固相放射免疫法、固相酶免疫法及免疫电镜法检测甲型肝炎抗原

从甲型肝炎暴发点收集的甲型肝炎病人的粪便50份,采用以国产聚苯乙烯珠为固相载体的放射免疫法(SPRIA)及酶免疫法(ELISA)检测甲型肝炎抗原(HAAg),发现阳性16份。同时检测正常人粪便21份,结果均阴性。二种方法符合率为95.8％。用免疫复合物电镜法检测(IEM)10例,见HAAg颗粒7例。该10例同时经三种方法检测均阳性者6例,均阴性者1例;余3例各法均有1例阴性,而其他二法阳性。3份标本与美国Abbott厂出品的检     

食蟹猴疟原虫抗原的固相放射免疫检测

<正> 疟疾是严重危害人民健康的疾病之一,但目前对疟疾的诊断仍以末梢血涂片染色镜检来确定。该技术不仅费时耗力,而且敏感度受镜检员的技术和疲劳程度的影响很大,所以不适于大规模流行病学调查之用。而血清学试验测定抗体的方法不能区分现症感染还是既往感染。因此急需寻找一个简便、灵敏、准确和适于大批样品快速处理的方法。     

用协同凝集试验和SPA—固相免疫电镜技术检测EHFV抗原

本文建立了检测流行性出血热病毒(EHFV)抗原的协同凝集试验(COA)和SPA—固相免疫电镜技术(SPA—SPIEM)。COA检测粗制抗原时,先以正常鼠脑和肺悬液吸收用于致敏的抗血清,并用Cowanl株葡萄球菌预先处理抗原,可排除非特异性凝集反应。SPA—SPIEM似较COA敏感。研究结果提示COA和SPA—SPIEM均可用于EHFV抗原的检测,有可能被用于EHF疫区宿主流行病学调查和疾病的快速诊断。     

固相酶联免疫测定法检测NS1抗原在登革病毒感染早期诊断中的应用

目的探讨固相酶联免疫测定（ELISA）法检测NS1抗原在登革病毒感染早期诊断中的应用价值。方法选取登革病毒感染早期患者血清171份,非登革病毒感染发热患者血清11份,正常人血清10份,采用ELISA法检测全部192份血清的登革病毒NS1抗原和IgM抗体;采用逆转录-聚合酶链反应-限制性内切酶酶切片段长度多态性分析（RT-PCR-RFLP）技术对发病5 d内的125份血清进行扩增和鉴定分型;并采用C6/36细胞微量培养法对发病第1、2天的41份血清进行登革病毒分离培养。结果登革病毒感染患者发病2 d内、3～5 d以及6～10 d血清NS1抗原的检出率分别是92.7%（38/41）、83.3%（70/84）、10.9%（5/46）;IgM抗体的检出率分别是2.4%（1/41）、51.2%（43/84）、97.8%（45/46）;非登革病毒感染的发热患者及正常人血清中,有1例疟疾患者血清登革病毒IgM抗体呈阳性,NS1抗原无一例阳性。RT-PCR在登革病毒感染患者发病第1、2天和3～5天的检出率分别是85.4%（35/41）、83.3%（70/84）;登革病毒感染患者发病第1、2天血清的病毒分离培养阳性率分别是80.0%（16/20）、38.1%（8/21）,总分离率58.5%（24/41）;RT-PCR-RFLP分型鉴定技术及间接免疫荧光法（IFA）均证实2006年广州流行株为登革Ⅰ型病毒。结论ELISA法检测登革病毒NS1抗原操作技术成熟,且具有敏感性高、特异性好的特点,对登革病毒感染的早期诊断和疫情的早期控制具有重要意义,适合于基层医疗机构常规应用。     

