神经生长因子对白细胞介素-1β抑制的胰岛B细胞功能的影响

目的：观察神经生长因子（NGF）对白细胞介素－β（IL－1β）作用后的胰岛B细胞分泌功能的影响。方法：实验分为正常对照组，IL－1β作用组，不同浓度NGF对IL-1β处理后胰岛作用组，采用胰岛细胞培养的方法，观察NGF对IL－1β作用后的胰细胞胰岛素基础分泌量、葡萄糖刺激分泌量和对MTT还原的影响，通过斑点印迹检测c-fos mRNA。结果：（1）IL－1β作用的胰岛B细胞胰岛素基础分泌量和葡萄糖刺激分泌量明显低于对照组，不同浓度NGF对IL－1β处理后胰岛作用组的胰岛细胞胰岛素基础分泌量和葡萄糖刺激分泌量明显高于IL－1β作用组；（2）IL－1β抑制胰岛细胞还原MTT，NGF能使MTT还原得到恢复；（3）NGF和IL－1β均诱导c-fos mRNA。结论：NGF具有促进IL－1β抑制的胰岛B细胞功能恢复作用，其机制可能是通过促进细胞代谢，调节基因表达影响细胞内蛋白质的合成。     

白细胞介素-1对大鼠离体胰岛B细胞分泌功能的影响

目的 :观察白细胞介素 1(IL 1)对大鼠胰岛B细胞分泌功能的影响并探讨其机制。方法 :采用胰岛细胞培养的方法 ,观察IL 1对胰岛素分泌和MTT还原的影响 ;通过分子杂交检测c fosmRNA并分析蛋白质合成的变化。结果 :IL 1作用后胰岛素分泌和MTT还原量明显减少 ,且有时间依赖性 ;IL 1诱导c fosmRNA ,从而使细胞蛋白质表达发生变化。结论 :IL 1可能通过改变胰岛细胞内基因表达 ,抑制细胞代谢 ,从而使胰岛素分泌减少     

促胃液素对白细胞介素-1β抑制大鼠离体胰岛B细胞基础分泌的影响

用新生大鼠胰岛离体培养方法，观察了五肽促胃液素（G－5）对白细胞介素－1β（IL－1β）致胰岛B细胞基础分泌抑制的影响。结果发现：①IL－1β能剂量依赖性抑制B细胞的分泌功能，IL－1β作用组基础胰岛素分泌量明显低于对照组；②C－5能对抗IL－1β对B细胞功能的抑制，与单纯IL－1β作用组相比，加用G－5能使基础胰岛素分泌量明显增加；③向IL－1β作用后的胰岛治疗性地给予G－5，能使抑制的B细胞功能得到部分恢复，作用呈时间和剂量依赖性。提示：G－5可能具有对抗IL－1β对胰岛B细胞毒性损伤的作用。     

链脲佐菌素对胰岛细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的：观察链脲佐菌素对胰岛细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响。方法：应用放射免疫法检测了低剂量链脲佐菌素培养后大鼠胰岛细胞高糖刺激后上清液的胰岛素水平；应用TUNEL法检测低剂量链脲佐菌素培养后大鼠胰岛细胞凋亡百分率；应用定量RT-PCR(QRT-PCR)检测培养后bcl-2、bax mRNA的表达；应用定量RT-PCR检测低剂量链脲佐菌素糖尿病大鼠胰岛bcl-2、bax mRNA的表达。结果：低剂量链脲佐菌素使原代培养的大鼠胰岛细胞胰岛素分泌功能明显下降；低剂量链脲佐菌素使大鼠胰岛细胞凋亡细胞比例明显增加，凋亡过程中，bax mRNA表达水平明显升高，bcl-2 mRNA表达水平明显下降；对低剂量链脲佐菌素糖尿病大鼠胰岛凋亡相关基因QRT-PCR检测也显示同样的结果。结论：低剂量链脲佐菌素可能通过诱导胰岛细胞凋亡导致糖尿病，其中bcl-2／bax mRNA表达比率变化可能起重要作用。     

