SDF-1和PI3K/Akt通路对卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭能力的影响研究

目的:探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号传导通路对卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭能力的影响及其作用机制.方法:将卵巢癌CAOV3细胞分为对照组(未给药),实验组1(100 ng/ml SDF-1),实验组2(50 μmol/L PI3K/Akt信号传导通路抑制剂LY294002)和实验组3(50 μmol/L LY294002,作用0.5h后加入100 ng/ml SDF-1).采用MTT法检测卵巢癌CAOV3细胞经不同药物处理后24、48和72 h的细胞增殖能力.采用Transwell体外细胞侵袭实验和Western Blot法检测经不同药物处理48h后卵巢癌CAOV3细胞的侵袭能力、Akt磷酸化程度和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平.结果:SDF-1可以明显促进卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭(P＜0.05),LY294002可以抑制卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭(P＜0.05);实验组3卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭能力与实验组2比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:SDF-1能够通过PI3K/Akt信号传导通路诱导MMP-9蛋白表达上调,增强卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力;应用LY294002阻断PI3 K/Akt信号传导通路可显著抑制SDF-1对人卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭的促进作用.     

白藜芦醇对卵巢癌细胞CXCR4/CXCL12信号轴的影响

目的探讨白藜芦醇对卵巢癌细胞株A2780细胞增殖、迁移、侵袭及CXCR4/CXCL12信号轴的影响。方法分别采用0μmol·L~(-1)、20μmol·L~(-1)、40μmol·L~(-1)、80μmol·L-1白藜芦醇处理卵巢癌A2780细胞,应用噻唑蓝比色法(MTT)检测白藜芦醇处理后卵巢癌A2780细胞增殖情况,采用Transwell实验检测白藜芦醇对卵巢癌A2780细胞侵袭、迁移能力的影响。应用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)及Western blot检测卵巢癌A2780细胞趋化因子受体4 (CXCR4)、基质细胞衍生因子1(CXCL12)、血管内皮生长因子(VEGF) mRNA及蛋白表达水平。设置二甲基亚砜(DMSO)对照组、100 ng·ml-1CXCL12处理组、20μmol·L~(-1)白藜芦醇处理组、20μmol·L~(-1)白藜芦醇+100 ng·ml-1CXCL12处理组,检测A2780细胞迁移、侵袭能力。结果 MTT结果显示,20μmol·L~(-1)、40μmol·L-1、80μmol·L~(-1)白藜芦醇可抑制A2780细胞增殖,且具有剂量依赖性(P<0. 05),白藜芦醇可明显抑制A2780细胞迁移、侵袭能力,且呈一定剂量依赖性(P<0. 05);白藜芦醇可下调A2780细胞CXCR4、CXCL12、VEGF mRNA及蛋白表达; 100 ng·ml-1CXCL12可明显促进A2780细胞迁移、侵袭能力,同时加入40μmol·L-1白藜芦醇后,其促进A2780细胞迁移、侵袭能力被抑制。结论白藜芦醇可通过靶向抑制CXCR4/CXCL12信号轴,抑制卵巢癌细胞株A2780细胞迁移及侵袭。     

Nectin-4与卵巢癌的关系及其意义

目的:检测Nectin-4在卵巢癌中的表达情况,分析其与卵巢癌临床病理参数之间的关系。方法:RT-PCR法检测30例卵巢癌、25例卵巢良性肿瘤和30例正常卵巢组织Nectin-4 mRNA表达;Western blotting法检测Nectin-4蛋白表达。结果:①Nectin-4 mRNA表达为卵巢癌组0.71±0.12,卵巢良性肿瘤组0.32±0.09、正常卵巢组0.30±0.09,卵巢癌组显著高于后两组,差异有统计学意义(P<0.01)。卵巢癌组织中,不同年龄、病理类型间比较,差异均无统计学意义(P>0.05);不同病理分化程度、手术病理分期、有无淋巴结转移比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。②Nectin-4蛋白表达为卵巢癌组0.71±0.06、卵巢良性肿瘤组0.35±0.07、正常卵巢组0.32±0.07,卵巢癌组织明显高于卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:卵巢癌存在Nectin-4过度表达,与其病理分化程度、手术病理分期及淋巴结转移有密切关系,提示Nectin-4参与调控卵巢癌发生及发展过程。     

