咳喘方对哮喘豚鼠肺组织嗜酸细胞凋亡的影响

【目的】通过观察中药咳喘方对哮喘豚鼠肺组织嗜酸细胞凋亡的影响，进一步探讨中药咳喘方治疗哮喘的疗效机制。【方法】采用经典的哮喘豚鼠模型，将60只符合实验标准的雄性豚鼠随机分为4组，即正常对照组、模型组、泼尼松组和咳喘方组，镜下观察各组支气管肺泡灌洗液嗜酸细胞计数的变化及肺组织嗜酸细胞浸润和凋亡的情况，并采用免疫组化的方法观察各组肺组织嗜酸细胞Fas和bcl-2凋亡基因的表达情况，将结果进行统计学分析。【结果】咳喘方组支气管肺泡灌洗液嗜酸细胞计数和肺组织嗜酸细胞浸润的数量明显低于模型组和泼尼松组，而肺组织嗜酸细胞凋亡的数量则高于模型组和泼尼松组；咳喘方组肺组织嗜酸细胞凋亡基因Fas的表达较其他组增强，而凋亡基因bcl-2的表达较泼尼松组和模型组低。【结论】中药咳喘方能减少哮喘豚鼠肺组织嗜酸细胞的浸润，促进嗜酸细胞凋亡基因Fas的表达，诱导嗜酸细胞凋亡，这可能是其治疗哮喘的疗效机制之一。     

芩荑合剂吸入对哮喘豚鼠气道嗜酸粒细胞凋亡的影响

目的 :研究芩荑合剂对哮喘豚鼠气道嗜酸粒细胞 (Eos)凋亡的影响。方法 :2 4只豚鼠随机分为 3组 ,即对照组、模型组和芩荑合剂吸入组 (1 8ml kg) ,每组 8只 ,以卵蛋白吸入致敏激发制作哮喘豚鼠模型 ,密度梯度分离法分离支气管肺泡灌洗液 (BALF)中Eos ,应用流式细胞术 (FCM)检测其凋亡率。结果 :对照组豚鼠BALF中Eos计数为 0 32± 0 11× 10 9 L ,Eos凋亡率为 14 1±4 2 % ;与对照组比较 ,模型组豚鼠BALF中Eos显著增加 (P <0 0 1) ,Eos凋亡率显著下降 (P <0 0 1) ;芩荑合剂吸入组同模型组相比 ,BALF中Eos显著减少 (P <0 0 1) ,Eos凋亡率显著增加 (P <0 0 1) ,且BALF中Eos数量与Eos凋亡率呈显著性负相关 (r=- 0 895 ,P <0 0 1)。结论 :Eos凋亡异常是支气管哮喘的一个重要的发病机制 ;芩荑合剂吸入可促进气道内Eos凋亡 ,减少Eos聚集 ,从而减轻哮喘气道炎症。     

针刺对哮喘豚鼠肺内嗜酸细胞凋亡及Fas表达的影响

目的 观察针刺定喘、膏肓、肺俞、丰隆等穴对哮喘豚鼠嗜酸粒细胞(EOS)凋亡及Fas表达的影响。方法 将27只豚鼠随机分成3组，哮喘模型组、针刺组和空白组。造模同时分别针刺，2w后，心脏采血并取肺组织，HE染色，以TUNEL法观测肺内EOS凋亡，以免疫组化观测Fas抗原表达。结果 空白组、模型组少见EOS凋亡及FAS阳性表达，而针刺组见EOS凋亡，有较多的FAS抗原阳性表达的细胞。结论 针刺可诱导哮喘豚鼠的肺内EOS凋亡。     

温阳抗寒方对哮喘豚鼠肺泡灌洗液细胞学的影响

为了研究中医药温阳祛寒平喘治疗支气管哮喘的作用机理,本文采用卵蛋白致敏法,建立哮喘豚鼠模型,运用细胞密度梯度分离法和分类计数,分析了温阳抗寒中药咳喘落对哮喘豚鼠肺泡灌洗液中细胞学的影响。结果显示,温阳抗寒方可显著降低哮喘豚鼠气道内嗜酸细胞和低密度嗜酸细胞的升高,说明其在治疗气道炎症中的作用,反应了温阳抗寒平喘治疗哮喘的部分机理。     

