is the development of effective therapeutic agents. Our present work addressed the effect of HIF-1α siRNA alone or in combination with cisplatin on the growth of ESCC in nude mice. Materials and Methods: Xenografts were established by inoculating ESCC TE-1 cells in nude mice, and transplanted tumors were treated with HIF-1α siRNA, cisplatin alone or together. Growth was assessed by measuring tumor volume. HIF-1α mRNA and protein expression were detected using RT-PCR and immunohistochemistry, respectively. Apoptosis of ESCC TE-1 cells was analyzed by flow cytometry. Results: In our nude mice model, HIF-1α siRNA effectively inhibited the growth of transplanted ESCC, downregulating HIF-1α mRNA and protein expression, and inducing ESCC TE-1 cell apoptosis. Notably when combinated with cisplatin, HIF-1α siRNA showed synergistic interaction in suppressing tumor growth. Furthermore, the proportion of apoptotic cells in HIF-1α siRNA plus cisplatin group was significantly higher than that in cisplatin or HIF-1α siRNA-treated groups (P<0.05). Conclusions: Down-regulated HIF-1α expression induced by siRNA could effectively suppress the growth of transplanted ESCC in vivo. HIF-1α siRNA could enhance the cytotoxicity of cisplatin, which suggests that a combination of these two agents may have potential for therapy of advanced ESCC.     

半枝莲对结直肠癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及其机制

目的观察半枝莲提取物对人结直肠癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,并探讨其作用机制。方法建立人结直肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,将24只小鼠随机分为模型组、5-Fu组(阳性对照)、半枝莲低剂量组和半枝莲高剂量组,观察并记录各组裸鼠移植瘤的生长情况,计算肿瘤抑制率。Western blot和免疫组织化学法检测各组裸鼠皮下移植瘤中TWIST和MMP-2表达水平,并分析其相关性。结果半枝莲高剂量组移植瘤瘤重和体积均较模型组明显减轻或缩小,高剂量组抑瘤率与5-Fu组差异无统计学意义(P>0.05);半枝莲高剂量组移植瘤TWIST和MMP-2的表达较模型组均明显降低(P<0.05),与阳性药5-Fu相当。结论一定剂量的半枝莲对人结直肠癌移植瘤具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制TWIST和MMP-2的协同表达有关。     

JNJ-26481585对人肺腺癌培美曲塞耐药裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制探讨

目的:探讨JNJ-26481585对人肺腺癌培美曲塞耐药裸鼠移植瘤的抑制作用及其抗癌机制。方法:构建人肺腺癌A549/培美曲塞耐药细胞(A549/PEM)的移植瘤裸鼠模型,随机分为模型组、培美曲塞组、JNJ组、联合组(培美曲塞+JNJ),第28天治疗观察结束时处死裸鼠,剥离肿瘤组织标本待测。测定4组裸鼠肿瘤体积与体质量,计算抑瘤率,观察各治疗组药物对荷瘤裸鼠的毒副反应,TUNEL方法检测4组移植瘤细胞凋亡情况的差异,qRT-PCR检测4组移植瘤细胞FAM96A、Bax、Bcl-2基因mRNA表达水平差异,Western blot检测4组移植瘤细胞FAM96A、Bax、Bcl-2蛋白表达的差异。结果:联合组的肿瘤体积、体质量低于JNJ组,JNJ组的肿瘤体积、体质量低于培美曲塞组,联合组的抑瘤率高于JNJ组,JNJ组抑瘤率高于培美曲塞组(均P<0.05)。联合组的细胞凋亡率高于JNJ组,JNJ组细胞凋亡率高于培美曲塞组(均P<0.05)。联合组肿瘤细胞的FAM96A、Bax表达水平高于JNJ组,JNJ组FAM96A、Bax表达水平高于培美曲塞组,联合组Bcl-2表达水平低于JN...     

Iressa对肝癌细胞Hep-3B、HepG2裸鼠移植瘤的抑制作用

背景与目的：Iressa是一种新型分子靶向药物,在治疗晚期非小细胞肺癌中显示出较好疗效,对Iressa治疗肝癌的研究国内外报道较少。本研究旨在探讨Iressa对肝癌Hep-3B、HepG2细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其毒副作用。方法：肝癌Hep-3B、HepG2细胞移植瘤裸鼠随机分为对照组、低剂量组和高剂量组,分别用葡萄糖溶液、Iressa 100mg／kg和Iressa 200mg／kg每日一次灌胃,每周灌五天,连用3周,用药结束后2天处死动物。分别计算Iressa对两种肝癌的抑瘤率,比较各组裸鼠肿瘤大小、体重及脾指数。结果：给药前各组裸鼠体重和肿瘤体积无差异。低剂量组和高剂量组Iressa对Hep-3B肝癌移植瘤的抑瘤率分别为32．77％、46．99％;低剂量组和高剂量组Iressa对HepG2肝癌移植瘤的抑瘤率分别为68．57％、75．24％。两种肿瘤类型的高剂量组裸鼠的脾指数和体重下降与对照组比较均有显著性差异,低剂量组和对照组裸鼠的脾指数和体重比较无明显差异。结论：Iressa对肝癌Hep-3B、HepG2细胞移植瘤生长均有明显抑制作用。但高剂量可能引起裸鼠体重下降并影响免疫器官功能。     

