实时荧光定量PCR检测脂多糖对NR8383细胞TNF-α mRNA的影响

目的实时荧光定量PCR检测脂多糖(LPS)诱导NR8383肺泡巨噬细胞前后TNF-αmRNA的表达情况。方法体外培养的肺泡巨噬细胞系NR8383分成LPS刺激组和PBS(磷酸盐缓冲液)对照组,LPS终浓度为1μg.mL-1,共培养2 h后,TRIzol法提取细胞总RNA,SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测细胞TNF-αmR-N     

MicroRNA-146a在脂多糖诱导的肺泡巨噬细胞中表达的动态变化

目的 观察并分析microRNA-146a(miR-146a)在脂多糖(LPS)刺激肺泡巨噬细胞中不同时间表达的变化,为探讨miR-146a对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控作用及机制奠定基础.方法 体外培养的肺泡巨噬细胞系NR8383分成LPS刺激组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,1 μg/mL的LPS刺激3 h,6 h,12 h后采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中TNF-α的表达水平,实时荧光定量PCR(Taqman探针法)检测细胞miR-146a的表达情况.运用SPSS13.0统计软件,采取单因素方差分析或t检验进行数据统计分析.结果 ①LPS刺激3 h,6 h,12 h,细胞上清液中TNF-α的表达比对照组明显升高(P＜0.01);②LPS刺激6 h,12 h细胞中miR-146a表达增高(P＜0.01),且呈持续增高趋势.结论 LPS刺激后,miR-146a在NR8383肺泡巨噬细胞中的表达上调,且随着刺激时间的延长,miR-146a的表达有增高的趋势,推测其可能参与了肺泡巨噬细胞的炎症反应调控.

Abstract：

Objective To explore the mechanism and effect of miR-146a on alveolar macrophages and to observe the changes of miR-146a expression in the LPS-induced alveolar macrophages. Method NR8383 alveolar macrophages were divided into LPS-stimulated group and control group, and the cells of former group were treated with LPS ( 1 μg/mL) and then incubated for 3 h, 6 h and 12 h, respectively. The level of TNF-α in the supernatant of cells was assayed by using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and the expression of miR-146a of cells was detected by using Real-Time PCR (TaqMan probe).Statistical analysis carried out by using SPSS 13.0 software package in which One-way ANOVA and Student's t-test were used. Results Compared with control group, the levels of TNF-α in the supernatant of cells were significantly increased 3 h, 6 h and 12 h after LPS challenge (P ＜ 0.01 ). The expression of miR-146a increased 6 h and 12 h after LPS stimulation in NR8383 cells( P ＜0.01 ), and it had an upward tendency.Conclusions The expression of miR-146a in alveolar macrophages increases after LPS-stimulation. It hints miR-146a may be involved in the regulation of the inflammatory responses produced by alveolar macrophages.     

氯胺酮对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激的影响

目的研究氯胺酮对脂多糖(LPS)刺激的大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激的影响。方法体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383经氯胺酮(10、100和1000μmol/L)预处理,LPS刺激24 h后,应用试剂盒检测细胞培养上清液中丙二醛(MDA)及超氧化物岐化酶(SOD)的水平。结果与PBS组比较,LPS组培养上清液中MDA水平均明显增加,而SOD水平显著下降,而氯胺酮预处理组(100和1000μmol/L)对此具有抑制作用。结论氯胺酮对LPS所致的NR8383细胞的氧化应激损伤具有一定的保护作用。     

氯胺酮对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激的影响

目的 研究氯胺酮对脂多糖(LPS)刺激的大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激的影响.方法 体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383经氯胺酮(10、100和1000 umol/L)预处理.LPS刺激24 h后,应用试剂盒检测细胞培养上清液中丙二醛(MDA)及超氧化物岐化酶(SOD)的水平.结果 与PBS组比较,LPS组培养上清液中MDA水平均明显增加,而SOD水平显著下降,而氯胺酮预处理组(100和1000 umol/L)对此具有抑制作用.结论 氯胺酮对LPS所致的NR8383细胞的氧化应激损伤具有一定的保护作用.     