NDRG2基因过表达影响卵巢癌细胞生物学功能的研究

目的构建N-myc下游调节基因2 (NDRG2)过表达质粒,研究NDRG2基因影响卵巢癌细胞增殖、凋亡及侵袭等生物学行为的作用。方法 NDRG2过表达质粒载体感染卵巢癌细胞,从而实现NDRG2基因的在卵巢癌细胞中的过表达。之后通过CCK8试验观察卵巢癌细胞的生存能力及平板克隆形成试验观察卵巢癌细胞的增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果质粒转染后,Q-PCR检测NDRG2基因特异过表达。Q-PCR试验观察NDRG2过表达质粒瞬时转染后NDRG2基因表达情况,与空载体组相比,NDRG2过表达转染组卵巢癌细胞NDRG2基因表达水平明显升高(OVCAR-3、SKOV3、CAOV3卵巢癌细胞t值分别为48.000、28.667、29.784,均P0.05)。CCK8检测、平板克隆试验结果显示过表达NDRG2基因显著抑制OVCAR-3、SKOV3及CAOV3细胞生长(t=22.928、13.797、10.332;χ~2=5.530、4.060、4.230,P0.05),并促使上述3种卵巢癌细胞周期停滞于G1期。结论通过真核表达载体使细胞NDRG2基因的过表达,可以明显抑制OVCAR-3、SKOV3及CAOV3细胞的生长和增殖。     

沉默ITGA2通过下调ZEB1的表达抑制卵巢癌细胞SKOV3侵袭转移

目的探讨整合素A2(ITGA2)调控卵巢癌细胞系锌指增强子结合蛋白1(ZEB1)的表达对卵巢癌转移侵袭能力的影响。方法分析490例卵巢癌标本中ITGA2与ZEB1 mRNA表达的相关性;应用Western blot比较4种卵巢癌细胞系中ITGA2与ZEB1蛋白水平的相关性;将针对ZEB1的siRNA转染到SKOV3细胞系中,Western blot验证ZEB1蛋白表达变化,Transwell验证其转移侵袭能力的变化;将针对ITGA2的siRNA转染到SKOV3细胞系,Western blot验证其ITGA2及ZEB1的蛋白表达变化,Transwell验证其转移侵袭能力的变化。结果 490例卵巢癌标本中,ZEB1与ITGA2在mRNA水平呈显著正相关(P0.01);卵巢癌细胞系中ZEB1和ITGA2蛋白水平呈正相关;下调ZEB1后,卵巢癌细胞侵袭转移能力降低;下调ITGA2后,ZEB1表达降低,卵巢癌细胞转移侵袭能力也降低。结论 ITGA2正调控ZEB1的表达,促进卵巢癌细胞转移侵袭,提示降低ITGA2和ZEB1的表达可抑制卵巢癌细胞的转移侵袭。     

siRNA沉默NDRG2基因表达对卵巢癌细胞增殖的影响

目的构建N-myc下游调节基因2 (NDRG2) siRNA重组真核表达载体,研究NDRG2基因与卵巢癌转移、侵袭等生物学行为的关系。方法应用NDRG2 siRNA基因重组质粒载体感染卵巢癌细胞,从而实现NDRG2基因在卵巢癌细胞中的低表达,通过定量Q-PCR检测转染后细胞中NDRG2的表达情况;通过平板克隆形成实验、CCK8实验观察NDRG2基因低表达后对OVCAR-3、SKOV3、CAOV3等卵巢癌细胞生物学特性的影响。结果质粒转染后,Q-PCR检测NDRG2基因特异低表达。CCK8检测、平板克隆实验结果显示,沉默NDRG2基因对OVCAR-3、SKOV3、CAOV3细胞生长均有明显促进作用(P0. 05)。结论通过真核表达载体使细胞NDRG2基因的低表达,可以明显促进OVCAR-3、SKOV3、CAOV3细胞的生长和增殖。     

