预防使用大剂量甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤的神经保护作用

目的研究预防使用大剂量甲基强的松龙对急性脊髓损伤大鼠的神经功能保护作用方法采用Allen重物打击模型，动物随机分为三组：对照组；脊髓损伤组；预防使用大剂量甲基强的松龙组。分别在脊髓损伤后24h、72h进行神经功能评分(Tarlov评分障碍率、Molt斜板功能障碍率)、脊髓病理形态学及超微结构观察、神经中丝(NF)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)观察、结果预防使用大剂量MP可明显改善损伤脊髓的病理形态及超微结构；脊髓损伤后72h大鼠神经功能评分明显提高；显著提高NF的表达、抑制GFAP的表达．结论预防使用大剂量甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤有神经保护作用     

成年大鼠压迫性脊髓损伤后损伤区神经干细胞的分离培养实验研究

目的 研究脊髓损伤后损伤反应性巢蛋白(nestin)和胶质酸性纤维蛋白(glial fibrillary acid protein, GFAP)阳性共存(nestin+/GFAP+)细胞的分裂、增殖和分化能力,以探讨其是否具有神经干细胞(neural stem cells,NSCs)特性. 方法 8周龄雄性SD大鼠12只,体重200～250 g,随机分为正常对照组和模型组(n=6).模型组利用动脉瘤夹压迫法建立成年大鼠脊髓损伤动物模型,正常对照组不作任何处理.造模后5 d,两组分别取大鼠Ts脊髓节段,分离中央管周围室管膜区以外的脊髓灰质和白质,制成单细胞悬液,用无血清NSCs培养基进行培养,并用含血清NSCs培养基进行诱导分化,利用免疫荧光化学和流式细胞仪观察细胞类型及分裂、分化、增殖能力. 结果 模型组培养后3～7 d,单细胞悬液中有大量高度表达的nestin+/GFAP+共存细胞,细胞计数为5.15±0.71;对照组为1.12±0.38;两组比较差异有统计学意义(P<0.01).细胞周期结果 示,模型组S期细胞比例(15.49%±3.04%)及增殖指数(15.88%±2.56%)均明显高于对照组(5.84%±0.28%,6.47%±0.61%),两组比较差异有统计学意义(P<0.01).模型组原代细胞逐渐形成边缘光滑、中心膨隆有立体感的小克隆球,nestin免疫荧光染色呈强阳性,多次传代后获得大量细胞克隆球.对照组单细胞悬液原代及传代培养均未见明显克隆球生长.免疫染色结果 示模型组克隆球诱导分化约5 d,细胞球中含有大量半乳糖脑苷脂(galactocerebroside,GaLC)-nestin免疫染色阳性细胞;5～7 d,大量β-微管蛋白Ⅲ(β-tubulin Ⅲ)-nestin和GFAP免疫染色阳性细胞;7～14 d出现GaLC阳性少突胶质细胞、β-tubulin Ⅲ神经元和GFAP染色阳性的胞体及细胞突起. 结论 成年大鼠压迫性脊髓损伤后,剔除中央管周围室管膜区脊髓白质与灰质分离而得的nestin+/GFAP+细胞,具有自我更新能力和多分化潜能,是中枢神经系统的NSCs.     