疏风通络方对哮喘大鼠不同时相外周血和肺泡灌洗液嗜酸细胞数量变化的影响

目的：探讨疏风通络方对哮喘大鼠血液和肺泡灌洗液（BALF）嗜酸细胞（EOS）数量变化的影响。方法：选择SPF级雄性Wistar大鼠为研究对象,随机分为正常组、模型组、氟美松组、DPI组、中药低、中、高剂量组,共7组,每组大鼠36只。第1d致敏：正常组给予生理盐水1mL代替抗原腹腔注射致敏,而其他6组给予1mL造模液（含Ⅴ级卵清蛋白100mg,氢氧化铝100mg和灭活百日咳杆菌6×10^9个）腹腔注射致敏;第15d开始激发：将各组大鼠分别置于相同大小的雾化箱内,正常组给予生理盐水6mL雾化激发,其他6组给予5％的Ⅴ级卵清蛋白（OVA）溶液6mL雾化激发,每次激发前2h正常组给予生理盐水1mL灌胃,而其他6组给予相应的药物灌胃。各组每天激发1次,每次激发30min,连续激发10d。距首次激发后的0h、6h、12h、24h、72h、10d各时点分别麻醉下每组取6只大鼠心脏采血和肺泡灌洗（取材结束后大鼠失血死亡）,然后迅速对血液和BALF标本进行EOS数量检测。结果：血中EOS数量变化：在不同时点模型组均高于正常组（P〈0．001）;各治疗组与模型组相比,氟美松组在0h、6h、12h、10d时点处于最低（P〈0．01或P〈0．001）,DPI组在24h、72h时点处于最低,但二者之间比较没有显著差异（P〉0．05）;其他治疗组之间相比,0—72h各时点DPI组处于最低（P〈0．001）,在10d时点中药高剂量组处于最低,且优于DPI组（P〈0．01）。BALF中EOS数量：在0h时点各组之间没有显著变化（P〉0．05）;在6h时除中药高剂量组外,模型组与其他治疗组和正常组之间均没有差异（P〉0．05）;在12h时点除模型组较正常组显著上升（P〈0．05）,各治疗组与模型组之间及各治疗组之间均没有差异（P〉0．05）;在24h时点,模型组显著高于正常组（P〈0．01）,各治疗组与模型组比较,只有氟美松有显著差异（P〈0．01）;在72h、10d时点模型组均显著高于正常组（P〈0．001）,DPI组和中药低剂量组与模型组比较均没有差异（P〉0．05）,氟美松组、中药中、高剂量组均与模型组比较有显著差异（P〈0．05或P〈0．01或P〈0．001）,三者比较,氟美松组EOS数值最低,中药中、高剂量组之间比较没有显著差异（P〉0．05）。结论：氟美松对哮喘大鼠血和BALF中EOS数量的影响最大,能显著降低血和BALF中EOS数量,而中药疏风通络方起效、显效慢,效果始终不及氟美松。     

三拗汤加味对哮喘豚鼠肺内嗜酸细胞凋亡的影响

目的:观察三拗汤加味(SATJW)对哮喘豚鼠肺内EOS凋亡的影响.方法:60只豚鼠分为正常组、哮喘模型组、中药3个剂量组及博利康尼组,末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿嘧啶缺口末端标记(TdT-mediated dUTPnick end labelling,TUNEL)技术原位标记细胞凋亡,计算机图像分析技术对气道壁EOS浸润和EOS凋亡进行定量检测,电镜观察BALF中凋亡细胞形态学改变.结果:哮喘模型组豚鼠支气管壁浸润显著增多.肺内凋亡细胞较少;各SATJW组EOS的浸润量较哮喘模型组有明显降低,凋亡较哮喘模型组明显.BALF中SATJW组电镜下见嗜酸性细胞染色质浓缩、边集、聚集在核膜周边.胞核发生固缩,胞膜皱缩等凋亡现象.结论:SATJW在哮喘发生过程中有诱导EOS凋亡的作用.     

