阿帕替尼对宫颈癌细胞增殖及化疗敏感性的影响

目的:探讨阿帕替尼(Apatinib)对人宫颈癌细胞的抑制增殖作用以及对宫颈癌化疗药物敏感性的影响。方法:CCK-8实验和克隆形成实验分别检测apatinib对宫颈癌细胞Si Ha和HCC94的增殖抑制作用,流式细胞术检测apatinib对宫颈癌细胞周期的影响,RT-qPCR检测Cyclin D3 mRNA表达,Western blot检测Cyclin D3蛋白表达。结果:Apatinib呈剂量依赖性抑制宫颈癌细胞的增殖;apatinib可诱导宫颈癌细胞发生G_0/G_1期阻滞,显著降低宫颈癌Si Ha和HCC94细胞中Cyclin D3 mRNA及Cyclin D3蛋白的表达水平(P0.01);apatinib可提高宫颈癌细胞对紫杉醇的化疗敏感性。结论:Apatinib可通过诱导宫颈癌细胞G_0/G_1期阻滞抑制其增殖,且对紫杉醇抑制宫颈癌细胞的生长有增效作用。     

甲氧滴滴涕对人绒毛外滋养细胞的白细胞表面抗原G(HLA-G)表达的影响

目的:探讨甲氧滴滴涕(MXC)对绒毛外滋养细胞(EVCT)白细胞表面抗原G(HLA-G)表达的影响。方法:用胰蛋白酶消化加流式细胞仪分离得到人绒毛外滋养细胞,进行原代培养及鉴定。将所获细胞分为MXC(1μmol/L、3μmol/L、5μmol/L、7μmol/L)处理组及空白对照组,培养12h、24h、48h。用Western blotting检测各组各时间点HLA-G的表达,同时用RT-PCR法检测HLA-GmRNA表达。结果:MXC处理组滋养细胞HLA-G表达呈时间剂量依赖性下降,HLA-G mRNA变化与其一致。结论:MXC可从蛋白和mRNA水平降低绒毛外滋养细胞HLA-G表达,从而降低其免疫耐受功能。     

槲皮素以及槲皮素联合顺铂对子宫颈癌细胞黏附、迁移和侵袭的影响

目的 探讨槲皮素以及槲皮素联合顺铂对宫颈癌细胞黏附、迁移和侵袭的影响.方法 以不同浓度(20、40、80 μmol/L)槲皮素以及槲皮素联合顺铂(10 μmol/L)处理宫颈癌细胞株HeLa细胞,采用细胞黏附实验、划痕实验和穿膜小室侵袭实验分别检测处理前后HeLa细胞黏附率、迁移速度以及侵袭力(以穿膜细胞数表示)的变化.结果 不同浓度的槲皮素处理后,随着槲皮素浓度从20 μmol/L增加至80 μmol/L,细胞黏附率由(82.2±1.5)%降至(48.4±1.1)%;细胞迁移速度由(7.26±0.20)μm/h降至(3.78±0.64)μm/h;穿膜细胞数由(124.3±1.5)个降至(90.7±2.1)个,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).顺铂联合槲皮素处理后,随着槲皮素浓度从20 μmol/L增加至80 μmol/L,细胞黏附率由(42.6±1.2)%降至(27.5±1.7)%;细胞迁移速度由(2.20±0.33) μm/h降至(0.72±0.19) μm/h;穿膜细胞数由(78.7±2.5)个降至(44.0±4.0)个,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).槲皮素联合顺铂处理后对HeLa细胞黏附、迁移和侵袭的抑制作用明显强于单纯槲皮素处理者(P<0.05).结论 槲皮素以及槲皮素联合顺铂能抑制HeLa细胞黏附、迁移及侵袭,槲皮素能增强顺铂对HeLa细胞黏附、迁移及侵袭的抑制作用.     