硫酸软骨素酶ABC对大鼠急性脊髓损伤后神经中丝和胶质纤维酸性蛋白的影响

目的：探讨硫酸软骨素酶ABC（ChABC）对大鼠急性脊髓损伤后神经中丝200（NF200）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的影响.方法：SD大鼠72只,雌雄不限,随机分为假手术组（A组）、损伤对照组（B组）和ChABC治疗组（C组）,每组24只.A组仅打开椎板及置管,不损伤脊髓,不给药;C组和B组均采用Allen＇s法制作大鼠T10脊髓损伤模型,分别在伤后即刻和随后每天1次连续1周蛛网膜下腔注射ChABC（6μl/次）和等量生理盐水.术后1d、1周、2周和4周每组各处死6只大鼠,B组和C组以损伤区为中心、A组在相应部位切取1cm长的脊髓组织,以HE染色观察脊髓组织形态变化,应用免疫组化方法检测脊髓组织中NF200和GFAP的变化.结果：HE染色示A组脊髓无胶质细胞增生和胶质瘢痕形成;B、C组脊髓损伤区有胶质细胞增生和胶质瘢痕,C组明显少于B组.A组术后1d、1周、2周和4周时NF200阳性细胞数及灰度值和GFAP染色阳性面积无差异,1、2、4周时B、C组脊髓损伤区NF200染色阳性细胞数及灰度值和GFAP染色阳性面积均较A组显著增加（P＜0.05或P＜0.01）,1d和1周时C组NF200染色阳性细胞数及灰度值与B组比较无显著性差异,2周和4周时C组明显高于B组（P＜0.05）;1d、1周和4周时C组GFAP染色阳性面积与B组无显著性差异,2周时C组显著小于B组（P＜0.05）.结论：ChABC能提高大鼠急性脊髓损伤后神经细胞内NF200的表达并抑制GFAP的表达,进而促进神经细胞的修复,抑制胶质细胞的增生和胶质瘢痕的形成,对脊髓损伤具有保护作用.     

复方丹参对大鼠脊髓急性损伤后神经丝蛋白及胶质原纤维酸性蛋白表达的影响

已有报道急性脊髓损伤(SCI)后复方丹参可以提高超氧化物歧化酶清除脊髓组织中自由基,抑制细胞凋亡减少脊髓细胞的死亡,而复方丹参对SCI后神经丝蛋白(NF200)及胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响报道尚少,我们通过观察复方丹参对大鼠SCI后NF200及GFAP表达变化的影响。     

bFGF与骨髓间充质干细胞联合应用对大鼠脊髓损伤的修复作用

目的:观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)与成纤维细胞生长因子(bFGF)联合移植对大鼠脊髓损伤的修复作用,并探讨其机制。方法:利用血清培养技术获得SD大鼠BMSCs。80只健康雄性6周龄SD大鼠(重约240 g)随机分为4组,每组20只。假手术组行单纯椎板切除,不损伤脊髓,与其余3组同条件饲养。其余3组均采用左侧T9脊髓半切,建立脊髓损伤模型。制模9 d后进行损伤局部移植治疗,对照组损伤处植入吸附有生理盐水的明胶海绵;BMSCs移植组损伤处植入吸附有BMSCs的明胶海绵;bFGF+BMSCs移植组损伤处植入吸附有bFGF+BMSCs的明胶海绵。术后4、8周后Western blotting分析受损脊髓组织中NF-200、GFAP表达水平,Basso Beattie Bresnahan (BBB)运动功能评分量表评价大鼠的后肢功能恢复情况。结果:术后4、8周后BMSCs移植组和bFGF+BMSCs移植组的(BBB)评分较对照组改善(P0.05),且bFGF+BMSCs移植组与BMSCs移植组比较差异有统计学意义(P0.05);术后4、8周后NF200在对照组表达极少,在BMSCs移植组只有少量表达,而bFGF+BMSCs移植组呈高表达(P0.05)。GFAP在对照组表达高,BMSCs移植组少量表达,bFGF+BMSCs移植组呈现低表达(P0.05)。bFGF+BMSCs移植组与BMSCs移植组、对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:BMSCs与bFGF联合移植对大鼠脊髓损伤有修复作用,机制可能与其降低GFAP表达及升高NF-200表达有关。     