三氧化二砷对哮喘豚鼠肺内嗜酸性粒细胞凋亡的影响

目的：研究三氧化二砷（As2O3)对哮喘豚鼠肺内嗜酸性粒细胞（EOS）凋亡的影响及其作用机制。方法：豚鼠30只随机分为3组，即对照组、哮喘组和As2O3(2mg/kg)治疗组。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿嘧啶缺口末端标记（TdT-mediated dUTP nick end labelling,TUNEL)技术原位标记细胞凋亡；计算机图像分析技术对气道壁EOS浸润和EOS凋亡进行定量测定。结果：对照组豚鼠气道壁EOS计数（4．4±2．5）个／HP，EOS凋亡指数为（0．42±0．08）％；与对照组比较，哮喘组豚鼠气道壁EOS浸润显著增加（P＜0．01），EOS凋亡指数显著下降（P＜0．01）；As2O3治疗组，气道壁EOS浸润显著下降（P＜0．01），EOS凋亡指数显著增加（P＜0．01），EOS凋亡指数显著下降（P＜0．01）；As2O3治疗组，气道壁EOS浸润显著下降（P＜0．01），EOS凋亡指数明显增加（P＜0．01），并且气道壁EOS浸润数量与EOS凋亡指数之间呈显著性负相关（r=-0.949,P<0.01)。结论：EOS凋亡异常是支气管哮喘的一个重要的发病机制；As2O3通过促进肺内EOS凋亡，下调EOS浸润数量，从而减轻了哮喘气道炎症；小剂量As2O3治疗哮喘既有效又相对安全，具有潜在的应用价值。     

培土生金法对脾虚哮喘大鼠嗜酸细胞凋亡的影响

为探讨培土生金法对哮喘治疗的作用机制 ,通过苏木精伊红染色 (HE)和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 (TU NEL) ,对脾虚哮喘大鼠模型肺组织切片中嗜酸性粒细胞 (Eos)的变化情况进行了观察。结果表明 ,培土生金中药有降低气道局部的 Eos计数 (P<0 .0 1或 P<0 .0 5 )、提高哮喘大鼠气道周围的 Eos凋亡率 (P<0 .0 5 )的作用 ,提示培土生金中药可能通过减轻气道慢性炎症反应起到一定的防治哮喘的作用。     

柴朴汤对哮喘豚鼠肺内嗜酸粒细胞凋亡及气道重塑的影响

目的:研究柴朴汤对哮喘豚鼠肺内嗜酸粒细胞(EOS)凋亡及气道重塑的影响。方法:将2 7只豚鼠随机分成三组,每组9只:即对照组,模型组,柴朴汤组。以HE染色观察气道重塑,以TUNEL法标记肺内EOS凋亡,以免疫组化标记Fas抗原表达。结果:模型组EOS凋亡指数(0 14±0 0 2 ) % ,Fas抗原表达(1 2 9±1 86 ) %细胞,柴朴汤组EOS凋亡指数(2 6 3±0 35 ) % ,Fas抗原阳性表达(8 11±3 6 ) %的细胞,两组有显著性差异(P <0 0 5 ) ,并且EOS凋亡指数与表达Fas阳性的细胞比例呈显著正相关;柴朴汤组气道重塑指标明显低于模型组,两组相比有显著性差异(P<0 0 5 )。结论:柴朴汤可诱导哮喘豚鼠的肺内EOS凋亡,抑制气道重塑。     

针刺对哮喘模型大鼠支气管肺泡灌洗液中炎性细胞的影响

目的:探讨针刺对哮喘模型大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞及嗜酸粒细胞(EOS)的影响.方法:将30只清洁级雄性SD大鼠,随机分为空白组、模型组和针刺组,每组10只.针刺组和模型组采用腹腔注射卵蛋白(OVA)的方法建造哮喘模型,模型组只建模,不予针刺干预;针刺组在建模的同时取“大椎”“肺俞”和“风门”进行针刺干预,隔日1次,共治疗7次(2周);空白组不予任何处理.各组大鼠2周后使用肺灌洗法收集BALF,在光学显微镜下计数白细胞总数,瑞氏染色法计数EOS总数.结果:造模后,模型组大鼠BALF中白细胞、EOS计数与空白组比较明显升高(P＜0.05);针刺后,针刺组大鼠BALF中白细胞、EOS计数与模型组相比明显降低(P＜0.05).模型组大鼠的BALF中EOS占白细胞比例高于空白组(P＜0.05);针刺组大鼠BALF中的EOS占白细胞比例低于模型组(P＜0.05).结论:针刺干预能明显减少哮喘模型大鼠支气管肺泡灌洗液中白细胞和嗜酸性粒细胞数目,从而达到缓解哮喘的目的.     

