对"氢氟酸烧伤中毒对兔细胞凋亡及胞浆钙变化的实验研究"一文的商榷

该文登在《职业卫生与应急救援》杂志第21卷第3期120页上.报道了氢氟酸染毒动物兔前后体内单个核细胞Ca 离子变化差异无统计学意义下,其单个核细胞凋亡百分率高出染毒前单个核细胞凋亡的百分率(P＜0.001),作出氢氟酸致毒Ca 离子不是造成兔单个核细胞凋亡的原因.何种原因作者未作进一步的探讨.然而文中的数据其统计学处理上值得商榷.     

丙烯腈对V79细胞线粒体膜电位和胞内Ca~(2+)浓度及细胞凋亡的影响

目的 探讨丙烯睛(acrylonitrile,ACN)对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79)线粒体膜电位、细胞内Ca~(2+)浓度和细胞凋亡的影响.方法 用含0、8、40、200、1000、5000μmol/L的ACN的RPMI-1640培养液染毒体外培养的V79细胞,染毒4、12、24 h后检测细胞的胞浆Ca~(2+)浓度,采用流式细胞仪检测细胞的线粒体膜电位及细胞凋亡的变化.结果 与阴性对照组比较,ACN染毒4 h 1000、5000μmol/LACN染毒组,染毒12、24 h各ACN浓度组Ca~(2+)度明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05);与阴性对照组比较,染毒4 h 1000、5000μmol/L ACN染毒组,染毒12、24 h 40、200、1000μmol/L ACN染毒组线粒体膜电位均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05).随染毒剂量和染毒时间延长,细胞凋亡率明显增加,与阴性对照组比较,染毒12、24 h各浓度ACN染毒组细胞凋亡率均明显增加,24 h各浓度ACN染毒组细胞凋亡率均明显高于12 h,差异有统计学意义(P<0.05).结论 ACN可导致V79细胞发生凋亡,胞浆内Ca~(2+)浓度增加及线粒体膜电位的下降.     

甲苯对原代培养海马神经细胞的毒性研究

目的　通过在体外对原代培养的海马神经细胞进行染毒 ,观察其对神经细胞的毒作用 ,并探讨其作用机制。方法　取新生的SD大鼠海马神经细胞进行原代培养 ,两周后 ,用甲苯染毒 ,分成 3个染毒组 ,染毒浓度分别为 3、6和 9mmol L ,并设空白对照组和赋形剂组 ,染毒 2 4h ,观察其对细胞形态、细胞存活率、LDH漏出率、细胞内游离钙和细胞凋亡的影响。结果　甲苯染毒后 ,细胞的形态发生改变 ,引起细胞突起萎缩 ,细胞肿胀变圆 ,细胞数量减少 ;神经细胞存活率的显著下降 ,且随着染毒时间的延长及浓度的升高其存活率逐渐降低 ;高剂量组神经细胞LDH漏出率的显著升高 ,与对照组相比有显著性 (P <0 0 5 ) ;细胞细胞内的[Ca2 + ]i浓度显著上升 ,与对照组相比P <0 0 5 ,并呈剂量依赖性的变化 ,加入钙通道拮抗剂硫氮卓酮后 ,则未见 [Ca2 + ]i浓度上升 ;可见明显的细胞凋亡。结论　甲苯体外染毒对神经细胞有较强的毒性。这可能与甲苯有较强的脂溶性、引起细胞钙内流增加 ,促进细胞凋亡有关。     

Fe2O3纳米颗粒对人肝癌细胞游离钙的影响

[目的]探讨三氧化二铁（Fe2O3）纳米颗粒对人肝癌细胞（HepG2细胞）形态学和游离钙（[Ca^2＋]i）的影响,为研究Fe2O3纳米颗粒诱导细胞凋亡的机制提供依据。[方法]以不同浓度（0.173、0.347、0.694g／L）的Fe2O3纳米颗粒对HepG2细胞染毒1、12、24h,用激光扫描共聚焦显微镜检测HepG2细胞[Ca^2＋]i荧光强度的变化。[结果]与对照组相比,染毒不同时间各染毒组细胞内[Ca^2＋]i含量差异均有统计学意义（P〈0.05）;染毒不同浓度时,Fe2O3纳米颗粒均能不同程度地引起HepG2细胞的形态学改变及其细胞内[Ca^2＋]i的升高。0.347、0.694g／L组染毒不同时间点的平均荧光强度分别为127.33±20.13、108.88±19.15、144.00±13.86和119.67±1.15、122.35±11.47、186.40±17.34,均明显高于对照组54.33±6.43,差异有统计学意义（P〈0.05）。[结论]HepG2细胞凋亡可能与Fe2O3纳米颗粒引起的细胞[Ca^2＋]i升高有关。     