神经生长因子和脑源性神经营养因子基因修饰的雪旺细胞和胚胎脊髓细胞悬液植入促进大鼠脊髓损伤修复的研究

目的从转基因角度探讨治疗脊髓损伤的有效性。方法用改良Allen打击法制作脊髓损伤动物模型,1周后将神经生长因子nervegrowthfactorNGF和脑源性神经营养因子brainderivedneurotrophicfactorBDNF基因修饰的雪旺细胞(Schwanncells,SCs)和胚胎脊髓细胞悬液(fetalspinalcordcellsuspension,FSCS)移植联合植入脊髓损伤部位,1个月和3个月后用免疫组化方法观察神经丝蛋白NF、胶质纤维酸性蛋白GFAP、髓基质蛋白MBP、5-羟色胺5HT、NGF和BDNF的变化,并根据图像分析各实验组的免疫阳性反应变化;通过光电镜观察脊髓组织形态学改变。结果将转NGF和BDNF基因的SCs与FSCS联合植入脊髓损伤部位有以下优点:1移植物能很好地与宿主融合和存活,2能发挥FSCS的“桥接”、“中介”作用,3SCs可以起到神经轴突的“导管”、“导向”作用,4神经营养因子(neurotrophicfactors,NTFs)NGF和BDNF可以刺激轴突的生长和挽救受损的神经元。结论将NGF和BDNF基因修饰的SCs和FSCS移植联合起来,让局部释放的NTFs不断刺激、引导宿主纤维和移植物的整合与联系,以促进脊髓损伤的修复。此方法为将来治疗脊髓损伤提供线索。     

低温保存神经干细胞移植促进脊髓损伤后轴突再生的实验研究

目的:观察低温保存(-70℃)的神经干细胞(NSCs)复苏后移植对大鼠脊髓损伤(SCI)后轴突再生的影响.方法:NSCs在处于对数生长期阶段冻存2周,复温后由5-溴脱氧尿嘧啶核苷法(Brdu)标记,制备大鼠SCI模型.实验分为3组:NSCs移植组(A组)、DMEM填充组(B组)、正常对照组(C组).脊髓损伤后立即进行移植干预,应用免疫组化法观察Brdu标记的移植细胞的存活及迁移情况,应用辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪法观察损伤处轴浆运输的重建.结果:复苏的NSCs经Brdu标记后移植到SCI区,在损伤脊髓区域可检测到标记的阳性细胞,辣根示踪技术显示细胞移植组较DMEM填充组阳性细胞明显多,组间差别有统计学意义.结论:低温保存的NSCs在移植到脊髓损伤区域后可存活,并参与脊髓损伤处轴浆通路的结构重建.     

胶质源性神经营养因子对脊髓损伤后功能及前角运动神经元酶组织化学改变的研究

目的　探讨胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)对损伤脊髓运动功能及前角运动神经元酶组织化学改变的影响。方法　改良Allen撞击致T13 脊髓不完全损伤 ,蛛网膜下腔分别给予生理盐水和GDNF ,不同时间分别 :①测定大鼠后肢神经功能 ;②利用酶组织化学染色方法显示脊髓侧前角运动神经元中胆碱酯酶 (ChE)和酸性磷酸酶 (ACP)活性并通过计算机图像分析系统将酶活性量化、比较。结果　①神经功能随时间延长而逐渐恢复 ,GDNF有助于功能恢复 ,但 3周时均未达正常标准 ;②ChE和ACP活性随时间延长而向正常趋近 ,GDNF显著加强了这一趋势 ;③随着ChE水平上升和ACP水平隆低 ,大鼠后肢运动功能逐渐恢复 ,两者呈现较强的相关性。结论　①前角运动神经元酶学改变与神经功能恢复密切相关 ;②GDNF加强前角运动神经元酶学改变 ,呈现对损伤神经元有保护作用。     

