寻常型天疱疮自身抗原Dsg3片段的重组表达和免疫识别

探讨寻常型天疱疮（pemphigus vulgaris,PV)自身抗原桥粒芯蛋白3（desmoglein 3,Dsg3)的抗原决定簇，为自身免疫性疾病机制的研究提供依据。根据Gene Bank中的Dsg3序列分析，采用反转录－聚合酶链式反应（RT－PCR）法克隆自身抗原Dsg3 E1、E2、E3、E4、E5多肽片段的cDNA，定向插入表达载体pGEX-2T，并且导入大肠杆菌JM109中表达重组融合蛋白，经免疫印迹法与PV患者及疾病对照组、正常对照组血清进行反应。结果显示，Dsg3 E1、E2和E4与PV患者血清反应，而不与疾病对照组、正常对照组血清反应。不同患者抗原优势表位有所不同。研究表明，Dsg3 E1、E2和E4表位在PV发病中起重要作用。     

我国登革2型病毒43株包膜E蛋白基因的特征

对我国1987年流行的登革2型病毒43株包膜E蛋白基因的核苷酸序列进行了分析。结果表明登革2型病毒43株包膜E蛋白基因核苷酸序列含1485个核苷酸，编码495个氨基酸，并就其核苷酸序列及其相应的氨基酸序列与其它的登革2型病毒株进行了比较，发现核苷酸序列与我国1985年分离的登革2型病毒04株，新几内亚C株（NGC），牙买加株1409（JAM）和马来西亚当地流行株M1（登革出血热）、血2（登革休克综合征）、M3（登革热）同源性分别是95.8%、94.6%、97.5%、925%、92.7%和939%，氨基酸序列的同源性分别是94.3%、94.3%、96.0%、93.7%、93.7%和91.5%，推断出的氨基酸序列显示出12个保守的半胱氨酸残基和两个潜在的糖基化位点，分别位于Asn-67和Asn-153位。     

3.0T DCE-MRI定量参数联合外周血micro RNA21t和金属硫蛋白-1E对乳腺癌诊断价值

【摘要】目的：研究3.0T动态增强磁共振成像(DCE-MRI)定量参数联合外周血micro RNA21、金属硫蛋白-1E对乳腺良恶性病变的诊断价值。方法：选取2017年2月-2019年10月收治156例乳腺病变患者均行3.0T DCE-MRI检测,检测患者外周血microRNA21、金属硫蛋白-1E水平。根据组织病理学以及影像学检测结果分为良性组、恶性组,比较两组患者3.0T DCE-MRI定量参数以及外周血micro RNA21、金属硫蛋白-1E水平差异;用Pearson相关分析定量参数与外周血micro RNA21、金属硫蛋白-1E水平相关性;绘制受试者工作特征曲线（ROC）,评估3.0T DCE-MRI、micro RNA21、金属硫蛋白-1E单项或联合检测对乳腺良恶性病变鉴别诊断价值。结果：组织病理学结果示良性组患者60例,恶性组96例。恶性组患者micro RNA21、金属硫蛋白-1E水平以及Ktrans、Kep、Ve均显著高于良性组患者（P<0.05）。Ktrans、Kep、Ve分别与外周血micro RNA21、金属硫蛋白-1E水平具有正相关性（P<0.05）。ROC曲线分析显示micro RNA21诊断恶性病变截断值3.535,AUC（95% CI）0.872（0.816~0.928）,金属硫蛋白-1E诊断恶性病变截断值1.955ng/mL,AUC（95% CI）0.838（0.773~0.902）。联合检测micro RNA21、金属硫蛋白-1E、3.0T DCE-MRI联合诊断敏感度（92.5%）、阴性预测率（88.1%）以及准确率（90.4%）均明显高于单独检测。结论：乳腺癌患者外周血micro RNA21、金属硫蛋白-1E高表达与3.0T DCE-MRI定量参数具有相关性,三者联合检查对于乳腺良恶性病变诊断有重要临床价值。     