咳喘膏穴位贴敷对哮喘豚鼠氨茶碱药代动力学影响的研究

[目的]研究中药咳喘膏穴位贴敷对哮喘豚鼠氨茶碱药代动力学的影响,探讨其可能机制。[方法]将30只豚鼠随机分为5组,分别为正常组、模型组、咳喘膏高、中、低剂量组,每组6只。采用卵蛋白致敏-雾化激发方法复制豚鼠支气管哮喘模型。豚鼠均予氨茶碱灌胃,咳喘膏高、中、低剂量组予咳喘膏穴位贴敷,按设定时点经豚鼠内眦取血,高效液相色谱法检测氨茶碱血药浓度,DAS2.0药代动力学软件计算氨茶碱药代动力学参数。[结果]咳喘膏高剂量组与正常组、模型组及低剂量组比较,氨茶碱半衰期(T1/2)延长(P=0.007,P=0.022,P=0.028)、消除速率常数(Ke)减低(P=0.005,P=0.012,P=0.015),差异有统计学意义;咳喘膏中剂量组与正常组比较,氨茶碱T1/2延长(P=0.029)、Ke减低(P=0.047),差异有统计学意义。[结论]咳喘膏穴位贴敷可影响氨茶碱药代动力学,使氨茶碱T1/2延长,Ke减低。可以通过调控咳喘膏药物颗粒直径的方法,减小咳喘膏穴位贴敷对氨茶碱药代动力学影响。     

雷公藤和糖皮质激素对哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞的影响

目的　研究大鼠哮喘模型支气管肺泡灌洗液 (BALF)中嗜酸性粒细胞的改变以及雷公藤和糖皮质激素治疗对BALF中嗜酸性粒细胞的影响。方法　随机将 4 0只大鼠分为正常、哮喘、雷公藤治疗和激素治疗组 ,并对其BALF的嗜酸性粒细胞进行计数。结果　哮喘组大鼠BALF中的嗜酸性粒细胞计数明显高于正常组 (P <0 .0 1) ;激素组BALF中嗜酸性粒细胞计数与哮喘组比较明显降低 (P <0 .0 1)。雷公藤组BALF中嗜酸性粒细胞计数与哮喘组比较明显降低 (P <0 .0 1)。结论　雷公藤及激素可以明显降低哮喘大鼠BALF中的嗜酸性粒细胞数目 ,减轻哮喘的发作     

As2O3对大鼠生精细胞凋亡及其Bcl-2/Bax 表达的变化

目的；观察不同剂量的染砷(As2O3)大鼠生精细胞凋亡及其Bcl-2/Bax表达的变化。方法：40只健康雄性SD大鼠随机分成4组，分别为0.375，0.75，1.5 mg·kg-1 3个染毒组和正常正常组,灌胃法连续给药16周后处死，对各组大鼠进行睾丸脏器系数、精子头计数,并计算每日精子生成量(DSP)。采用TUNEL法检测大鼠生精细胞凋亡，免疫组化法检测大鼠生精细胞Bcl-2/Bax的表达。结果：①与正常组相比,中剂量组(0.75 mg·kg-1)和高剂量组(1.5 mg·kg-1)睾丸精子头计数和DSP均显著降低(P＜0.01)，生精细胞凋亡指数(AI)显著升高(P＜0.01)，生精细胞Bcl-2阳性产物表达明显降低(P＜0.01)，Bax表达明显升高(P＜0.01)；②DSP与生精细胞AI呈负相关(r=-0.563，P＜0.01)；③生精细胞凋亡与Bcl-2表达呈负相关(r=-0.825，P＜0.01)，与Bax表达呈正相关(r=0.710，P＜0.01)。结论：一定剂量的As2O3可通过抑制生精细胞Bcl-2和促进Bax的表达，诱导生精细胞凋亡增加而导致精子生成量的减少，产生雄性生殖毒性。     

咳喘膏穴位贴敷对哮喘豚鼠嗜酸细胞趋化因子和组胺的影响

目的观察咳喘膏对哮喘豚鼠嗜酸细胞趋化因子、组胺的影响,探讨其作用机制。方法将豚鼠随机分为对照组,模型组,地塞米松组,咳喘膏穴位贴药1、3、6h组,每组各10例。卵蛋白致敏并诱发哮喘,行穴位贴敷。检测各组嗜酸性粒细胞趋化因子、血组胺水平。结果咳喘膏穴位贴敷各组嗜酸性粒细胞趋化因子、组胺较模型明显减低。结论咳喘膏穴位贴敷可改善豚鼠哮喘气道炎性反应。     

