新型冠状病毒核酸提取方法的性能评价及临床应用

目的评价3种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸提取方法的分析性能及临床应用价值。方法采用目前临床常用的裂解法、柱提法和磁珠法提取SARS-CoV-2核酸,通过实时荧光反转录聚合酶链反应及自建检测系统检测SARS-CoV-2核酸[开放阅读框(ORF)1ab、核衣壳蛋白(N)],评价3种核酸提取方法下的检测精密度、正确度、最低检测限等性能指标。将3种核酸提取方法应用于17份新型冠状病毒肺炎(COVID-19)确诊病例标本的检测,分析其临床应用价值。结果3种核酸提取方法下检测结果的重复性精密度和中间精密度、正确度均通过验证,可满足临床需求。采用裂解法、柱提法、磁珠法提取核酸时的最低检测限(Ct值)分别是37.42、37.87、39.61,均符合厂家声明的最低检测限。在应用于临床标本检测时,3种核酸提取方法下的检测结果两两之间均呈良好的线性关系(P<0.05),其中,采用柱提法和磁珠法提取核酸时的检测结果相关性最好(r=0.905,P<0.001)。3种核酸提取方法下的靶标(ORF1ab+/N-、ORF1ab-/N+、ORF1ab+/N+)检出率比较,差异无统计学差异(P>0.05)。结论裂解法、柱提法和磁珠法提取SARS-CoV-2核酸在自建检测系统中的分析性能可接受,均可满足临床对SARS-CoV-2的检测需求。     

新型冠状病毒核酸检测模拟室内质控品的研制

摘要：目的?评价用阴性临床样本稀释假病毒原料、制备新型冠状病毒核酸检测模拟室内质控品的可行性。方法?用PBS与阴性临床样本梯度稀释噬菌体病毒样颗粒(假病毒)制备模拟室内质控品，用荧光PCR仪检测ORF1ab和N靶基因。同时加入RNase抑制剂-20 ℃保存，评价其稳定性。结果?PBS与阴性临床样本稀释制备的模拟室内质控品核酸检测Ct值差异无统计学意义，且所用试剂N靶基因的检测灵敏度大于ORF1ab基因。制备的模拟质控品在-20 ℃条件下可稳定保存60 d，且无需添加RNase抑制剂。结论?阴性临床样本作为基质稀释假病毒原料制备模拟质控品可更好地反映基质效应，可用作新冠病毒核酸检测室内质控品。同时应关注靶基因检测灵敏度不同造成的单靶标阳性样本，防止漏检。     

新型冠状病毒奥密克戎株核酸检测循环阈值与感染患者转阴周期的相关性及影响因素分析

目的：探讨入院首次新型冠状病毒(新冠)奥秘克戎株(Omicron)核酸检测ORF1ab基因、N基因的循环阈值(cycle threshold,Ct)与新冠感染患者转阴周期之间的相关性及其影响因素。方法：选取2022年3月到4月期间,上海交通大学医学院附属瑞金医院北部院区收治的5 212例新冠奥密克戎变异株感染者,依据患者既往史及入院后相关指标检验,将其分为无基础疾病组(2 746例)及合并基础疾病组(2 466例)。检测所有研究对象ORF1ab基因和N基因的Ct值,分析入院首次检测不同Ct值下无基础疾病组与合并基础疾病组的ORF1ab基因、N基因的转阴周期之间的差异。采用Pearson线性相关性分析,评估ORF1ab基因、N基因检测的Ct值与转阴周期的相关性,并采用多元线性回归分析转阴周期的影响因素。结果：新冠患者ORF1ab基因、N基因的Ct值与转阴周期均呈负相关(rORF1ab=-0.462 2,P<0.01;r_N=-0.542 8,P<0.01)。Ct值≤20和20相似文献   

