舒尼替尼体内诱导耐药鼻咽癌细胞表达NKG2DLs增强NK细胞的抑瘤作用

目的：探讨体内条件下舒尼替尼对耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞NKG2DLs（natural killer group 2 member D ligands)表达的诱导作用,及其对NK细胞抗肿瘤活性的影响。方法：建立ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分如下8组：A、E组分别接种ABCG2high、ABCG2lowCNE2/DDP细胞,B、F组分别接种舒尼替尼处理的ABCG2high、ABCG2lowCNE2/DDP细胞,C、G组分别接种ABCG2high、ABCG2lowCNE2/DDP细胞后再输注NK细胞;D、H组接种舒尼替尼处理的ABCG2high、ABCG2lowCNE2/DDP细胞后再输注NK细胞。检测各组裸鼠成瘤时间、成瘤率、肿瘤体积和抑瘤率。免疫组织化学法检测移植瘤组织中NKG2DLs的表达。结果：A、B、C、D和E、F、G、H组肿瘤出现时间分别为(5.43±1.00)、(8.50±035)、(1110±1.25)、(13.56±1.23) d和 (9.00±1.00)、(12.30±0.78)、(14.50±0.50)、(17.25±0.77) d,其中舒尼替尼与NK细胞联合处理组（D 和H 组）成瘤时间最晚（P<0.01）。A、B、C、D和E、F、G、H组肿瘤质量分别为(2.63±089)、(1.00±003)、(065±0.08)、(0.21±0.27) g和(2.79±0.83)、(1.18±0.77)、(0.96±0.50)、(0.86±0.82) g,其中舒尼替尼与NK细胞联合处理组肿瘤质量最小（P<001）;舒尼替尼与NK细胞联合处理的D组和H组的抑瘤率分别为92%和69%。舒尼替尼上调移植瘤组织中NKG2DLs的表达,且ABCG2highCNE2/DDP细胞移植瘤中的NKG2DLs表达率高于ABCG2lowCNE2/DDP细胞。结论：舒尼替尼可在体内诱导CNE2/DDP移植瘤组织表达NKG2DLs,增强NK细胞的抗肿瘤作用。     

分子靶向药物诱导耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞NKG2DLs的表达

目的：探讨不同分子靶向药物对高表达与低表达ATP结合转运蛋白G超家族成员2（ATPbinding cassette superfamily G member 2,ABCG2）的人耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞（分别简写为ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP）表面NKG2D配体（natural killer group 2 member D ligands, NKG2DLs）表达的诱导作用及其对NK细胞杀伤敏感性的影响。方法：免疫磁珠法分选ABCG2 highCNE2/DDP、ABCG2lowCNE2/DDP细胞及NK细胞。流式细胞术检测分选细胞的纯度和不同分子靶向药物（硼替佐米、索拉非尼、舒尼替尼）处理前后ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞NKG2DLs的表达率。LDH释放法检测不同药物处理前后ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞对NK细胞杀伤的敏感性。结果：ABCG2 highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞表面ABCG2的表达率分别为（91.40±2.32）%和（1.70±0.24）%。分选后NK细胞中CD3-CD16+CD56+细胞的比例达90%以上。药物处理前,ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2和ULBP3呈弱表达;经不同分子靶向药物处理后,5种NKG2DLs的表达率均明显上升(P<001),以舒尼替尼处理后NKG2DLs的表达率升高最明显。随着NKG2DLs表达的上调,ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞对NK细胞杀伤的敏感性也随之升高。结论：不同分子靶向药物可诱导耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞NKG2DLs的表达,以舒尼替尼的诱导作用最强,且肿瘤细胞NKG2DLs的表达与其对NK细胞杀伤敏感性之间存在线性关系。     