促胃液素对白细胞介素—1β抑制大鼠离体胰岛B细胞基础分泌的影响

用新生大鼠胰岛离体培养方法，观察了五肽促胃液素对白细胞介素－１β致胰岛Ｂ细胞基础分泌抑掉的影响。结果发现：１．ＩＬ－１β能剂量依赖性抑制Ｂ的细胞的分泌功能，ＩＬ－１β作用组基础胰岛素分泌量明显低于对照组；２．Ｃ－５能对抗ＩＬ－１βＢ细胞功能的抑制，与单纯ＩＬ－１β作用组相比，加用Ｃ－Ｇ能使基石胰岛互分泌量明显增加；３．向ＩＬ－１β作用后的胰岛治疗性地给予Ｃ－５，能使抑制的Ｂ细胞功能得到部分恢复，作     

细胞因子诱导离体胰岛β细胞凋亡及其机理研究

目的：观察白细胞介素1-β（IL-1β）、肿瘤坏死因子（TNF）和γ-干扰素（IFN-γ）引起胰岛细胞凋亡、胰岛素分泌、bcl—xl和bax蛋白表达的变化。方法：应用体外单层培养的3-5天的Wistar大鼠胰岛细胞，分别检测IL—1β、TNF和IFN—γ对胰岛细胞凋亡细胞百分率、以及培养液中基础和高糖刺激下胰岛素分泌量、NO含量、NOS活性、bcl—xl和bax蛋白表达以及DNA片段的影响。结果：IL—1β、TNF和IFN-γ联合可诱导胰岛细胞凋亡率明显增加及DNA明显片段化，同时NO含量和NOS活性亦明显升高，胰岛素分泌明显降低，bcl—xl表达下降和bax表达增强（P〈0.01），且有时间和剂量依赖性。结论：细胞因子能诱导胰岛细胞凋亡，其机制可能与提高NOS活性从而增加NO的生成以及上调bax／bcl—xl比例有关。     

新诊断的Ⅱ型糖尿病患者胰岛β—细胞胰岛素分泌功能的测定

为观察Ⅱ型糖尿病患者胰岛β－细胞功能的变化，采用口服及静脉葡萄糖负荷方法，测定了３０例初发的Ⅱ型糖尿病患者胰岛β－细胞Ｉ相及Ⅱ相胰岛素分泌功能，并与正常对照组３０例比较。结果发现：新诊断的Ⅱ型糖尿病患者其胰岛β－细胞的Ｉ相分泌功能缺如，Ⅱ相分泌功能降低且与血糖高峰不同步。认为Ⅱ型糖尿病患者胰岛β－细胞分泌胰岛素不足以及胰岛素分泌的脉冲现象减弱，可能是Ⅱ型糖尿病患者血糖升高的主要原因。     

新诊断的Ⅱ型糖尿病患者胰岛β-细胞胰岛素分泌功能的测定

为观察Ⅱ型糖尿病患者胰岛β－细胞功能的变化，采用口服及静脉萄萄糖负荷方法，测定了３０例初发的Ⅱ型糖尿病患者胰岛β－细胞Ⅰ相及Ⅱ相胰岛素分泌功能，并与正常对照组３０例比较。结果发现：新诊断的Ⅱ型糖尿病患者其胰岛β－细胞的Ⅰ相分泌功能缺如，Ⅱ相分泌功能降低且与血糖高峰不同步。认为Ⅱ型糖尿病患者胰岛β－细胞分泌胰岛素不足以及胰岛素分泌的脉冲现象减弱，可能是Ⅱ型糖尿病患者血糖升高的主要原因。     