实时荧光聚合酶链反应检测新型冠状病毒室内质控方法初探

目的 绘制实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)定性室内质控图和基于循环阈值的Levey-Jennings质控图,探究新型冠状病毒RT-PCR检测的室内质控方法。方法 使用无菌生理盐水按照1∶5、1∶10、1∶20、1∶30、1∶40对第三方质控物进行倍比稀释,确定室内弱阳性质控的稀释倍数。统计该实验室2022年1-2月新型冠状病毒RT-PCR阴阳性质控原始记录,以自定义数值绘制定性结果散点图。统计2022年1-2月每批次弱阳性质控的靶基因Ct值,分别对N基因和ORF1ab基因两组Ct值进行正态分布检验,根据前20次检测结果分别计算N基因和ORF1ab基因的靶值X和标准差s,绘制Levey-Jennings质控图。结果 确定1∶30为每日室内质控的弱阳性质控品的稀释倍数。定性检测散点图可直观发现1次弱阳性质控检出阴性的“假阴性”反应。弱阳性质控N基因、ORF1ab基因Ct值均符合正态分布(P>0.05)。N基因Ct值靶值X为34.13,变异系数为1.91%,所有Ct值均在X±3s以内,5次出现±2s警告,符合Westgard质控规则。ORF1ab基因Ct值靶值为35.30,变异系数...     

两种RT-PCR 检测SARS-CoV-2 核酸试剂盒实验室应用评价

目的　应用两个厂家生产的试剂盒平行检测新型冠状病毒（SARS-CoV-2）感染的肺炎（COVID-19）患者样本, 对其检测效果进行实验室应用评价。方法　A,B 两试剂盒共同靶基因为ORF1ab 和N,B 试剂盒增加靶基因E;两试 剂盒同为磁珠核酸提取,RT-PCR 扩增法。结果　298 份痰液、咽拭子、肛拭子和尿液标本中,两种试剂盒共同确认阳 性结果120 份,阴性结果178 份。其检测分别表达为:A 试剂盒ORF1ab 阳性120 份,N 阳性120 份,阴性178 份,内 标（IC）297 份,质控合格全覆盖;B 试剂盒ORF1ab 阳性120 份,N 阳性118 份,E 阳性120 份,阴性178 份,内标（IC） 298 份,质控合格全覆盖;阳性结果的Ct 值有限配对的t 检验,均P ＞ 0.05（ORF1ab:n=120,t=1.839,P=0.069;N:n=118, t=1.881,P=0.063）, 差异无统计学意义。结论　两种试剂盒表达的Ct 值趋同性较理想,标本的阳性表达上符合指南规定, 结果一致。A 试剂盒有内标（IC）1 份未能表达,不可忽视;B 试剂盒N 基因有2 份缺项需找原因克服,而具备的E 基 因提高了SARS-CoV-2 核酸检测的可控性。     

新型冠状病毒核酸检测循环阈值变化规律浅析

目的初步探讨新型冠状病毒感染者呼吸道标本核酸扩增循环阈值(cycle threshold,Ct值)变化规律。方法筛选2020年1月21日至2020年3月2日间安徽省某定点医院收治的45例新型冠状病毒感染确诊患者,用实时荧光逆转录聚合酶链反应技术对患者的痰液与咽拭子混合液进行检测,观察Ct值与发病天数、性别、年龄、疾病分型的变化规律。结果随着发病天数的增加,ORF1ab基因、N基因及E基因Ct值均不断升高,E基因首先消失,其次是ORF1ab基因,最后是N基因。出现症状后1~6 d男性与女性核酸Ct值均为最低值,差异无统计学意义(P>0.05);7~12 d Ct值逐渐升高,男性低于女性Ct值,两者差异有统计学意义(P<0.05)。不同年龄段间Ct值差异无统计学意义(P>0.05)。不同病情分型间Ct值差异无统计学意义(P>0.05)。结论Ct值与患者出现症状的天数、性别有关,与年龄、疾病分型无关。     