舒尼替尼促进HepG2细胞NKG2DLs表达从而增强NK细胞杀伤活性

目的：探讨舒尼替尼促进肝癌细胞自然杀伤细胞2族成员D配体（natural killer group 2 member D ligands,NKG2DLs）表达及提高NK细胞杀伤肿瘤细胞的作用。方法：常规体外培养HepG2细胞,免疫磁珠法从健康志愿者外周静脉血中分选NK细胞,流式细胞技术检测NK细胞纯度及1 μmol/L舒尼替尼孵育24 h前后肝癌细胞NKG2DLs表达率;LDH释放测定法检测NK细胞对药物处理前后靶细胞的杀伤活性,实时荧光定量PCR检测药物处理前后HepG2细胞NKG2DLs mRNA的表达情况。结果：分选后NK细胞(CD3-CD16+CD56+细胞)的纯度达78%以上;经舒尼替尼处理后靶细胞MHC-Ⅰ类链相关分子A或B（MHC class Ⅰ-related chain molecules A/B, MICA/MICB）、人巨细胞病毒糖蛋白UL16结合蛋白（UL16-binding proteins,ULBPs）的表达率均有升高,以MICA、MICB和ULBP2升高最明显（F=17.73,P=0.000）。当效靶比为10∶1、20∶1时,NK细胞对舒尼替尼处理前后HepG2细胞的杀伤活性分别从(9.47±1.11)%、(20.45±1.94)%上升到(28.88±123)%、(44.93±1.57)%,舒尼替尼处理前后NK细胞对靶细胞杀伤活性的差异有明显统计学意义(P<0.05)。舒尼替尼处理HepG2细胞后,MICA、MICB和ULBP2 mRNA表达水平明显升高（F=62.628,P=0.000）。结论：舒尼替尼能选择性诱导肿瘤细胞高表达NKG2DLs(MICA/B和ULBP2),并增强NK细胞杀伤活性。     

IL-2、IL-15增强免疫编辑后NK细胞NKG2D的表达及其对鼻咽癌CNE2细胞的杀伤活性

目的:观察IL-2、IL-15对免疫编辑后NK细胞NKG2D的表达及其对鼻咽癌CNE2细胞杀伤活性的影响.方法:抗CD56磁珠纯化NK细胞后分为4组:(1)编辑前NK细胞组:加入1130 U/ml IL-2;(2)单纯编辑组:NK细胞与CNE2细胞10:1混合,加入100U/ml IL-2;(3)IL-2再培养组:纯化编辑后的NK细胞,加入1 000 U/ml IL-2;(4)IL-15再培养组:纯化编辑后的NK细胞,加入10 ng/ml IL-15.24 h后,流式细胞仪检测各组NK细胞表面NKG2D的表达;LDH释放测定法测定效靶比20:1时各组NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性.结果:编辑前NK细胞组、单纯编辑组、IL-2再培养组、IL-15再培养组NK细胞表面NKG2D的表达率分别为(97.63±0.83)%、(53.50±1.25)%、(94.47±1.00)%、(98.07±0.21)%.IL-2、IL-15再培养组NK细胞NKG2D的表达分别比单纯编辑组有显著的增加(P＜0.01),该4组NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性分别为(35.90±3.27)%、(4.70±2.30)%、(31.70±3.56)%、(40.18±2.94)%,IL-2再培养组、IL-15再培养组明显提高编辑后NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性(P＜0.01),IL-15的作用强于IL-2.结论:高剂量IL-2、IL-15可以上调免疫编辑后NK细胞表面NKG2D的表达,恢复编辑后NK细胞对鼻咽癌细胞CNE2的杀伤活性,IL-15的作用强于IL-2.     

