miR-1250-3p对肝细胞癌细胞侵袭迁移能力的影响及其作用机制

目的 探究miR-1250-3p对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)细胞侵袭和迁移能力的影响及其作用机制。方法 采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-1250-3p在正常肝细胞L02和HCC细胞系QGY-7703、PLC/PRF/5、HccL-M3中的表达情况;将QGY-7703细胞分为A、B、C、D、E、F 6组,各组分别转染mimics NC、mimics miR-1250-3p、inhibitor NC、inhibitor miR-1250-3p、Myc-EVA1A+mimics miR-1250-3p、Myc-EVA1A,采用Western blot方法检测自噬相关蛋白EVA1A的表达,采用细胞划痕法检测miR-1250-3p表达对QGY-7703细胞迁移能力的影响,采用Transwell实验检测miR-1250-3p对QGY-7703细胞侵袭能力的影响。将293T细胞按实验需求分为G、H、I、J组,各组分别转染EVA1A-3′UTR-wt+mimics NC、EVA1A-3′UTR-wt+miR-1250-3p mimics...     

乳腺癌细胞来源的外泌体对乳腺癌BT549细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 研究乳腺癌细胞来源的外泌体对乳腺癌BT549细胞的增殖、侵袭和迁移的影响.方法 使用超速离心的方法对人乳腺癌BT549细胞培养液中的外泌体进行提取和纯化,以通用透射电子显微镜观察外泌体的形态和大小,蛋白免疫印迹实验鉴定外泌体的标志蛋白,以CCK-8实验、细胞划痕实验和Transwell实验检测外泌体对BT549细...     

泛素连接酶三基序蛋白21对结直肠癌鞘氨醇激酶2的调控作用及其机制

目的 探讨泛素连接酶三基序蛋白21(TRIM21)对结直肠癌(colorectal cancer, CRC)中鞘氨醇激酶2(SphK2)的调控作用及机制。方法 将转染Flag-SphK2的PLC/RPF/5细胞分为a、b、c、d、e组,分别采用表皮生长因子刺激、葡萄糖饥饿处理、过氧化氢刺激、缺氧处理、转化生长因子-β刺激,通过质谱鉴定与SphK2互作的蛋白。将HEK-293T细胞分为f、g、h、i、j、k、l、m、n、o组,f～k组分别转染Flag-SphK2、Flag-SphK2+HA-TRIM21质粒、Flag-SphK2、Flag-SphK2+His-Ubquitin、Flag-SphK2+His-Ubquitin+1μg HA-TRIM21质粒、Flag-SphK2+His-Ubquitin+4μg HA-TRIM21质粒,l～o组分别分别转染HA-TRIM21质粒0、0.3、0.6、0.9μg, f～g组进行免疫共沉淀实验鉴定SphK2与TRIM21蛋白的相互作用情况,h～k组进行体内泛素化实验鉴定TRIM21对SphK2泛素化水平的影响,l～o组进行Western-blot...     

lncRNA SNHG1对乳腺癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响及其机制

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)核仁小分子RNA宿主基因1(SNHG1)对乳腺癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法 收集20例乳腺癌患者的癌组织与癌旁正常组织,培养人正常乳腺上皮细胞MCF-10A及乳腺癌细胞MCF-7、BT-549、MDA-MB-231和MDA-MB-468,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测组织和细胞中SNHG1与miR-641表达量。以BT-549细胞为研究对象,分为A～D组,分别转染si-NC(A组)、si-SNHG1(B组)、si-SNHG1+anti-miR-641-NC(C组)、si-SNHG1+anti-miR-641(D组),采用RT-qPCR检测细胞中SNHG1和miR-641表达量,采用Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力,用Western blot检测细胞EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin表达量。将BT-549细胞分为E～H组,分别共转染SNHG1-WT与miR-641 mimics(E组)、SNHG1-WT与miR-NC(F组)、SNHG1-M...     

miR-103a-3p对肝细胞癌细胞迁移能力的影响及其作用机制

目的 探讨miR-103a-3p对肝细胞癌(HCC)细胞迁移能力的影响及其作用机制.方法 采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-103a-3p在正常肝细胞L02和HCC细胞系Hccl-M3中的表达;将Hccl-M3细胞按照实验要求分为A、B、C、D、E组,各组分别转染mimics NC、miR-103a...     

吲哚-3-甲醇对神经母细胞瘤细胞增殖与迁移能力的影响及其机制

目的 探讨吲哚-3-甲醇(I3C)对神经母细胞瘤(NB)细胞增殖与迁移能力的影响及其机制.方法 采用CCK8实验检测终浓度为0、50、100、150、200、300、500μmol/L的I3C对SH-SY5Y细胞活力的影响,并计算I3C对SH-SY5Y细胞的半数致死浓度(IC50值),作为后续实验中I3C浓度设定的参考...     