佛波酯对促进人绒毛膜癌AJR细胞侵入机制的研究

目的：探讨佛波酯（PMA）是否通过改变细胞因子的生成而影响滋养细胞的侵袭性。方法：用反转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测人绒毛膜癌JAR细胞与侵袭力调节有关的多种细胞因子基因表达的变化。结果：JAR细胞表达肝细胞生长因子（HGF）、胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF－Ⅱ）、转化生长因子β（TGF-β）、白细胞介素1β（IL－1β）和血管内皮生长因子（VEGF），且VEGF的表达以VEGF121和VEGF165为主，而不表达IGF－I。100nmol/L PMA处理细胞24h可显著上调IL－1β、HGF、IGFⅡ mRNA的表达，同时抑制TGF－β2、TGF－β3 mRNA的表达，而对TGF－β1、VEGF mRNA的表达未见有明显变化。结论：HGF、IL－1β、IGF－Ⅱ对滋养细胞的侵入起促进作用，而TGF－β2、TGF－β3具有抑制效应。说明丝裂原PMA可能通过调节这几种细胞因子的自分泌机制，从而增强JAR细胞的侵袭能力。     

内毒素对大鼠胰岛细胞凋亡及其意义的研究

目的：探讨内毒素对大鼠胰岛细胞凋亡作用的意义。方法：采用单细胞凝胶电泳和DNA凝胶电泳技术,分析外源NO供体（硝普钠）和LPS对离体胰岛细胞的凋亡及胰岛素合成与分泌的影响。结果：体外试验显示,外源NO明显引起胰岛细胞DNA断裂,出现慧星尾和凋亡梯状带,并呈剂量依赖关系,高浓度NO（60mmol/L,SNP)可引起胰岛细胞DNA随机降解,外源NO强裂抑制葡萄糖刺激β－细胞的胰岛素合成与分泌,LPS离体条件下,对胰岛细胞凋亡作用不明显。结论：LIPS通过整体作用诱导炎症细胞和胰岛细胞iNOS表达,产生NO介导胰岛细胞凋亡,从而抑制胰岛素合成与分泌。     

乙肝后肝硬化患者T辅助细胞亚型的变化

目的：了解乙肝后肝硬化患外周血中CD4^ T辅助细胞（Th)亚型的变化情况。方法：使用细胞因子诱生和ELISA技术检测32例乙肝的肝硬化患和21例对照患外周血单个核细胞（PBMC）分泌的细胞因子IL－2、IFN-γ、IL-4、IL-10及TGFβ值浓度，RT－PCR检测PBMC的IL－2、IFNγ、IL-4、IL-10及TGF－β的mRNA表达水平。结果：乙肝后肝硬化患对照组比较，PBMC休外诱生后的IFN-γ、IL－12分泌水平下降，而IL－4、IL－10分泌水平上升，IFN－γ、IL－122的mRNA表达下降，而IL－4、IL－10的mRNA表达水平升高；TGF-β浓度分泌及其mRNA表达水平明显上升。结论：乙肝后肝硬化患T辅助细胞亚群中Th2较Th1细胞占优，Th3细胞功能增强，从而抑制了机体的细胞免疫，使病毒不能被有效地清除。     

牛磺酸对细胞因子诱导的胰岛细胞凋亡的影响

目的：观察牛磺酸对白细胞介素－1β（IL-β）、肿瘤坏死因子（TNF）和γ－干扰素（IFN－γ）诱导的胰岛细胞凋亡的影响。方法：应用体外单层培养的Wistar大鼠胰岛细胞,分别检测IL－1β、TNF和IFN－以及牛磺酸对胰岛细胞凋亡细胞百分率,培养液中NO含量及NOS活性以及DNA片段的影响。结果：IL－1β、TNF和IFN－γ联合可诱导胰岛细胞凋亡率及DNA片段明显增加,同时NO含量和NOS活性亦明显升高（P＜0．01）;牛磺酸能阻断上述细胞因子的作用（P＜0．01）,且有剂量依赖性。结论：NO可能是介导上述细胞因子引起胰岛细胞凋亡的重要途径之一。牛磺酸能够改善细胞因子诱导的胰岛细胞凋亡,其机制可能与抑制NOS活性从而减少NO的生成有关。     