PTEN对糖尿病肾病肾间质纤维化的作用及其机制

目的 探讨同源性磷酸酶-张力蛋白（PTEN）对糖尿病肾病肾间质纤维化的作用及其可能机制。方法 将体外培养的大鼠近端肾小管上皮（NRK52E）细胞分为正常糖（NG）组、高糖（HG）组及高渗（MA）组,采用Western blotting检测各组PTEN、LC3、P62、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达水平。另将NRK52E细胞分为正常糖对照（NG）组、高糖对照（HG）组和高糖过表达PTEN（HG+pPTEN）组,采用激光共聚焦显微镜观察PTEN对自噬的影响,并在荧光显微镜下观察PTEN对胶原表达的影响。结果 Western blotting检测结果显示,与NG组比较,HG组PTEN、LC3表达水平明显降低,而P62、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达水平明显升高,差异均有统计学意义（_P<0.01）,而MA组PTEN、LC3、P62、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达水平无明显变化。激光共聚焦显微镜观察结果显示,HG组红色斑点和黄色斑点数减少,表明存在明显的自噬抑制,而其余两组未见明显自噬抑制。细胞免疫荧光染色结果显示,HG组PTEN红色荧光减弱、表达降低,胶原荧光染色增强、表达升高,而其余两...     

胸主动脉假性动脉瘤误诊为肺癌一例简

患者,男性,70岁,因咳嗽、胸痛半月入院,既往体健,体格检查：血压正常,气管居中,心界不大,各瓣膜听诊区未闻及病理性杂音,肝脾无肿大,腹部未闻及血管杂音,四肢动脉搏动正常,血常规、凝血功能、梅毒抗体及肝、肾功能检查正常。影像学检查：胸部后前位片（图1）示左肺门见大小约4．51 cm×4．75 cm肿块影,边缘清晰,不光滑,其内密度尚均匀,未见钙化灶及低密度影,主动脉未见增宽,弓部钙化,心脏大小外形未见异常。左侧位胸片（图2）示肺门后方见大小约5．10 cm×4．66 m类圆形高密度影,与降主动脉影重叠,边缘尚清。X线诊断：左肺门占位性病变,建议做CT检查。CT轴位平扫（图3）示左肺下叶团状软组织密度影,边缘不清,密度均匀,CT值约45 Hu,与主动脉分界不清,CT诊断：考虑左肺下叶占位性病变,恶性可能性大,建议增强扫描。CT轴位增强扫描（图4）示胸主动脉向外突出,壁厚,直径约3．5 cm,其内见明显造影剂充填,见附壁血栓。诊断为胸主动脉瘤。主动脉CT血管造影（CTA）轴位和冠状位（图5a）、矢状位及三维（图5b）重建片示降主动脉近段左侧见局限性膨大,内部见附壁血栓形成,诊断为降主动脉假性动脉瘤。     

脑脊液各项指标联合检测对颅内细菌感染的诊断价值

目的通过回顾性分析明确诊断为颅内细菌感染的150例患者的脑脊液检测结果,探讨各项检测指标对颅内细菌感染的诊断价值。方法分别选取临床确诊的150例颅内细菌感染患者的初次脑脊液葡萄糖测定、氯测定、脑脊液总蛋白、脑脊液白细胞计数、脑脊液IgG、脑脊液IgM、脑脊液IgA、细菌培养及结核杆菌荧光定量PCR结果进行统计和分析。结果 （1）感染组与对照组相比,脑脊液白细胞计数和脑脊液总蛋白显著升高,脑脊液氯测定、葡萄糖测定及脑脊液葡萄糖与血液葡萄糖比值显著降低（P〈0.01）。（2）感染组与对照组比较,IgG、IgA及IgM均显著升高（P〈0.01）。（3）检出前3位分别为凝固酶阴性葡萄球菌、鲍曼不动杆菌和结核杆菌。（4）凝固酶阴性葡萄球菌以耐苯唑西林的葡萄球菌（MRCoSA）为主（77.78%）,鲍曼不动杆菌多重耐药性严重。结论脑脊液的生化和常规检查对颅内细菌感染的早期诊断有重要的参考价值,脑脊液特定蛋白测定对颅内细菌感染具有辅助诊断价值,病原学检查有助于颅内细菌感染的确诊。     

