传代细胞制备抗原底物测定抗核抗体方法及其影响因素的探讨

抗核抗体(ANA)测定作为临床诊断系统性红斑狼疮及其他自身免疫的手段之一,具有十分重要的临床意义。测定ANA的方法有许多种,国内多采用间接荧光抗体实验法(HF)进行测定,底物一般要大鼠、小鼠的肝、肾组织冷冻切片;肝、肾组织印片、组织匀浆涂片以及人白细胞涂片。常用组织培养的传代细胞如:小鼠纤维母细胞、人纤维母细胞、人咽癌上皮细胞(HEP—2)、人上皮细胞(KB)、人子宫颈癌细胞(Hela-小鼠腹水癌细胞)等。本文以Hela细胞制备抗原底物法测定ANA,获得满意效果,现介绍如下:1材料与方法1.1抗原法制备:Hela细胞株用Rp-MI1640(含10%小…     

喉癌细胞/鼠肝细胞复合片检测抗核抗体的临床应用

目的用间接免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)时复合抗原片的应用,是否可提高抗核抗体(ANA)阳性率。方法分别用2种抗原片(Hep-2型细胞/鼠肝组织复合片,鼠肝组织片)检测抗核抗体,比较检出率和特异性。结果复合抗原片的检出率高、特异性好。结果:在类风湿关节炎(RA)患者中,分别是78.3和58.9;干燥综合征(SS)患者中,前者是47.6,后者是22.6;硬皮病(ssc)患者中分别是57.9和31.0,两种底物的ANA检测率差异有显著性。结论运用Hep-2型细胞/鼠肝组织复合抗原片检测ANA,有利于对自身免疫性疾病的初步筛选和判断。     

用免疫金银法检测抗核抗体

抗核抗体(ANA)是诊断风湿性疾病的常用实验室指标。经典的检测方法为间接荧光法(IFA),但此法受荧光显微镜、荧光抗体、底物(抗原)片的种类与质量影响甚大,荧光又极易淬灭,标本片不能长期保存。我们建立了一种免疫金银法(IGSS)测定ANA,操作简便,结果清晰,无需特殊设备,一般实验室均可采用。材料和方法 (一)试剂制备 1.鼠肝匀浆底物片:按本科常规制作。2.葡萄球菌A蛋白(SPA)交     

利用α-胞衬蛋白免疫诱导建立小鼠干燥综合征模型

目的 应用α-胞衬蛋白(α-Fodrin)免疫BALB/C小鼠,以期建立干燥综合征的实验动物模型.方法 应用α-胞衬蛋白100μg(50μl)配合等体积佐剂,于0、14、35、51 d进行尾根部皮下注射给药免疫4周龄的BALB/C小鼠,以颌下腺匀浆作为阳性对照,GST及PBS作为阴性对照.小鼠每周计饮水量,每2～3周取血,检测不同时间点小鼠血清中的α-胞衬蛋白抗体、M3受体蛋白多肽(M3RP)抗体、SSA抗体、SSB抗体、类风湿因子(RF)以及抗核抗体(ANA)等自身抗体,ELISA方法测定小鼠血清中的细胞因子白介素(IL)-2,IL-10和干扰素(IFN)-γ.检测小鼠颌下腺病理改变及α-胞衬蛋白的抗原表达情况.结果 (1)免疫前小鼠血清中的自身抗体均为阴性,而自初次免疫后35 d开始,经颌下腺匀浆及α-胞衬蛋白免疫的BALB/C小鼠出现α-胞衬蛋白抗体、M3RP抗体和ANA,而上述抗体在PBS和GST对照组为阴性.(2)自初次免疫后56 d开始,予颌下腺匀浆及α-胞衬蛋白免疫的BALB/C小鼠的腺体中出现少量淋巴细胞浸润,且随时间的延长,淋巴细胞浸润逐渐加重;而应用PBS和GST免疫的小鼠腺体无明显的病理改变.应用α-胞衬蛋白多抗免疫组化的方法检测颌下腺匀浆、α-胞衬蛋白免疫的BALB/C小鼠的颌下腺组织中有α-胞衬蛋白表达,而PBS和GST组为阴性.(3)IFN-γ在予α-胞衬蛋白、颌下腺匀浆、GST及PBS免疫后分别为(81.6±7.1)、(90.5±4.9)、(30.1±5.9)、(19.3±6.4)ps/ml;IL-2在上述各组免疫后分别为(18.7±2.3)、(19.8±0.9)、(4.9±1.1)、(3.5±1.6)pg/ml,与GST及PBS组相比,α-胞衬蛋白及颌下腺匀浆免疫可明显提高小鼠血清IFN-γ和IL-2水平(P<0.05).(4)α-胞衬蛋白免疫对各组小鼠饮水量无明显影响.结论 (1)建立了应用α-胞衬蛋白诱导的SS动物模型.(2)免疫后小鼠血清中出现的多种抗体可能与抗原扩展有关.(3)干燥综合征的发病可能与Thl参与有关.     