乙酰胆碱酯酶在脂多糖诱导肺泡巨噬细胞中的变化

目的 观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激大鼠肺泡巨噬细胞NR8383后乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,ACHE)的表达变化,为研究胆碱能抗炎通路的调控提供新的实验依据.方法 将体外去致热源培养的NR8383细胞分为对照组及LPS(1μg/mL)刺激组,于刺激后3、6、12、24 h各时间点分别离心收集上清液及细胞沉淀,采用酶联免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA)测定上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的变化,实时定量PCR检测细胞中AChE mRNA的表达改变,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞中AChE蛋白的表达变化,乙酰胆碱酯酶T-CHE测试盒检测上清液中AChE活性的变化.组间多重比较采用单因素方差分析,进一步采用LSD-t检验进行两两比较,P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 与对照组相比,TNF-α的含量在LPS刺激NR8383细胞后3h开始显著上升(P＜0.05),12 h达高峰,24 h下降但仍明显高于对照组水平(P＜0.05).与对照组相比,AChE mRNA于刺激后3h开始上升,升高(3.19±0.44)倍(P＜0.05),6h后达高水平并维持于此水平,6、12、24 h分别上调[(5.65±0.63)、(5.40±0.71)、(5.35±0.77)[倍(与对照组相比,均P＜0.05);AChE蛋白的表达及上清液中AChE的活性在LPS刺激后12 h与各自对照组相比均上升[AChE蛋白:(1.37±0.01) vs.(1.05±0.02),P＜0.05; AChE活性:(6.14±1.13) U/mLvs.(2.64±0.85) U/mL,P＜0.05],随后呈下降趋势,于LPS作用24 h时均低于各自对照组[AChE蛋白:0.65±0.05,P＜0.05,AChE活性:(0.56±0.19)U/mL,P＜0.05].结论 LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞后,AChE的表达增加,提示其可能参与肺泡巨噬细胞炎症反应的调控;LPS刺激后24 h,AChE mRNA仍处于高表达水平,AChE蛋白及活性却下降,提示在肺泡巨噬细胞炎症反应中可能存在AChE转录后水平的调控.     

氯胺酮对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激的影响

目的研究氯胺酮对脂多糖（LPS）刺激的大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激的影响。方法体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383经氯胺酮（10、100和1000μmol／L）处理，LPS刺激24h后，应用试剂盒检测细胞培养上清液中丙二醛（MDA）及超氧化物岐化酶（SOD）的水平。结果与PBS组比较，LPS组培养上清液中MDA水平均明显增加，而SOD水平显著下降，而氯胺酮预处理组（100和1000μmol／L）对此具有抑制作用。结论氯胺酮对LPS所致的NR8383细胞的氧化应激损伤具有一定的保护作用。     

B16F10黑素瘤细胞培养上清液对脂多糖刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α和一氧化氮的影响

目的 探讨B16F10黑素瘤细胞培养上清液对脂多糖(LPS)刺激小鼠腹腔巨噬细胞释放肿瘤坏死因子-α (TNF-α)和一氧化氮(NO)的影响.方法 体外培养同基因小鼠腹腔巨噬细胞,分为实验组和空白对照组.实验组加入B16F10黑素瘤细胞培养上清液,空白对照组加入RPMI 1640完全培养基,分别用LPS刺激后继续培养24 h,采用免疫细胞化学染色法及L929细胞抑制实验[四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法]检测巨噬细胞TNF-α的表达及活性,Griess法检测NO的含量.结果 实验组TNF-α阳性表达较空白对照组明显减少,TNF-α活性较空白对照组明显降低[吸光度(A值):0.746±0.049比0.387±0.030,P＜0.01];巨噬细胞释放NO的水平明显低于空白对照组(μmol/L:4.830± 1.384比11.455±0.175,P＜0.01).结论 B16F10黑素瘤细胞培养上清液对LPS诱导的同基因小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、NO具有抑制作用.     