不同灭活温度对新型冠状病毒核酸检测的影响

目的探讨不同灭活温度处理对新型冠状病毒核酸检测的影响。方法收集该中心2020年1月25至2月25日采集的新型冠状病毒核酸检测阳性标本14份,每份标本分别采取未灭活56℃、35 min和65℃、15 min恒温金属浴灭活处理,比较未灭活标本和灭活标本循环阈值(Ct值),并进行统计学分析。结果未灭活组和56℃、35 min灭活处理组,未灭活组和65℃、15 min灭活处理组,56℃、35 min灭活处理组和65℃、15 min灭活处理组开放读码框1ab(ORF1ab)、核衣壳蛋白(N)基因扩增Ct值差异均无统计学意义(P>0.05)。在Ct值≥34的标本中未灭活组和56℃、35 min灭活处理组,未灭活组和65℃、15 min灭活处理组,56℃、35 min灭活处理组和65℃、15 min灭活处理组ORF1ab、N基因扩增Ct值差异均无统计学意义(P>0.05)。在Ct值<34的标本中未灭活组和56℃、35 min灭活处理组,未灭活组和65℃、15 min灭活处理组,56℃、35 min灭活处理组和65℃、15 min灭活处理组ORF1ab、N基因扩增Ct值差异均无统计学意义(P>0.05)。结论使用56℃、35 min灭活处理和65℃、15 min灭活处理新型冠状病毒标本对核酸检测结果无明显影响,对Ct值较大标本也未发现有明显影响,对于试验条件有限的基层检测机构可以采用上述方式处理标本以保护实验人员安全。     

新型冠状病毒核酸检测循环阈值变化规律浅析

目的初步探讨新型冠状病毒感染者呼吸道标本核酸扩增循环阈值(cycle threshold,Ct值)变化规律。方法筛选2020年1月21日至2020年3月2日间安徽省某定点医院收治的45例新型冠状病毒感染确诊患者,用实时荧光逆转录聚合酶链反应技术对患者的痰液与咽拭子混合液进行检测,观察Ct值与发病天数、性别、年龄、疾病分型的变化规律。结果随着发病天数的增加,ORF1ab基因、N基因及E基因Ct值均不断升高,E基因首先消失,其次是ORF1ab基因,最后是N基因。出现症状后1～6 d男性与女性核酸Ct值均为最低值,差异无统计学意义(P0.05);7～12 d Ct值逐渐升高,男性低于女性Ct值,两者差异有统计学意义(P0.05)。不同年龄段间Ct值差异无统计学意义(P0.05)。不同病情分型间Ct值差异无统计学意义(P0.05)。结论 Ct值与患者出现症状的天数、性别有关,与年龄、疾病分型无关。     

不同灭活方式对携带新型冠状病毒的物体表面标本核酸检测结果的影响

目的 研究不同灭活方式对携带新型冠状病毒的物体表面标本核酸检测结果的影响。方法 25份核酸检测结果为阳性的物体表面标本,每份标本分为4份,分别采用4～8℃未灭活(未灭活组),以及60℃水浴30 min、56℃水浴45 min、75%乙醇30 min灭活处理(灭活组),比较不同处理方式的平均循环阈值(Ct值)。结果 未灭活组和灭活组Ct值比较,差异有统计学意义(ORF基因:F=48.740,Eta=0.720,P<0.05;N基因:F=65.597,Eta=0.781,P<0.05);灭活组60℃水浴30 min和56℃水浴45 min Ct值比较,差异无统计学意义(ORF基因:P=0.306;N基因:P=0.920),60℃水浴30 min与75%乙醇30 min Ct值比较,差异有统计学意义(ORF基因:P<0.05;N基因:P<0.05),56℃水浴45 min与75%乙醇30 min Ct值比较,差异有统计学意义(ORF基因:P<0.05;N基因:P<0.05)。未灭活组ORF基因Ct值为22～26时,未灭活组和灭活组ORF基因、N基因Ct值比...     