双酚A激活PI3K/AKT通路促进子宫内膜癌细胞增殖的研究

目的:研究双酚A(bisphenol A,BPA)活化磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)促子宫内膜癌细胞Ishikawa和RL952增殖的机制。方法:CCK8试剂盒检测Ishikawa和RL952细胞的增殖情况,蛋白质印迹(Western blotting)法检测p-AKT蛋白的表达。结果:在Ishikawa和RL952细胞中,BPA作用48 h时,细胞增殖呈浓度依赖性,1μmol/L的BPA促细胞生长效应最显著,Ishikawa和RL952细胞增殖率分别为0.758±0.023和0.692±0.042。BPA浓度超过1μmol/L后,促细胞增殖的作用下降。BPA作用24 h时促增殖效应不明显,BPA作用72 h时表现出细胞毒作用。1μmol/L BPA处理的Ishikawa和RL952细胞48 h后p-AKT蛋白的表达较对照组升高(P<0.05),加入PI3K抑制剂(LY294002),p-AKT的蛋白表达比对照组降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:BPA通过激活PI3K/AKT通路促进子宫内膜癌细胞增殖。     

双酚A激活PI3K/AKT通路促进子宫内膜癌细胞增殖的研究

目的:研究双酚A(bisphenol A,BPA)活化磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)促子宫内膜癌细胞Ishikawa和RL952增殖的机制。方法:CCK8试剂盒检测Ishikawa和RL952细胞的增殖情况,蛋白质印迹(Western blotting)法检测p-AKT蛋白的表达。结果:在Ishikawa和RL952细胞中,BPA作用48 h时,细胞增殖呈浓度依赖性,1μmol/L的BPA促细胞生长效应最显著,Ishikawa和RL952细胞增殖率分别为0.758±0.023和0.692±0.042。BPA浓度超过1μmol/L后,促细胞增殖的作用下降。BPA作用24 h时促增殖效应不明显,BPA作用72 h时表现出细胞毒作用。1μmol/L BPA处理的Ishikawa和RL952细胞48 h后p-AKT蛋白的表达较对照组升高(P0.05),加入PI3K抑制剂(LY294002),p-AKT的蛋白表达比对照组降低,但差异无统计学意义(P0.05)。结论:BPA通过激活PI3K/AKT通路促进子宫内膜癌细胞增殖。     

BV6诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡定量蛋白组学研究

目的:通过定量蛋白组学技术探讨Smac类似物BV6影响人卵巢癌SKOV3细胞生长的可能机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各浓度梯度BV6干预SKOV3细胞48 h后的生长抑制率,计算抑制率为50%时的药物浓度为半数抑制浓度(IC50),以0.05、0.1、0.2μmol/L BV6进行后续实验;光镜下观察对照组与0.05μmol/L BV6处理组48 h后的细胞形态变化,应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术结合液相串联质谱策略筛选差异蛋白并行生物信息分析;蛋白质印迹(Western blotting)检测对照组、不同浓度BV6处理组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达。结果:BV6可以抑制SKOV3细胞的生长增殖,且呈剂量依赖性,多组间方差分析及任意组间两两比较,差异均有统计学意义(均P0.05)。按公式计算BV6作用于SKOV3细胞48 h的IC50为0.40μmol/L。基于发现错误率(FDR)1%,对照组与0.05μmol/L BV6处理48 h组筛选到349个差异蛋白,其中251个蛋白表达上调、98个蛋白表达下调,经生物信息学分析显示差异蛋白与RNA转录、蛋白质翻译、细胞分裂增殖、凋亡信号调节及肿瘤血管生成密切相关。Western blotting结果显示高、中、低浓度BV6干预SKOV3细胞48 h后与对照组相比,Caspase-3蛋白表达增加,其中高BV6组的Caspase-3蛋白表达最高,组间差异有统计学意义(均P0.05)。结论:BV6通过抑制RNA转录、蛋白质翻译进程、细胞分裂增殖及肿瘤血管生成,促进Caspase-3凋亡信号活化介导SKOV3细胞死亡。     

哌立福辛联合顺铂对卵巢透明细胞癌ES2细胞系凋亡及Caspase-3和PARP表达的影响

目的:探讨哌立福辛(perifosine)与顺铂(cisplatin)联合对人卵巢透明细胞癌ES2细胞系凋亡及Caspase-3和PARP表达的影响。方法:以不同浓度(0、2、4、6、8和10μmol/L)哌立福辛作用于人卵巢透明细胞癌ES2细胞系48h。CCK-8法检测细胞增殖抑制情况。以哌立福辛最小有作用剂量与不同浓度(0、10、40、70和100μmol/L)顺铂联合处理细胞48h,以金氏公式筛选出协同抑制作用最明显的联合剂量,以该联合剂量处理ES2细胞48h后,DAPI染色法、流式细胞仪检测细胞凋亡情况;用Giemsa染色检测细胞有丝分裂指数;Western blot法检测细胞中Caspase-3(cleaved)及PARP(cleaved)蛋白的表达情况。结果:CCK-8法检测提示,哌立福辛作用48h时对ES2细胞的最小作用剂量为4μmol/L。金氏公式计算结果提示,4μmol/L哌立福辛+40μmol/L顺铂联合用药协同抑制细胞增殖作用最强(q=1.21);与哌立福辛或顺铂单独作用相比,DAPI染色发现联合用药组镜下可见大量的核碎裂及凋亡小体;流式细胞仪检测发现,联合用药能协同增加细胞凋亡率(q=1.32,P0.01)。Giemsa染色结果显示,联合用药能协同抑制细胞有丝分裂(P0.01)。Western blot检测发现,联合用药能明显增加细胞中Caspase-3(cleaved)蛋白的表达,降低PARP(cleaved)蛋白的表达。结论:哌立福辛与顺铂联合能协同通过增加Caspase-3(cleaved)蛋白表达及降低PARP(cleaved)蛋白表达,促进人卵巢透明细胞癌ES2细胞发生凋亡。     