高通量连续性血液滤过技术对脓毒症患者外周血单个核细胞miRNA-146a表达的影响

目的 前瞻性观察高通量连续性血液滤过(HVHF)治疗对严重脓毒症患者免疫功能及其外周血单个核细胞中miRNA-146a表达的影响.方法 选择严重脓毒症患者30例,分为HVHF组及对照组.①在两组治疗过程的0、6、12、24、48 h时相点,分离外周血单个核细胞,提取总RNA,荧光定量PCR法检测miRNA-146a表达量的变化;②两组患者治疗24 h后分离出外周血单个核细胞于体外培养,以LPS刺激,在4、8、12、24、48 h时相点检测单个核细胞中miRNA-146a表达量的变化;ELISA法检测单个核细胞培养液中TNF-α、IL-6、IL-10水平.结果 ①两组患者miRNA-146a表达量较治疗前均有所下调,但HVHF组较对照组下调明显(P<0.05);②HVHF组孵育的细胞在LPS刺激下各个时相TNF-α、IL-6的分泌水平均明显高于对照组(P<0.05);HVHF组TNF-α、IL-6在12 h分泌达高峰,对照组在8 h即达高峰;两组细胞IL-10分泌水平均持续升高,两组间各时相点IL-10分泌水平比较差异无统计学意义(P>0.05);③HVHF组孵育的细胞在LPS刺激下miRNA-146a表达量较孵育前有所升高,在12 h升高最明显(P<0.05),对照组在4、8 h时miRNA-146a表达都处于高水平状态,明显高于同时相的HVHF组(P<0.05).结论 HVHF通过大量清除脓毒症患者血循环中的炎症因子及促炎介质,从而下调部分miRNA-146a的表达水平,减轻严重脓毒症患者外周血单个核细胞的免疫抑制状态,使部分免疫功能得到恢复,可能是HVHF参与机体免疫内稳状态重建的作用机制之一.     

COX2抑制剂对大鼠肺泡巨噬细胞生长及炎症反应的影响及机制研究

目的探讨环氧合酶2(COX2)抑制剂塞来昔布对肺泡巨噬细胞凋亡、炎症反应及吞噬能力的影响。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测0. 1μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L塞来昔布对大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383的细胞毒性,选择合适的塞来昔布浓度。将NR8383细胞随机分为3组,即对照组、LPS组和LPS+塞来昔布组。对照组:细胞培养板加等体积磷酸盐缓冲液(PBS); LPS处理组:细胞用终浓度为1μg/ml的脂多糖(LPS)处理; LPS+塞来昔布组:10μmol/L的塞来昔布处理细胞1 h后,加1μg/ml的LPS处理细胞24 h。流式细胞术检测细胞凋亡率; Western blotting检测NF-κBp65、IκBα、Bax和Bcl-2蛋白表达; qRT-PCR检测炎症因子TNF-αmRNA表达;激光共聚焦技术检测巨噬细胞的吞噬能力。结果 0. 1～10μmol/L塞来昔布处理对NR8383细胞无细胞毒性,20μmol/L塞来昔布处理可抑制NR8383细胞活力。LPS组与对照组比较,细胞凋亡率升高,NF-κBp65和Bax蛋白表达升高,IκBα和Bcl-2蛋白表达降低,TNF-αmRNA表达升高,细胞吞噬能力降低(P 0. 05),LPS+塞来昔布组与LPS组比较,细胞凋亡率降低,NF-κBp65和Bax蛋白表达降低,IκBα和Bcl-2蛋白表达升高,TNF-αmRNA表达降低,细胞吞噬能力升高(P 0. 05)。结论塞来昔布可通过下调NF-κB信号抑制LPS诱导的NR8383细胞凋亡及炎症反应,并维持吞噬功能,从而对肺损伤起保护作用。     