舒尼替尼通过NF-кB旁路途径诱导人肝癌HepG2细胞NKG2DLs的表达

目的：探讨舒尼替尼通过NF-κB信号通路诱导肝癌HepG2细胞表达自然杀伤细胞2族成员D配体（natural killer group 2 member D ligands, NKG2DLs)的分子机制。方法： 常规体外培养HepG2细胞,单细胞凝胶电泳检测1 μmol/L舒尼替尼处理HepG2细胞24 h前后DNA损伤情况,实时荧光定量PCR检测药物处理前后细胞DNA损伤修复分子mRNA的表达,Western blotting 检测分别以NF-κB激动剂和抑制剂处理HepG2细胞前后NKG2DLs蛋白表达及IKKα和IκBα表达情况。结果： 舒尼替尼药物处理后,HepG2细胞均发生不同程度DNA损伤;且AP-1、ATM、ATR mRNA表达水平明显升高,而CHK1、CHK2、GSK3β mRNA表达水平明显降低;不同处理组间DNA损伤修复相关信号分子mRNA表达有显著差异（F=61.242,P=0.000）。NF-κB转录活性抑制剂JSH-23可降低HepG2细胞NKG2DLs蛋白表达量,而NF-κB转录活性激动剂TNF-α、PMA均可增加HepG2细胞NKG2DLs蛋白表达量（F=15.043,P=0000）;舒尼替尼处理肿瘤细胞后NF-κB的抑制分子IKKα被抑制,而激活分子IκBα被激活。结论： 舒尼替尼可通过DNA损伤修复分子激活NF-κB旁路途径诱导肿瘤细胞表达NKG2DLs。     

苹果酸舒尼替尼诱导高表达三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2的耐药鼻咽癌细胞高表达NKG2D配体

目的:探讨苹果酸舒尼替尼(sunitinib malate, SU11248)对高表达三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette superfamily G member 2,ABCG2)耐药鼻咽癌细胞CNE2/DDP(ABCG2high CNE2/DDP)表达NKG2D配体的诱导作用.方法:利用免疫磁珠技术分离ABCG2highCNE2/DDP细胞及同种异体反应性自然杀伤细胞(allo-reactive natural kill cell, Allo-NK),流式细胞技术检测分离后细胞的纯度及苹果酸舒尼替尼处理前后ABCG2highCNE2/DDP细胞NKG2D配体表达率,LDH释放测定法检测苹果酸舒尼替尼处理前后ABCG2highCNE2/DDP细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性.结果:ABCG2highCNE2/DDP细胞分离后ABCG2的表达率为(91.40±2.32)%,Allo-NK细胞分选后CD3-CD16 CD56 细胞的纯度达90%以上.经苹果酸舒尼替尼处理后,ABCG2highCNE2/DDP细胞的NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3的表达率由药物处理之前的(2.92±0.33)%、(4.27±0.33)%、(5.80±0.62)%、(11.10±3.15)%、(7.75±1.14)%分别上升到(89.12±4.56)%、(66.10±2.22)%、(67.56±4.19)%、(69.37±8.83)%、(63.28±3.31)%.在效靶比为10∶1、20∶1时,苹果酸舒尼替尼处理前后Allo-NK细胞对ABCG2highCNE2/DDP细胞的杀伤率分别为(15.32±13.86)%、(27.26±6.81) % 及(41.12±4.12)%、(57.25±2.37)%,处理后的杀伤率有明显的提高(F=15.58, P＝0.000).结论:苹果酸舒尼替尼通过诱导高表达NKG2D配体(MICA/B、ULBP1-3),使ABCG2high CNE2/DDP细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性明显增强.     

西妥昔单抗对耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞和NK细胞的双重免疫调节作用

目的：探讨西妥昔单抗(cetuximab)对耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞NKG2D配体（natural killer group 2 member D ligands,NKG2DLs）的表达及NK细胞分泌IFNγ的影响。方法：流式细胞术检测高、低表达ABCG2（ATPbinding cassette superfamily G member 2)的耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞（简称ABCG2lowCNE2/DDP细胞和ABCG2highCNE2/DDP细胞）表面EGFR的表达水平,以及西妥昔单抗处理前后两种CNE2/DDP细胞表面NKG2DLs的表达水平。西妥昔单抗处理前后的两种CNE2/DDP细胞分别与NK细胞共培养,ELISA检测上清中IFNγ的分泌水平,LDH释放法检测NK细胞对不同组CNE2/DDP靶细胞的杀伤。结果：ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞表面EGFR的表达率分别为（43.60±2.01）%和（47.20±207）%。西妥昔单抗上调ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞表面MICA、MICB、ULBP1和ULBP2的表达,但下调ABCG2highCNE2/DDP细胞表面ULBP3的表达。西妥昔单抗处理两种CNE2/DDP细胞后,与NK细胞的共培养体系中IFNγ的分泌水平明显上调（P<001）;西妥昔单抗增强两种CNE2/DDP细胞对NK细胞杀伤的敏感性（P<0.01）。结论：西妥昔单抗可上调耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞NKG2DLs的表达,间接刺激NK细胞分泌IFNγ,具有双重免疫调节作用。     