新生儿缺氧缺血性脑病的发病机理及综合干预新进展

新生儿缺氧缺血性脑病(以下简称HIE)的发病机理,涉及面很广,近年来认识到氧自由基、兴奋性氨基酸和细胞内游离钙(以下简称Ca~(2+)i)在HIE发病中占有重要地位,三者的中心环节是细胞内钙平衡的紊乱.人体大多数细胞,其细胞内Ca~(2+)i含量极少,如我院采用Quin-2法测定正常新生儿的血单个核细胞内Ca~(2+)i浓度为116.6±28nmol/L.正常情况下,细胞膜内外存在着近10000倍的钙离子梯度差,主要依靠细胞膜对Ca~(2+)i的自然低通透性即通过钙通道以及胞膜上的Ca~(2+)-Mg~(2+)ATP酶即钙泵等的作用来维持,细胞内Ca~(2+)i的含量虽然很少,但却是发挥调节细胞机能活动的重要部分,它和环核苷酸如CAMP一样,被称为第二信使和细胞功能调节者,参与机体许多生理过程,但当细胞内钙超负荷时,却给细胞带来损害,甚至引起细胞死亡.     

鸦胆子苦醇对苯致白血病小鼠的治疗作用及其机制

将30只无特定病原体级雄性CBA/CA小鼠,随机分为对照组、苯诱导急性髓系白血病(BZ-AML)模型组、鸦胆子苦醇(Brusatol)治疗组,每组各10只小鼠。BZ-AML、Brusatol组小鼠利用静式染毒柜吸入染毒,每天苯吸入浓度300 ppm,6 h/d,5 d/周,连续8周;对照组小鼠吸入空气。观察各组小鼠外周血血常规、骨髓细胞学涂片,确认BZ-AML建模成功后给药。Brusatol治疗组腹腔注射给药4 mg/(kg·d),连续5 d。流式细胞术测定外周血中CD~+_3、CD■、CD■T细胞的数量以及骨髓单个核细胞ROS、细胞凋亡率的改变。与BZ-AML组小鼠比较,Brusatol组小鼠外周血CD~+_4、CD~+_3 T淋巴细胞数量及CD■/CD■比值增加,骨髓单个核细胞ROS水平降低及细胞凋亡率增高。提示Brusatol通过改善T淋巴细胞免疫功能,降低骨髓细胞ROS生成及诱导凋亡发挥抗白血病的作用。     

氧化应激损伤对内耳毛细胞内游离钙离子和钙调蛋白表达的影响

目的通过分析氧化应激损伤的内耳毛细胞内游离Ca~(2+)浓度和钙调蛋白(CaM)表达水平,探讨感音性耳聋的氧化应激损伤机制。方法采用不同浓度(50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)双氧水染毒培养内耳毛细胞,24 h后检测细胞过氧化氢酶(CAT)活性,Fluo-3 AM荧光探针定量检测细胞内Ca~(2+)浓度,免疫荧光法分析CaM表达水平。结果氧化损伤的毛细胞CAT活性明显下降,随着染毒浓度的增加下降更明显(F=689.9,P0.01);氧化损伤毛细胞游离Ca~(2+)浓度随着染毒浓度的增加而增加(F=716.107,P0.01);氧化损伤的毛细胞CaM表达水平明显增加,50μmol/L和100μmol/L H_2O_2染毒组随浓度增加表达增强,但200μmol/L H_2O_2染毒组表达水平有所回落(F=732.727,P0.01)。结论氧化应激损伤导致毛细胞内游离Ca~(2+)浓度和CaM表达增加诱发细胞凋亡是多类型感音性耳聋的重要发病机制,严重的氧化应激损伤可抑制细胞CaM表达。     