成骨不全^99Tc^m-MDP骨显像一例

患者女,44岁,因“右足疼痛9个月余,加重1个月余”入院.体格检查;患者身材矮小（137 cm）,巩膜稍蓝,牙齿几乎全部脱落,胸廓及脊柱无畸形;听力检查示右耳轻度感音神经性听力损失.实验室检查：骨特异性ALP 47.32（正常参考范围11.4～24.6）μg/L;Ⅰ型胶原羧基末端肽0.907（正常参考范围0.300～0.584）ng/L;血磷值降低,2次测定值分别为0.68、0.79（正常参考范围0.97～ 1.61）mmol/L;血钙及PTH正常;尿糖（＋＋＋＋）.定量CT检查示骨量减少,骨密度正常.X线检查示：全身骨质疏松;右足未见骨质破坏;双侧股骨向外侧成角,上段增粗,并向外侧凸（图1）.MRI检查示：右足距骨、跟骨及第2楔状骨信号异常,周围软组织肿胀,踝关节、跟距关节少量积液（图2）;右侧股骨下段及胫腓骨上端骨质信号异常,右侧股骨内侧髁骨皮质不连续（图3）.     

散发性Creutzfeldt-Jakob病病程不同时期的辅助检查敏感性研究

目的 研究散发性Creutzfeldt-Jakob病(sCJD)患者在病程的不同时期时各项辅助检查手段的敏感性.方法 回顾性分析53例sCJD患者的临床资料,统计病程不同时期头颅核磁弥散加权像(DWI)、24h动态脑电图(EEG)、脑脊液14-3-3蛋白及正电子发射计算机断层显像(PET-CT)的敏感性.在计算某一检测手段的敏感性时,以特异性临床表现结合2项或以上辅助检查阳性结果作为诊断的公认标准.结果 在53例sCJD患者中,列入病程早期、中期及晚期统计的例数分别为24、53、22例(其中部分患者跨越2或3个时期).随病程进展,DWI敏感性(早期:58.3％;中期:84.6％;晚期:94.7％、EEG敏感性(早期:45.8％;中期:62.7％;晚期:77.8％、脑脊液14-3-3蛋白的敏感性(早期:l1.1％;中期:52.9％)及PET-CT的敏感性(早期:80％;中期:100％)均逐渐增高.除晚期未行PET-CT检查外,其他各期PET-CT的敏感性均优于其他辅助检查.结论 sCJD患者在病程不同时期各辅助检查的敏感性不同,在病程不同阶段进行多次复查可提高诊断的敏感性.PET-CT检查的敏感性较高,结合其他检查手段诊断sCJD可起到较为关键的作用.     

颅内病变——请分析病变性质

<正>患者男,36岁,1个月前出现无明显诱因头痛,呈持续胀痛,口服“头痛粉”稍缓解,无头晕、四肢抽搐等。实验室检查：C反应蛋白38.8 mg/L（↑）,白介素10.86 pg/ml（↑）。脑脊液总蛋白含量584 mg/L（↑）。影像学检查：颅脑CT平扫示左侧额颞叶片状不规则密度减低影,边界不清,范围约4.2 cm×2.8 cm×1.7 cm（图1）,左侧额骨局部骨质密度增高（图2）;     

彩色M型多普勒评价室壁肥厚患者左室舒张功能的临床研究

目的：探讨应用M型彩色多普勒评价室壁肥厚患者左室舒张功能的临床价值。方法：研究32例左室肥厚患者，包括肥厚型心脏病（HCM）10例、高血压性心脏病（HHD）Ⅱ期左室肥厚22例，正常对照（NC）20例，分别测量左室舒张早期血流播散速度（Vp）、E峰与Vp的比值（E／Vp）等指标。结果：室壁肥厚患者不论E／A〉1，还是E／A〈1，其Vp和E／Vp与对照值相比，均有显著性差异（P〈0．01）。结论：彩色M型多普勒无“假性正常化”现象，是评价左室舒张功能的可靠指标。     