新型冠状病毒核酸检测高循环阈值情况分析

目的探讨新型冠状病毒核酸检测出现高循环阈值(Ct值)情况的原因。方法用实时荧光RT-PCR法检测疑似新型冠状病毒肺炎患者鼻咽拭子、肛拭子样本新型冠状病毒核酸,回顾性分析Ct值处于33~38的高Ct值样本在同一患者重复采样检测、不同品牌基因扩增仪检测及不同实验室相同型号仪器检测情况下结果的一致性。结果8例单靶位高Ct值阳性患者次日重复采样检测结果双靶标均为阴性。7例高Ct值样本有6例同一样本核酸在LC480及ABI 75002台扩增仪上检测结果不一致,包括ORF1ab基因检测结果不一致4例,N基因不一致4例,其中ORF1ab基因和N基因均不一致2例。5例高Ct值样本不同实验室相同基因扩增仪结果均不一致。结论该病毒核酸检测高Ct值时结果重复性较差,需要其他检测方法同时进行补充检测。     

新型冠状病毒核酸快速检测单靶标阳性结果分析

目的 对新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸快速检测(快检)的单靶标阳性结果进行分析,为临床实验室检测和结果判读提供参考。方法 收集2021年1月1日至2022年8月16日在深圳市罗湖医院集团医学检验实验室采用快检试剂进行新冠病毒核酸检测的标本,严格按照国家相关文件要求进行标本采集、送检、保存、检测和结果判读,并采用常规PCR方法进行平行检测。对检出的快检单靶标阳性结果进行分析,并与常规检测结果进行比较。结果 38例快检单靶标阳性结果中,单靶标N基因阳性有20例,单靶标ORF1ab基因阳性18例;12例为复阳,其中单靶标N阳性10例,单靶标ORF1ab阳性2例;经常规试剂平行检测,有24例为双靶标阳性,14例为单靶标阳性。结论 新冠病毒核酸快检单靶标阳性结果应及时采用灵敏度更高的常规检测试剂进行复检,复核阳性方可报告结果,必要时需重新采样复核。     

5种新型冠状病毒核酸检测试剂应用于DXcellence™全自动核酸检测分析系统的性能评估

摘要:目的探讨5种新型冠状病毒核酸检测试剂与DXcellenceM全自动核酸检测分析系统的适配性,为临床实验室选择新型冠状病毒核酸检测方法和仪器提供参考依据。方法参考《病原体核 酸即时检测质量管理要求专家共识》对定性项目的性 能验证要求，在DXcellenceT全自动核酸检测分析系统上,搭配艾科诺公司(简称Accunome)的核酸提取纯化试剂盒,评价5种新型冠状病毒核酸检测试剂(杭州金迪安、武汉明德、江苏硕世、北京金豪和上海思路迪，简写为JDA、MD、SS.JH、SLD)的性 能。结果5种新型冠状病毒核酸检测试剂均可配合Accunome公司的核酸提取纯化试剂盒,在DXcellenceTM全自动核酸检测分析系统.上实现样本进、结果出的检测。5种试剂检测时间为:单个样本54~94 min,12个样本65~ 105 min。JDA、MD .JH试 剂对新型冠状病毒开放阅读框lab 基因( ORF1ab基因)329~ 450 copies/mL的检出率均为100%,在核衣壳蛋白基因(N基因)260 copies/mL的检出率均为100% ;Ss试剂对ORF1ab基因256~ 350 copies/mL、N基因203 copies/mL 的检出率为100% ;SLD试剂对ORF1ab基因146~ 200 copies/mL、N基因116 copies/mL的检出率为100%。5种核酸检测试剂在稀释标准品浓度约1200 copies/mL进行精密度测试,其ORF1ab基因和N基因循环阈值(Ct)的变异系数(CV)分别为JDA 1.13%和1.97%, MD 0.96%和1.01%,JH 1.55%和1.29%,ss 1.01%和1.96% ,SLD 1.12%和2.00%。5种试剂在DXcellenceTM 系统上检测的10 例阳性样本均为阳性,10例阴性样本均为阴性。结论5种新型冠状病毒核酸检测试剂配合Accunome公司的核酸提取纯化试剂 与DXcellenceTM系统适配,检测时间短、结果准确。实验室可以根据需要选取合适的检测试剂用于DXcellenceT"全自动核酸检测分析系统。     