应用固相酶联免疫试验法检测脑脊液中免疫球蛋白G、A和M

测量脑脊液(CSF)免疫球蛋白(Ig)含量,对于诊断某些神经系统疾病,是很有意义的.本文介绍一种新技术-固相酶联免疫试验,用于检测CSF IgG、IgA和IgM.该法既敏感又特异.方法的基本程序是,在96孔微型聚氯乙烯反应板各孔中,加100μl含Ig的磷酸缓冲液(PBS),其中IgG、IgA和IgM浓度分别为100、20和20.μg/ml.4℃孵育过夜.冷PBS洗3次.为了封闭聚氯乙烯表面残留的结合点,加1%牛血清白蛋白(BSA)PBS 200μl,室温3小时.冷PBS洗3次后,再分别加100μl 1∶100倍的抗血清(抗人IgG、     

甲状腺过氧化物酶抗体固相放射免疫法建立及临床应用

以本所制备的７Ｇ７ＴＰＯ单克隆抗体腹水稀释４００倍后包被聚苯乙烯管，建立了ＴＰＯＡｂ检测的固相放射免疫法，测定结果以抑制率表示，抑制率〉１２％为阳性。不同ＡＩＴＤ患者的阳性率分别为：桥本氏甲状腺炎９６．３％；Ｇｒａｖｅｓ病６５．６％；原发性甲减５２．９％，研究表明：本法灵敏度高，特异性强，重复性好，操作简便。     

酶标固相免疫测定(ELISA)检测乙型肝炎e抗原

本测定所用方法为以聚苯乙烯反应板为载体的双抗体夹心法。用于包被反应板及酶标记的抗HBeIgG系用DEAE-纤维素层析法从抗HBe阳性血清中提取而得。检测的操作步骤如下:(1)用0.75％鞣酸溶液处理聚苯乙烯反应板。43℃,1小时。洗涤。(2)加入抗HBe IgG(20～25微克/毫升)100微升。4℃过夜。洗涤。(3)在测定孔中加入血清标本50微升,正常人血清50微升;阳性对照孔中用HBeAg阳性血清代替血清标本;阴性对照孔中只加正常人血清。43℃,1小时。洗涤。(4)加入用含     

前列腺特异抗原的酶联免疫分析

用本室纯化的人前列腺特异抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，经淋巴细胞杂交瘤技术，建立了４株体外稳定分泌抗人前列腺特异抗原的杂交瘤细胞株，分别命名为ＱＷ２、ＱＷ４、ＱＷ７和ＱＷ８。将杂交瘤细胞注入同系小鼠腹腔制备腹水，用ＥＬＩＳＡ方法测得腹水抗体效价为１０６，其中ＱＷ８的抗体滴度最高。ＱＷ８腹水经５０％硫酸铵沉淀后包被酶标板，建成双抗体夹心ＥＬＩＳＡ，标准曲线线性良好，灵敏度为１．０μｇ／Ｌ血清稀释曲线，回收率及批内、批间变异系数测定表明，该方法的准确性和精密度均符合质量控制要求。检测８１名５０岁以下正常男性血清，ＰＳＡ均值为１．０５±０．７３μｇ／Ｌ，１０例临床确诊为前列腺癌患者的血清ＰＡＳ均值为３６．５±２．３μｇ／Ｌ明显高于正常值。     

微丝蚴固相抗原酶免疫试验诊断丝虫病的初步报告

以微丝蚴固相抗原酶免疫试验法,检查了101例微丝蚴血症患者和200例健康人。按本文拟订的标准判断阳性、可疑阳性、假阴性和假阳性率分别为:91.09％,7.92％,0.99％和1.5％。在与血吸虫、肺吸虫和钩虫病人血清作交叉试验中,仅发现与钩虫病人(1/10)有交叉阳性。用本法和厚血膜片法现场检查了480例,发现前者阳性20例,后者7例(其酶免疫试验均阳性)。初步认为,本法诊断丝虫病具有较好的敏感性、特异性和重现性,因而具有一定实用价值。     

纤维素固相放射免疫测定甲胎蛋白

本文在国内首次报道了纤维素固相RIA法测定甲胎蛋白。本法简便灵敏,快迅稳定,平均回收率95.7±8.08％,批间变异系数r=7.8±1.7％,批内变异系数r=5.8±2.6％,线性关系较好(r=0.999),灵敏度比液相RIA提高6倍,32份血样品用双位点夹心法和试剂盒的液相RIA进行比较,结果经统计学处理,相关系数分别为r=0.82,r=0.80,均具有显著相关性。     

