高功率微波对小鼠免疫组织淋巴细胞影响的初步研究

目的：观察不同强度高功率微波(HPM)对小鼠免疫组织和外周血淋巴细胞的影响及其作用机制。方法：应用TUNEL和FCM(Annexin—V/PI双标法)技术研究小鼠胸腺、脾脏、淋巴结和外周血淋巴细胞凋亡的发生规律。结果：①10～30mW/cm~2 HPM辐照后,C57小鼠外周血WBC出现降低,而淋巴细胞凋亡率明显升高,与WBC的变化呈较好的对应关系,且在0～15mW/cm~2内呈一定的剂量效应关系。②照后7d,C57小鼠免疫组织淋巴细胞凋亡率均出现明显升高,而在0～15mW/cm~2范围内与辐照剂量呈一定的量效关系。③不同剂量辐照后3d,129小鼠免疫组织淋巴细胞凋亡率均出现明显升高,而以脾组织淋巴细胞凋亡率与剂量呈一定的量效关系。淋巴结经15mW/cm~2辐照后3、7和14 d,其凋亡率的升高与照后时间显示一定的时效关系。结论：虽然对非热效应的生物学影响及其机制仍存在争议,然而本研究结果明确指出,微波对机体免疫机能影响的非热效应还是比较明显的,有关机制尚需进一步阐明。     

基因表达谱芯片用于检测脓毒症小鼠肺组织基因表达的改变

目的：筛选脓毒症小鼠肺组织中与正常组织差异表达的基因并作初步功能分析。方法：在小鼠盲肠结扎一穿孔术(CLP)引起小鼠的脓毒症模型上，采用含有2201个小鼠基因cDNA克隆的表达谱基因芯片，检测并分析脓毒症小鼠肺组织在CLP后6h、12h的基因表达变化并以计算机软件筛选出差异表达的基因。结果：在CLP后6h和12h，共筛选出80个与假手术对照组相比出现差异表达的已知功能基因，其中表达上调和下调者各40个；聚类分析发现其中包括免疫相关基因、急时相反应与热休克反应相关基因、抗氧化反应基因、细胞骨架相关基因以及多种细胞代谢和信息传递相关基因。结论：脓毒症性急性肺损伤涉及到一系列与炎症、免疫、应激、抗氧化、能量代谢与细胞骨架相关的基因表达异常；采用基因芯片俭测技术有利于全面揭示脓毒症中的基因表达模式，快速高效地发现新的研究目标和基因治疗途径。     

应用cDNA微阵列技术初步分析中枢神经系统血管母细胞瘤的基因表达谱

我们应用cDNA微阵列技术初步分析中枢神经系统血管母细胞瘤的基因表达谱，现将结果报道如下。     

基因表达谱技术在急性髓系白血病中的应用

基因表达谱（gene expression profiling,GEP）技术在诊断急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）不同细胞遗传学亚型、发现新的AML亚型以及评估临床预后上是非常有价值的。近年来GEP研究在AML方面表现出显著的一致性,从而会最终产生一个更准确的分子分类法。     

利用cDNA微列阵技术分析胰腺癌相关基因表达谱

目的：利用cDNA微列阵技术分析胰腺癌相关基因表达谱来寻找下一步研究的目标基因。方法：利用含有18000个cDNA克隆的微列阵，对2例正常胰腺组织和4例中分化胰腺癌标本行基因表达谱分析。结果：2份混合癌组织样品分别有1484和1353条差异表达基因，表达趋势相同的有455条，上调基因102条，下调基因353条，已知基因274条，未知功能EST181条，差异2倍以上的基因各占27．8％和52．0％，已知差异基因中包括抑癌基因、生长因子及其受体基因、信号传导相关基因、转寻调节因子等。结论：cDNA微列阵技术为分析胰腺癌相关基因表达谱提供了有力的工具,MBD1、EDG1等基因和过甲基化表达调控可能在胰腺癌发病机制中起着关键作用。     

周期性牵张应力对人成骨细胞基因表达谱影响的初步研究

目的:研究周期性牵张力对人成骨细胞基因表达谱的影响,为进一步研究机械应力状态下骨改建机理提供思路和线索。方法:通过体外细胞加载系统对培养的人成骨细胞施加8%形变率、6周/min的周期性牵张力24h,应用基因表达谱芯片技术对人成骨细胞中的mRNA表达水平进行对比杂交分析,检测周期性牵张力加载组成骨细胞基因表达谱的变化。结果:在所分析的21073条人类功能基因中,加载组与未加载组人成骨细胞之间差异表达显著的基因有2498条,其中表达上调的有899条(2.0倍以上),表达下降的有1599条(0.5倍以下)。这些基因表达产物涉及细胞信号转导、细胞周期调节等多个方面。结论:周期性牵张力对成骨细胞多种基因的表达产生了影响,成骨细胞的应力反应是一个复杂的,多基因参与调控的过程。这些变化的基因可能与成骨细胞的机械应力反应有关。     