氨基胍对大鼠急性脊髓损伤后脊髓水肿的作用机制研究

目的氨基胍(aminoguanidine,AG)能显著减轻脑外伤及中风动物模型脑水肿,提高神经功能恢复程度。探讨AG对大鼠急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后脊髓水肿的作用及相关机制。方法取成年雄性SD大鼠150只(体重230～255 g),分为对照组(A组,25只)、假损伤组(B组,25只)、SCI后未治疗组(C组,25只)和SCI后AG治疗组(75只);AG治疗组按给药剂量分为AG 75 mg/kg组(D组,25只)、AG 150 mg/kg组(E组,25只)和AG300 mg/kg组(F组,25只)。A组未行任何处理,B组仅行椎板切除术但不治疗;C、D、E、F组制备静压型大鼠SCI模型后,C组腹腔注射5%DMSO,D、E、F组腹腔注射相应剂量AG。于造模后0、12、24、48 h用干湿重法检测受损脊髓组织含水量以筛选最佳剂量,进一步用伊文思兰(Evans blue,EB)法评测血-脊髓屏障功能,用RT-PCR检测水通道蛋白4(aquaporins 4,AQP4)mRNA表达,Western blot和免疫组织化学染色检测AQP4蛋白表达。结果脊髓组织含水量检测示,E组在造膜后12、24、48 h对SCI后脊髓组织水肿有明显抑制作用(P<0.05),选择该剂量组用于后续实验。造模后12、24、48 h,E组EB含量明显低于C组(P<0.05),降低血-脊髓屏障通透性。RT-PCR检测结果示造模后12、24、48 h,B、E组AQP4 mRNA表达明显低于C组;Western blot检测示造模后24、48 h,B、E组AQP4蛋白表达明显低于C组;免疫组织化学染色示造模后48 h,B、E组AQP4蛋白表达明显低于C组,差异均有统计学意义(P<0.05);但各指标各时间点B、E组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论急性SCI后大鼠经150 mg/kg AG治疗后,能降低AQP4表达,改善脊髓水肿,减轻损伤。     

碱性成纤维细胞生长因子对脊髓损伤早期保护作用的实验研究

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子（ｂ Ｆ Ｇ Ｆ）对脊髓损伤的早期保护作用。方法　选３４ 只 Ｓ Ｄ 大鼠,随机分为正常组、对照组和治疗组,采用 Ａｌｌｅｎ 氏技术,以１０ ｇ×２．５ ｃｍ 致伤力造成大鼠 Ｔ８ 急性脊髓损伤,并于损伤平面以下蛛网膜下腔置入细塑料管,治疗组给予ｂ Ｆ Ｇ Ｆ治疗,对照组同时注入生理盐水。术后切取损伤区脊髓组织进行形态学观察和生化指标测定。结果受损伤段脊髓组织水含量增多,钙离子水平升高,镁离子水平下降,白质内髓鞘结构紊乱,囊性变严重,而ｂ Ｆ Ｇ Ｆ可明显改变上述变化。结论　ｂ Ｆ Ｇ Ｆ对脊髓损伤早期的继发性损害有保护作用。     

急性脊髓损伤动物模型的建立

目的：建立一种不同程度的脊髓损伤动物模型。方法：自行设计一种脊髓损伤动物模型，以一恒定的外力和打击时间，以观察35只大鼠在不同的打击深度下的运动功能和病理变化。结果：假手术组大鼠，苏醒后能站立行走，脊髓结构正常；打击深度为0.5mm时，动物苏醒后能站立行走，脊髓结构正常，打击度为0.8mm 时，动物出现不瘫，数天后能站立行走，脊髓结构破坏较轻；打击深度为1．0 mm时，动物出现全瘫，4周后不能站立行走，脊髓结构破坏，打击深度为1．5 mm时，动物出现全瘫，4周后不能站立行走，脊髓结构破坏严重。结论：以打击深度为参数建立不同程度的脊髓损伤动物模型，重复性好较     