过表达锌指蛋白A20可抑制肺泡巨噬细胞炎症反应

目的:通过建立A20过表达肺泡巨噬细胞株,研究A20对肺泡巨噬细胞炎症反应的影响及调控机制。方法:构建携带A20基因的慢病毒载体,转染大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383),筛选出稳定过表达A20基因的细胞株并行体外培养。向培养基中加入脂多糖(LPS,1μg/mL)进行干预,并于刺激后0.5、1、2、4h收集上清液及细胞。ELISA法测定上清液中细胞因子(TNF-α、IL-1β)及核因子κB(NF-κB)活性。Western印迹方法检测A20蛋白及核内p65含量。实时荧光定量PCR法测定A20mRNA含量。结果:LPS刺激后,A20过表达组(A20组)及正常对照组(VEC组)A20蛋白及mRNA含量都升高,并于1h达高峰,之后逐渐下降;且A20组较VEC组A20水平明显升高(P0.05)。与VEC组相比,A20组培养上清液中细胞因子(TNF-α、IL-1β)水平明显降低(P0.05);NF-κB DNA结合活性及核内p65含量也降低(P0.05)。结论:A20能够抑制肺泡巨噬细胞NF-κB活性及TNF-α、IL-1β分泌,进而抑制肺泡巨噬细胞炎症反应活性。     

iPSC-MSC来源的外泌体对LPS刺激肺泡巨噬细胞产生炎性因子的影响

目的探讨i PSC-MSC来源的外泌体(exosome,Exo)对LPS刺激的肺泡巨噬细胞释放炎性因子的作用。方法采用旋转超滤法提纯i PSC-MSC外泌体,以无外泌体培养基培养肺泡巨噬细胞NR8383,分别给予Exo(50μg/ml)、LPS(50ng/ml)、LPS(50ng/ml)+Exo(50μg/ml)培养24h,以不含Exo和LPS培养为对照组,利用酶联免疫标记法(ELISA)检测各组上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白浓度。结果提取物经透射电镜观察为圆形或半圆形囊泡,直径40~100nm,表达Exo标志物CD9和CD63;LPS组上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的浓度(435.38±36.31pg/ml、319.76±39.14pg/ml和408.33±43.44pg/ml)与空白对照组(37.48±8.75pg/ml、33.51±7.88pg/ml和37.73±8.46pg/ml)和Exo组(38.71±9.14pg/ml、32.05±6.81pg/ml和42.84±6.54pg/ml)比较显著上调(P0.01);LPS+Exo组TNF-α、IL-1β和IL-6的浓度(369.30±32.74pg/ml、249.23±36.77pg/ml和328.91±46.45pg/ml)与LPS组相比,明显减少(P0.05);空白对照组与Exo组的TNF-α、IL-1β和IL-6的浓度无显著性差异。结论成功富集Exo;i PSC-MSC来源的Exo可抑制LPS诱导的肺泡巨噬细胞表达炎性因子。     

谷氨酰胺抑制内毒素诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞TNF-α释放

目的 研究谷氨酰胺(Gin)调节内毒素(LPs)诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)肿瘤坏死因子(TNF)-α分泌及谷胱甘肽(GSH)在其中的作用.方法 原代培养成年雄性SD大鼠AECⅡ细胞,原代培养24 h后,分为空白对照、10.0 mmol/L Gin,1 μg/mL LPS、LPS+(0.5、2.0和10.0 mmol/L)Gln六组,每组3个孔.LPS刺激24 h,Gln在LPS刺激前8 h加入;另一组实验分为l μg/mL LPS,LPS+10.0 mmol/L Gln,LPS+100 μmol/L丁硫氨酸哑砜胺(BSO)、LPS+Gln+(1、10和100 μmol/L)BSO六组,每组3个孔.LPS刺激24 h,BSO和Gln在LPS刺激前8 h加入.以二硫双硝基苯甲酸(DTNB)法测定细胞内GSH浓度,酶联免疫(ELISA)法测定细胞上清TNF-α水平.统计学方法用方差分析(LDS-t检验)比较各组间差异.结果 谷氨酰胺可以提高LPS诱导大鼠AECⅡ细胞的GSH浓度,降低TNF-α的水平,其作用随浓度的增加而增加,在10 mmol/L浓度最为显著,GSH水平从(50.69±3.04)pmol/mgcell上升到(126.74±7.13)pmol/mg cell(P<0.01),TNF-α水平从(1104.5±48.8)pg/mL下降到(329.67±48.27)pg/mL(P<0.01);同时,谷氨酰胺的作用可以被10 μmol/L以上浓度BSO显著阻断(P<0.01).结论 谷氨酰胺可以抑制LPS诱导的大鼠AECⅡ细胞TNF-α的释放,其作用可能是通过促进GSH的合成而实现的.     