二期梅毒患者外周血单个核细胞基因表达谱研究

目的:分析二期梅毒患者外周血单个核细胞基因表达谱特征,探索机体抗梅毒免疫的分子机制。方法:采用全基因组高通量的Illumina测序技术,对4例二期梅毒患者和4例健康对照者外周血单个核细胞行数字基因转录组分析。后行实时PCR对其结果进行验证。结果:与健康对照者相比较,二期梅毒患者外周血单个核细胞共发现差异表达基因78个,其中有16个免疫应答相关基因。肿瘤坏死因子超家族成员17(TNFRSF17)、IL-17C、IL-21、IL-31受体A(IL-31RA)、C-X-C配体10(CXCL10)、趋化因子配体1(CCL1)等炎症因子和相关受体、CD4+T细胞激活标志CD38、Fc类吞噬性受体(FcγR1A、FcγR3B)以及补体(C2、SERPING1)等均显著上调。结论:二期梅毒患者多种天然免疫和适应性免疫分子参与机体系统性抗梅毒应答。     

原发性骨质疏松症肾阴虚证骨组织基因表达谱研究

目的：通过检测原发性骨质疏松症患者骨组织基因表达谱的差异,探讨原发性骨质疏松症肾阴虚证相关基因的信息学特征。方法随机选择骨质疏松症患者,中医辨证分型为肾阴虚证组3例、肾阳虚证组3例、无肾虚证组3例,并选择正常骨密度人群3例设为正常对照组。用人全基因组表达谱芯片检测4组人群骨组织基因表达谱,筛选共同的差异表达基因,并对这些差异表达基因进行基因通路等相关功能分析。结果肾阴虚证组与正常对照组、肾阳虚证组、无肾虚证组的差异表达基因分别为2378、4026、4071条,肾阴虚证组与其他3组比较共同的差异表达基因有344条,这些差异基因参与免疫调节、矿物质吸收、激素合成、组氨酸代谢等11条信号通路。结论原发性骨质疏松症肾阴虚证的相关基因主要与免疫调节、激素合成、组氨酸代谢、矿物质吸收等信号通路相关。     

麝香调控退变大鼠颈椎间盘组织基因表达谱的研究

目的　分析麝香对退变椎间盘基因表达谱的调控作用。方法　建立颈椎间盘退变模型。从 9个月模型组、麝香治疗组大鼠颈椎间盘中抽提mRNA ,经反转录分别用Cy3、Cy5荧光标记 ,获得椎间盘cDNA的探针 ;cDNA探针与大鼠BiostarR - 4 0s基因表达谱芯片杂交 ,结果由激光扫描仪扫描并用软件进行图像分析、标准化处理、ratio值分析、聚类分析。结果　麝香组与模型组比较 ,11.1% (共 4 4 1条 )基因表达发生明显变化 ,其中 2 6 0条基因表达量上升(R >2 .0 ) ,182条基因表达量明显下降 (R <0 .5 )。经过信息学分析 ,在上述两张芯片上都有基因表达量明显变化的 90条 (R >2 .0或 <0 .5 ) ,其中基因表达量都明显上调的 2 5条 (R >2 .0 ) ,其中功能明确的基因有 3条 ;都明显下调的 2 0条 (R <0 .5 ) ,其中功能明确的基因有 5条 ;麝香发挥明显上调作用的共 13条 (由R <0 .5到R >2 .0 )。结论　麝香对退变椎间盘出现总体调控。筛选出大鼠退变椎间盘中相关基因 ,特别是有较多的细胞信号和传递蛋白类基因表达 ,说明细胞内外的信号传导介导了椎间盘退变过程。     

肝癌及癌旁肝组织基因表达的分析

目的 了解肝癌的基因表达概况、寻找肝癌及癌旁肝组织中差异表达基因。方法 以24例肝癌及癌旁肝组织的总RNA反转录合成含有α－^32PdATP的cDNA为探针,与Atlas微阵列表达分析膜进行差异杂交。结果 放射自显影结果经AtlasImage^TM软件分析显示：在所分析的588种已知基因中,TFDP2、Aktl、E2F－3等18个在肝癌组织中表达上调,TDGF1、BAK、LAR等25个表达下调,参与细胞增殖、凋亡、分化、细胞间相互作用、与细胞侵袭相关的基因表达水平发生了明显改变。结论 通过Atlas微阵列系统分析发现的这些基因的表达改变组成了一个肝癌特异的基因表达谱,系统地研究肝癌的基因表达改变,与肝癌发生相关的差异变化基因可为肝癌早期诊断和治疗提供线索。     