我国登革2型病毒04株包膜蛋白基因的核苷酸及其相应的氨基酸序列

本文报告我国登革2型04株包膜蛋白基因的核苷酸及氨基酸序列,并与登革1、3、4型及其它2型毒株如几内亚C株(NGC)、牙买加株1409(JAM)、候选疫苗株S1以及马来西亚当地流行株M1(登革出血热)、M2(登革休克综合征)。 M3(登革热)进行比较。结果表明D_2-04株E蛋白基因的核苷酸序列与NGC,JAM和S1的同源性分别为95.0％、97.4％和90.0％;与M1、M2、M3的同源性分别为93.3％、92.1％和94.3％;与其它登革血清型的同源性大约为65％。登革2型04株蛋白的氨基酸序列与NGC、JAM、S1、M1、M2、M3的类似性分别为96.8％、97.2％、91.4％、95％、95.6％和94.3％。与其它登革血清型氨基酸类似性大约为62％～68％;与其它黄病毒的类似性范围为43％～47％。推断的氨基酸序列显示出7个保守的半胱氨酸残基及两个潜在的糖基化位点,分别位于Asn-67和Asn-153位。     

PI3K在妊娠期糖尿病发病机制中的作用生物信息分析及验证

目的利用大数据生物信息挖掘算法探讨妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus,GDM）发病相关基因及其可能生物学功能在GDM发病机制中的作用。方法首先检索基因表达数据库,筛选并下载GDM差异表达芯片数据,采用R软件Lima包对差异表达基因进行筛选（Log2FC>1;P<0.05）;对筛选出的差异表达基因进行功能富集分析。采用数据库STRING构建GDM发病机制蛋白-蛋白相互作用网络,分析差异表达基因编码蛋白间的相互作用关系。利用Cytohubb软件进一步筛选信号通路中关键基因（hub基因）;同时选取30例GDM患者和30名正常分娩孕妇为研究对象,采用免疫组化方法对关键基因编码蛋白在GDM患者胎盘组织及正常妊娠产妇胎盘组织中的表达水平进行检测。结果2个数据集GSE51546和GSE87295纳入本次分析,2个数据集中共差异表达基因4个[TACSTD2,磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositide 3-kinase,PI3K),COLEC12和IGFBP6]。差异表达基因蛋白主要位于细胞质和细胞接合器,主要分子功能为磷酸转移酶活性,醇基作为受体和蛋白激酶,主要参与体内相关蛋白信号转导。京都基因百科全书通路分析显示,差异基因主要参与了PI3K-Akt信号通路、糖代谢途径相关通路和胰岛素信号通路。与筛选出的4个差异表达基因编码蛋白-蛋白相互作用网络54个蛋白节点,共574个相互作用链接,平均连接度为21.3,聚集度为0.74。根据蛋白-蛋白相互作用网络筛选出PI3K、TAL1和LYL1为GDM差异表达蛋白-蛋白网络中的关键基因（hub基因）,其中PI3K在3个关键基因中作用最为重要。GDM组中,阳性表达率为70.0%（21/30）,正常妊娠组阳性表达率达为100%(30/30)。GDM患者胎盘组织中PI3K的阳性表达低于正常妊娠者,差异有统计学意义(χ2＝22.47,P<0.05)。结论PI3K在GDM患者中存在明显的差异表达,并可能在GDM发生、发展中发挥重要作用。PI3K可能成为治疗和预防GDM的关键靶点。     

E型肉毒神经毒素(BoNT)基因序列分析及其B细胞表位预测

目的：分析不同E型肉毒梭菌的肉毒神经毒素（BoNT）基因序列的同源性，预测E型BoNT的B细胞表位。方法：用LaserGene软件中的MegAlign程序比对GenBank中5株不同E型肉毒梭菌的BoNT基因序列；分别利用BioSun和LaserGene软件分析E型BoNT的表位参数、蛋白质二级结构及氨基酸序列保守性，利用三维结构显示软件Cn3D，分析E型BoNT可能的B细胞表位的空间定位，进而预测E型BoNT的B细胞表位。结果：5个E型BoNT基因核酸序列同源性为97．2％-100％，氨基酸序列同源性为95％-100％；E型BoNT轻链中的62-78，111-127区段，重链中443-465，661-677，693～709，727-743，853-869，1093-1109，1128-1144，1163-1179区段最有可能是其B细胞优势表位。结论：我们利用不同分析软件，结合多参数综合预测出了E型BoNT的多个B细胞表位，为进一步鉴定E型BoNer的B细胞表位及其多表位疫苗的研究奠定了基础。     