雌激素对人子宫内膜样癌Ishikawa细胞中p57~(kip2)、Cyclin D1、CDK4表达及形态变化影响的研究

目的:研究雌激素对人子宫内膜样癌(EC)Ishikawa细胞(高分化)中p57~(kip2)、Cyclin D1、CDK4表达及形态变化的影响。方法:分别采用含3种不同浓度雌二醇(E_2)(10~(-6)、10~(-8)、10~(-10)mol/L)的培养基培养Ishikawa细胞24、48、72h,MTT检测细胞增殖情况,光镜和电镜观察细胞形态变化,Western blot法检测p57~(kip2)、Cyclin D1、CDK4蛋白表达。结果:MTT结果显示,与对照组比较,低、中浓度E_2组Ishikawa细胞增殖明显(P0.05),高浓度E_2组细胞增殖不明显(P0.05)。光镜及电镜结果显示,与对照组比较,低、中浓度E2组Ishikawa细胞密度增加,部分细胞内线粒体、内质网轻微肿胀,随着作用时间延长,其肿胀程度增加;高浓度E_2组Ishikawa细胞密度减少,较多细胞内线粒体明显肿胀,可见细胞凋亡现象,随着作用时间延长,线粒体、内质网弥漫肿胀、空泡化,细胞凋亡增多。Western blot法结果显示,随着E_2作用时间延长及浓度增加,p57~(kip2)、Cyclin D1与CDK4蛋白表达均逐渐增加(P0.05),其中p57~(kip2)、Cyclin D1、CDK4蛋白均在高浓度E_2组表达最高,而p57~(kip2)蛋白在低浓度E_2组表达最低,Cyclin D1与CDK4蛋白在对照组表达最低。Cyclin D1和CDK4蛋白表达呈正相关(P0.05)。结论:E_2浓度较低时可能以上调Cyclin D1与CDK4蛋白表达为主,发挥正向调控细胞周期进程的作用,促进Ishikawa细胞增殖;E_2浓度较高时可能以上调p57~(kip2)蛋白表达为主,从而抑制Ishikawa细胞增殖,还可导致较强细胞损伤。     

绿茶提取物对人卵巢癌SKOV3细胞生长增殖的影响及其作用途径

目的:探讨绿茶提取物(green tea extract,GTE)对人卵巢癌SKOV3细胞株生长增殖的影响及其作用途径。方法:应用MTT法观察SKOV3细胞生长增殖的情况;光学显微镜观察SKOV3细胞的形态学变化;流式细胞术(FCM)检测SKOV3细胞周期及凋亡的情况;DAPI标记法观察细胞凋亡形态变化;Western blotting检测p-ERK1/2、ERK1/2、Caspase-3及Bcl-xl等相关蛋白的表达水平。结果:随GTE浓度的增加及作用时间的延长,SKOV3细胞存活率逐渐降低(P<0.01),SKOV3细胞数目逐渐减少,细胞受损逐渐增多;经GTE(80μg/L)处理24h、48h、72h的SKOV3,G0/G1期细胞比例与对照组比均显著减少(P<0.01),S期细胞比例及sub-G0期细胞比例与对照组比均显著升高(P<0.01),而添加GTE24h后,G2/M期细胞比例与对照组比明显升高(P<0.05);DAPI标记示有典型的凋亡小体;经GTE(40μg/L、80μg/L)作用24h后与对照组比,SKOV3细胞中p-ERK1/2、Bcl-xl蛋白表达下调,p-ERK1/2分别为0.334±0.030、0.053±0.140(P<0.01);Bcl-xl分别为0.410±0.026、0.267±0.020(P<0.01);Caspase-3蛋白分别为0.128±0.090、0.287±0.028,与对照组相比显著升高(P<0.01),而ERK1/2蛋白则未见明显变化(P>0.05)。结论:GTE在体外能有效地抑制SKOV3细胞的生长,其作用途径可能是通过抑制ERK信号通路的转导,导致细胞周期阻滞,并下调Bcl-xl、上调Caspase-3,最终导致SKOV3细胞凋亡。     