老龄SD大鼠胰岛β细胞形态功能研究

目的观察3组不同月龄SD大鼠糖脂代谢指标变化，了解在基础及葡萄糖刺激下胰岛β细胞胰岛素分泌、结构变化与老龄糖耐量减退的关系，探讨老龄糖耐量受损的机制。方法采用免疫组化、细胞体视学、透视电镜等方法观察5～6、11～12、20～24月龄SD大鼠胰岛及胰岛β细胞形态及胰岛素分泌水平；将胰岛β细胞分离后与两种不同质量浓度的葡萄糖培养，观察葡萄糖刺激下老龄大鼠β细胞胰岛素分泌水平。结果20～24月龄大鼠体质量、空腹血糖及血脂水平有增高；11～12、20～24月龄大鼠血清中游离脂肪酸（FFA）水平显著增高；对葡萄糖刺激出现峰值降低、达峰时间延迟；胰岛β细胞体积增大和细胞内胰岛素分泌量减少。老龄胰岛β细胞内线粒体和内质网肿胀，空泡变性。从11～12月龄大鼠开始，胰腺中平均胰岛面积随着年龄的增加而减少；但每个胰岛中平均胰岛β细胞的面积比例却有增加。结论老龄鼠在空腹血糖正常时即已具备胰岛素抵抗的某些特征；老龄大鼠胰岛β细胞虽然有面积比例增大，但β细胞基础和葡萄糖刺激的胰岛素分泌功能减低。提示一旦糖代谢受损出现糖尿病，应尽早考虑胰岛素治疗同时改善胰岛素抵抗。     

LiCl 对胰岛 NIT －1细胞 NLK 和 FOXO1表达的影响

目的：观察在不同葡萄糖浓度条件下,LiCl对胰岛β细胞株NIT－1细胞NLK和FOXO1基因表达的影响,探讨NLK与FOXO1基因表达对胰岛β细胞增殖周期和胰岛素分泌的影响。方法在含不同浓度（5.6、11.1、16.7、27.6 mmol／L）葡萄糖的培养基培养NIT－1细胞,应用10 mmol／L的LiCl干预48 h, MTT法检测NIT－1细胞增殖情况;放射免疫法测定NIT－1细胞胰岛素分泌水平,免疫印迹法检测细胞内NLK和FOXO1蛋白表达,流式细胞术法检测细胞周期变化。结果 LiCl 能够增加IT－1细胞增殖率,干预组与于无药干预对照组比较差异有统计学意义（ P＜0.05）;干预组的NIT－1细胞胰岛素分泌水平明显增高,细胞内NLK蛋白表达明显升高,而FOXO1蛋白表达明显降低,此时该组的G1／G0期细胞百分比明显降低,S期与G2／M期细胞百分比之和明显增加,细胞增殖指数也明显升高,与对照组比较差异均有统计学意义。结论 LiCl可能通过调控NLK基因抑制FOXO1基因表达和促进NIT－1细胞增殖和胰岛素分泌。     

血管紧张素Ⅱ损伤人胰岛细胞功能相关机制的研究

目的探讨分离纯化的人胰岛细胞是否表达NAD（P）H氧化酶亚基p22phox，通过体外实验了解该酶在血管紧张素Ⅱ损伤胰岛细胞功能中所起的作用。方法对分离纯化后的胰岛分别进行p22phox亚基和胰岛素免疫荧光检测；使用化学发光法检测不同浓度血管紧张素Ⅱ、AT，受体拮抗剂及NAD（P）H氧化酶抑制剂干预下胰岛细胞胰岛素分泌功能。结果免疫荧光标记胰岛p22phox亚基和胰岛素均呈强阳性；血管紧张素Ⅱ抑制高糖刺激下胰岛细胞胰岛素的分泌，使用AT1受体拮抗剂或者NAD（P）H氧化酶抑制剂能拮抗血管紧张素Ⅱ的抑制作用。结论分离纯化的人胰岛细胞表达NAD（P）H氧化酶；血管紧张素Ⅱ可能通过激活细胞表面NAD（P）H氧化酶使胰岛细胞发生氧化应激损伤，从而损伤胰岛细胞的分泌功能。     