猴肝组织与Hep-2细胞联合检测抗核抗体的临床意义

本文探讨猴肝组织和人类上皮细胞 (Hep - 2细胞 )检测血清抗核抗体 (ANA)的临床意义。检测结果示Hep - 2细胞检测ANA阳性率高于猴肝组织检测ANA阳性率 ,应用两种基质联合对疾病的诊断 ,减少抗核抗体的检测的漏检是有重要意义。     

猴肝组织与Hep—2细胞联合检测抗核抗体的临床意义

本文探讨猴肝组织和人类上皮细胞(Hep-2细胞)检测血清抗核抗体(ANA)的临床意义。检测结果示Hep-2细胞检测ANA阳性率高于猴肝组织检测ANA阳性率，应用两种基质联合对疾病的诊断，减少抗核抗体的检测的漏检是有重要意义。     

猴肝组织与Hep-2细胞联合检测抗核抗体的临床意义

本文探讨猴肝组织和人类上皮细胞(Hep-2细胞)检测血清抗核抗体(ANA)的临床意义.检测结果示Hep-2细胞检测ANA阳性率高于猴肝组织检测ANA阳性率,应用两种基质联合对疾病的诊断,减少抗核抗体的检测的漏检是有重要意义.     

分析自身抗体检测对自身免疫性肝病诊断的意义

目的研究分析自身抗体检测对自身免疫性肝病诊断的意义。方法使用间接免疫荧光法进行检测抗线粒体抗体(AMA)、血清抗核抗体(ANA)以及抗平滑肌抗体(SMA)。采用免疫印迹法对抗溶性肝抗原/肝胰抗原和抗肝特异性胞浆抗原体Ⅰ型抗体以及抗肝肾微粒体Ⅰ型等肝脏疾病有关的自身抗体均给予检测。结果 ANA阳性检查率分别为;AIH检出21例占(84%),PBC检出36例占(90%),PSC检出3例占(20%)。几组比较差异有统计学意义,P0.05。结论自身免疫性肝病的诊断和分型采用自身抗体检测,检出率高,具有较高的临床诊断价值。     

自身抗体在自身免疫性疾病患者中的检查价值研究

目的研究自身抗体在自身免疫性疾病(AID)患者中的检查价值。方法选择2014年9月至2015年5月在本院进行治疗的AID患者120例,全部患者都在空腹情况下进行采血,采血3ml,并在2小时之内将血清分离备用。ANA检测应用的方法为间接免疫荧光法(IIF),抗原片选用Hep-2细胞/猴肝组织复合片。检测抗ds-DNA应用IIF法,选取绿蝇短膜虫为抗原片。检测抗ENA应用免疫印迹法。观察并记录所有患者血清ANA、抗ds-DNA及抗ENA测定结果以及不同ANA荧光模式下各AID疾病的分布情况。结果经过计算统计,全部AID患者的ANA阳性率为84.2%,抗ds-DNA阳性率:38.3%,其中,SLE病人检测出的抗ds-DNA的阳性率是65.2%,特异性为96.6%,抗ENA阳性率是56.7%。经过本次研究一共检测出SLE患者共计69例,ANA阳性率达到91.3%,镜下显示为单一核型以颗粒型阳性率最高为23.8%,如镜下显示为多种核型则以颗粒/核仁/其他为主,阳性率为36.5%。以上统计结果显示,SLE患者ANA阳性荧光核型图谱以颗粒型为主。PSS患者ANA阳性荧光核型以核仁型为主。结论在诊断AID的过程中,检测ANA、抗ds-DNA、抗ENA多肽抗体能够显著提升检测的阳性率,提升检测的准确性,为AID的分类与提升疗效提供准确的依据。     