大剂量甲泼尼龙对脊髓损伤早期基因表达谱的影响

目的甲泼尼龙(methylprednisolone,MP)是治疗急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的惟一有效药物,但其作用机制尚未明确。通过观察MP对SCI早期基因表达谱的影响,从基因表达层面探讨其机制。方法采用重复样本和重复基因芯片检测的方法进行实验。取9只健康成年日本大耳白兔,体重(3 100±140)g,随机分为对照组(A组)、模型组(B组)和药物组(C组),每组3只。A组仅进行椎板切除术,B、C组行椎板切除后采用Allen法建立急性SCI模型。C组在造模后2 h按人-兔等效剂量给予大剂量MP冲击治疗,B组注射等量生理盐水,A组不作处理。造模后8 h处死实验动物,分别获取以损伤区为中心长约8 mm的脊髓组织,采用Trizol法提取总RNA,用9张Agilent兔脊髓组织全基因4×44 K芯片进行检测。采用GeneSpring11.0统计软件,以P<0.05且倍数变化(fold change,FC)≥2筛选出差异表达基因,并对部分差异表达基因行RT-PCR验证。结果成功建立SCI动物模型并获得相应的组织标本。各组总RNA质量均能满足基因芯片检测要求。基因芯片结果显示:在SCI早期大剂量MP治疗后许多基因发生表达变化,主要涉及炎症、先天性免疫、离子通道、物质转运和转录因子等,IL-1α、IL-1β和防御素(defensin 4,NP-4)的RT-PCR检测结果与基因芯片结果相符。其中,先天性免疫相关基因如NP-3、NP-4、皮质素6、内源性抗菌肽CAP-18、抗菌肽等呈现显著的差异性表达。结论大剂量MP可能主要通过免疫调节机制发挥神经功能保护作用,其主效应细胞可能是中性粒细胞。     

急性外伤性无骨折脱位型颈脊髓损伤的神经电图表现

为了探讨神经电图对判断急性外伤性无骨折脱位型颈脊髓损伤程度和预后的临床意义，对１９９７年９月～１０月收治的４例急性外伤性无骨折脱位型颈脊髓损伤患者作了上肢的神经电图和体感诱发电位（ＳＥＰ）检测。随访４个月～５个月。结果证实，双上肢腋神经、肌皮神经、尺神经、桡神经及正中神经的ＳＥＰ和运动诱发电位（ＭＥＰ）都能引出。认为，连续检测ＳＥＰ和ＭＥＰ，对颈脊髓损伤的程度和预后可提供有价值的参考数据     

BMSCs联合去细胞肌肉生物支架修复大鼠脊髓半切损伤的实验研究

目的以去细胞肌肉生物支架(acellular muscle bioscaffolds,AMBS)接种BMSCs,同种异体移植修复大鼠脊髓半切损伤,观察两者联合移植对脊髓损伤的修复作用。方法取8周龄雌性SD大鼠,采用改良化学方法制备AMBS,并进行复合冷灭菌;密度梯度离心法提取、贴壁法培养BMSCs,取第3代细胞用Hoechst 33342荧光标记,采用注射法制备BMSCs-AMBS复合支架,14 d后扫描电镜及荧光显微镜观察其生物相容性。取成年雌性SD大鼠48只,制备T9～11脊髓半切损伤模型后随机分为4组(n=12),A组于缺损处移植BMSCs-AMBS复合支架,B组单独移植BMSCs,C组单独移植AMBS,D组注射PBS作为空白对照组,分别于术后1、2、3、4周行运动功能评分,术后4周行HE染色观察及免疫荧光检测。结果 Masson染色及HE染色示AMBS内部呈平行结构,主要为胶原纤维,几乎无肌纤维。BMSCs-AMBS复合培养14 d后荧光显微镜观察示Hoechst 33342标记BMSCs大量存活,扫描电镜可见BMSCs贴附于支架内表面生长。术后2～4周,大鼠BBB评分A组均高于其余3组(P<0.05),D组明显低于其余3组(P<0.05);术后4周B组明显高于C组(t=10.352,P=0.000)。术后4周,HE染色示脊髓空洞面积A组明显小于其余3组,免疫荧光染色示A组神经丝蛋白200、巢蛋白阳性细胞表达量高于其余3组,神经胶质原酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)则明显低表达。A、B组荧光示踪的BMSCs移植到体内后主要迁移至对侧灰质前角,部分分化为神经元样细胞。A、B、C、D组GFAP荧光半定量分析积分吸光度(IA)值分别为733.01±202.04、926.42±59.46、1 069.37±33.42、1 469.46±160.53,A组明显低于其余3组,D组高于其余3组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 AMBS具有相对规则的内部结构,与BMSCs有良好生物相容性,能抑制胶质瘢痕,促进BMSCs存活、迁徙、分化,是细胞移植理想的天然载体。两者联合移植修复大鼠脊髓损伤能发挥协同作用,促进运动功能恢复。     