上皮性卵巢癌组织趋化因子CXCL14与金属基质蛋白酶2表达相关性研究

目的观察上皮性卵巢癌组织趋化因子CXCL14与基质金属蛋白酶2 (MMP-2)表达。方法选取2015年5月至2017年12月,陕西省宁强县天津医院收治的上皮性卵巢癌患者78例,均手术留取其肿瘤组织(卵巢癌组),另外选取卵巢交界性肿瘤组织30例份(交界性肿瘤组),卵巢良性肿瘤组织20例份(良性肿瘤组),其中畸胎瘤7例,浆液性囊腺瘤5例,黏液性囊腺瘤4例,纤维瘤4例。采用免疫组化SP法检测三组CXCL14、MMP-2表达,分析卵巢癌CXCL14、MMP-2表达与患者临床病理参数的关系及CXCL14、MMP-2之间的关系。结果卵巢癌组CXCL14阳性表达率均低于交界性肿瘤组及良性肿瘤组,差异有统计学意义(χ~2=28.146、32.388,P0.05),MMP-2阳性表达率均高于交界性肿瘤组及良性肿瘤组,差异有统计学意义(χ~2=5.524、9.568,P0.05)。卵巢癌组织CXCL14表达与肿瘤TNM分期、淋巴结转移及腹水有关(χ~2=5.435、4.780、4.967,P0.05),MMP-2表达与卵巢癌分化程度、TNM分期、淋巴结转移及腹水均有关(χ~2=8.969、22.772、19.855、18.332,P0.05)。卵巢癌组织CXCL14、MMP-2表达呈负相关(r=-0.438,P0.05)。结论卵巢癌组织趋化因子CXCL14低表达、MMP-2高表达,二者的表达变化参与卵巢癌的发生发展。     

靶向p38反义寡核苷酸-脂质体复合物对人卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖的影响

目的:探讨p38反义寡核苷酸(p38 anti-ODN)对卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖的影响。方法:培养卵巢癌细胞株(CAOV3),以MTT比色法及克隆形成实验测定p38 anti-ODN抑制卵巢癌细胞株CAOV3增殖的作用。免疫印迹法测定p-p38、Cyclin D1及p21waf/cip1表达。免疫沉淀法纯化蛋白并p38试剂盒测定p38活性。结果:MTT实验及克隆分析法均显示p38 anti-ODN明显抑制CAOV3细胞增殖、p-p38表达、下调Cyclin D1表达,同时上调p21waf/cip1表达。结论:p38反义寡核苷酸可以抑制卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖,其机制与影响p38通路及下游CyclinD1、p21waf/cip1表达有关;干预p38通路是基因治疗卵巢癌的重要途径之一。     

丁酸钠抑制卵巢癌细胞侵袭及转移能力的研究

目的:探讨组蛋白去乙酰基酶抑制剂丁酸钠对卵巢癌细胞株CAOV3侵袭及转移能力的影响。方法:用不同浓度的丁酸钠处理CAOV3细胞,MTT比色法、克隆形成实验测定其对细胞生长的抑制情况,细胞黏附实验、Transwell小室和划痕损伤实验观察其对细胞黏附、迁移和侵袭能力的影响。结果:丁酸钠抑制CAOV3细胞的生长,并呈剂量依赖性(P<0.05);其对CAOV3细胞的黏附、迁移和侵袭能力均有明显的抑制作用,其抑制率呈剂量效应曲线(P<0.05)。结论:丁酸钠对卵巢癌细胞株CAOV3的侵袭及转移能力有明显的抑制作用。     