阿帕替尼联合放疗治疗非小细胞肺癌的临床研究

目的探讨阿帕替尼联合放疗治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效及安全性。方法依据随机数字表法将60例NSCLC患者分为观察组和对照组,每组30例,观察组患者采用阿帕替尼联合放疗,对照组患者仅采用放疗。比较两组患者的近期疗效、治疗前后的血清血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)水平、生活质量及不良反应发生情况。结果观察组患者的总有效率为83.3%(25/30),高于对照组的56.7%(17/30),差异有统计学意义(P﹤0.05)。治疗后,两组患者的血清VEGF、HIF-1α水平均低于本组治疗前,且观察组患者的血清VEGF、HIF-1α水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。治疗后,两组患者的卡氏功能状态(KPS)评分和生活质量评分均高于本组治疗前,且观察组患者的KPS评分和生活质量评分均高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。观察组患者的不良反应总发生率为33.3%(10/30),明显低于对照组的83.3%(25/30),差异有统计学意义(P﹤0.01)。结论阿帕替尼联合放疗治疗NSCLC具有协同作用,通过下调VEGF、HIF-1α的表达改善肿瘤微环境的乏氧状态,增强放疗敏感性,提高近期疗效,改善患者生活质量,且安全性较好,二者联合有望成为一种新的治疗策略。     

人参皂苷Rg3、索拉非尼和奥沙利铂不同联合方式抗裸鼠肝癌移植瘤血管生成的作用研究

目的 观察人参皂苷Rg3、索拉非尼、奥沙利铂单药及联合对裸鼠人肝癌细胞移植瘤血管生成的作用并探讨其可能机制。 方法 以裸鼠人肝癌转移模型LCI-D20为观察对象,将60只荷瘤裸鼠随机分成8组,分别为人参皂苷Rg3组（A组）、奥沙利铂组（B组）、索拉非尼组（C组）、人参皂苷Rg3+索拉非尼组（D组）、人参皂苷Rg3+奥沙利铂组（E组）、奥沙利铂+索拉非尼组（F组）、人参皂苷Rg3+奥沙利铂+索拉非尼组（G组）和生理盐水对照组（H组）。肿瘤接种第11 d后开始给药,人参皂苷Rg3 5 mg／kg（1天1次）、奥沙利铂5 mg／kg（2天1次）,均用腹腔注射,索拉非尼30 mg／kg（1天1次）灌胃。给药14 d后处死裸鼠,剥离瘤体,检测各组瘤组织中微血管密度（MVD）,免疫组化染色和Western blotting检测各组瘤组织中血管内皮生长因子（VEGF）、缺氧诱导因子（HIF）-1α和VEGF受体（VEGFR）-2的表达。 结果 与H组比较,其余各组MVD均较低（P＜0.01）,VEGF蛋白阳性表达率均较低（P＜0.05）,HIF-1α蛋白阳性表达率均下降,但差异无统计学意义（P＞0.05）;A组、D组、E组的VEGFR-2蛋白阳性表达率显著低于H组（P＜0.05）。与H组比较,仅A组、B组、C组、D组、E组能显著下调瘤组织中VEGF、HIF-1α和VEGFR-2蛋白的表达（P＜0.05）。 结论 人参皂苷Rg3具有一定的抗血管生成作用,其机制可能与下调VEGF、HIF-1α、VEGFR-2及MVD的表达有关。人参皂苷Rg3分别与索拉非尼、奥沙利铂联合可以增强抗血管生成作用,但三药联合时抗血管生成作用反而减弱,提示可能存在其他抗肿瘤机制,值得进一步研究。     

RNA干扰技术裸鼠体内沉默缺氧诱导因子1α的表达对宫颈癌的抑瘤效应

目的 观察体内沉默缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达后对宫颈癌的抑瘤效应,并探讨其可能的机制.方法 将实验用宫颈癌Siha细胞分为空白对照组(转染空载体)、无关对照组(转染无关对照质粒)和实验组(稳定转染pU-HIF-1α-shRNA的真核表达载体),接种裸鼠,建立裸鼠荷瘤模型,观测HIF-1α-shRNA对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用.采用免疫组化SP法和Western blot 法,检测HIF-1α和葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)蛋白在肿瘤组织中的表达.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测HIF-1α、GLUTI和己糖激酶Ⅱ(HKⅡ)mRNA的表达.采用酶显色法,检测肿瘤组织中的乳酸含量.采用原位末端标记(TUNEL)法,检测细胞凋亡.结果 实验组裸鼠肿瘤的生长速度较空白对照组和无关对照组明显减慢(P＜0.05).接种50 d后处死裸鼠,实验组裸鼠的肿瘤重量为(1.90±0.28)g,也明显轻于空白对照组[(2.95±0.77)g]和无关对照组[(2.54±0.56)g,P＜0.01].实验组肿瘤组织中HIF-1α mRNA和蛋白的相对表达量分别为0.45±0.04和1.25±0.92,GLUT1mRNA和蛋白的相对表达量分别为0.32±0.02和1.25±0.48,均明显低于空白对照组和无关对照组(均P＜0.05).实验组中HK Ⅱ mRNA和乳酸的含量均明显低于空白对照组和无关对照组(均P＜0.05),但凋亡细胞数较空白对照组和无关对照组明显增多(均P＜0.01).结论 以HIF-1α为靶点的基因治疗,可通过下调靶基因GLUT1和HKⅡ的表达来降低宫颈癌Siha细胞的糖酵解水平,促进肿瘤细胞凋亡,从而发挥抑制宫颈癌生长的作用.     