正常脾脏与肝硬化脾脏组织基因表达概况分析

目的 了解正常脾脏与肝硬化脾脏的基因表达概况，寻找在两者之间的差异表达基因。方法 以正常脾脏及肝硬化脾脏组织的总RNA反转录合成含有α-^32P dATP的cDNA为探针，与Atlas微阵列表达分析膜进行差异杂交。结果 放射自显影结果经AtlasImage^TM软件分析显示：在所分析的588种已知基因中，CK8、ICE－LAP6、PISSLARE等32个在肝硬化脾脏组织中表达上调，byglycan、Caspase-10、CRAF－1等45个表达下调，参与细胞增殖、凋亡、分化、细胞间相互作用，与细胞侵袭相关的基因表达水平发生了明显改变。结论 通过Atlas微阵列系统分析发现的这些基因的表达改变组成了一个不同情况下脾脏特异的基因表达谱，是人类首次全面系统地研究脾脏的基因表达改变，一些与脾脏变化有关的差异表达基因，对彻底了解脾脏在肝硬化过程中的变化及其所发挥的作用有重要的意义。Altas微阵列技术的应用将为人类了解疾病的发生、发展过程提供一个较好的方法。     

Gene expression profile of degenerated cervical intervertebral disc tissues in rats

egenerationofintervertebraldisciscausedbymanyfactorsandisacomplicatedwebsystemofdifferentialexpressionofmanygenes .Throughstudyingthegeneexpressionprofile ,theanalysisresultsofaseriesofphysiologicalstatesofintervertebraldisccellsortissuescanbeobtainedsensitivelyandcompletely .1,2 Thesedataaremuchvaluabletotheearlydiagnosis ,thecharacteristicpreventionandtherealizationandpopularizationoftherapeuticmethodsforthisdisease ,aswellasprovideprerequisiteandimportantbasisforstudyingthetherapeuticdrugsan…     

缺血预处理对大鼠肺组织中缺血再灌注损伤相关基因表达的影响

目的 探讨缺血预处理(IPC)后大鼠肺组织中缺血再灌注损伤(IRI)相关基因的表达,为研究IPC减轻IRI的分子机制提供依据.方法 将雄性Wistar大鼠随机分为三组,缺血预处理组(IPC组,n:20)阻断左肺门5 min,开放10 min,如此重复3次,然后阻断左肺门,1 h后恢复血流灌注;缺血再灌注组(IR组,n=20)直接阻断左肺门,1 h后开放血流;假手术组(n=5)仅松解肺下部韧带,不做其它处理.IPC组和IR组分别于再灌注后1、3、6及24 h各取大鼠5只,切取左肺组织,采用含有22 226个大鼠基因点的Illumina RatRef-12全基因组表达谱微珠芯片检测肺组织中基因表达情况,比较IPC组与IR组各再灌注时间点基因表达的差异.结果 与IR组再灌注1 h相比,IPC组再灌注1 h时有1849个基因表达发生改变,其中上调的有918个,下调的有931个.与IR组再灌注3 h相比,IPC组再灌注3 h时有2568个基因表达发生改变,其中上调的有1377个,下调的有1191个.与IR组再灌注6 h相比,IPC组再灌注6 h时有1370个基因表达发生改变,其中上调的有563个,下调的有807个.与IR组再灌注24 h相比,IPC组再灌注24 h时仅有77个基因表达发生改变,全部为下调.结论 IPC对缺血再灌注损伤肺组织中基因表达的影响主要在再灌注后6 h内,以3 h最为明显;IPC可能通过影响凋亡相关基因、氧化应激相关基因、炎症反应及循环相关基因、能量代谢相关基因的表达来减轻IRI.     

