弓形虫感染家兔精液中虫体含量的动态变化

目的检测弓形虫感染家兔精液中虫体DNA,观察虫体在精液中动态变化情况。方法用RH株弓形虫速殖子105个/只的剂量腹腔感染雄性家兔16只。在家兔感染前后分别采集精液,-40℃冻存备用,采用两种方法提取精液中总DNA,用实时定量PCR(quantitativereal-timePCR,QRT-PCR)检测弓形虫感染家兔精液中弓形虫DNA,依据对照计算虫体拷贝量,绘制感染后时间与精液中虫体含量的动态曲线图。结果16只雄兔感染前其精液中均不能检测到弓形虫DNA,精液中虫体含量在感染后7wk左右达到高峰期,然后虫体含量逐渐下降。在感染9wk~15wk维持较低水平。结论弓形虫感染雄兔精液中虫体含量随感染后时间不同而变化。     

弓形虫感染家兔血液中虫体的动态观察

目的探明虫体在家兔血液中动态变化情况。方法用RH株弓形虫速殖子105个/只的剂量腹腔感染雄性家兔16只。在家兔感染前后分别采集家兔血液,抗凝处理后,-40℃冻存备用,用实时定量PCR检测弓形虫感染家兔血液中弓形虫DNA,依据对照计算虫体拷贝量,绘制感染后时间与血液中虫体含量的动态曲线图。结果雄兔弓形虫感染后4d血液中即可检测到虫体DNA,血液中虫体含量为217.887×103个/ml,血液中虫体含量在感染后8 d达到高峰期,血液中虫体含量为248.019×103个/ml,然后虫体含量逐渐下降,在感染后121 d雄兔血液中虫体密度为1.45×103/ml。结论弓形虫感染雄兔血液中虫体含量随感染后时间不同而变化。     

家兔精液传播弓形虫的实验研究

目的 了解弓形虫能否通过精液传播，并探讨雌兔阴道不同健康状态对精液传播弓形虫的影响。 方法 8只健康新西兰雄兔经腹腔分别感染1×10⁵个RH株弓形虫速殖子，分别于感染前、后用假阴道采集雄兔精液，每周将采集到的精液混合液化后0.1 ml/只， 分别经宫腔内人工受精管感染4组阴道健康状态不同的成年新西兰雌兔（阴道正常组、阴道损伤组、滴虫性阴道炎组和霉菌性阴道炎组）， 共采集8周，将所得8份混合精液分别感染8次。每次受精后第2～3天耳缘静脉采血2 ml， 分别用ELISA和PCR检测血清抗弓形虫抗体和全血中弓形虫B1基因片段。 结果 ELISA结果显示，雌兔在初次受精后第16天可检测到抗弓形虫抗体，第1～4组抗体阳性家兔数分别有2、1、3和1只，ELISA阳性率为25.9％（7/27）。PCR检测最早在受精后3 d和最晚51 d可扩增出弓形虫B1基因片段200 bp， 第1～4组阳性家兔数分别有2、1、2和0只，PCR阳性率为18.5%（5/27）。其中两种检测结果均为阳性的3只。 结论 弓形虫可通过精液感染雌兔。雌兔的阴道健康状态对经精液感染弓形虫无影响。     

应用PCR技术评价抗弓形虫药物的疗效

目的　探讨应用PCR技术对药物治疗小鼠急性弓形虫感染的疗效进行了考核评价。方法　小鼠腹腔内感染RH株弓形虫速殖子 2× 10 3 ,8h后给予双氢青蒿素 75mg/kg d和双氢青蒿素 75mg/kg d联合磺胺嘧啶钠 10 0mg/kg d每日两次灌胃小鼠治疗 ,疗程 15d ,观察小鼠存活率 ,并于感染后第 9、15、31d取小鼠腹水及肝、脾和脑进行弓形虫PCR检测 ;于停药后5个月取存活小鼠脑再行弓形虫PCR检测。结果　双氢青蒿素联合磺胺嘧啶钠组小鼠存活率达 93% ,明显高于磺胺嘧啶钠组 (6 8 3% )及双氢青蒿素组 (0 % )。PCR检测可见小鼠腹水中除联合治疗组外 ,其余各组均可检测出特异弓形虫DNA ;但只有对照组和双氢青蒿素组小鼠的肝脏和脑中可检测出虫体DNA ,而脾脏中只有对照组可检出虫体DNA。结论　小鼠腹水的PCR检测结果与存活率和腹水虫体镜检结果一致 ,并弥补了镜下检查由主观造成的不足 ;肝、脾、脑等脏器的PCR检测也取得与存活率基本一致的结果 ;总之 ,本研究中的PCR检测结果较客观地反映药物对小鼠的疗效情况 ,为动物实验性弓形虫病的药物疗效考核提供了一个较为简便、灵敏、特异的方法     