ERK1/2通路抑制剂PD98059影响卵巢癌细胞SKOV3增殖、侵袭能力的研究

目的:探讨MAPK/ERK信号传导通路抑制剂PD98059对卵巢癌细胞SKOV3的增殖、侵袭能力的影响。初步探讨阻断MAPK/ERK信号传导通路治疗卵巢癌的可能性。方法:体外培养人上皮性卵巢癌细胞SKOV3,采用CCK-8细胞增殖方法检测卵巢癌细胞SKOV3增殖情况,Western blot检测p-ERK蛋白表达,Transwell细胞侵袭实验检测SKOV3细胞的侵袭能力。结果:CCK-8法显示PD98059在一定范围内能够明显抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖,其作用具有时间依赖性及浓度依赖性,PD98059有效浓度为25μmol/L,在此有效浓度作用下有效时间为24h;Western blot法检测结果显示PD98059能够下调pERK1/2,即抑制ERK1/2磷酸化,从而使得ERK1/2信号传导途径失活;Transwell细胞侵袭实验结果显示PD98059在一定浓度范围内能抑制卵巢癌细胞SKOV3的侵袭与转移能力。结论:PD98059可以通过抑制ERK1/2信号途径,抑制人上皮性卵巢癌SKOV3细胞的增殖、侵袭转移。     

卵巢癌相关成纤维细胞对上皮性卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响

目的:采用Transwell体外共培养体系,研究直接分离自卵巢癌的癌相关成纤维细胞CAFs对卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响,探讨CAFs在上皮性卵巢癌进展中的作用。方法:采用0.4μm孔径的Tranwell小室进行CAFs或者NFs与卵巢癌细胞CAOV3体外共培养,用RT-PCR的方法检测共培养之后的卵巢癌细胞CAOV3中增殖细胞核抗原(PC-NA)表达的改变,以了解卵巢癌细胞增殖的变化。②用流式细胞仪检测共培养之后CAOV3细胞的细胞周期和Annexin-V/PI检测CAOV3细胞的凋亡情况。③用8μm孔径的Transwell小室建立卵巢癌CAFs与CAOV3细胞的交互作用模型,观测CAFs对CA-OV3细胞迁移特性的影响。④以Matrigel模拟重建基底膜,用8μm孔径的Transwell小室建立卵巢癌CAFs与CAOV3细胞的交互作用模型,观测CAFs对CAOV3细胞侵袭特性的影响。结果:与CAFs共培养之后卵巢癌细胞CAOV3的PCNA基因表达显著增高,并且随着CAFs细胞量的增加,CAOV3细胞增殖活性显著增强。同时CAFs细胞的PCNA基因表达下降,随着CAOV3细胞数量的增加,PCNA表达明显减少(P=0.011)。②采用流式细胞仪检测细胞周期的方法可以发现,与CAFs共培养之后CA-OV3细胞的凋亡显著减少(P=0.008),而在与NFs共培养之后的CAOV3细胞中未发现这一现象。③同时用Annexin-V/PI的方法,用流式细胞仪进行检测,也可以证实与CAFs共培养之后CAOV3细胞的凋亡显著减少(P=0.011),而与NFs共培养之后,CAOV3的凋亡没有明显变化。④与对照组相比CAFs或者NFs对CAOV3作用8h后,CAOV3迁移明显增加,但CAFs组的增加有极显著性(P<0.01)。⑤侵袭实验中发现,与对照组相比CAFs或者NFs对CAOV3作用24h后,CAOV3侵袭明显增强,但CAFs组的增强有极显著性(P<0.01)。结论:CAFs能促进卵巢癌CAOV3细胞的增殖,减少其凋亡,并且两种成纤维细胞对卵巢癌细胞均有促迁移和侵袭的作用,但是CAFs的作用更加显著。这些发现提示,在CAFs与卵巢癌CAOV3细胞的交互作用中,产生的信号因子能够促进卵巢癌的进展。     

Escin Suppresses Migration and Invasion Involving the Alteration of CXCL16/CXCR6 Axis in Human Gastric Adenocarcinoma AGS Cells