不同浓度吗啡对小胶质细胞极化状态的影响

目的 探讨高、低浓度吗啡对小胶质细胞M1/M2极化状态的影响.方法 体外培养大鼠小胶质细胞HAPI,将稀释好的细胞混悬液接种于6孔板中,当细胞融合度约达70％时,采用随机数字表法将细胞分为空白对照组(C组)、10-7 mol/L吗啡组(L组)和10-4 mol/L吗啡组(H组).C组细胞不做任何处理,L组和H组细胞分别...     

LncRNA SNHG11对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞上皮间质转化及增殖、迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNAs)核仁小分子RNA宿主基因11(SNHG11)对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)上皮间质转化(EMT)及增殖、迁移的影响.方法 将ARPE-19细胞分为低糖对照组(5.5 mmol/L葡萄糖处理48 h)、高渗对照组(60.0 mmol/L甘露醇处理48 h)以...     

晚期糖基化终末产物对糖尿病小鼠角膜树突状细胞活化的影响及作用机制

目的 探讨晚期糖基化终末产物(AGEs)对糖尿病小鼠角膜中树突状细胞(DCs)活化功能的影响及其作用机制.方法 将6周龄小鼠随机分为正常对照组(A组)和1型糖尿病组(B组),分别连续5d腹腔注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液或链脲佐菌素(60 mg/kg),通过Western Blot方法检测A、B组小鼠角膜中AGEs蛋白的表...     

GPX4对erastin诱导的H9C2细胞脂质过氧化和铁死亡的影响及其机制

目的 探讨谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)以及核因子红细胞2相关因子2(NRF2)对erastin诱导的H9C2细胞脂质过氧化和铁死亡的影响及其机制.方法 将H9C2细胞按照实验要求分为A～K组,A组为对照组,B～K组为分别经erastin(5μmol/L)、erastin(5μmol/L)+Fer-1(5μmol/L)...     

藻蓝蛋白对小鼠精原细胞氧化损伤的保护作用及其机制

目的 探讨藻蓝蛋白(C-PC)对H2 O2诱导的小鼠精原细胞(GC-1 spg)氧化损伤的保护作用及其机制.方法 制备H2 O2诱导的GC-1 spg氧化损伤模型.实验分为对照组、模型组及C-PC低、中、高3个剂量预处理组.C-PC各剂量组用不同浓度C-PC预处理24 h后,除对照组以外,其余各组细胞培养液中均加入H2...     

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯对细胞色素P450酶活性的影响

目的 研究表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)对人肝微粒体中细胞色素P450(CYP450)酶活性的影响.方法 以未处理的肝微粒体作为阴性对照组,CYP450酶各亚型的特异性抑制剂作为阳性对照组,通过EGCG或特异性抑制剂与探针底物共同孵育,高效液相色谱法定量分析特异性底物的代谢产物,分析EGCG对CYP450酶...     

无均整器模式对宫颈癌放射治疗剂量的影响

目的 通过比较均整器模式容积旋转调强放射治疗(FF-VMAT)和无均整器模式容积旋转调强放射治疗(FFF-VMAT)两种放疗方式在宫颈癌中的剂量分布,探讨有无均整器对放疗剂量的影响.方法 选取青岛市中心医院2019年1—8月35例宫颈癌患者,每例患者分别设计FF-VMAT和FFF-VMAT两种放疗方式,均采用eclipse计划系统,在系统中除分别采用FF和FFF两种模式外,其他参数设置均相同.分别对两种计划的靶区剂量和危及器官剂量进行评估和比较;将两种放疗方式分别在加速器上模拟运行比较运行效率.结果 FF-VMAT与FFF-VMAT两种放疗方式进行比较,靶区剂量评估中靶区2％体积对应的剂量(D2％)及靶区剂量均匀性指数(HI)、适形度指数(CI)、剂量梯度平均距离(GM)具有显著差异(t=3.43～5.46,P<0.05),D98％无显著差异(P>0.05),危及器官剂量评估中仅直肠Dmean和小肠Dmax比较具有显著差异(t=2.81、2.84,P<0.05),运行效率比较仅加速器跳数有显著差异(t=28.46,P<0.05).结论 FF-VMAT和FFF-VMAT两种放疗方式均能满足临床需求,但在剂量分布方面FF-VMAT较FFF-VMAT更优.