巴弗洛霉素A1抑制卵巢癌细胞SKOV3自噬并增强化疗敏感性的作用机制

目的:研究巴弗洛霉素A1(bafilomycin A1)对5-氟尿嘧啶(5-FU)作用下的卵巢癌细胞SKOV3自噬的抑制作用及其增强化疗敏感性的可能机制。方法:将SKOV3细胞随机分为3组,A组:50μmol/L5-氟尿嘧啶(5-FU)处理48h;B组:100nmol/L巴弗洛霉素A1给药1h后加入50μmol/L5-FU处理48 h;C组(阴性对照):不作任何处理。3组细胞均应用吖啶橙染色、间接免疫荧光技术检测卵巢癌细胞SKOV3自噬形态学变化;并通过Western blotting检测巴弗洛霉素A1对SKOV3细胞中微管相关蛋白轻链3(LC3)及自噬相关蛋白Beclin1表达的影响。结果:B组产生的红色酸性区域明显减少,LC3定位的荧光亮度减弱,细胞内LC3、Beclin1蛋白表达量显著降低。结论:巴弗洛霉素A1可能通过减少SKOV3细胞酸性区域的数量,抑制LC3产生从而抑制SKOV3细胞的自噬。     

NS-398对宫颈癌细胞系的增殖抑制作用及对survivin基因表达的影响

目的:研究选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对宫颈癌HeLa,SiHa细胞系的增殖、凋亡作用及其对凋亡抑制基因survivin表达的影响。方法:体外培养宫颈癌HeLa,SiHa细胞系,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析不同浓度的NS-398分别作用于HeLa,SiHa细胞系24h、48h后对细胞增殖的作用;流式细胞仪(FCM)检测对细胞凋亡的作用;RT-PCR分析对凋亡抑制基因survivin表达的影响。结果:MTT检测显示,NS-398可抑制宫颈癌HeLa,SiHa细胞系增殖,并有浓度时间依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。FCM检测提示,NS-398可诱导HeLa,SiHa细胞系凋亡,有浓度依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR分析表明,NS-398可抑制HeLa,SiHa细胞系凋亡抑制基因survivinmRNA表达,与对照组的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NS-398可抑制宫颈癌HeLa,SiHa细胞增殖,诱导凋亡,其机制与抑制凋亡抑制基因survivin mRNA表达有关,为宫颈癌治疗提供了新的靶点和理论依据。     

硼替佐米对SiHa细胞的抑制作用及其机制的研究

目的:研究不同浓度与作用时间的硼替佐米(PS-341)对宫颈癌SiHa细胞活力的影响,以及PS-341可能的作用机制。方法:常规体外培养宫颈癌SiHa细胞,随机将处于对数生长期的细胞分为24h、48h、72h 3个作用时间组,予以不同浓度的PS-341:0,20,40,60nmol/L。MTT法测定各组细胞抑制率;RT-PCR检测26S蛋白酶体mRNA和p53mRNA的表达。结果:(1)MTT法检测结果显示,随着PS-341作用时间及作用浓度的增加,对细胞活力的抑制率显著高于对照组(P<0.01);(2)RT-PCR结果显示,26S蛋白酶体mRNA的表达量显著降低(P<0.01),p53 mRNA表达量显著升高(P<0.01)。结论:PS-341可能通过降解26S蛋白酶体使p53表达升高而影响宫颈癌的发生。     