Escin, a natural mixture of triterpene saponins isolated from horse chestnut, has been reported to possess anticancer activity in many human cancer cells. However, the effect of escin on the metastasis has not been studied. The present study examined the effect of escin on the migration and invasion of AGS human gastric cancer cells. To examine the effects of escin on metastatic capacities of gastric cancer cells, AGS cells were cultured in the presence of 0–4 μmol/L escin. Escin inhibited cell migration and invasion in AGS cells. However, escin did not affect the viability of these cells at these concentrations. The chemokine receptor and its ligands play an important role in cancer metastasis. Escin decreased the production of soluble C-X-C motif chemokine (CXCL)16 but increased the expression of trans-membranous CXCL16. The expression of C-X-C chemokine receptor (CXCR)6 was not affected by escin treatment. Exogenous CXCL16 reversed escin-induced migration inhibition. In addition, escin inhibited the phosphorylation of focal adhesion kinase and Akt. These results demonstrate that escin inhibited the migration and invasion of AGS cells, which is associated with altered CXCL16/CXCR6 axis. These findings suggest that escin has potential as an antimetastatic agent in gastric cancer.     

过表达GCNF对HeLa细胞生物学行为的影响

目的:将成功构建的人pcDNA3.1-GCNF真核表达载体瞬时转染宫颈癌HeLa细胞,观察GCNF基因对HeLa细胞生物学功能的影响。方法:将重组质粒pcDNA3.1-GCNF转染HeLa细胞,通过MTT比色法、基质胶黏附实验和Transwell侵袭试验对转染后HeLa细胞增殖、黏附和侵袭力进行分析。结果:成功获得瞬时转染的pcDNA3.1-GCNF HeLa细胞,转染目的基因组(0.239±0.014)与转染空质粒组(0.198±0.020)及未转染组(0.204±0.012)相比,细胞增殖最快(P<0.05)。转染目的基因后细胞粘附、侵袭力未见明显改变。结论:GCNF基因促进了体外培养的宫颈癌HeLa细胞增殖,但对HeLa细胞粘附、侵袭力没有明显的影响。     

IL-8和CXCL12在来曲唑诱导的PCOS大鼠卵巢中的表达及意义

目的:应用来曲唑建造多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型,探讨趋化因白介素-8和CXCL12在PCOS发病机制中的作用。方法:应用来曲唑诱导PCOS大鼠模型,阴道涂片观察大鼠动情周期变化,应用放免法测定大鼠血清性激素水平;大鼠卵巢组织石蜡包埋、组织切片并HE染色观察组织学变化;借助免疫组织化学技术,对IL-8和CXCL12在多囊卵巢综合征大鼠和对照组大鼠卵巢组织的表达情况进行对照研究。结果:PCOS大鼠模型建造成功,PCOS组IL-8和CXCL12在卵泡膜细胞、颗粒细胞、间质细胞的表达明显低于实验对照组(P<0.05)和空白对照组(P<0.05)。结论:①来曲唑诱导的大鼠动物模型是理想的PCOS模型。②IL-8和CXCL12参与多囊卵巢综合征排卵障碍的发生。     

VEGF-C反义寡核苷酸和姜黄素联合化疗对卵巢癌细胞SKOV3生长、粘附、侵袭能力的抑制作用

目的探讨VEGF-C反义寡核苷酸(VEGF-C ASODN)和姜黄素联合化疗对人卵巢癌细胞SKOV3生长粘附侵袭能力的抑制作用。方法 MTT法检测VEGF-C ASODN和姜黄素联合化疗对卵巢癌细胞的增殖抑制效应;MTT法检测卵巢癌细胞与细胞外基质粘附能力,体外侵袭实验检测卵巢癌细胞侵袭人工基底膜的能力。结果 VEGF-C ASODN和姜黄素联合化疗对卵巢癌细胞有明显的增殖抑制作用,使卵巢癌细胞对细胞外基质粘附率明显降低,穿透重组基质膜数目明显下降。结论 VEGF-C ASODN和姜黄素联合化疗能明显抑制卵巢癌细胞体外实验中的生长粘附侵袭能力,可望为卵巢癌提供一种有效的联合化疗方法。     