人退变椎间盘髓核组织中 miR-146a的表达及对 NP细胞增殖、凋亡和炎性细胞因子的影响作用机制

目的　检测人退变椎间盘髓核组织中 miR-146a的表达变化,并探讨其可能的作用机制。方法　实时荧光定量 PCR (qRT-PCR) 检测人退变腰椎间盘髓核组织中 miR-146a表达。用脂多糖（LPS）刺激人髓核（nucleus pulposus,NP）细胞模拟椎间盘变性,qRT-PCR检测 NP细胞中 miR-146a的表达变化。将 miR-146a mimics或 miR-146a inhibitor转染至 NP细胞,然后 LPS刺激 NP细胞,观察 miR-146a对 NP细胞增殖活性、凋亡、 TLR4蛋白表达及 IL-1β,TNF-α和 IL-6等炎性因子水平的影响。结果　miR-146a在椎间盘退变（intervertebral disc degeneration, IVDD组）椎间盘髓核组织中表达（0.65±0.12）明显低于对照组（ 1.01±0.10）,miR-146a在 LPS组 NP细胞中表达（ 0.29±0.11）明显低于阴性对照组（1.06±0.07）,差异均有统计学意义（ t=11.856,10.229,均 P＜ 0.01）。与阴性对照组比较, LPS组上清液中的 IL-1β, TNF-α和 IL-6含量明显升高,差异均有统计学意义（ t=15.572~23.354,均 P＜ 0.001）。上调 NP细胞 miR-146a表达,能够提高 LPS刺激的 NP细胞的增殖活性（ t=4.436~7.995, 均 P＜ 0.05）,降低其凋亡率（ t=9.255,P=0.001）,降低 TLR4蛋白（ t=5.881,P=0.004）和 IL-1β,TNF-α和 IL-6等炎性细胞因子水平（ t=8.854~10.772,均 P＜ 0.01）;而下调 NP细胞 miR-146a表达则出现相反的结果（ t=2.977~6.777,均 P<0.05）。结论　miR-146a在退变椎间盘髓核组织中表达降低, miR-146a可能能够通过靶向 TLR4调控 NP细胞的增殖、凋亡和炎症反应,为椎间盘退变的生物治疗提供了新的方向。     

谷氨酰胺对内毒素血症大鼠肠道损伤的保护作用及对血红素加氧酶-1表达的影响

目的 探讨谷氨酰胺(Glu)对内毒素血症大鼠肠道损伤的保护作用以及对血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响.方法 按随机数字表法将32只雄性SD 大鼠分为正常对照组、模型组、Glu组和Glu+锌原卟啉(ZnPP)组,每组8只.腹腔注射内毒素脂多糖(LPS)10 mg/kg制备内毒素血症动物模型.Glu组注射LPS前12 h灌胃Glu 1 g/kg;Glu+ZnPP组注射LPS前12 h灌胃Glu 1 g/kg,注射LPS前1 h静脉注射ZnPP 10 mmol/kg.术后12 h取回肠组织,测定髓过氧化物酶(MPO)活性及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)含量,并进行肠组织学评分;用免疫组化法检测回肠组织HO-1表达.结果 与正常对照组比较,模型组回肠组织学评分、MPO活性及TNF-α、IL-10含量显著升高[组织学评分(分):3.3±0.4比1.1±0.6,MPO活性(U/g):0.40±0.08比0.26±0.07,TNF-α含量(ng/g):25.2±6.9比6.5±2.8,IL-10含量(ng/g):27.6±10.2比5.7±2.9,均P<0.01];HO-1表达较低.与模型组比较,Glu组组织学评分、MPO活性和TNF-α含量明显减低[组织学评分(分):1.6±0.5比3.3±0.4,MPO活性(U/g):0.25±0.05比0.40±0.08,TNF-α含量(ng/g):13.4±3.2比25.2±6.9,均P<0.01],IL-10含量(ng/g)显著升高(47.3±5.5比27.6±10.2,P<0.01),HO-1表达明显增加.Glu+ZnPP组与模型组各指标比较差异无统计学意义.结论 Glu能明显增强内毒素血症大鼠肠组织HO-1表达,明显减轻肠道炎症反应,从而保护肠黏膜.