小鼠胰岛细胞MHC－DR抗原的诱导表达

本文报告肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和ｒ－干扰素（ＩＦＮ－ｒ）诱导小鼠胰岛细胞ＭＨＣ－ＤＲ抗原表达对胰岛素分泌的影响。实验结果表明：（１）当ＴＮＦ浓度为５０～１００Ｕ／ｍｌ时未见胰岛细胞表达ＭＨＣ－ＤＲ抗原，而５０Ｕ／ｍｌｒ－ＩＦＮ可诱导少量胰岛细胞（８．５±２．９％）表达ＭＨＣ－ＤＲ抗原；（２）１００Ｕ／ｍｌＴＮＦ和１００Ｕ／ｍｌｒ－ＩＦＮ合并使用，ＭＨＣ－ＤＲ抗原阳性细胞明显增多（８０．２５±４．１１％）；（３）两种因子单独或合并作用均能使体外培养的胰岛细胞的胰岛素分泌量增加（Ｐ＜０．０１）。上述结果提示，胰岛细胞ＭＨＣ－ＤＲ抗原的诱导表达本身并不影响其分泌胰岛素的功能。     

3T3L1脂肪细胞对大鼠胰岛β细胞功能障碍的影响

目的 通过3T3L1脂肪细胞与大鼠原代胰岛细胞共培养,从细胞整体水平探讨脂肪细胞对胰岛β细胞功能的影响.方法 研究分为两组:(1)对照组:SD大鼠原代胰岛细胞组;(2)共培养组:SD大鼠原代胰岛细胞与3T3L1脂肪细胞共培养.对各组胰岛细胞观察以下指标:(1)胰岛素释放试验和细胞内胰岛素含量;(2)用RT-PCR检测葡萄糖转体2(GLUT2)、葡萄糖激酶(GCK)及内向整流钾离子通道6.2(Kit6.2)的mRNA表达水平;(3)用免疫沉淀和Western印迹检测胰岛素受体β(IR-β)、胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白及其酪氨酸磷酸化程度.结果 (1)共培养组在低糖水平胰岛素分泌明显增多[(0.79±0.35)ng·h-1·ml-1胰岛比(0.38±0.09)ng·h-1·ml-1胰岛,P=0.028],而高糖刺激时两组胰岛素分泌差异无统计学意义(P=0.760),共培养组刺激指数较对照组降低[(1.57±0.61)比(2.84±0.92),P=0.04].两组的胞内胰岛素含量差异无统计学意义(P=0.102).(2)共培养组胰岛细胞GLUT2、GCK、Kil6.2的mRNA表达下调为0.27 ±0.11,(P=0.01)、0.32±0.24,(P=0.009)、0.41±0.09,(P=0.003).(3)共培养组胰岛细胞IR-β、IRS-1蛋白表达及其酪氨酸磷酸化程度均下降.结论 3T3L1脂肪细胞通过下调胰岛细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)的相关基因,及通过抑制其自身胰岛素信号通路,从而影响GSIS.脂肪细胞可能参与了2型糖尿病胰岛细胞功能障碍的发生.     

