亲和层析法纯化华支睾吸虫抗原的研究

目的 探索华支睾吸虫特异性抗原的纯化方法。方法从华支睾吸虫病流行区的淡水鱼中分离华支睾吸虫囊蚴，接种动物，收集成虫，制备匀浆液（粗抗原），借助偶联华支睾吸虫病人血清抗体的Sepharose4B亲和层析柱，提取特异性抗原，用浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳（CG-PAGE）和免疫印迹方法鉴定纯化抗原的纯度和特异性。结果亲和层析法纯化抗原经CGPAGE显示5条蛋白带，免疫印迹试验鉴定均有抗原性，强阳性带蛋白分子质量单位为31ku，各区带蛋白与并殖吸虫、血吸虫血清抗体无交叉反应。粗抗原有16条蛋白带。结论经亲和层析法纯化的华支睾吸虫抗原特异性高。亲合层析是获取华支睾吸虫诊断用抗原的较佳方法。     

重组华支睾吸虫诊断抗原研究进展

华支睾吸虫多种诊断抗原的基因已被克隆和重组表达，一些重组抗原已初步应用于华支睾吸虫病的免疫学诊断，显示出较高的诊断价值。     

ABC-ELISA检测粪便华支睾吸虫抗原的初步探讨

本实验用ABC-ELISA双抗体夹心法检测人工感染家兔粪便华支睾吸虫抗原(CsAg)。结果表明,此法能测出CsAg的最低含量为0.045μg/ml PBS,粪便中CsAg含量与感染兔的虫荷呈直线正相关。检测轻、重感染兔粪便各28份,正常兔粪便29份,阳性数分别为7、23和2。3组兔粪便中CsAg含量有显著性差异(P<0.001)。5只感染日本血吸虫家兔粪便CsAg检测均为阴性。     

4096例华支睾吸虫感染病例分析报告

华支睾吸虫又称肝吸虫，人误食生的或未熟透的含有华支睾吸虫囊蚴的淡水鱼或被含囊蚴的鱼肉污染的食物而感染。我院2001-2004年粪检查出华支睾吸虫感染4906例，现报道如下。     

华支睾吸虫抗原定位,生化及免疫学特性初步分析

本文在制备了华支睾吸虫全虫粗抗原（ＣｓＡｇ）、代谢抗原（ＥｓＡｇ）、表膜抗原（ＭＡｇ）及其相应抗血清的基础上，应用石蜡和冰冻两种连续组织切片、ＩＦＡＴ、ＩＧＳＳ、ＰＡＰ三和免疫化学方法对华支睾吸虫抗原定位进行了较系统的研究。结果表明：虫体定位器官主要是肠管，睾丸，储精囊和虫卵卵黄膜。两种切片抗原定位的主要区别是虫体皮层，石蜡切片未见皮层有抗原性，而冰冻切片虫体皮层有抗原性性。在此基础上应用ＩＥ、Ｓ     

华支睾吸虫减数分裂的观察

本文研究了华支睾吸虫的减数分裂,报道了同源染色体的配对、交换与分离及其细线期、偶线期、粗线期、双线期,终变期的形态学特点,以及华支睾吸虫的单倍体、二倍体、多倍体、精原细胞、精细胞和精子的观察结果。     

应用斑点ELISA检测华支睾吸虫病患者循环抗原的研究

用斑点ＥＬＩＳＡ检测１４０例粪检虫卵阳性的华支睾吸虫病人血清中的循环抗原（ＣＡｇ），阳性率为９７．１％。在１００例正常人和１０２例其它７种寄生虫病人中，有１．０％假阳性和２．０％轻度交叉反应。对６６例华支睾吸虫病人经吡喹酮治疗后１～２月进行ＣＡｇ复查，有２９例（４３．９％）转为阴性，即使仍保持阳性反应者，其反应强度亦有明显降低。用本法进行流行病学调查，获得较满意的结果，检测血清中ＣＡｇ与粪便中虫卵阳性和阴性总符合率高达９５．５％。     

华支睾吸虫与二甲基亚硝胺诱发动物肝癌的初步实验研究

本文报道用华支睾吸虫与二甲基亚硝胺诱发动物肝癌的实验结果。Ａ组每只金地鼠通过胃管人工感染华支睾吸虫囊蚴，３０ｄ后当鼠粪中查见华支睾吸由卵时开始自由饮服０．００２５％二甲基亚硝胺溶液１７周，结果１１只鼠中４只诱发肝癌，１只诱发肝胆管癌和５只肝硬变。Ｂ组每只鼠仅自由饮服０．００２５％二甲基亚硝胺溶液１７周，１５只鼠中３只诱发肝癌，５只肝硬变。Ｃ组每只鼠仅通过胃管人工感染华支睾吸虫囊蚴，不饮服二甲基亚硝胺，１２只鼠中仅６只发生肝硬变。空白对照的１５只鼠均未发现病变。结果显示金地鼠饮服二甲基亚硝胺可引起肝细胞和胆管细胞恶变，而华支睾吸虫在肝内的寄生，可促使肝癌的发生。     