弓形虫ITS-1序列PCR诊断方法的建立

目的本文旨在为弓形虫感染的临床病例检测建立特异性PCR诊断方法。方法本研究以弓形虫ITS-1序列为种特异性遗传标记,采用有限稀释法稀释速殖子DNA,经PCR扩增,检测该方法的敏感性;用同一引物扩增鸡柔嫩艾美耳球虫原虫和弓形虫,检测PCR方法的特异性。人工感染小鼠和家兔,用组织触片法和PCR方法检测感染动物的组织,并检测10头临床疑似病猪的肺脏、肺门淋巴结、脾脏、肾脏和肝脏等组织,比较两者的敏感性。结果该PCR方法最低可以检测1pg弓形虫速殖子DNA(相当于10个速殖子的DNA);鸡柔嫩艾美耳球虫原虫未扩增出特异条带,仅弓形虫出现特异条带(300bp)。组织触片和PCR方法对人工感染小鼠组织DNA的检出率均为87.5%(7/8),对人工感染家兔的检出率分别为50%(3/6)和66.7%(4/6),对临床疑似弓形虫病猪检测的阳性率均为20%,两种方法的检查结果基本一致。结论本试验结果表明,PCR技术可以作为弓形虫感染动物的诊断与检测方法。     

RNA原位杂交法检测灌胃接种弓形虫速殖子小鼠体内虫体的早期动态分布

目的观察经灌胃接种弓形虫RH株速殖子后,虫体在小鼠体内的早期动态分布。方法弓形虫RH株速殖子经灌胃接种BALB/c小鼠20只(2×104/只),用RNA原位杂交法观察感染后1、2、4、6和8d小鼠的肠系膜淋巴结(MLN)、肝、脾、肺和脑组织内速殖子的数量及分布趋势。同时设PBS空白对照组(5只)。结果感染后1d,在MLN、肝和脾组织内均检测到速殖子,分别于感染后4d和6d在肺和脑组织内检测到速殖子。感染后6～8d,各组织间虫荷差异均有统计学意义(P值均0.05),组织内虫荷依次为MLN肝脾肺脑,各组织内虫体数量呈时间依赖性。结论弓形虫RH株速殖子经灌胃接种后,首先侵入MLN、肝和脾,其次为肺,最后为脑,且虫体在MLN内增殖较快。     

弓形虫既往感染在孕期内对胎儿的影响

目的探讨既往感染者孕期内弓形虫的活动情况及对胎儿的影响。方法对68例抗弓形虫抗体IgG阳性、IgM阴性孕妇的血清、脐血采用酶联免疫吸附试验检测弓形虫抗体IgG、IgM、弓形虫循环抗原（CAg）,PCR法检测虫体DNA;胎盘样本采用直接涂片、匀浆涂片及PCR法观察弓形虫感染情况。结果68例弓形虫抗体IgG阳性孕妇中脐血弓形虫抗体IgG阳性28例,IgG胎盘垂直传播率41.2%;脐血弓形虫DNA阳性6例,宫内感染发生率8.8%;胎盘组织中虫体DNA阳性9例,宫内感染发生率13.2%。结论既往弓形虫感染孕期内仍可导致垂直传播。     

弓形虫RH株在实验小鼠脑组织内的动态分布

目的通过观察实验小鼠脑组织内不同部位弓形虫的动态分布,进一步探讨弓形虫感染与血脑屏障的关系,为弓形虫脑病患者的早期诊断和治疗提供帮助。方法弓形虫（RH株）经静脉途径感染小鼠,应用直接涂片法动态观察小鼠脑组织弓形虫感染情况。结果弓形虫感染第8d,小鼠大脑皮质及间脑内查获虫体,第10d,虫体出现于脑干、中脑及海马。结论实验小鼠静脉途径感染弓形虫后,第8d脑内开始出现虫体,但脑组织各部位出现虫体的时间不一致。脑组织不同部位血脑屏障对弓形虫的阻隔作用存在差异。     

应用双单克隆抗体ELISA夹心法检测循环抗原诊断弓形虫病实验研究

应用ELISA双单抗夹心法检测弓形虫不同感染度的家兔各临床期循环抗原(CA_g),并与双多抗法等检测CA_g进行比较,探讨该法检测CA_g诊断弓形虫病的敏感性和特异性。 人工感染弓形虫家兔分重度、中度及轻度感染组,分别感染13、6、15只。健康对照兔5只。各组同时分期采血。另设血吸虫感染兔42只。球虫感染兔8只,分别     