白细胞介素—10抑制人肾系统膜细胞脂酶A2及其前列腺素E2的合成

目的：观察白细胞介素－10（IL－10）对白细胞介素－1β（IL－1β）诱导的人系膜细胞HMC）胸质型磷脂酶A2（cPLA2）基因和蛋白表达及其前列腺素E2（PGE2）释放的影响。方法：利用体外培养的HMC，设立对照组、IL-10处理组、IL－1β处理组及IL－10＋IL－1β处理组；采用放免法检测培养上清中PGE2，应用逆转录－多聚酶链反应（RT－PCR）和蛋白质印迹（Western Blot)检测cPLA2mRNA和蛋白水平。结果：正常情况下，HMC低水平表达cPLA2mRNA和并蛋白并释放少量的PGE2；IL－1β能显著上调HMCPGE2释放及cPLA2mRNA和蛋白的表达（P值均＜0．01）；IL－10对基础状态下的HMCPGE2释放及cPLA2mRNA和蛋白表达无明显影响（P值均＞0．05），但可呈剂量依赖性地下调IL－1β诱导的PGE2释放及cPLA2mRNA和蛋白表达（P值均＜0．01）。结论：IL－10抑制诱导的HMCPGE2释放及cPLA2表达，提示IL－10对HMC具有多方面抗炎作用。     

GLP-1受体激动剂Exendin4对胰岛β细胞胰岛素和IAPP分泌模式的影响

目的：探讨GLP-1受体激动剂（GLP-1RA）Exendin4作用下胰岛β细胞的胰岛素及胰淀粉样多肽（IAPP）的分泌模式。方法：观察小鼠胰岛瘤细胞系MIN6细胞在不同浓度Exendin4作用不同时间后的细胞形态的变化;利用MTT实验检测MIN6细胞在不同干预后的细胞活性的变化;采用葡萄糖刺激胰岛素分泌实验,检测MIN6细胞在不同干预后培养液上清中的胰岛素和IAPP分泌量的变化;采用荧光定量PCR（RT-PCR）检测各组MIN6细胞的胰岛素和IAPP mRNA表达水平的变化。结果：与正常对照组比较,Exendin4组的细胞数量增加,贴壁牢固,形态正常;细胞活性随Exendin4作用浓度以及作用时间的增加而显著增加,具有一定的浓度及时间依赖性;胰岛素和IAPP的分泌水平随Exendin4作用浓度以及作用时间的增加而显著增加,具有一定的浓度及时间依赖性,而IAPP/胰岛素的比值随作用浓度以及作用时间的增加而减小;胰岛素和IAPP mRNA水平均随Exendin4作用浓度以及作用时间的增加而上调,具有一定的浓度及时间依赖性,IAPP/胰岛素mRNA比值随作用浓度以及作用时间的增加而减小。结论：Exendin4作用于MIN6细胞可增加细胞数量和细胞活性,改善细胞状态,保护胰岛细胞功能;并且可引起胰岛素以及IAPP分泌水平增加,胰岛素和IAPP mRNA表达水平增加,而IAPP/胰岛素比值下降。     

壳寡糖促胰岛细胞增殖、胰岛素分泌及调节餐后血糖作用的研究

目的研究酶解法制备的壳寡糖对原代培养的胰岛细胞和胰岛口细胞系NIT-1的促增殖及胰岛素分泌作用，探讨在体内壳寡糖降低链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠的餐后2h血糖的作用。方法通过壳聚糖酶降解壳聚糖制备得到水溶性、低分子量的壳寡糖，在细胞水平上，通过形态学观察、MTT比色法、放射免疫等方法研究不同浓度的壳寡糖对于原代培养的大鼠胰岛细胞和胰岛G细胞系NIT-1细胞的增殖及促胰岛素分泌作用；体内实验，通过一般状态观察、餐后2h血糖、尿糖、糖耐量测定研究了壳寡糖对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠降低餐后2h血糖和改善葡萄糖耐量的作用。结果壳寡糖对于原代培养的大鼠胰岛细胞和胰岛G细胞体外增殖具有明显的促进作用并可以显著促进原代培养胰岛细胞的胰岛素分泌。不同剂量的壳寡糖均能不同程度改善糖尿病大鼠的体重减轻、多饮、多食等症状，降低餐后2h血糖值和尿糖，改善葡萄糖耐量。结论壳寡糖有多种不同的生物等功能，尤其在糖尿病的治疗方面有潜在的应用价值。