肝内异位脾脏1例

<正>1资料患者,男性,59岁,无明显诱因出现腹痛、腹胀2周。至外院就诊,实验室检查示糖类抗原（carbohydrateantigen,CA）7-24为20.72μ/mL,甲胎蛋白、CA19-9及癌胚抗原（carcinoembryonic antigen,CEA）均正常,乙肝及丙肝病毒标志物检查均为阴性,上腹部增强计算机体层成像（computed tomography,CT）提示肝脏恶性肿瘤,建议进一步检查（无具体影像学资料）。查体：巩膜无黄染,全腹软,     

盐诱导激酶2对放射损伤后细胞周期检查点中的调节作用

目的 了解盐诱导激酶2（SIK2）在电离辐射诱发G₂/M细胞周期阻滞中的作用,并探讨其作用机制。方法 ⁶⁰Coγ射线照射HeLa细胞,慢病毒载体（pSicoR）构建SIK2的小干扰RNA（shRNA）表达载体,Lipofectamine2000介导转染构建SIK2敲低表达细胞模型。Western blot检测SIK2的蛋白表达含量,流式细胞术检测细胞周期,磷酸化组蛋白3（pH3Ser10）作为流式细胞检测分子标记物分析G₂/M期检测点功能。结果 γ射线照射能诱发HeLa细胞SIK2蛋白表达增加。成功构建shRNA敲低HeLa细胞SIK2表达的细胞模型,并通过该细胞模型观察到在不同剂量照射后（1、2、4、6Gy）降低SIK2蛋白表达水平导致细胞的放射敏感性增高（t=-3.445、-2.581、-3.251、-2.553,P<0.05）,γ射线诱发的细胞周期G₂/M边界阻滞在照后5、6h被提前解除（t=4.341、6.500,P<0.05）。Western blot检测结果表明,SIK2敲低细胞与对照细胞相比,放射损伤诱发的磷酸化CHK2蛋白提前消退。结论 SIK2在细胞放射损伤反应中参与细胞的G₂/M检查点功能的调节,影响细胞的放射敏感性。     

E4F1真核表达载体的构建及与p53的相互作用

目的：构建E4 F1野生型及缺失32～81位氨基酸的真核表达载体,检测其与p53的相互作用及对下游基因p53的调节。方法分别用普通PCR和重组PCR方法从乳腺文库中扩增E4F1野生型编码序列及缺失32～81位氨基酸的突变型序列,分别将其以正确相位构建到pXJ40-MYC载体中,得到重组质粒MYC-E4F1和MYC-E4F1（Δ32-81）,分别转化大肠杆菌DH5α,重组质粒经酶切鉴定并转染293 T细胞, Western印迹检测蛋白的表达。将MYC-E4F1和MYC-E4F1（Δ32-81）质粒与FLAG-p53质粒共转染293T 细胞,免疫共沉淀实验检测其相互作用,野生型及缺失突变型表达载体共转染骨肉瘤细胞U2OS,检测其对下游基因p53的调节。结果 E4F1重组质粒及其突变型构建成功,在293 T细胞中鉴定表达正确,野生型及突变型E4 F1均与p53存在相互作用,突变型的结合能力增强,野生型E4F1升高p21蛋白表达水平,而突变型不改变p21蛋白水平。结论成功构建E4F1野生型及缺失32～81位氨基酸的突变型真核表达载体,二者都能与p53相互作用且突变型结合能力更强,野生型E4F1升高基因p53的靶基因p21的蛋白表达水平,而突变型不改变靶基因p21的蛋白水平。该研究为进一步研究E4 F1对p53的调节及其机制奠定了基础。     