自身抗体检测对自身免疫性肝炎的诊断研究

目的 检测抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(SMA)、抗肝肾微粒体抗体(LKM)、抗可溶性肝抗原抗体(SLA)、抗肝细胞膜抗体(LMA)、抗线粒体抗体(AMA)，来探讨自身抗体检测对诊断自身免疫性肝炎的临床意义。方法 应用ELISA方法筛选出肝炎病毒血清标志物阴性而谷丙转氨酶异常升高的病人血清。应用间接免疫荧光法检测自身抗体。结果38份血清中有9例存在一项或一项以上的自身抗体，其中ANA阳性5例，SMA阳性4例，LKM阳性4例，SLA阳性1例，LMA阳性2例，抗线粒体抗体阳性2例。结果 全为阴性的血清标本29例；而对照组健康人只有1例ANA呈阳性。结论 自身免疫性肝炎是一组以存在自身抗体为特点的肝损害疾病，通过检测自身抗体可对一部分AIH病人进行确诊。     

自身免疫性肝病患者自身抗体的检测及临床应用

目的了解自身免疫性肝病患者可能出现的各种自身抗体阳性率,以提高对该病的认识。方法分别应用间接免疫荧光法和免疫印迹法检测92例自身免疫性肝病患者和30名健康人的抗核抗体(ANA),抗平滑肌抗体(SMA),抗线粒体抗体(AMA)、AMA-M2、抗肝肾微粒体Ⅰ型(LKM-1)抗体、抗可溶性肝抗原/抗肝胰抗原(SLA/LP)抗体、抗核点(Sp100)抗体、抗核膜(gp210)抗体、抗肝细胞胞质抗原1型抗体(抗LC-1抗体)。92例患者分为4组:自身免疫性肝炎27例;原发性胆汁性肝硬化29例;原发性硬化性胆管炎6例;不明原因肝损伤30例。结果自身免疫性肝炎组ANA、SMA、抗LKM-1抗体、抗SLA/LP抗体、抗LC-1抗体的阳性率分别为81.5%、51.9%、11.1%、18.5%、14.8%。原发性胆汁性肝硬化组ANA、AMA、AMA-M2、抗Sp100抗体、抗gp210抗体阳性率为89.7%、93.1%、89.7%、58.6%、31.0%。原发性硬化性胆管炎组检测ANA 1例(16.7%),不明原因肝损伤ANA 9例(30%),AMA 3例(10%)。结论多数自身免疫性肝病伴有特异性自身抗体的出现;自身抗体的检测对临床肝病学具有重要的意义。     

ANA、LKM-1、AMA M2、LC-1及SLA/LP联合检测在乙肝病毒感染分型中的应用研究

目的 探讨ANA、LKM-1、AMA M2、LC-1及SLA/LP联合检测在乙肝病毒感染分型中的应用研究。方法选取2015年1月～2019年5月我院传染科35例乙肝合并自身免疫性肝病患者作为观察组,同时选取65例乙肝病毒感染患者作为对照组。观察两组血清抗核抗体(ANA)、抗肝肾微粒体Ⅰ型抗体(LKM-1)、抗线粒体抗体(AMA M2)、抗肝胞浆Ⅰ型抗体(LC-1)、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗体(SLA/LP)阳性率,对结果进行分析。结果观察组中ANA的阳性率(35.00%)高于对照组(21.86%),观察组中LKM-1、AMA M2、LC-1及SLA/LP的阳性率均显著高于对照组(P0.05),差异均有统计学意义(P0.05)。对照组ANA阳性主要为核颗粒型,主要在1:100的血清稀释度中检出,观察组ANA阳性主要为核均质性,主要在1:1000的血清稀释度中检出,两种核型稀释度组间差异有统计学意义(P0.05)。结论 多项自身抗体联合检测对乙肝及自身免疫性肝病的抗体检测全面,ANA检测是初筛试验,LKM-1、AMA M2、LC-1及SLA/LP等是确证试验,有助于临床诊断及指导用药。     