速尿对肾阳虚豚鼠听觉功能影响的实验研究

目的观察速尿对肾阳虚豚鼠听觉功能的影响。方法利用糖皮质激素制造豚鼠肾阳虚模型,应用听性脑干反应(ABR)测试动物静注速尿后的听力变化,采用耳蜗基底膜铺片及螺旋韧带铺片观察其形态学的变化。结果静脉注射速尿后10 min时豚鼠ABR反应阈均较注药前显著升高,且阳虚加速尿组反应阈明显高于速尿组;耳蜗螺旋韧带铺片显示豚鼠血管纹缺血情况明显,且阳虚加速尿组较速尿组严重,但光镜下各组动物毛细胞形态学观察未见明显变化。结论速尿静脉注射可对豚鼠的听觉功能及血管纹微循环造成严重影响,在同等条件下对肾阳虚豚鼠的影响更明显。     

苏黄止咳胶囊改善哮喘豚鼠气道重塑的作用及其机制

目的探讨苏黄止咳胶囊改善哮喘豚鼠气道重塑的作用及其机制。方法36只豚鼠随机分为正常组,模型组,苏黄止咳胶囊低、中、高剂量组(1.5、3、6 g/kg),阳性对照组(沙丁胺醇,5 mg/kg)。除正常组外,各组豚鼠均腹腔注射1 mg/mL卵清白蛋白(OVA)和10 mg/mL Al(OH)_3混悬液1 mL,同时以1%OVA雾化致敏,隔天刺激1次制造哮喘模型,连续给药2周。末次给药后1 h,检测豚鼠的咳嗽潜伏期,HE染色分析豚鼠气管及肺组织病理形态,ELISA测定肺组织中白介素IL-4、IL-5和组胺水平,immunoblot法检测肺组织中相关蛋白变化,离体实验观察苏黄止咳胶囊对豚鼠支气管舒张率的影响,MTT比色法检测苏黄止咳胶囊(125、250、500μg/mL)和阳性对照组(氨茶碱,50μg/mL)对组胺诱导大鼠支气管平滑肌细胞(RBSMCs)细胞增殖的抑制率影响,免疫荧光法检测其对增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的影响,immunoblot法检测其对酪氨酸激酶(JAK2)、信号传导与转录激活因子(STAT3)、蛋白激酶(Akt)、细胞周期相关蛋白的影响。结果与模型组比较,苏黄止咳胶囊延长哮喘豚鼠的咳喘潜伏期,改善气管平滑肌增厚、肺组织炎症及肺组织IL-4、IL-5、组胺水平;改善离体豚鼠支气管舒张率;有效抑制RBSMCs细胞增殖,改善PCNA、JAK2、STAT3、Akt及周期相关蛋白表达。结论苏黄止咳胶囊通过影响JAK/STAT信号通路来调控细胞周期相关蛋白抑制RBSMCs细胞增殖,改善支气管平滑肌增生,缓解气道重塑,从而发挥较好的平喘作用。     

IL-1β基因在哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液炎细胞中的表达

目的　观察哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液 (BALF)中炎细胞IL - 1βmRNA的表达情况 ,探讨IL - 1在哮喘发病中的作用。方法　用卵白蛋白 (OVA)致敏并激发大鼠哮喘反应 ,于激发后即刻、1h ,4h和 16h行支气管肺泡灌洗。用地高辛配基标记的cDNA探针检测BALF炎细胞IL - 1βmRNA的原位杂交水平。结果　正常大鼠BALF炎细胞极少表达IL - 1βmRNA ,过敏原激发可诱导BALF炎细胞表达IL - 1βmRNA显著增加。结论　哮喘大鼠BALF炎细胞表达IL - 1βmRNA增加 ,提示IL - 1在哮喘发病中有一定作用。     

电针合法舒地尔对改善急性中耳炎豚鼠耳蜗微循环的研究

目的：研究电针配合法舒地尔对豚鼠急性中耳炎模型耳蜗血流量、平均动脉压及血清学指标改变的影响。方法：使用注射金葡菌液的方法建立豚鼠急性中耳炎模型,将造模成功的80只豚鼠随机分为4组：单纯使用电针组（A组）、单纯使用法舒地尔组（B组）、电针配合法舒地尔组（C组）、对照组（D组）,每组20只。各组予相应药物干预10d,检测耳蜗血流量、平均动脉压及血清TNF-α、IL-6含量。结果：电针或法舒地尔均能改善耳蜗血流量、平均动脉压及血清TNF-α、IL-6含量,两者联合使用,指标改善更明显。结论：电针能明显改善急性中耳炎豚鼠耳蜗微循环,配合法舒地尔效果更好。