OPN基因高表达的重组腺病毒对口腔鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为的影响

目的研究OPN基因高表达的重组腺病毒对口腔鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为的影响。方法培养口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞株并将其分为rAd-OPN组和rAd-NC组,rAd-OPN组转染OPN基因高表达的重组腺病毒、rAd-NC组转染包含无效片段的重组腺病毒,测定细胞中OPN基因的m RNA含量以及细胞迁移、侵袭、上皮间质转化情况。结果腺病毒转染后12、24、36、48小时,rAd-OPN组细胞中OPN基因的m RNA含量以及细胞迁移率均显著高于rAd-NC组(P<0.05),穿膜细胞数显著多于rAd-NC组(P<0.05);腺病毒转染后48小时,rAd-OPN组中Twist、Snail、Vimentin、N-cadherin基因的mRNA含量显著高于rAd-NC组(P<0.05),E-cadherin基因的mRNA含量显著低于rAd-NC组(P<0.05)。结论 OPN基因高表达的重组腺病毒能够促进口腔鳞状细胞癌的迁移、侵袭以及上皮间质转化。     

lncRNA SNHG1对乳腺癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响及其机制

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)核仁小分子RNA宿主基因1(SNHG1)对乳腺癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法 收集20例乳腺癌患者的癌组织与癌旁正常组织,培养人正常乳腺上皮细胞MCF-10A及乳腺癌细胞MCF-7、BT-549、MDA-MB-231和MDA-MB-468,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测组织和细胞中SNHG1与miR-641表达量。以BT-549细胞为研究对象,分为A～D组,分别转染si-NC(A组)、si-SNHG1(B组)、si-SNHG1+anti-miR-641-NC(C组)、si-SNHG1+anti-miR-641(D组),采用RT-qPCR检测细胞中SNHG1和miR-641表达量,采用Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力,用Western blot检测细胞EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin表达量。将BT-549细胞分为E～H组,分别共转染SNHG1-WT与miR-641 mimics(E组)、SNHG1-WT与miR-NC(F组)、SNHG1-M...     

母系表达基因3对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响机制研究

目的探究长链非编码RNA母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)对卵巢癌细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达和侵袭、迁移能力的影响。方法荧光定量聚合酶链反应检测卵巢上皮细胞和卵巢癌细胞MEG3表达情况。通过慢病毒转染携带MEG3全长序列的载体和空白载体于SKOV3人卵巢癌细胞中,分别作为实验组细胞和对照组细胞,通过Transwell侵袭实验检测两组细胞的侵袭能力,通过Transwell迁移实验检测两组细胞的迁移能力,通过蛋白质印迹法检测两组细胞MMP-2和MMP-9的表达情况。结果人卵巢癌细胞SKOV3、OVCAR3和A2780中MEG3的表达显著低于人卵巢上皮细胞IOSE80(均P<0.05)。通过慢病毒转染外源性上调SKOV3细胞MEG3的表达,实验组细胞MEG3表达显著高于对照组(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示实验组穿过基质胶的细胞数显著少于对照组(P<0.05);Transwell迁移实验结果显示实验组迁入下室的细胞数显著少于对照组(P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示实验组细胞MMP-2和MMP-9表达水平均显著低于对照组(均P<0.05)。结论 MEG3低表达于人卵巢癌细胞系,并可下调MMP-2和MMP-9的表达,抑制卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力。     

新型Hsp90/HDAC双靶点抑制剂对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移的影响及其机制

目的 研究新型热休克蛋白90(Hsp90)/组蛋白去乙酰化酶(HDAC)双靶点抑制剂FXX-W-12-4对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制。方法 采用CCK-8实验检测FXX-W-12-4对MDA-MB-231细胞活力的影响,并计算其半致死浓度(IC₅₀)作为后续实验中浓度设定的参考值。以IC₅₀值为依据,在MDA-MB-231细胞中分别加入终浓度为0、100、200、300 nmol/L的FXX-W-12-4(分别设为A、B、C、D组),采用划痕实验、Transwell实验分别检测FXX-W-12-4对各组MDA-MB-231细胞侵袭以及迁移能力的影响。采用Western Blot实验检测各组MDA-MB-231细胞中ac-H3、Hsp70等蛋白的相对表达量。结果 CCK-8实验结果显示,随着FXX-W-12-4浓度的升高,MDA-MB-231细胞活力逐渐下降(F=2 663.00,P<0.05)。划痕实验结果显示,与A组相比,B～D组MDA-MB-231细胞在第12、24、48小时时迁移能力均明显降低...     