放疗诱导宫颈癌细胞中经典Wnt通路的表达情况及顺铂耐药性研究

目的:研究放疗诱导后的耐放疗宫颈癌Hela、Siha细胞系顺铂耐药情况及经典Wnt通路相关分子在其化疗耐受中的作用。方法:分割剂量多次照射诱导宫颈癌细胞并成功建立耐放疗细胞系,将细胞分为R0组(空白对照)、R1组(分割剂量4GY,照射6次)和R2组(分割剂量6GY,照射4次)。CCK8法进行耐药实验,Real-time PCR及Western blot法检测Wnt/β-catenin通路及耐药分子表达情况。结果:Hela R0、R1、R2顺铂IC50分别为3.86、6.65μmol/L和6.53μmol/L,Siha R0、Siha R1、Siha R2顺铂IC50分别为4.79、7.25μmol/L和7.98μmol/L;与R0组相比,其他两组的IC50显著升高,差异有统计学意义(P0.001)。放疗诱导宫颈癌Hela、Siha细胞中经典Wnt通路分子在基因与蛋白水平受到激活,其下游基因C-Myc、Cyclin D1表达增多,放疗诱导Hela细胞中耐药蛋白ABCB1、ABCG2表达升高,而放疗诱导Siha细胞中上述耐药蛋白变化无统计学差异。结论:经典Wnt通路可能是放疗诱导宫颈癌细胞化疗耐受性获得的重要机制,这为复发性宫颈癌患者提供了潜在治疗靶点。     

格尔德霉素对宫颈癌HeLa细胞中bcl-2表达的影响

目的:观察格尔德霉素(geldanamycin,GA)在体外对宫颈癌HeLa细胞抗凋亡基因bcl-2和mRNA转录、蛋白表达水平的影响。方法:分别给予宫颈癌HeLa细胞0,0.02,0.2,2,10μmol/L浓度GA处理24h,用annexin V方法检测细胞凋亡,半定量PCR检测bcl-2、Hsp90 mRNA转录水平,用10μmol/L的GA处理HeLa细胞3、12、24、48h后,Western blot检测bcl-2、Hsp90蛋白表达水平的变化。结果:宫颈癌HeLa细胞经不同浓度的GA作用24h,细胞凋亡指数呈剂量依赖性增加,bcl-2 mRNA表达呈剂量依赖性降低,bcl-2蛋白表达水平呈时间依赖性降低,处理组与对照组之间的差异有统计学意义;但GA对Hsp90 mRNA和蛋白表达水平无明显影响。结论:GA可抑制宫颈癌HeLa细胞抗凋亡基因bcl-2的转录和表达,促进凋亡。     

γ-分泌酶抑制剂DAPT对宫颈癌细胞系及HPV16亚基因转化的永生化人宫颈上皮细胞系作用的研究

目的:研究γ-分泌酶抑制剂DAPT对宫颈癌细胞系以及HPV16亚基因转化的永生化人宫颈上皮细胞系的作用,探讨DAPT临床治疗宫颈癌的可行性。方法:体外培养宫颈癌Siha、HeLa细胞系和HPV16亚基因转化的永生化人宫颈上皮细胞系(CRL2614)。加入不同浓度的γ-分泌酶抑制剂DAPT,不同时间点终止细胞生长,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色方法检测细胞生长情况;使用流式细胞计数仪检测细胞增殖周期中增殖指数(PI)、S期细胞比例(SPF)和凋亡细胞百分比。结果:应用MTT法检测细胞生长情况,5μmol/L及10μmol/LDAPT作用宫颈癌细胞系72h,可显著抑制其生长(P均0.05)。10μmol/LDAPT对CRL2614细胞系作用72h无抑制作用(P0.05)。流式细胞计数仪检测细胞增殖周期及细胞凋亡百分比。用5μmol/L及10μmol/LDAPT作用宫颈癌细胞系24,48,72h均可见SPF、PI明显降低,凋亡细胞百分比明显增加(P均0.05)。10μmol/LDAPT作用CRL2614细胞系72h对SPF、PI及凋亡细胞百分比无影响(P0.05)。结论:DAPT能抑制宫颈癌HeLa、Siha细胞系增殖,促进肿瘤细胞凋亡,对HPV16亚基因转化的永生化人宫颈上皮细胞系的增殖和凋亡没有明显影响。DAPT可能为药物治疗宫颈癌提供新思路。     

顺铂和卡铂上调SiHa细胞株胸苷磷酸化酶的研究

目的:研究顺铂、卡铂上调宫颈癌SiHa细胞株胸苷磷酸化酶(thymidinephosphorylase,TP)的变化,探讨序贯联合化疗时抗嘧啶类药物用药的适合时机。方法:体外培养SiHa细胞株,分为对照组、顺铂组、卡铂组。顺铂和卡铂72h的IC50分别是:19μmol/L,236.82μmol/L。药物作用后0、4、8、12、16、24、36、48h,用RT-PCR检测各组细胞TP mRNA表达。于药物作用后0、6、12、18、24、30h,用Western blot检测TP蛋白表达。结果:顺铂和卡铂作用4~8h后TP mRNA表达开始增加,24h达高峰,相对于空白组,顺铂组升高2.52倍,卡铂组升高1.90倍,24h后逐渐降低;顺铂和卡铂作用6~12h后TP蛋白增加,24h达高峰,顺铂组和卡铂组表达分别是对照组的3.45倍和2.73倍。蛋白质增加幅度大于mRNA,顺铂组与卡铂组差异无统计学意义。结论:顺铂和卡铂可以上调宫颈癌SiHa细胞株TP,渐次升高后下降,呈时间依赖性,顺铂组与卡铂组上调TP的作用差异不显著。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合顺铂对宫颈癌细胞化疗增敏作用的研究