PCR-ELISA检测弓形虫实验研究

目的建立快速、敏感、特异、稳定的PCR—ELISA方法，并用其检测感染动物体内的弓形虫。方法将生物素标记的PCR产物与地高辛标记的特异性探针杂交，再通过酶免显色反应测出OD值。以判断弓形虫感染情况。测定该方法的敏感性、特异性及稳定性。再分别以10^4、10^3弓形虫RH株速殖子腹腔接种小鼠。取全血、肝组织用PCR—ELISA检测小鼠感染情况。结果本实验中，PCR-ELISA方法的检测闻值为20fg弓形虫DNA，其灵敏度是电泳法的10倍，并且与人、小鼠、疟原虫、旋毛虫等DNA均无交叉反应。同一样本重复测试5次，结果经统计学检验，一致性良好（Alpha=0．72）。检测感染动物肝组织及全血标本，10^4、10^3组分别在感染后第二d、第三d即可测出阳性，两种标本的阳性检出效率无统计学差异（P〉0．05）。结论PCR—ELISA是一种快速、敏感、特异、稳定的检测方法，可试用于临床弓形虫病的诊断及流行病学调查。     

急性弓形虫病兔循环抗原动态的实验观察

用Dot-ELISA观察人工感染2株不同剂量的弓形虫家兔血清循环抗原(CAg)动态。结果感染RH株弓形虫速殖子10~4/只和10~2/只的两组家兔,CAg出现和全部阳转时间均在感染后3d。但RH株的感染量影响宿主血清CAg动态。感染PP株10~6/只和10~4/只的两组家兔,血清CAg变化无明显差异。RH株CAg水平变化急骤,而PP株变化较平缓,表明宿主血清CAg动态与弓形虫虫株毒力密切相关。     

用PCR技术检测大鼠弓形虫DNA

目的 探讨弓形虫病大鼠外周血弓形虫DNA检测的意义。方法 自行设计一对引物,用聚合酶链反应技术扩增弓形虫P30基因的一段保守序列。结果 设计的这对引物对健康人、大鼠、小鼠外周血白细胞以及阴道毛滴虫、溶组织内阿米巴均不能扩增,表明具有特异性。反应体系经35个循环扩增,可检测到2条弓形虫DNA,表明具有较高的敏感性。结论 PCR法对大鼠弓形虫感染可做出早期诊断。     

徐州地区猫源弓形虫虫株的分离与鉴定

目的 目的 获得徐州地区猫源弓形虫虫株, 了解徐州地区流浪猫弓形虫感染情况。方法 方法 捕捉徐州地区流浪猫, 收 集血清后, 用ELISA试剂盒检测弓形虫特异性IgG抗体; 同时将猫的心、 脑、 舌用盐酸?胃蛋白酶溶液消化处理后接种小 鼠, 经连续传代分离弓形虫虫株, 采用特异PCR法对所分离的虫株进行鉴定。结果 结果 共捕捉41只流浪猫。从猫体内共 分离到弓形虫虫株11株, PCR均扩增出弓形虫特异性条带; ELISA结果表明41.5%的流浪猫均能检测到弓形虫抗体。结 结 论 论 徐州地区流浪猫弓形虫感染较为严重, 有可能成为人和其它动物弓形虫病的重要传染源, 应引起相关部门的重视。     

microRNA?155在弓形虫感染调节巨噬细胞极化中的作用

目的 探讨弓形虫感染对宿主细胞内microRNA?155（miR?155）表达的影响及其对巨噬细胞极化的作用。 方法 利用miRNAs基因芯片检测弓形虫感染宿主细胞内miRNAs表达水平,应用实时定量聚合酶链反应技术（qPCR）检测miR?155表达水平。采用脂质体转染法将pEGFP?miR?155导入人巨噬细胞,利用流式细胞术检测转染效率。采用流式细胞术、qPCR、酶联免疫法检测弓形虫感染组、pEGFP?miR?155过表达组以及miR?155抑制组诱导巨噬细胞表面分子CD86及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和白细胞介素（IL）?12表达水平。结果 基因芯片和qPCR检测结果显示,随着弓形虫感染时间的延长,miR?155表达量上升;pEGFP?miR?155转染宿主细胞的转染效率可达82.6%。弓形虫感染组和pEGFP?miR?155过表达组CD86表达水平显著高于对照组和miR?155抑制组,iNOS和IL?12基因表达量显著升高。结论 弓形虫感染能够通过上调miR?155表达参与驱动人源巨噬细胞向M1型偏移。     

Reactivation of Toxoplasma gondii by cytomegalovirus disease in mice: antimicrobial activities of macrophages

Reactivation of Toxoplasma gondii infection often occurs concurrently with active cytomegalovirus (CMV) disease in immunocompromised patients, and CMV disease results in immunosuppression. To determine if murine CMV (MCMV) infection decreases resistance to T. gondii, mice with latent T. gondii infection were infected with MCMV. T. gondii infection reactivated, manifested primarily as pneumonia. Lung macrophages supported the growth of T. gondii before, during, and after T. gondii reactivation. Peritoneal macrophages inhibited the growth of T. gondii as pneumonia developed and became permissive as pneumonia resolved. Mice with latent T. gondii infection could survive larger doses of MCMV than could controls. Thus, MCMV infection led to reactivation of latent T. gondii infection in mice. Activation of lung macrophages, assessed by their ability to inhibit replication of T. gondii in vitro, was not associated with control of T. gondii infection.