IL-2、IL-15增强免疫编辑后NK细胞NKG2D的表达及其对鼻咽癌CNE2细胞的杀伤活性

目的：观察IL2、IL15对免疫编辑后NK细胞NKG2D的表达及其对鼻咽癌CNE2细胞杀伤活性的影响。方法：抗CD56磁珠纯化NK细胞后分为4组：（1）编辑前NK细胞组：加入100 U/ml IL2;（2）单纯编辑组：NK细胞与CNE2细胞10∶1混合,加入100U/ml IL2;（3）IL2再培养组：纯化编辑后的NK细胞,加入1 000 U/ml IL2;（4）IL15再培养组：纯化编辑后的NK细胞,加入10 ng/ml IL15。24 h后,流式细胞仪检测各组NK细胞表面NKG2D的表达;LDH释放测定法测定效靶比20∶1时各组NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性。结果：编辑前NK细胞组、单纯编辑组、IL2再培养组、IL15再培养组NK细胞表面NKG2D的表达率分别为(97.63±0.83)%、(53.50±1.25)%、(94.47±1.00)%、(98.07±0.21)%。IL2、IL15再培养组NK细胞 NKG2D的表达分别比单纯编辑组有显著的增加（P<0.01),该4组NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性分别为(35.90±3.27)%、(4.70±2.30)%、(31.70±3.56)%、(40.18±2.94)%,IL2再培养组、IL15再培养组明显提高编辑后NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性（P<0.01）, IL15的作用强于IL2。结论：高剂量IL2、IL15可以上调免疫编辑后NK细胞表面NKG2D的表达,恢复编辑后NK细胞对鼻咽癌细胞CNE2的杀伤活性,IL15的作用强于IL2。     

顺铂对鼻咽癌细胞NKG2D配体表达和NK细胞杀伤活性的增强作用

 目的 研究顺铂(Cisplatin, DDP)作用前后人鼻咽癌细胞CNE2 NKG2D配体和HLA-Ⅰ类分子表达的改变及NK细胞杀伤活性的变化。 方法 MTT法测定DDP对CNE2细胞的50%抑制量（IC₅₀）;以此浓度DDP作用CNE2细胞24h,乳酸脱氢酶释放法检测效靶比20∶1时,NK细胞对DDP作用前后的CNE2细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测DDP作用前后的CNE2细胞表面NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULBP2、 ULBP3)和HLA-Ⅰ类分子表达的变化。 结果 DDP对CNE2细胞的IC₅₀为5mg/L。效靶比20∶1时,NK细胞对5mg/L DDP作用前后的CNE2细胞的杀伤活性分别为 （38.11±1.41）%,（47.71±1.53）%,差异有统计学意义（P＜0.05）,DDP作用后CNE2细胞表面MICA/B、ULBP1、 ULBP3表达显著升高,与作用前相比差异有统计学意义（P＜0.05）。ULBP2、HLA-Ⅰ类分子无明显变化(P＞0.05)。 结论 DDP能提高CNE2细胞NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULBP3)的表达,从而增强CNE2细胞对NK细胞杀伤的敏感度。     