目的:通过检测组蛋白去乙酰化酶抑制剂(SAHA)联合顺铂(DDP)对宫颈癌SiHa细胞生长抑制和促凋亡结果,探讨SAHA对宫颈癌细胞化疗增敏的疗效及机制。方法:将SAHA 0.25、0.5、1、2、4、6μmol/L和DDP 1、2、4、6、8、10μg/mL分别组成单药组和不同SAHA+DDP联合用药组,另设不加药对照组。MTT法检测两种药物单用及联合用药对SiHa细胞的增殖抑制作用;通过流式细胞术(FCM)观察药物对细胞周期的影响;用AnnexinV-FITC标记药物作用后的细胞,了解其早期凋亡情况;镜检观察药物作用后细胞形态的变化。结果:SAHA有抑制癌细胞生长的作用,两药联合具有协同作用或相加作用(P<0.05);SAHA使细胞停滞在G1/G0期,与DDP联合作用后凋亡率增加,使细胞周期进一步阻滞在G1/G0期(P<0.05)。镜下可见对照组癌细胞生长旺盛,异型性高,SA-HA组与DDP组则可见细胞缩小变形,胞膜皱缩,贴壁不良,肿瘤细胞大量坏死,联用组尤为明显。结论:SAHA联合DDP可以抑制细胞增殖,停滞细胞周期,促进细胞凋亡,二者联合有协同作用。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对宫颈癌细胞的放射增敏作用

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对宫颈癌SiHa细胞的毒性和放射增敏作用。方法 2009年10月至2010年6月在河北联合大学医学院采用MTT法检测SAHA对SiHa细胞的毒性并计算IC50。选择20%IC50的SAHA与放疗联合,克隆形成实验分析SAHA对SiHa细胞的放射增敏作用,采用Sigma Plot 2000 Demo版软件,利用多靶单击模型S=1-(1-eD0/D)n拟合细胞存活曲线,计算放射相关参数和放射增敏比,评价增敏效果。结果 MTT结果显示SAHA对SiHa细胞的毒性反应呈浓度和时间依赖性,SAHA作用SiHa细胞48h的IC50为4.80μmol/L。克隆形成实验结果显示,SAHA联合放疗组细胞的克隆形成率明显低于单独放疗组,二者的平均致死剂量(D0)分别为2.329、1.213,准阈剂量Dq分别为1.721、0.823。放射增敏比(SER)为1.92。结论 SAHA对宫颈癌SiHa细胞有良好的细胞毒性和放射增敏作用。     

外源性FHIT基因表达对顺铂诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的影响

目的:探讨外源性脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)基因表达与顺铂(cisplatin,DDP)是否可协同促进宫颈癌SiHa细胞的凋亡。方法:重组质粒PRcC-MV-FHIT(A组)及空质粒PRcCMV(B组)分别转染无内源性FHIT蛋白表达的SiHa细胞(未转染SiHa细胞为C组),Western Blot检测外源性FHIT蛋白的表达,使用不同浓度的顺铂分别处理各组细胞,通过AO-EB染色、流式细胞术检测顺铂处理后各组细胞的凋亡。结果:顺铂处理48h后进行流式细胞仪检测,重组质粒+DDP2.0μg/ml、未转染细胞+DDP2.0μg/ml及未用顺铂处理的重组质粒组凋亡率分别为51.03%、20.58%、22.07%,重组质粒+DDP组细胞凋亡更明显(重组质粒+DDP2.0μg/ml组与未转染细胞+DDP2.0μg/ml及未用顺铂处理的重组质粒组相比P<0.01),AO-EB染色亦见顺铂处理的重组质粒组凋亡细胞明显增多。结论:外源性FHIT基因表达与顺铂协同促进SiHa细胞凋亡,为基因治疗与化疗联合治疗宫颈癌提供理论基础。