γ-catenin在白血病细胞中的表达

目的检测白血病骨髓标本及白血病细胞株中γ-catenin的表达情况,探讨γ-catenin在白血病细胞中的作用。方法以RT-PCR检测76例白血病骨髓标本、8例正常骨髓标本和白血病细胞株K562、HL-60、U-937、Jurkat中γ-catenin的mRNA表达情况,以Western blot和免疫细胞化学法检测上述白血病细胞株中γ-catenin蛋白表达及其分布情况。结果正常骨髓标本中γ-catenin表达阳性率为0（0/8）,急性髓细胞白血病（AML）骨髓标本中γ-catenin表达阳性率为40.0%[12/30,其中M2型的阳性率为50.0%（7/14）],慢性髓细胞白血病（CML）骨髓标本中γ-catenin表达阳性率为13.6%（3/22）,急性淋巴细胞白血病（ALL）和慢性淋巴细胞白血病（CLL）骨髓标本中γ-catenin表达阳性率均为25.0%（3/12）。白血病组γ-catenin表达阳性率与正常组相比,AML组有显著性差异（P〈0.05,其中M2型最为显著）,其余各组均无显著性差异（P〉0.05）。RT-PCR及免疫组化检测可见HL-60和K562细胞γ-catenin呈强阳性,U-937和Jurkat细胞呈弱阳性表达,且γ-catenin主要表达于细胞质中。Western blot检测见K562和HL-60细胞γ-catenin呈阳性表达,而U-937和Jurkat细胞未见表达。结论作为细胞内信号传导分子,γ-catenin表达于AML组、HL-60及K562细胞中,可能与急性髓细胞白血病（特别是M2型）的发生有关。     

颅内静脉窦血栓形成1例

 患者,女性,21岁,未婚,主诉:间断抽搐伴缄默、躁动20d于2012-04-16入院。既往体健,否认各种避孕药服用史。现病史:患者于2012-03-04无明显诱因出现头痛,呈发作性,以额顶部及后枕部胀痛为主,严重时伴有恶心、呕吐,无发热,未予治疗。2012-03-24患者与家人发生争执,之后出现与人交流减少、进食量少;次日23时突然开始出现四肢抽搐,牙关紧闭,四肢强直阵挛,呼之不应,持续约3min,抽搐反复发作,20d内发生5次,并出现拒食及失眠,同时伴有焦躁不安、易激惹,遂多次就诊精神专科,予奥氮平及利培酮治疗无效,并出现思维紊乱、谵妄等精神症状,遂来我院就诊,以“抽搐原因待查”收入院。体格检查:精神差,生命体征平稳;心肺腹未见阳性体征,神经系统查体:缄默状态,查体不合作。双瞳孔等大等圆,直径3.0mm,光反射灵敏,无复视及眼震;四肢肌力5级,肌张力增高,感觉及共济运动查体不合作,双上肢腱反射(++),双下肢腱反射(+++),双侧踝阵挛及左侧膝阵挛(+),双侧Babinski征(+)。颈强,Kernig征(-)。入院后患者头痛症状明显减轻,精神症状较突出,入院当天行腰穿检查,测压力320mmH₂O,脑脊液生化示:Glu:3.93mmol/L,蛋白及氯化物均正常;脑脊液常规:白细胞10M/L;查血生化示CK217U/L,钾3.12mmol/L;风湿三项示抗链“O”381U/L,尿常规示尿酮体+2,余肝炎6项,性病2项,抗心磷脂抗体、自身抗体谱、放免甲功、贫血、凝血4项、便常规均未见异常。头颅MRI+DWI示未见明显异常。心脏彩超示三尖瓣少量反流,心内结构及心功能未见明显异常。     

病例讨论

患者男，56岁。每天吸烟2包。患慢性髓性白血病作随访检查。查体示轻度恶病质，肝脾肿大，心肺听诊末发现异常。图1、2为这次检查所摄的正侧位胸片。1．正位胸片心影大小是否正常？2．侧位胸片是否证实心脏扩大？3．胸骨是否正常？4．请选出适合于图1、2的唯一诊断：（1）心包积液；（2）胸骨凹陷；（3）心包部分缺损；（4）心肌病。答案1．后前位胸片上心胸比率（图上长双箭）大于50％，提示心脏扩大。2．然而，在侧位胸片上示心脏大小完全正常，无明显地房室扩大征象（图4，弯箭示右室和流出道正常，箭头示在室正常）。只有几种情况如心包…     

POEMS综合征（附1例分析）

POEMS综合征为一种与浆细胞病有关的多系统病变,以多发性神经病变（polyneuropathy,P）、脏器肿大（organomegely,O）、内分泌病（endocrinopathy,E）、M蛋白（Mprotein,M）和皮肤改变（skinchange,S）为主要症状。临床十分少见,且疾病表现多样,极易误诊。本文报告PO—EMS综合征1例,并复习文献,加深对该病的认识。