新型冠状病毒肺炎（COVID-19）热灭活咽拭子及热灭活后提取核酸样本在 4℃保存的稳定性研究

目的　研究 56℃ 30 min 热灭活后的新型冠状病毒肺炎 (COVID-19) 咽拭子及提取的核酸在 4℃保存的稳定性。方法　采用多重荧光定量 PCR 方法对一例 COVID-19 患者的咽拭子样本，56℃ 30 min 热灭活后进行 COVID-19 双靶点(ORF1ab 和 N 基因 ) 核酸检测，把原始咽拭子样本及提取的核酸保存在 4℃，分别于 24，48，72 和 96h 再次检测咽拭子样本及提取核酸中新冠病毒核酸的含量（Ct 值），分析热灭活后咽拭子样本及提取核酸在 4℃保存的稳定性。结果COVID-19 患者的咽拭子样本，56℃ 30 min 热灭活后核酸检测结果为 ORF1ab 和 N 基因双阳性，Ct 值分别为 31.27 和30.64，咽拭子样本 4℃保存 24，48，72 和 96h 后再次检测 ORF1ab 和 N 基因的结果为 24h (31.41 和 30.68)，48h (34.13和 34.28)，72h (34.06 和 34.11) 和 96h (36.22 和 40.02)。 提取的核酸 4℃保存 24，48，72 和 96h 后的检测结果为 24h (31.64和 30.06)，48h (31.62 和 29.95)，72h (31.72 和 29.75) 和 96h (31.36 和 30.09)。56℃ 30 min 热灭活的咽拭子样本在 4℃保存 24h 后，对 COVID-19 核酸的检测无明显影响 ( 偏倚 <1%)，但 4℃保存 48~72h，ORF1ab 基因核酸降解约 7 倍，N 基因降解约 11 倍，4℃保存 96h, ORF1ab 和 N 基因核酸分别降解 30.91 倍和 666.29 倍。但是提取的核酸 4℃保存 24~96h 后，对核酸的检测结果无明显影响 ( 偏倚均小于 3%)。结论　研究结果表明 56℃ 30 min 热灭活后提取的核酸的稳定性比原始咽拭子样本好，热灭活后的咽拭子样本可在 4℃保存 24h。     

江苏省扬州市新型冠状病毒肺炎患者核酸检测结果分析

目的分析江苏省扬州市报告的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)确诊病例和无症状感染者的核酸检测结果。方法对COVID-19确诊病例和无症状感染者进行随访,连续6周采集咽拭子进行病毒核酸检测。结果暴露后第2、3、4周的病毒核酸检测结果显示,COVID-19确诊病例阳性率为100. 00%、61. 54%、8. 33%,平均核酸检测阳性时间为(24. 08±1. 17) d,无症状感染者阳性率依次为100. 00%、66. 67%、20. 00%,平均核酸检测阳性时间为(25. 21±1. 28) d,差异无统计学意义(P=0. 42)。确诊病例暴露后第2、3周核酸检测新型冠状病毒ORF1ab基因平均循环阈值(Ct值)为(31. 56±4. 98)、(34. 26±3. 16),N基因平均Ct值为(30. 88±4. 82)、(34. 40±2. 86),差异均无统计学意义(P=0. 25、0. 15)。从第4周开始,因咽拭子的核酸检测阳性例数较少(n≤1),未参与统计。无症状感染者暴露后第2、3、4周核酸检测新型冠状病毒ORF1ab基因平均Ct值为(31. 01±3. 68)、(32. 64±3. 74)、(29. 05±2. 96),N基因平均Ct值为(31. 37±3. 62)、(32. 9±3. 51)、(28. 40±4. 19),差异均无统计学意义(P=0. 23、0. 12)。从第5周开始,因咽拭子的核酸检测阳性例数较少(n≤1),不参与统计。确诊病例和无症状感染者中均有1例病例咽拭子核酸检测复检阳性。结论确诊病例和无症状感染者暴露后,第2周内呼吸道标本阳性检出率高,2组核酸检测阳性时间无显著差异,确诊病例和无症状感染者咽拭子标本连续2次核酸检测阴性存在复检阳性风险。     