Abstract：

Objective To investigate the protective effect of glutamine (Glu) pretreatment on intestinal injury induced by endotoxin and expression of heme oxygenase-1 (HO-1) in rats.Methods Thirty-two male Sprague-Dawley (SD) rats were randomly divided into four groups (n=8 in each group): normal control group, model group, Glu group and Glu+zinc protoporphyrin (ZnPP) group. In model group, endotoxemia was produced by intraperitoneal injection of lipopolysaccharide (LPS, 10 mg/kg). In Glu group, the rats received intragastraiclly 1 g/kg of Glu 12 hours before LPS intraperitoneal injection. In Glu+ZnPP group, the rats received 1 g/kg of Glu by gavage 12 hours before LPS intraperitoneal injection and ZnPP 10 mmol/kg intravenously via tail vein 1 hour before LPS injection. The distal ileum was harvested in full thickness 12 hours after LPS injection. The myeloperoxidase (MPO) activity, tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-10 (IL-10) in the intestine were determined, the pathologic changes were observed and expressed in Chiu grade. The expression of HO-1 was evaluated by immunohistochemistry method. Results Compared with normal control group, the Chiu grade, MPO activity, the content of TNF-α and IL-10 were significantly increased in model group [Chiu grade: 3.3±0.4 vs. 1.1±0.6, MPO activity (U/g): 0.40±0.08 vs. 0.26±0.07, TNF-α (ng/g): 25.2±6.9 vs. 6.5±2.8, IL-10 (ng/g): 27.6±10.2 vs. 5.7±2.9, all P<0.01], and the expression of HO-1 was decreased. Compared with model group, the Chiu grade, MPO activity, the content of TNF-α in Glu group were significantly decreased [Chiu grade: 1.6±0.5 vs. 3.3±0.4, MPO activity (U/g): 0.25±0.05 vs. 0.40±0.08, the content of TNF-α (ng/g): 13.4±3.2 vs. 25.2±6.9, all P<0.01], while the level of IL-10 (ng/g) elevated (47.3±5.5 vs. 27.6±10.2, P<0.01), and the expression of HO-1 was increased. There was no difference in above mentioned indexes between model group and Glu+ZnPP group. Conclusion Glu pretreatment significantly ameliorates the expression of HO-1 of intestinal tissue induced by LPS in rats, and intestinal mucosa is protected with alleviation of inflammatory reaction in intestinal tract.     