胚胎脊髓不同移植方法对成年大鼠损伤脊髓神经元的影响

目的：探讨胚胎脊髓不同移植方法防止成年鼠脊髓轴突损伤后引起的神经元萎缩的作用。方法：采用Wistar成年大鼠腰脊髓半切洞损伤模型。将实验动物分为五组：A组为正常对照组,B组为损伤组;C组为损伤＋移植组;D组为损伤＋移植＋椎旁肌组;E组为损伤＋移植＋大网膜组,手术后应用行为学和电生理检查观察大鼠神经功能恢复情况,应用尼氏染色方法观察神经元的大小,采用计算机图像分析技术,进行定量分析。结果 胚胎脊髓不同移植方法均可以防止老年鼠脊髓轴突损伤引起的神经元萎缩,图像分析发现其作用为E组＞D组＞C组＞B组＞A组,尤以E组效果最好,可以完全恢复损伤神经元的形态,大鼠神经功能的恢复也出现了相同的变化趋势。结论 鼠胚胎脊髓不同移植方法能维持神经元的细胞形态,对成年大鼠损伤脊髓功能恢复有促进作用。     

PHENOXYBENZAMINE IN THE MANAGEMENT OF NEUROPATHIC BLADDER FOLLOWING SPINAL CORD INJURY

Background : The present study aims to show the clinical and urodynamic effects of phenoxybenzamine on the neuropathic bladder of spinal cord-injured patients who failed to be free of catheter by attaining satisfactory voiding function, despite initial bladder training. Methods : Forty-six spinal cord-injured patients were subjected to pharmacological manipulation with phenoxybenzamine. It was used as an adjunct in the management of neuropathic bladder dysfunction that caused failure of the bladder to empty, by tapping or crede to achieve satisfactory residual urine volume of < 100 mL. Phenoxybenzamine was started with a dose of 10 mg daily, increased by 10 mg every 3 days to a dose of 30 mg daily; this was maintained from 3 weeks to 6 months (mean: 39 days). The pre-treatment residual urine volume ranged between 100 and 1050 mL (mean: 360 mL). Follow-up periods ranged between 12 and 36 months (mean: 16 months). Results : Five patients (11%) were excluded due to either inadequate treatment or inadequate follow-up. Nineteen patients (41%) with reflex (upper motor neurone) bladders showed improvement of bladder evacuation. There was a reduction of the maximum urethral closure pressure, which ranged between 10 and 32 cm of water (mean: 22 cm). Twenty-two patients (48%) did not respond, requiring other measures to be taken which included transurethral surgery (n = 19). Nine of the failures involved areflex (lower motor neurone) bladders, and seven failures involved reflex bladders with an extremely tight outlet and urethral closure pressure of > 50 cm of water. Six failures involved reflex bladders that were lacking strong enough detrusor contractions to attain a balanced bladder responsive to abdominal tapping; response was achieved by administration of a parasympatheticomimetic drug. Neuropathic bladders with uninhibited detrusor contractions responded well to phenoxybenzamine. Conclusions : Phenoxybenzamine proved useful in reducing bladder outlet resistance after spinal cord injury, provided that detrusor bladder contractions were present. It is useful in controlling detrusor–sphincter dyssynergia and autonomic hyperreflexia. It was not useful in areflex bladders, perhaps due to the development of spasticity of the striated muscle component of the external sphincter. The presence of bladder neck (internal sphincter) dysfunction may modify or abolish its effect.