鸡红细胞为底物测定抗核抗体的临床应用

抗核抗体(antinudear antibody,ANA)是以真核细胞的核成份为靶抗原的自身抗体的总称。自1958年首次应用间接免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)以来,迄今仍是筛查ANA的常规检测方法。用间接荧光抗体试验测定     

不同临床类型肝病患者血清中自身抗体的检测及临床应用

目的：分析不同临床类型肝病患者血清中各种自身抗体的存在状况,探讨其临床应用价值。方法采用间接免疫荧光法和免疫印迹法,对我院2010年6月至2014年2月3124例不同类型肝病患者和200例正常健康体检者血清中的抗核抗体(ANA)、抗线粒体抗体(AMA)、抗平滑肌抗体(ASMA)、抗肝肾微粒体抗体(LKM)和自身免疫肝病谱等9项指标进行检测。结果病毒性肝炎ANA、AMA阳性率分别为11.11%、0.39%,抗肝抗原自身抗体检测阳性率分别为AMA M22.22%,M2-3E 1.86%、Sp1000.59%、PML 0.42%、gp2103.81%、LKM-10.62%、LC-12.28%、SLA-LP 0.26%、Ro5210.6%。自身免疫性肝病ANA、AMA阳性率分别为90.63%、78.13%,抗肝抗原自身抗体检测阳性率分别依次为71.87%,71.87%、6.25%、6.25%、65.63%、3.13%、0、21.88%、93.75%。与病毒性肝炎比较,自身免疫肝病的9项指标以及ANA、AMA的差异有统计学意义(P<0.01)。与正常对照组比较,丙肝、自身免疫肝病、药物性肝炎的ANA阳性率的差异有显著统计学意义(P<0.01)。甲肝、戊肝、脂肪肝血清中未检测出自身抗体。与病毒性肝炎比较,药物性肝炎的ANA检出率差异有显著统计学意义(P<0.01)。各型肝炎患者ANA的荧光模型存在差异。结论检测自身抗体的类型、滴度以及荧光模型对于不同类型肝病的诊断和治疗具有临床参考价值。     

藜草花粉特异性致敏哮喘动物模型的制备

目的:建立藜草花粉粗制变应原诱导的小鼠变态反应气管炎症动物模型。方法:制备藜草花粉粗制变应原,将40只BALB/c小鼠,分为:1空白对照组、2低剂量组、3中剂量组、4高剂量组,每组10只。分别通过HE染色观察小鼠肺部炎症和黏液分泌;观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和细胞分类;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF、脾组织匀浆上清的IL-4、IFN-γ和血清抗原特异的IgE、IgG1抗体。结果:随着抗原浓度的升高肺部病理改变呈明显的变态反应炎症;BALF中的细胞总数、巨噬细胞数、EOS计数、IL-4、血清抗原特异性IgE抗体、IgG1抗体也逐步升高并明显高于空白对照组(P<0.05);BALF、脾组织匀浆上清的IFN-γ与空白对照组相比却反而下降(P<0.05)。结论:藜草花粉成功构建小鼠变态反应气道炎症动物模型。     

联合检测抗核抗体、抗ENA谱、抗dsDNA抗体对SLE的临床价值分析

目的探讨联合检测抗核抗体(ANA)、抗可提取性抗原抗体(抗ENA)及抗双链DNA抗体(抗ds-DNA)对系统性红斑狼疮(SLE)的临床价值。方法ANA采用间接免疫荧光检测,抗ds-DNA抗体采用胶体金斑点渗透法检测,抗ENA谱采用免疫印迹法。结果SLE组ANA阳性率为94.44%,抗ds-DNA抗体阳性率为63.33%,抗Sm抗体阳性率为50.00%,对照组中只有ANA的阳性率为6.67%,其他抗体均为阴性。结论ANA、抗ds-DNA抗体和抗Sm抗体可作为检测SLE的标志性抗体,联合检测可避免因单项检测出现的漏诊情况,提高SLE的检出率,对病情的诊断分型、治疗、追踪和预后判定均有重要价值。     