HIF2α促进肾细胞癌769-P细胞的增殖侵袭作用机制研究

目的探讨缺氧诱导因子2α(hypoxia-inducible factor 2α,HIF2α)促进肾细胞癌(肾癌)769-P细胞的增殖侵袭作用及其机制研究。方法以肾癌769-P细胞为研究对象,通过构建慢病毒干扰HIF2α载体,转染肾癌769-P细胞,依据转染剂量不同分为空白对照组(无HIF2α干预)、低剂量转染组(100 ng/ml HIF2α干预)、高剂量转染组(200 ng/ml HIF2α干预),采用MTT法检测769-P细胞的增殖活力,采用Transwell法检测769-P细胞侵袭迁移能力,采用免疫印迹法检测769-P细胞HIF2α、趋化因子CXC亚家族受体4(CXC subfamily receptor 4,CXCR4)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达情况。结果转染抑制HIF2α后,高剂量转染组和低剂量转染组769-P细胞活力均随时间的延长而显著下降(P<0.05),且高剂量转染组769-P细胞活力明显低于低剂量转染组(P<0.05);高剂量转染组和低剂量转染组769-P细胞侵袭力均显著低于空白对照组(P<0.05),且高剂量转染组769-P细胞侵袭力显著低于低剂量转染组(P<0.05)。转染抑制HIF2α后,三组769-P细胞HIF2α、CXCR4及VEGF的表达水平均显著下降,组间比较差异具有显著性(P<0.05)。结论通过慢病毒转染抑制HIF2α的表达可以抑制肾癌769-P细胞的侵袭力,HIF2α基因可能通过调控CXCR4和VEGF信号途径参与肾癌769-P细胞的生物学行为。     

miR-183及Akt1蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义

目的探讨mi R-183及Akt1蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义。方法收集2014年3月至2016年9月暨南大学附属第一医院手术切除的60例子宫内膜癌标本及癌旁组织标本,术后均经病理学确诊。培养子宫内膜癌Ishikawa细胞株,采用LipofectamineTM2000脂质体转染试剂进行转染,将其分为A组(转染mi R-183的特异性抑制剂反义寡核苷酸)、B组(转染无关mi R-183的特异性抑制剂核苷酸序列)、C组(转染LipofectamineTM2000脂质体转染试剂)、D组(空白对照,不转染)。采用流式细胞仪检测四组子宫内膜癌Ishikawa细胞的凋亡情况,实时逆转录聚合酶链反应检测各组子宫内膜癌Ishikawa细胞中mi R-183及Akt1m RNA表达水平,蛋白质印迹法检测各组子宫内膜癌Ishikawa细胞中Akt1蛋白的表达水平。结果子宫内膜癌组织中mi R-183表达水平低于癌旁组织,Akt1蛋白m RNA表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。A组子宫内膜癌Ishikawa细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均显著低于B、C、D组(P<0.05),B组早期凋亡率和晚期凋亡率均显著高于A、C、D组(P<0.05)。A组子宫内膜癌Ishikawa细胞中mi R-183表达水平低于B、C、D组(P<0.05)。A、B组子宫内膜癌Ishikawa细胞中Akt1m RNA表达水平均显著低于C、D组(P<0.05)。A组Akt1蛋白表达水平显著高于B、C、D组(P<0.05),B组Akt1蛋白表达水平显著低于C、D组(P<0.05)。结论 mi R-183在子宫内膜癌组织中呈低表达,Akt1蛋白呈高表达;在子宫内膜癌Ishikawa细胞中mi R-183通过抑制Akt1蛋白的表达影响癌细胞增殖和凋亡,进而影响子宫内膜癌的发生和发展。     