血管紧张素Ⅱ对肺泡巨噬细胞NF-κB信号通路的影响

目的 阐明血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对肺泡巨噬细胞核转录因子κB(NF-κB)信号通路的影响.方法 收集正常或其他肺病患者正常肺叶组织肺泡灌洗液,分离、纯化、培养肺泡巨噬细胞.予10-6M AngⅡ刺激15,30,60,120 min.另外,予AT-1受体阻断剂irbesartan(10-6M)预处理肺泡巨噬细胞60 min后再予10-6 M AngⅡ刺激60 min.设置对照组.凝胶电泳移动抑制实验(EMSA)检测NFκB的结合活性.免疫蛋白质印迹检测胞浆内IκBα的表达.RT-PCR检测TNF-α和ICAM-1的表达.应用SPSS 13.0软件进行One-Way ANOVA方差分析,多重比较采用LSD法.以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 AngⅡ刺激肺泡巨噬细胞15 min NF-xB结合活性增强,60 min达到峰值.AT-1受体阻断剂irbesartan可阻断NF-κB结合活性增强.与对照组(1.0)相比,AngⅡ处理组(0.29±0.11)ⅠκBα旺表达减弱,且差异具有统计学意义(P=0.013).与AngⅡ处理组相比,AngⅡ+irbesartan处理组ⅠκBα表达(0.83±0.12)则增强,且差异具有统计学意义(P=0.001).与对照组(0.42±0.099)相比,AngⅡ处理组TNF-α(1.13±0.17)表达增强,且差异具有统计学意义(P=0.001).与AngⅡ处理组相比,AngⅡ+irbesartan处理组(0.77±0.15)减弱,且差异具有统计学意义(P=0.02).与对照组ICAM-1表达(0.16±0.050)相比,AngⅡ处理组(0.55±0.08)增强且差异具有统计学意义(P=0.003).与AngⅡ处理组相比,AngⅡ+irbesartan处理组(0.32±0.07)减弱,且差异具有统计学意义(P=0.001).结论 Ang Ⅱ对肺泡巨噬细胞NF-κB通路有正向调节作用.     

山莨菪碱对急性肺损伤时肺泡巨噬细胞分泌细胞因子的干预探讨

目的观察山莨菪碱(654-2)对急性肺损伤(ALI)大鼠肺泡巨噬细胞(AM)分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的影响,探讨其对ALI治疗作用的可能机制。方法复制ALI大鼠模型。实验动物随机分为ALI模型组、654-2治疗组、对照组,进行各组大鼠动脉血气、肺湿／干(W／D）值测定及肺组织病理学光镜检查。分离培养各组大鼠肺泡巨噬细胞,采用生物活性法进行AM上清液TNF-α、IL-6测定。结果654-2治疗组大鼠AM分泌TNF-α［（38．98±4.51)KU/L］和IL-6［（20．82±6.3)kU/L］的水平明显低于ALI组［TNF-α为(68.27±9.13)kU/L,P＜0.001;IL-6为(33.84±9.02)kU/L,P＜0.01］,并能使血气改善(P＜0.05)、W／D值下降(P＜0.05),肺组织损伤程度减轻。结论654-2对ALI大鼠肺泡巨噬细胞过度活化、分泌TNF-α、IL-6具有显著抑制作用,在一定程度上防止ALI的发生和发展。     

间充质干细胞对巨噬细胞活化及其功能影响的实验研究

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSC)对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞活化的影响.方法 采用贴壁筛选法分离、纯化小鼠骨髓MSC,巯基乙酸钠腹腔注射刺激后收集小鼠腹腔巨噬细胞(MPM).实验分为四组(A组:MPM;B组:MPM+LPS;C组:MPM+LPS+MSC;D组:MPM+LPS+MSC上清),建立共培养体系.在LPS(终浓度1 μg/ml)刺激巨噬细胞18 h后收集细胞培养上清,检测TNF-α、TGF-β和一氧化氮(NO)等细胞因子分泌量的变化,同时在体系中加入大肠杆菌标准菌株ATCC25922,共孵育24 h后瑞特染色检查巨噬细胞吞噬功能的变化.结果 巨噬细胞活化后培养上清中TNF-α和NO的含量明显上升[分别为(147.4±37.1)pg/ml,(59.9±8.7)μmol/L];而MSC存在时,TNF-α显著减少[(97.6±30.3)pg/ml,P=0.032],NO降到(50.9±29.5)μmol/L(P＞0.05);当有MSC上清存在时,TNF-α和NO进一步减少为(58.3±31.5)pg/ml,(-3.4±2.3)μmol/L(P＜0.01).MSC对巨噬细胞活化后的吞噬率及吞噬指数没有影响.结论 MSC可抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的活化,而对其吞噬功能没有影响.     

1-甲基色氨酸对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞通透性及凋亡的影响

目的 探讨1-甲基色氨酸(1-methyltryptophan,1-MT)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)通透性及细胞凋亡的影响.方法 将HUVECs分为三组,即磷酸缓冲盐溶液(p...