DD3基因不同外显子在前列腺癌组织中的特异性表达

目的 探讨DD3基因不同外显子在前列腺癌组织中的特异性表达。方法 根据基因库所收录的DD3 mRNA序列，设计跨越不同外显子的3对DD3 mRNA序列特异的引物，应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）对61例前列腺组织和70例前列腺外的其他肿瘤组织及癌旁组织进行DD3 mRNA检测，并对前列腺癌组织DD3 mRNA进行全序列分析。结果 跨越DD3 mRNA外显子1与3、外显子1与4及外显子3与4之间设计的引物所检测DD3 mRNA结果完全一致，21例前列腺癌组织与1例前列腺上皮内肿瘤组织中DD3 mRNA均为阳性，39例良性前列腺增生组织和70例其他肿瘤组织及癌旁组织中DD3 mRNA均为阴性。21例前列腺癌组织DD3 mRNA序列之间完全一致（GenBank登陆号为AY894120），与国外报道序列（AF103907）之间有99．8％同源。结论 DD3 mRNA仅在前列腺癌中特异性表达，外显子3和外显子4均可作为DD3 mRNA特异的外显子。     

DNA微阵列检测异氟醚麻醉的基因表达

目的用DNA微阵列筛选异氟醚麻醉的表达基因。方法12只雄性Wister大鼠,分为2%异氟醚组(A组)和对照组(B组)。A组用2%异氟醚麻醉1h,B组直接处死后取脑组织。提取RNA,荧光标记,用有4096个位点的BiostarR40s基因芯片,检测差异表达的基因。结果发现了26个差异表达的基因,其中17个基因下调,9个基因上调。结论基因芯片检测出2%异氟醚麻醉1h有26个差异表达基因。     

肝特异性非病毒基因治疗载体介导增强型绿色荧光蛋白基因在小鼠肝细胞及肝脏中的表达

目的观察肝细胞特异性基因治疗载体蛋白介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)在体外培养小鼠肝细胞和小鼠肝脏中表达。方法将基因工程制备的肝细胞特异载体蛋白与真核表达质粒以所带电荷比为1：1的比例混合，两者结合形成蛋白-DNA复合物，将该复合物加入体外培养的小鼠肝细胞培养基中或经门静脉注射小鼠体内，用激光共聚焦显微镜观察EGFP在体外培养小鼠肝细胞及活体小鼠肝脏组织中的表达。结果在体外培养的小鼠肝细胞和小鼠肝脏切片中均可以观察到明显的绿色荧光，而对照组未能观察到绿色荧光蛋白。结论构建的肝细胞特异性载体蛋白可以有效的将真核表达质粒载体pcDNA3-EGFP带入肝细胞和活体肝脏组织。可能为肝细胞基因治疗提供有效载体。     

应用结肠癌基因表达谱数据整合分析筛选肿瘤相关基因

目的 通过结肠癌基因表达谱数据整合分析筛选肿瘤相关基因.方法 基因芯片技术构建的结肠癌基因表达谱与转录组公共数据库SAGE DGED信息相结合,筛选肿瘤相关基因.定量聚合酶链反应(PCR)验证基因差异表达.组织芯片(腺癌22例、腺瘤20例、正常8例)和免疫组织化学技术检测基因蛋白表达.结果 119条基因(上调17条、下调102条)在基因芯片与SAGEDGED中表达变化结果一致.定量PCR检测TGFBI、NME1、IFITM3、FCGBP和TSPAN1基因表达,结果与基因表达谱数据一致.IFITM3蛋白表达在结肠腺瘤(20%,4/20)和腺癌(55%,12/22)中表达较正常结肠组织(0,0/8)明显升高(P<0.05).结论 基因芯片数据和SAGE DGED相结合,可快速、准确筛选结肠癌肿瘤相关基因.     

大黄对糖尿病肾病大鼠肾皮质基因表达谱的影响

目的：研究大黄对糖尿病肾病大鼠肾皮质基因表达谱的影响及分析大黄对糖尿病肾病在基因水平上的作用机制。方法：20只雄性SD大鼠随机分为4组：正常对照组、用STZ诱导的糖尿病肾病组、糖尿病肾病大鼠给予大黄提取物治疗的大黄治疗组和糖尿病肾病大鼠给予安慰剂的阴性对照组。从4组SD大鼠的肾皮质中抽提mRNA,分别用Cy3、Cy5荧光标记，经反转录分别合成正常对照组与糖尿病组、大黄治疗组和对照组动物来源的cDNA探针；同时将Cy2,Cy5荧光标记的cDNA探针等量地与BioDoor基因表达谱芯片杂交，结果与扫描仪扫描并用软件进行分析统计。结果：正常对照组与糖尿病肾病组之间差异表达的基因有335条，占芯片基因总数的8．4％，其中12条基因在糖尿病肾病时表达量明显下降，而323条基因在糖尿病肾病时表达量明显上升。大黄治疗组和阴性对照组之间差异表达的基因有128条，占芯片基因总数的3．3％，其中有8条基因在大黄治疗以后明显上升，而120条基因在大黄治疗以后明显下降。并且，在糖尿病肾病中部分基因的表达变化在大黄治疗后可被逆转。结论：大黄能上调或下调部分差异表达的基因，并在一定程度上能逆转STZ诱导的基因表达谱。