γ射线控制华支睾吸虫囊蚴感染性的效果

用0－0．20kGy钴－60γ射线对含华支睾吸虫囊蚴的鱼体和从鱼体中分离所得的囊蚴（离体囊蚴）分别进行照射，观察照射囊蚴在宿主（动物）体内发育的能力。囊蚴以灌胃法感染豚鼠或大鼠。用粪检虫卵和尸剖动物检查虫体的生物学方法，判定控制华支睾吸虫囊蚴感染性的最小有效剂量。结果表明，照射离体囊蚴的最小有效剂量为0．05kGy。照射鱼体组织内囊蚴的半数致死量为0．05kGy，最小有效剂量为0．15kGy。我国北方、中部和南方的该虫株囊蚴对钴－60γ射线的敏感性无显著差异，认为用钴－60γ射线0．15kGy剂量可完全控制鱼体中华支睾吸虫囊蚴的感染性，因而辐照技术可作为预防医学中的一种方法。     

广西人体华支睾吸虫感染现状调查分析

目的了解广西人群华支睾吸虫病流行现状和态势。方法按流行程度和水系流域进行分层整群随机抽样。用改良加藤厚涂片法粪检虫卵并计数。结果调查了9个县(市)27个点13990人,华支睾吸虫平均感染率为9.76%,平均EPG为1083,有6个县(市)查出感染者,其中3个县感染率超过20%。男性平均感染率和EPG分别为13.09%和1320;女性分别为5.89%和658,差异均有显著性。各年龄组人群均有感染,以成人感染为重。蒙古族居民感染率最高,为16.67%;汉族感染率为11.56%,高于壮族的8.17%;壮族感染者EPG最高,为1470。职业分布以医生、教师、农民和行政干部感染为重。结论1989年以来广西华支睾吸虫感染率显著上升,疫情快速蔓延,已经成为一个严重的公共卫生问题,应积极开展综合性防治工作。     

广西人体华支睾吸虫感染现状调查分析

目的了解广西人群华支睾吸虫病流行现状和态势. 方法按流行程度和水系流域进行分层整群随机抽样.用改良加藤厚涂片法粪检虫卵并计数. 结果调查了9个县（市）27个点13 990人,华支睾吸虫平均感染率为9.76%,平均EPG为1 083,有6个县（市）查出感染者,其中3个县感染率超过20%.男性平均感染率和EPG分别为13.09%和1 320;女性分别为5.89%和658,差异均有显著性.各年龄组人群均有感染,以成人感染为重.蒙古族居民感染率最高,为16.67%;汉族感染率为11.56%,高于壮族的8.17%;壮族感染者EPG最高,为1 470.职业分布以医生、教师、农民和行政干部感染为重. 结论 1989年以来广西华支睾吸虫感染率显著上升,疫情快速蔓延,已经成为一个严重的公共卫生问题,应积极开展综合性防治工作.     

华支睾吸虫感染与急性胆囊炎的关系-流行区调查与临床资料分析

在广东顺德市调查５２３０人的华支睾吸虫感染率２５．１％（１３１５／５２３０），１３１５例华支睾吸虫感染者的胆囊炎发生率为６．０％，３９１５例非华支睾吸虫感染者则为０．８％，差异非常显著（Ｐ＜０．０１）。在６４例急性胆囊炎住院患者中，５７例（８９．１％）合并华支睾吸虫感染，未合并华支睾吸虫感染者仅为７例（１０．９％），前者为后者的８倍多。说明华支睾吸虫感染与急性胆囊炎的发生有密切关系。在急性胆囊炎合并华支睾吸虫患者中，驱虫治疗对防止急性胆囊炎反复发作有积极作用。     

生物素——亲和素系统检测华支睾吸虫特异性抗体的研究

用ABC-ELISA检测华支睾吸虫粪检阳性病人130例,粪检阴性受试者101例及其它疾病82例,并与粪检及另外两种血清学方法(SPA-ELISA、常规ELISA)比较。粪检阳性符合率93.08％,阴性符合率63.37％。ABC-ELISA的阳性反应强度是常规ELISA的1.31倍(P<0.05),其平均几何滴度是SPA-ELISA的1.77倍(P<0.05)。特别在轻度感染病人,ABC-ELISA的平均几何滴度明显高于后两种血清学方法,而且非特异性反应较低。     

华支睾吸虫mGST新基因的克隆、表达与纯化

目的扩增华支睾吸虫一个微粒体谷胱甘肽转移酶（mGST）新基因,明确是否存在内含子,并进行原核表达与纯化. 方法用PCR方法分别从华支睾吸虫成虫cDNA（质粒）文库和基因组DNA中扩增mGST基因并测序,将编码基因定向克隆到原核表达载体pET-30a（＋）,在大肠埃希菌BL21/DE3中表达,按照Ni-NTA agarose说明书纯化重组蛋白,用SDS-PAGE和TLC分析. 结果 mGST基因全长486 bp,没有内含子,构建的原核表达质粒pET-30a（＋）-mGST在大肠埃希菌中得到了有效表达,融合蛋白的分子质量单位约为24 ku.重组蛋白达细菌总蛋白质的11%,纯化后的重组蛋白纯度为83%. 结论 mGST基因没有内含子,在大肠埃希菌中能有效表达,得到了纯化的重组蛋白,为进一步研究其功能奠定了基础.