不同标本前处理方法对新型冠状病毒核酸检测结果的影响

目的分析不同标本前处理方法对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测结果的影响。方法选取该院SARS-CoV-2核酸检测结果为阳性的18份未灭活咽拭子标本为研究对象。分别采用56℃金属浴30 min、56℃金属浴60 min、56℃水浴30 min、56℃水浴60 min、化学裂解15 min、化学裂解30 min 6种方法进行标本前处理,分析各方法处理后的检测结果。结果经56℃水浴30 min、56℃水浴60 min处理后,开放读码框1ab(ORF1ab)基因检出率分别为94.44%、100.00%,核衣壳蛋白(N)基因检出率均为100.00%,假阴性率均为0.00%。经56℃金属浴30 min、56℃金属浴60 min处理后,ORF1ab基因检出率分别为83.33%、77.78%,N基因检出率分别为88.89%、77.78%,假阴性率均为5.56%。经化学裂解15 min、化学裂解30 min处理后,ORF1ab基因检出率分别为77.78%、50.00%,N基因检出率分别为77.78%、61.11%,假阴性率分别为11.11%、38.89%。结论SARS-CoV-2核酸检测标本前处理方法应首选56℃水浴60 min和56℃水浴30 min,而化学裂解法对标本核酸检测结果影响最大,不建议在日常实验中使用。     

西安地区新型冠状病毒肺炎患者康复期2019-nCoV 核酸检测复阳结果分析

目的 研究西安地区新型冠状病毒肺炎（corona virus disease 2019,COVID-19）患者康复期新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸检测复阳情况。方法 对2021 年12 月~2022 年2 月在西安秦皇医院的873 例COVID-19 患者康复期采集口咽和鼻咽拭子,应用实时荧光定量PCR 进行2019-nCoV 核酸检测,核酸复阳结果按性别、年龄、标本类型、靶标基因和Ct 值与转阴时间分别进行分组比较。结果 核酸检测复阳患者共201 例,阳性率为23.02%。不同性别（21.58%vs 24.81%）和年龄组（24.70 % vs 25.90%）核酸复阳率之间差异无统计学意义（χ2=1.272,3.223,均P>0.05）。双拭子（鼻咽+ 口咽）联合检测复阳率明显高于单鼻咽或单口咽拭子（23.02% vs 19.01%,5.84%）,且鼻咽拭子核酸复阳率明显高于口咽拭子,差异均有统计学意义（χ2=8.699,121.5,69.59 ,均P<0.05）。双靶标基因阳性标本数明显高于单靶标N 或ORF1ab 基因(55.30% vs 28.57%,16.13%),且单靶标N 基因阳性标本数明显高于ORF1ab 基因,差异均有统计学意义（χ2=31.83,72.51,9.679,均P<0.05）。不同区间Ct 值组间核酸转阴时间差异有统计学意义（F=16.66,P<0.001）,且转阴时间与复阳时的Ct 值呈显著负相关性（r= -0.539,P<0.05）。结论 COVID-19 患者康复期核酸复阳率仍较高,机制和原因尚不明确,仍需加强隔离管理和健康监测。     

益气解毒方治疗新型冠状病毒肺炎的临床研究

目的：探讨益气解毒方治疗新型冠状病毒肺炎的临床疗效。方法：选取医院2022年1～9月收治的60例新冠肺炎患者,按随机数字表法分为治疗组与对照组,各30例。治疗组给予益气解毒方治疗,对照组给予西医对症治疗。观察两组新型冠状病毒核酸QRF1ab基因及N基因Ct值变化情况、平均住院天数、平均住院费用、中医证候积分、治疗总有效率及不良反应发生情况。结果：治疗后,两组新型冠状病毒核酸QRF1ab基因及N基因Ct值均显著提高,且治疗组优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;与对照组相比,治疗组平均住院天数明显减少,平均住院费用明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗后,两组中医证候积分均低于治疗前,且治疗组更低,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗组治疗总有效率高于对照组（P<0.05）;治疗组不良反应发生率低于对照组（P<0.05）。结论：益气解毒方治疗新型冠状病毒肺炎疗效显著,可提升新型冠状病毒核酸QRF1ab基因及N基因Ct值,缩短治疗周期,减少住院费用,改善临床症状,不良反应发生率低。     