舒尼替尼治疗肾细胞癌的新进展

肾细胞癌（ｒｅｎａｌｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ,ＲＣＣ）是最常见的肾脏肿瘤,其发病率呈逐年上升趋势,近年来随着ＲＣＣ增殖分子机制研究的深入和新的分子靶向药物不断问世,ＲＣＣ患者的生存率及生活质量均得到显著提高,ＲＣＣ的治疗进入了分子靶向时代。更重要是的,多靶点药物舒尼替尼已经取代传统的ＩＦＮ被列为转移性ＲＣＣ的一线标准治疗药物,联合分子靶向治疗与免疫治疗将是未来的发展方向。本文就舒尼替尼治疗ＲＣＣ的研究现状及进展作一综述。     

苦参碱诱导自然杀伤细胞对白血病K562细胞杀伤的实验研究

目的 探讨中药苦参碱对人自然杀伤（NK）细胞体外杀伤白血病细胞的作用及可能的分子机制.方法 以人慢性粒细胞白血病K562细胞为靶细胞,采用CFSE/PI双染色法流式细胞术检测不同质量浓度（02、0.5、0.8 mg/ml）苦参碱处理后,人NK细胞在不同效靶比下对K562细胞的体外杀伤活性.流式细胞术分析不同浓度苦参碱处理24 h对NK细胞主要活化性受体NKG2D和抑制性受体CD158a、CD158b表达的影响及K562细胞膜上NKG2D配体MICA/B、ULBP1、ULBP 2、ULBP 3表达的改变.结果 效靶比为5∶1时,NK细胞对0.2、0.5和0.8 mg/ml苦参碱处理后的K562细胞杀伤率分别为32.8％、38.1％和40.5％,较处理前均有不同程度增高（29.2％）;但进一步增加效靶比（10：1）后,NK细胞杀伤活性改变差异无统计学意义（P＞0.05）.苦参碱处理24 h,NK细胞抑制性受体CD158a、CD158b的表达均较处理前降低,而活化受体NKG2D的表达则增高.K562细胞表面NKG2D配体ULBP1和ULBP2分子的表达也较处理前增高（平均荧光强度分别为174.33±39.93比275.67±32.88,517.6±47.97比1368.6±49.43,P＜0.05）.结论 苦参碱可增强NK细胞对白血病K562细胞的体外杀伤活性,其机制可能与NK细胞受体及配体表达调节作用有关.     

以NKG2A 为靶点的肿瘤免疫治疗：现状、问题与对策

自然杀伤细胞2 族成员A（NKG2A）为免疫细胞表面重要的免疫检查点,NKG2A 与其配体HLA-E 的结合会抑制NK 细胞和T 细胞的免疫效应功能,甚至使之发生功能耗竭,导致肿瘤细胞免疫逃逸。抗NKG2A 抗体可以通过阻断NKG2A 与其配 体的结合而恢复NK 细胞和T 细胞的功能,从而唤醒强大的抗肿瘤免疫。与其他免疫检查点（如PD-1、CTLA-4 等）相比,NKG2A 阻断性抗体在临床肿瘤治疗中具有其独特的优势,其阻断NKG2A 的识别及其信号通路,能够同时逆转T 细胞和NK 细胞的功能 耗竭,全面唤醒机体的抗肿瘤效应。基于NKG2A 的抗肿瘤免疫疗法正在开展多项临床试验,显示出良好的安全性和有效性。本 文就NKG2A 及其配体的表达与信号转导、NKG2A 介导免疫细胞的功能耗竭,以及目前以NKG2A 为靶点的肿瘤免疫治疗策略和 临床研究进展现状、存在问题和对策进行阐述,为以NKG2A 为靶点的肿瘤免疫治疗策略的开发和临床应用提供参考。     

同种异体NK细胞对人多药耐药鼻咽癌细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

目的: 研究同种异体自然杀伤（natural killer，NK）细胞对人多药耐药鼻咽癌细胞CNE2/DDP裸鼠皮下移植瘤的抑制作用，探讨异体间的免疫治疗。方法：PCRSSP法分析CNE2/DDP细胞人白细胞抗原（human leucocyte antigen， HLA）基因型和健康人NK细胞表面的抑制性杀伤细胞免疫球蛋     