LKB1对胰腺癌细胞上皮间质转化及侵袭迁移的影响

目的探究LKB1基因对胰腺癌细胞上皮间质转化及侵袭迁移的影响情况。方法通过细胞实验检测LKB1过表达对胰腺癌上皮间质转化相关蛋白E-钙黏蛋白,及间质标记物N-钙黏蛋白、vimentin的影响,并分析其对人胰腺癌细胞PANC-1迁移和侵袭能力的影响。通过免疫荧光法对转染后的细胞进行处理,并通过荧光显微镜高倍镜观察细胞的变化情况。结果与空载体组、转染试剂组相比,LKB1过表达组中LKB1蛋白及E-钙黏蛋白表达水平显著升高(P0.05);间质细胞标志物N-钙黏蛋白、Vimentin的蛋白相对表达水平明显降低(P0.05)。LKB1过表达对胰腺癌细胞PANC-1迁移和侵袭能力的影响分别为转染试剂组(45.56±6.60)、空载体组(45.06±3.85)、LKB1过表达组(22.54±3.74);转染试剂组(111.48±14.90)、空载体组(107.58±13.18)、LKB1过表达组(57.48±7.94);LKB1过表达组细胞迁移和侵袭能力均显著降低(t=-14.501、-14.824、-12.810、-13.808,P均=0.000)。结论 LKB1可以抑制人胰腺癌细胞的迁移和侵袭,该抑制过程可能与其参与上皮间质转化有关。     

依帕司他对四氯化碳致小鼠慢性肝损伤的保护作用及机制研究

目的 探讨依帕司他对四氯化碳(CCl4)致小鼠慢性肝损伤的保护作用及机制.方法 将75只C57BL/6J小鼠随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、阳性对照组(C组)、依帕司他低剂量组(D组)和依帕司他高剂量组(E组).A组小鼠腹腔注射橄榄油(2 mL/kg),其余各组小鼠腹腔注射等量体积分数0.20的CCl4橄榄油溶液,每周2次,持续8周.建模成功后A、B组小鼠灌胃生理盐水,C组小鼠灌胃甘草酸二铵50 mg/kg,D、E组小鼠分别灌胃依帕司他50、100 mg/kg,每天1次,连续给药4周.利用生化仪检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;利用苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠肝组织病理变化;采用TUNEL法检测各组小鼠肝细胞凋亡情况;采用ELISA法检测各组小鼠肝组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性;采用Western blot方法检测各组小鼠肝组织中B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平.结果 D、E组与B组相比,小鼠血清中ALT、AST水平显著下降(F=12.00、7.42,t=4.24～5.27,P<0.05);肝组织中MDA含量显著降低(F=7.70,t=3.58、4.98,P<0.05),SOD、GSH-Px、CAT活性显著上升(F=3.36～8.70,t=2.28～3.42,P<0.05);肝组织中Bcl-2蛋白表达水平显著上调(F=8.39,t=4.05、4.71,P<0.05),Bax及Caspase-3蛋白表达水平显著下调(F=6.46、5.29,t=2.75～4.36,P<0.05).E组与B组相比,小鼠肝细胞凋亡率显著下降(F=7.99,t=4.38,P<0.05).病理结果显示,D、E组与B组相比细胞水肿及坏死减轻,炎性细胞浸润减少.结论 依帕司他可能通过抑制氧化应激、减轻肝细胞凋亡来改善CCl4诱导的小鼠慢性肝损伤.     

核糖体调控因子1对人乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖和转移能力的影响

目的 探讨核糖体合成调控因子1(RRS1)对人乳腺癌细胞增殖和转移能力的影响。方法 通过Western Blot实验检测人乳腺癌细胞系(MDA-MB-231、MDA-MB-468、BT549、MCF-7细胞)以及正常人乳腺上皮细胞中RRS1蛋白的表达量;将MDA-MB-468细胞分别感染sh-RRS1慢病毒(sh-RRS1组)和阴性对照慢病毒(Con组),未进行任何感染的MDA-MB-468细胞为Blank组,在荧光显微镜下观察Con组和sh-RRS1组慢病毒感染效率,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术和Western Blot实验分别检测各组细胞中RRS1 mRNA和蛋白的表达水平;采用CCK-8实验检测RRS1对MDA-MB-468细胞活力的影响;采用划痕实验、Transwell实验以及侵袭实验检测RRS1对MDA-MB-468细胞侵袭和迁移能力的影响。结果 各乳腺癌细胞系中RRS1的表达水平均明显高于正常人乳腺上皮细胞(F=28.71,P<0.05);相较于Blank组和Con组,sh-RRS1组细胞中RRS1 mRNA和蛋白的表达水平均显著降低(F=118.10...     