咽拭子和肛拭子标本核酸检测对新型冠状病毒肺炎检测效果的比较

目的分析咽拭子和肛拭子标本核酸检测对新型冠状病毒肺炎检测效果的应用价值。方法选取2020年3月至2021年1月安阳地区医院收治的新型冠状病毒肺炎患者82例,收集患者咽拭子标本、肛拭子标本,均行核酸检测。比较不同标本的检出率,同一患者、同一时间、不同标本检测结果,咽拭子检出患者病毒核酸扩增循环阈值(Ct值)情况变化。结果肛拭子阳性检出率(24.39%,40/164)较咽拭子阳性检出率(38.41%,63/164)低,差异有统计学意义(χ^(2)=7.487,P<0.05)。同一患者、同一时间肛拭子阳性检出率(17.07%,28/82)较咽拭子(9.76%,16/82)高(χ^(2)=4.473,P<0.05)。检出组ORFlab基因、N基因与未检出组比较,差异未见统计学意义(P>0.05)。结论咽拭子和肛拭子标本核酸检测对新型冠状病毒肺炎病毒核酸扩增Ct值无明显影响,咽拭子阳性率高,但同一患者同一时间肛拭子阳性率高,临床可结合实际情况联合应用两种检测方法,以提高检验结果准确性。     

4种SARS-CoV-2核酸检测试剂一致性评价

目的评估4种严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核酸检测试剂盒在新型冠状病毒肺炎(COVID-19)诊断中的一致性。方法收集2020年2月18—24日武汉亚心总医院204例COVID-19住院患者临床资料,利用检测剩余标本,对4家通过应急注册审批的SARS-CoV-2核酸检测试剂盒进行一致性评价。在临床诊断为COVID-19的基础上,以任一试剂检出阳性为参考,分别比较4种试剂盒检测SARS-CoV-2ORF1ab基因、N基因的敏感性和特异性。采用Kappa一致性分析和χ~2检验对检测结果的一致性进行统计学分析。结果 4种试剂对SARS-CoV-2的整体检出率分别为72.4%、78.0%、59.3%和72.4%,差异有统计学意义(P=0.011)。A、B、C、D试剂对SARS-CoV-2 ORF1ab基因的检出率分别是47.7%、31.8%、68.2%和83.2%(P0.000 1);A、B、C试剂对SARS-CoV-2 N基因的检出率分别是79.0%、90.5%和16.2%(P0.000 1)。结论SARS-CoV-2核酸检测试剂盒存在一定比例的假阴性结果,不同品牌SARS-CoV-2核酸检测试剂检测性能差异有统计学意义,多试剂联合检测有利于提高病毒检出率。     

不同核酸提取及扩增系统组合检测新型冠状病毒核酸的效能比较

目的 探讨不同核酸提取及扩增系统组合检测新型冠状病毒核酸的效能。方法 收集同一时间段内使用不同核酸提取系统(提取系统a、b、c)和扩增系统(扩增系统1、2、3)组合检测结果为阴性的人源性标本的内标基因(IC基因)的Ct值,以及在不同检测批次中所使用的同一批号弱阳性质控品O、N及IC基因的Ct值。比较不同核酸提取、扩增系统组合的检测效能。结果 不同提取系统提取的人源性标本IC基因经同一扩增系统扩增,同一提取系统提取的人源性标本IC基因经不同扩增系统扩增,其Ct值差异均有统计学意义(P<0.05)。除部分检测系统组合(提取系统a与扩增系统2/3组合、提取系统a/b与扩增系统3组合检测弱阳性质控品N基因;提取系统a与扩增系统2/3组合、提取系统a/c与扩增系统2组合、提取系统b与扩增系统1/3组合检测弱阳性质控品O基因;提取系统a/c与扩增系统3组合、提取系统a/c与扩增系统2组合检测弱阳性质控品IC基因)检测的Ct值差异无统计学意义(P>0.05)外,其他不同提取系统提取的核酸由同一扩增系统扩增,同一提取系统提取的核酸由不同扩增系统扩增,其IC、O、N基因Ct值差异均有统计学意...