人鼻咽癌顺铂耐药细胞系 (CNE2/DDP)及其亲代细胞 (CNE2)的比较基因组杂交研究

背景与目的：比较基因组杂交(comparative genomic hybridization,CGH)是一种在荧光原位杂交(FISH)技术上发展起来的,用于检测两个基因组间相对DNA拷贝数的改变(缺失或扩增),并将这些变化在染色体上进行定位的分子细胞遗传学方法。为全面了解鼻咽癌耐药细胞与药物敏感细胞在基因组DNA水平上可能存在的差异,以及这种差异在肿瘤耐药性产生中的意义,我们用CGH技术对鼻咽癌耐药细胞系(CNE2／DDP)和其亲代药物敏感细胞(CNE2)的基因组DNA进行检测和分析。方法：提取两种癌细胞及正常胎盘组织的基因组DNA,以随机引物法进行荧光标记(CNE2／DDP和CNE2 DNA以Fluorescein-12-dUTP标记,探针显绿色荧光;正常胎盘组织以Tetramethylrhodamine-5-dUTP标记,探针显红色荧光),将标记的DNA探针同时与正常淋巴细胞分裂中期染色体进行杂交,杂交信号在荧光显微镜下经CCD(charge coupled device)摄像装置摄取,并通过荧光数字图像分析系统(quips CGH program)进行数据处理,计算两种荧光的比率并绘制分析图。结果：CNE2细胞存在广泛的染色体改变,主要表现在1q,3q,5p,6p,7p,8q,9q,11p,12q,19q的扩增和4q,12p,13p,14p,15p,18,20q,21p,22的缺失。从CNE2诱导的耐药细胞系CNE2／DDP恒定表现为8q,19q的扩增和8p的缺失,其它的染色体均未发现明显异常的扩增或缺失。将CNE2／DDP在不含药物的培养基中连续传代培养1个月后重复CGH,发现与连续药物处理的CNE2／DDP结果一致。CNE2／DDP细胞较CNE2细胞具有更为正常和稳定的染色体组成。结论：CNE2／DDP细胞是在耐药诱导过程中选择出来的单一的耐药细胞克隆。肿瘤细胞耐药的产生主要是一个克隆选择过程,即被诱导产生了耐药的细胞克隆在有药物存在的生存压力下被选择出来。     

Increase of CIK cell efficacy by upregulating cell surface MICA and inhibition of NKG2D ligand shedding in multiple myeloma

Multiple myeloma, which is a monoclonal plasma cell malignancy, still remains incurable despite recent progress in our understanding of this disorder. Adoptive immunotherapy of multiple myeloma using cytokine‐induced killer cells is yielding promising results in clinical trials; however, some myeloma cells still evade immune surveillance by various unknown molecular mechanisms. This study aims at increasing the efficacy of cytokine‐induced killer cells in targeting this tumor, using selective small‐molecule inhibitors which increase and stabilize surface expression of the natural killer group 2, member D ligand, major histocompatibility complex class I polypeptide‐related sequence A (MICA) on myeloma cells. We treated 2 multiple myeloma cell lines—U266 and KMS‐12‐PE—with 3 drugs. One of these drugs (sodium butyrate) is a histone deacetylase inhibitor. Another drug which was used (matrix metalloproteinase inhibitor III) blocks ligand shedding while the third drug (phenylarsine oxide) obstructs surface ligand internalization. The effect of these drugs on cell viability was determined using the 3‐(4,5‐dimethylthiazol‐2‐yl)‐2,5‐diphenyltetrazolium bromide assay, surface ligand expression was examined using flow cytometry, and ligand shedding was assessed using enzyme‐linked immunosorbent assay. We demonstrated that cytokine‐induced killer cells have increased cytotoxicity against multiple myeloma cells after combined drug treatment than without drug pretreatment. We also established that this increased cytotoxicity was due to potent upregulation and stabilization of surface MICA on the surface of these tumor cell lines. Our study thus highlights further therapeutic options which could be used for the treatment of multiple myeloma patients.