miR-1250-3p对肝细胞癌细胞侵袭迁移能力的影响及其作用机制

目的 探究miR-1250-3p对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)细胞侵袭和迁移能力的影响及其作用机制。方法 采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-1250-3p在正常肝细胞L02和HCC细胞系QGY-7703、PLC/PRF/5、HccL-M3中的表达情况;将QGY-7703细胞分为A、B、C、D、E、F 6组,各组分别转染mimics NC、mimics miR-1250-3p、inhibitor NC、inhibitor miR-1250-3p、Myc-EVA1A+mimics miR-1250-3p、Myc-EVA1A,采用Western blot方法检测自噬相关蛋白EVA1A的表达,采用细胞划痕法检测miR-1250-3p表达对QGY-7703细胞迁移能力的影响,采用Transwell实验检测miR-1250-3p对QGY-7703细胞侵袭能力的影响。将293T细胞按实验需求分为G、H、I、J组,各组分别转染EVA1A-3′UTR-wt+mimics NC、EVA1A-3′UTR-wt+miR-1250-3p mimics...     

核糖体合成调控因子1对乳腺癌细胞阿霉素抗性的影响

目的 探讨核糖体合成调控因子1(RRS1)对乳腺癌细胞阿霉素抗性的影响.方法 通过Western blot方法检测MCF-7和耐阿霉素MCF-7/ADR细胞中RRS1的表达;构建携带绿色荧光蛋白的shRRS1慢病毒和阴性对照慢病毒,分别感染MCF-7/ADR细胞(实验组与对照组),荧光显微镜下观察慢病毒转染效率,采用W...     

阿司匹林对子痫前期发病的预防作用及机制

目的 探讨阿司匹林对子痫前期(PE)发病的预防作用及其机制.方法 采集PE患者(PE组)及正常对照孕妇(NP组)的血清及胎盘组织,采用ELISA法测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平,采用Western-blot法测定胎盘组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9的表达水平.将妊娠大鼠随机分为正常妊娠组(C组)、TNF-α组(B组)及TNF-α+阿司匹林组(A组)3组,于妊娠第14天,C组大鼠经颈静脉每天将50 mL生理盐水持续泵入,B组大鼠每天将TNF-α50 ng加入到生理盐水50 mL中持续泵入,A组大鼠每天将TNF-α50 ng加入到生理盐水50 mL中持续泵入,同时给予掺有阿司匹林的面团喂养,均连用5 d,采用Western-blot法和明胶酶谱法分别测定各组大鼠胎盘组织中MMP-2、MMP-9的表达水平及活性.结果 与NP组比较,PE组患者血清中TNF-α的水平和胎盘组织中MMP-2、MMP-9的表达水平比较差异均有显著性(t=5.81～7.18,P<0.05);且PE组患者血清中TNF-α的表达水平与胎盘组织中MMP-2、MMP-9表达水平呈负相关(r=-0.64、-0.61,P<0.05).3组妊娠大鼠胎盘组织中MMP-2、MMP-9的表达水平及活性比较差异均有显著性(F=4.05～126.50,P<0.05);其中B组大鼠均明显低于C组大鼠,而A组大鼠均明显高于B组大鼠(t=2.83～16.36,P<0.05).结论 TNF-α可能通过抑制胎盘组织中MMP-2、MMP-9的表达水平及活性参与子痫前期发病,阿司匹林可部分抑制TNF-α的抑制作用,此可能是其预防子痫前期发病的潜在机制.     

第一跖骨干Scarf截骨结合趾骨Akin截骨治疗中重度踇外翻的短期效果

目的 分析第一跖骨干Scarf截骨结合趾骨Akin截骨治疗中重度踇外翻短期的临床效果.方法 选取2018年9月—2019年10月我院收治的16例中重度踇外翻患者,应用第一跖骨干Scarf截骨结合趾骨Akin截骨的手术方式进行矫治,术后6个月对患足进行负重正侧位X线片检查,比较术前及术后踇趾外翻角度(HVA)和第一第二跖...     