评价两种基质联合检测抗核抗体的临床意义

目的 :探讨猴肝组织和人类上皮细胞 (Hep - 2细胞 )检测血清抗核抗体 (ANA)的临床意义。方法 :以猴肝组织和Hep - 2细胞为基质 ,用间接免疫荧光 (IFA)法测 118例结缔组织病患者 ,80例非结缔组织病患者和5 0例健康人血清ANA。结果 :Hep - 2细胞检测ANA阳性率高于猴肝组织检测ANA阳性率 ,其阳性率比较差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ,两种基质联合检测结缔组织病患者和非结缔组织病患者及健康人组血清ANA阳性率差异有显著性意义 (P <0 .0 1) ,非结缔组织病患者及健康人组血清ANA阳性率差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论 :对每一份血清进行两种基质联合检测ANA及ANA滴度的观察对系统性红斑狼疮(SLE)的诊断及疗效的判断有一定的临床意义。     

慢性移植物抗宿主反应诱导SLE样小鼠模型

目的运用慢性移植物抗宿主反应(GVHR)诱导系统性红斑狼疮(SLE)样小鼠模型,为进一步探索SLE发病机制奠定基础。方法将亲代BALB/C小鼠淋巴细胞经静脉途径输入(BALB/C×C57BL/6)F1代小鼠体内,用ELISA测定IgG类抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体,用免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)核型和免疫复合物沉积,用免疫印迹法测定抗可浸出核抗原(ENA)抗体。结果亲代淋巴细胞所致的慢性移植物抗宿主反应可诱导F1代小鼠产生高滴度的抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体等多种ANA,免疫小鼠的肾脏有显著的免疫复合物沉着。结论运用慢性GVHR诱导的SLE样小鼠模型,小鼠发病迅速,抗核抗体的产生与人SLE相似,有利于实验室进行有关SLE的研究。     

检测ANA的新方法——酶标法普通光学显微镜检测抗核抗体

ANA(Antinuclear Antibody)筛查是结缔组织病、系统性红斑狼疮(SLE)等自身免疫病的常规检测手段。ANA是一个统称,通常是指抗各种细胞核成分的抗体。ANA的性质主要是IgG,也有IgM、IgA和IgD,它们无器官和种属特异性,即该类抗体可以和所有动物的细胞核发生反应。因此,理论上玻片基质上包被有任何的真核细胞都可以与检体中的抗体反应,经典的ANA检测手段——间接荧光免疫标记法(IIF)都可以检测到相应的抗体。但由于不同细胞的核抗原表达量不同,在临床检测中的检测灵敏度有很大差异,如与传统的用鼠肾基质检测PSS(progressive system sclerosis)相比,有丝分裂状态的人上皮细胞(human epithelioid cells,HEp-2)检测具有更高的灵敏度,可获得更清晰的识别模式。新的抗原基质的不断出现,为特征模式的判读提供了更加方便清晰的图像,HEp-2000细胞即是一例,它是经HEp-2转染的有丝分裂状态的细胞:     

肝功能试验联合免疫血清学检测对自身免疫性肝炎的诊断价值

目的探讨肝功能试验联合免疫血清学检测对自身免疫性肝炎(AIH)的诊断价值。方法选取2015年4月至2017年2月安阳市人民医院收治的106例ANA抗体异常患者,以肝穿刺病理检测为金标准,根据诊断结果将患者分为观察组(24例,AIH患者)和对照组(82例,非AIH患者)。两组患者均接受肝功能相关指标[碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、总胆汁酸(TBA)]及免疫血清学指标[血清抗核抗体(ANA)、抗肝细胞溶质蛋白-1抗体(LC-1)、抗可溶性肝抗原抗体/抗肝-胰抗体(SLA/LP)]检测,根据检测结果分析上述指标对AIH的诊断价值。结果观察组患者TBA水平低于对照组,ALP、GGT水平高于对照组,ANA检出阳性率高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论肝功能试验联合免疫血清学检测,对AIH有较高的诊断价值,可为AIH的早期诊断提供重要依据。