层粘素及其受体在人卵巢癌细胞中的表达和意义

目的探讨层粘素（laminin,LN）及其受体（laminin receptor, LNR）在人卵巢癌细胞黏附和转移中的作用。方法采用细胞黏附实验检测层粘素及其受体在5株卵巢癌细胞黏附中的作用;Boyden小室测定癌细胞侵袭能力;流式细胞技术检测层粘素及其受体在人卵巢癌细胞上的表达情况。结果抗层粘素及其受体抗体,可明显抑制人卵巢癌细胞的黏附作用,且随着稀释度的不同,其抗黏附能力各异。抗层粘素抗体侵袭力测定显示,A2780最弱,Skov-3最强,两者比较,差异有显著意义（P％0．01）。在5种卵巢癌细胞中,4株癌细胞有层粘素及其受体表达,l株癌细胞无表达。结论层粘素及其受体可通过诱导肿瘤细胞黏附和迁移,从而促进肿瘤细胞浸润和转移。     

藤黄酸通过YAP信号通路发挥对高糖诱导的内皮损伤的保护作用

目的 探讨藤黄酸在高糖诱导的内皮损伤中的保护作用及可能的作用机制。方法 人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分5组,对照组给与低糖培养基培养,模型组和藤黄酸低剂量组、中剂量组和高剂量组均给与40mmol/L葡萄糖培养基培养,藤黄酸各给药组分别给与0.2μM、0.4μM、0.8μM藤黄酸处理,MTT检测各组细胞活力,流式细胞术检测各组凋亡,WB检测凋亡蛋白Cl-cas-3和Cl-cas-9表达,收集各组细胞上清液,检测氧化应激指标:ROS、MDA、NO以及粘附分子ICAM-1、VCAM-1水平,WB检测YAP信号通路蛋白总YAP（t-YAP）蛋白和细胞核中YAP（n-YAP）蛋白表达量。在藤黄酸处理基础上,在HUVEC细胞中过表达YAP,MTT检测细胞活力,WB检测t-YAP和n-YAP蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组及各给药组HUVEC细胞活性明显降低、凋亡率显著增加,凋亡蛋白Cl-cas-3和Cl-cas-9表达增加,细胞中ROS、MDA水平增加,NO水平降低,ICAM-1、VCAM-1水平增加,t-YAP和n-YAP蛋白表达增加（P<0.05）,与模型组比较,藤黄酸各剂量组细胞活力显著增加、凋亡率显著降低,凋亡蛋白Cl-cas-3和Cl-cas-9表达降低,细胞中ROS、MDA水平降低,NO水平升高,ICAM-1、VCAM-1水平降低,t-YAP和n-YAP蛋白表达降低,差异均有统计学意义（P<0.05）。藤黄酸+YAP组细胞活性显著低于藤黄酸组（P<0.05）,t-YAP和n-YAP蛋白显著高于藤黄酸组（P<0.05）。结论 藤黄酸可以抑制高糖诱导的HUVEC凋亡,增强细胞活力,减轻氧化应激损伤和细胞粘附,对高糖诱导的内皮损伤发挥保护作用,机制可能与抑制YAP信号通路激活有关。     

CXC趋化因子配体3与相关疾病的研究进展

CXC趋化因子配体(CXCL)3是由多种细胞分泌的一种低相对分子质量的生物活性蛋白质，主要通过招募和活化多种表达CXC趋化因子受体(CXCR)1、2的细胞，参与细胞迁移、侵袭及血管新生等调控，在妊娠相关疾病、肿瘤、心血管疾病及肺部疾病发生、发展中具有重要作用。阻断CXCL3或CXCR1、2信号传导通路，可抑制细胞迁移、侵袭、血管生成、肿瘤发生及纤维化等病理生理过程，这可能成为多种疾病的潜在防治靶点。笔者拟就CXCL3与妊娠相关疾病、肿瘤、心血管疾病及肺部疾病关系的最新研究进展进行阐述，旨在发现CXCL3在上述疾病发病机制中的具体作用，为临床采取新策略诊断及分子靶向治疗上述疾病提供参考。