血清胰岛素固相放射免疫测定

用马来酸酐－苯乙烯共聚物结合二抗ＩｇＧ的方法，制备出二抗固化管，建立了固相放射免疫测定血清胰岛素的方法。以ＬｏｇｉｔＢ／Ｂ０方法绘制标准曲线呈直线相关（ｒ＝０．９９９９）；灵敏度３ｍＵ／Ｌ，回收率９４．９～１０６．２９％；批内ＣＶ３．８～８．８％，批间ＣＶ５．３～１７．４％，与液相方法对比测定样本８２份，两种方法结果十分接近（ｒ＝０．９７５，Ｐ＜０．００１）。     

用单克隆抗体酶联免疫法检测临床标本中单纯疱疹病毒抗原

本文报告在太原市6所医院从各类感染性疾病中采取各种临床标本2067份,正常妇女阴道分泌物72份,用ELISA法快速分型检测单纯疱疹病毒抗原(HSV-Ag),总阳性率为24.5％,其中HSV-1占4.4％,HSV-2占20.1％;正常对照总阳性率为7.0％,HSV-1占1.4％,HSV-2占5.6％。HSV-Ag阳性率和型分布因感染部位而不同:肺部感染以HSV-1居多,生殖器疱疹、疱疹性脑炎、宫颈癌和胎儿畸型均以HSV-2为主。     

塑料试管固相放射免疫法测定甲胎蛋白

本文将甲胎蛋白(AFP)特异的抗体IgG包被在塑料管内壁,建立了一种快速、简便、高灵敏、特异的固相竞争放射免疫分析(RIA)法测定AFP。标准曲线范围为10～800ng/ml,最小检出值和正常值均<10ng/ml。批内CV％为7.1％,批间CV％为10.3％。本文与液相RIA法平行测定61扮样品的AFP浓度(10.1～3030ng/ml)。经统计学处理,两者之间具有良好的直线相关,表明本文建立的方法可以替代液相RIA法测定AFP,并适用于大批样品和自动化检测。     

Leptin固相放射免疫分析法的建立

目的：研究瘦素（Leptin）固相放射免疫分析法的建立。方法：将提取的兔抗人Leptin特异性抗体IgG,包被在活化的塑料试管内壁,建立了简便、快速、高灵敏、特异的固相竞争RIA,测定人血清Leptin。结果：标准曲线范围为（0.5～24）ng/ml;测定69例健康人血清正常值为（3.68±1.46）ng/ml;最小检出值为0.38ng/ml,批内CV%为5.6%,批间CV%为8.8%;回收率为92%。本文所建方法与液相RIA标准曲线具有良好的平行性;使用两种方法平行测定88份血清Leptin浓度（1.00～7.68）ng/ml,经统计学处理两者之间具有良好的直线相关（r=0.987,P〈0.001,Y=0.977X）。结论：所建立的Leptin固相放射免疫分析法为科研及临床病人血清Leptin浓度的测定提供了一种新的检测方法。     

应用固相放射免疫法检测乙型肝炎病毒感染者的γ干扰素

应用固相放射免疫法，对４８例乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染者的血清ＩＦＮ－γ水平及其外周血单个核细胞诱生ＩＦＮ－γ的能力进行了研究。结果表明，慢性乙型肝炎患者ＩＦＮ－γ的诱生能力明显低于正常对照，推测其ＩＦＮ－γ系统可能存在着某种程度的缺陷，这或许与造成ＨＢＶ慢性感染状态有关。     

酶免疫和放射免疫技术在检测单克隆抗体中的应用

随着淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术的迅猛发展和应用,越来越需要有微量、快速、简易、敏感、特异,适于大规模筛选检测单克隆抗体(单抗)的技术方法。放射免疫测定法(RIA)和酶免疫测定法(EIA)是目前免疫学中符合上述要求的两种技术。本文就这两种广泛应用的技术在单抗筛选检测方面的应用加以综述,并讨论其优缺点。