细菌性角膜炎362例病原学分析

目的 探讨我院细菌性角膜炎的流行病学特征和临床表现,为细菌性角膜炎的诊断和治疗提供数据参考.方法 对2010年1月—2019年12月我院收治的362例细菌性角膜炎患者的流行病学特征、危险因素、入院前治疗情况、临床表现、实验室检查结果和治疗结果等资料进行回顾性分析.结果 在收治的362例细菌感染性角膜炎患者中,最常见的危险因素是角膜外伤(70.17％).实验室检查结果显示角膜组织刮片培养革兰染色阳性者136例,其中革兰阳性菌感染者67.65％,革兰阴性菌感染者32.35％.表皮葡萄球菌(30.88％)为最常见的致病菌种,其次为铜绿假单胞菌(18.38％)和金黄色葡萄球菌(11.76％).角膜感染药物治疗有效率为40.6％(147例),在进行手术治疗的215例患者中,行穿透性角膜移植术(PKP)者62例(28.84％),板层角膜移植术(LKP)者2例(0.93％),行角膜病灶切除伴羊膜覆盖术者9例(4.19％),行单纯角膜病灶切除或烧灼术者82例(38.14％),行眼内容物剜除术者30例(13.95％).结论 角膜外伤是细菌性角膜炎最常见的危险因素,表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌是3种最常见的致病菌,PKP是手术治疗的常用方法.     

不同浓度吗啡对小胶质细胞极化状态的影响

目的 探讨高、低浓度吗啡对小胶质细胞M1/M2极化状态的影响.方法 体外培养大鼠小胶质细胞HAPI,将稀释好的细胞混悬液接种于6孔板中,当细胞融合度约达70％时,采用随机数字表法将细胞分为空白对照组(C组)、10-7 mol/L吗啡组(L组)和10-4 mol/L吗啡组(H组).C组细胞不做任何处理,L组和H组细胞分别...     

晚期糖基化终末产物对糖尿病小鼠角膜树突状细胞活化的影响及作用机制

目的 探讨晚期糖基化终末产物(AGEs)对糖尿病小鼠角膜中树突状细胞(DCs)活化功能的影响及其作用机制.方法 将6周龄小鼠随机分为正常对照组(A组)和1型糖尿病组(B组),分别连续5d腹腔注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液或链脲佐菌素(60 mg/kg),通过Western Blot方法检测A、B组小鼠角膜中AGEs蛋白的表...     

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯对细胞色素P450酶活性的影响

目的 研究表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)对人肝微粒体中细胞色素P450(CYP450)酶活性的影响.方法 以未处理的肝微粒体作为阴性对照组,CYP450酶各亚型的特异性抑制剂作为阳性对照组,通过EGCG或特异性抑制剂与探针底物共同孵育,高效液相色谱法定量分析特异性底物的代谢产物,分析EGCG对CYP450酶...     

腹股沟斜疝患儿不同术式治疗效果比较

目的 通过腹股沟斜疝患儿不同手术方式中结扎环周长的对比,探讨腹股沟斜疝患儿不同术式治疗效果的差异.方法 2016年6月—2018年5月青岛大学附属威海市立第二医院住院的腹股沟斜疝患儿168例,分别采用开放式手术(A组)、腹腔镜下常规穿刺结扎法手术(B组)及单孔腹腔镜下双钩疝针+Roeder结+推结器行疝囊高位结扎手术(...     

西妥昔单抗联合放化疗治疗宫颈癌的临床效果

目的 探讨对无法手术治疗的宫颈癌患者给予西妥昔单抗联合放化疗的临床效果.方法 选取河南圣德医院2013年1月—2015年9月收治的108例无法手术治疗的宫颈癌患者作为研究对象,依据治疗方案分为基础化疗+放疗组(A组)52例和西妥昔单抗联合放化疗组(B组)56例.对两组患者治疗前后血清肿瘤标志物水平变化、临床疗效及3年时...     

左乙拉西坦治疗儿童癫痫的疗效及其对肝功能、血清MDA和8-OHDG的影响

目的 探讨左乙拉西坦(LEV)治疗儿童癫痫的疗效及其对肝功能、血清丙二醛(MDA)和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)的影响.方法 选取2017年1月-2019年1月在新郑市人民医院儿科接受治疗的160例癫痫患儿为研究对象.采用随机数字表法将患者随机分为观察组(n =80)与对照组(n=80),分别给予LEV和丙戊酸钠(...