CS-TPGS-b-(PCL-ran-PGA)纳米粒递送HIF-1α siRNA联合顺铂对鼻咽癌裸鼠移植瘤影响研究

目的 乏氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)增强抗肿瘤药物敏感性研究在国内外已有诸多报道.本研究拟探讨纳米聚合物壳聚糖-聚乙二醇1 000维生素E琥珀酸酯-聚乙内酯-聚乙醇酸[d-α-tocopheryl polyethylene glycol 1 000 succinate-b-poly(ε-caprolactone-ran-glycolide),CS-TPGS-b-(PCL-ran-PGA),简称CNP]包载HIF-1α小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)联合顺铂(cisplatin,DPP)对鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的影响.方法 皮下接种CNE-2细胞建立人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,应用随机数字表法分磷酸盐缓冲液组(Control)、单纯纳米粒组(CNP,200 μg/kg)、单纯顺铂组(DPP,100 μg/kg)、单纯纳米粒联合顺铂组(CNP 200 μg/kg+DPP 100 μg/kg)、载HIF-1α siRNA纳米粒组(CNP-siRNA,200 μg/kg)和载HIF-1α siRNA纳米粒联合顺铂组(CNP-siRNA 200μg/kg+DPP 100μg/kg)6组.每组5只,腹腔注射3d1次,共7次.干预过程中3d测量1次肿瘤体积,治疗22d后拉颈处死裸鼠,称取瘤质量,计算抑瘤率;利用蛋白质印迹与RT-PCR检测移植瘤中HIF-1α和多重耐药基因-1/P糖蛋白(multidurg resistance gene 1/P-glycoprotein,MDR-1/P-gp)基因蛋白表达水平,HE染色观察各组肿瘤组织病理形态改变.结果 与Control组相比,CNP组抑瘤率为18.32％,DPP组为37.59％,CNP-siRNA组为43.32％,CNP+ DPP组为47.64％,CNP-siRNA+ DPP组为70.21％.其中CNP-siRNA+DPP组抑瘤效果最为显著,与其他治疗组相比,差异有统计学意义,F=253.511,P＜0.001.在HIF-1α mRNA表达上,与Control组相比,CNP组mRNA表达量为0.89±0.04,DPP组为0.99±0.02,CNP-siRNA组为0.95±0.02,CNP+ DPP组为0.35±0.04,CNP-siRNA+DPP组为0.15±0.07.CNP-siRNA+ DPP组mRNA抑制效果最为显著,与其他组相比,差异有统计学意义,F=351.194,P＜0.001.蛋白质印迹结果亦显示,CNP-siRNA+ DPP组中HIF-1α蛋白条带宽度明显低于其余各实验组,MDR-1/P-gp表达水平表现出与HIF-1α基因蛋白表达相似的实验结果.HE结果表明,CNP-siRNA+ DPP组能够显著促进肿瘤细胞坏死及凋亡.结论利用CNP纳米聚合物递送HIF-1α siRNA联合DDP能够有效下调肿瘤细胞HIF-1α及MDR 1/P-gp基因蛋白表达,抑制肿瘤生长,促进肿瘤细胞坏死凋亡.新型纳米聚合物CNP作为递送siRNA的有效载体,在肿瘤基因靶向治疗中具有较高的应用前景.     

蜂毒素对人肝癌裸鼠移植瘤的抗血管生成作用

目的探讨蜂毒素对人肝癌裸鼠移植瘤生长的影响及其抗血管生成作用。方法建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察蜂毒素对肿瘤生长的影响。采用免疫组织化学法,检测肿瘤组织微血管密度（microvessel density,MVD）及碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）、缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）和核转录因子κB（nuclear factorκB,NF-κB）的水平。结果蜂毒素低、中、高剂量组相对肿瘤增殖率分别为48.78%、38.33%和33.82%。与生理盐水组比较,蜂毒素处理组肿瘤体积明显缩小（P〈0.01）。免疫组化结果显示,蜂毒素可降低肿瘤组织MVD,且蜂毒素处理组bFGF、HIF-1α和NF-κB蛋白水平明显低于生理盐水组（P〈0.01）。结论蜂毒素可抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,其作用机制可能是降低NF-κB活性,抑制HIF-1α转录,进而下调bFGF表达,最终阻碍肝癌血管生成。