急性双光气染毒对兔肺泡和肺Ⅱ型细胞磷脂合成与分泌的影响

目的　研究日本大耳兔双光气肺损伤后 ,肺泡和肺Ⅱ型细胞磷脂的变化及机制。方法　将 35只纯种日本大耳白兔随机分为对照组 (10只 )、中毒即刻组 (5只 )、中毒 2h组 (5只 )、中毒 4h组 (5只 )、中毒 8h组 (5只 )、中毒 12h组 (5只 ) ;染毒浓度为 30 0 μg·L-1,中毒后按不同时间点放血法处死实验动物 ,取肺并用肺灌洗液对支气管肺泡进行多次灌洗 ,吸集灌洗液离心取上清 ,检测灌洗液中磷脂含量的变化 ;肺组织作冰冻切片 ,显微分光光度计吸收光谱法进行磷脂定量分析。结果　双光气染毒大鼠后 ,与正常对照组相比 ,实验组不同时间点的肺泡内磷脂含量明显降低(P <0 .0 1)。双光气致肺损伤初期 ,肺Ⅱ型细胞和肺泡内磷脂含量迅速下降 (P <0 .0 1) ,表现为磷脂分泌功能降低 ;染毒 2h后 ,肺Ⅱ型细胞内磷脂合成增加 ,分泌到肺泡内的磷脂也略有升高 ,但仍显著低于对照组 (P <0 .0 1) ;染毒 4h后 ,迟发毒性反应加重 ,表明无论磷脂合成还是分泌功能都受到影响 ,虽然尚存在较低的磷脂分泌功能 ,但回升速度减缓 ;染毒 8h后 ,肺泡内的磷酯含量也呈降低趋势。随染毒时间的变化 ,肺Ⅱ型细胞内外磷脂含量呈对应性改变。结论　双光气中毒可造成肺泡Ⅱ型细胞合成、分泌磷脂功能障碍 ;肺损伤早期 ,肺泡表面活性物质含量减少 ,     

AO/EB染色法及流式细胞术检测DMF诱导人肝细胞凋亡

目的观察二甲基甲酰胺（DMF）诱导正常成人离体肝细胞凋亡情况。方法以50mmol/L、100mmol/L、150mmol/L和200mmol/L剂量DMF对正常成人离体肝细胞染毒。采用AO/EB双重染色法进行形态学观察;流式细胞术检测细胞凋亡率变化。结果AO/EB染色可见：活细胞核染色质着绿色,死亡细胞核染色质着橘红色,晚期凋亡细胞核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状,早期凋亡细胞核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状。染毒组早期凋亡细胞多于阴性对照组,随剂量增高,晚期凋亡细胞和死亡细胞也增多。不同剂量组间染毒24小时后,流式细胞术散点图可见,随染毒剂量增加,活细胞率逐渐下降,以200mmol/L剂量组的活细胞率最低。经单因素方差分析,空白对照组和各剂量组间早期凋亡细胞占细胞总数的百分率差异有统计学意义（F=8.299,P〈0.01）,随染毒剂量增高,早期凋亡细胞率增加。结论一定浓度的DMF能诱导正常成人离体肝细胞发生凋亡,其早期凋亡率有随DMF浓度的增高而增高的趋势。     

早期自然流产与转化生长因子-β1的相关性研究

目的　探讨自然流产患者外周血单个核细胞内转化生长因子 -β1(TGF-β1) m RNA的异常表达与自然流产的相关性。　方法　采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR)技术 ,检测3 0例早期自然流产患者、 2 5例正常妊娠妇女、 2 5例正常未妊娠妇女外周血单个核细胞内 TGF-β1m RNA表达量。　结果　早期自然流产患者、正常妊娠妇女、正常未妊娠妇女 3组研究对象外周血单个核细胞表达 TGF-β1m RNA相对含量分别为 (2 1.5± 9.4) %、(95.7± 12 .9) %、(87.0± 13 .8) % ,组间比较差异均有显著性 (P<0 .0 5)。　结论　正常早期妊娠妇女外周血单个核细胞 TGF-β1m RNA表达水平较正常未妊娠妇女显著升高 ,早期自然流产患者则显著下降 ,提示 TGF-β1对妊娠维护起重要作用 ,而其低表达水平可能与自然流产相关     

60例氢氟酸灼伤的早期处理

目的探究氢氟酸灼伤患者的早期治疗方法,以提高治愈率。方法对天津市第四医院烧伤科2006年1月—2009年12月60例氢氟酸灼伤患者的临床资料进行回顾性分析。结果 60例患者治疗效果满意,未出现严重并发症或死亡。结论早期、及时、正确的施救,彻底清创,补充钙剂,定时监测血钙,尽早切除坏死创面,重视吸入性损伤及防止严重并发症是成功救治的关键。     

菹草类胡萝卜素对Hela细胞增殖与凋亡的影响

目的研究菹草类胡萝卜素提取物(carotenoids extracts from Potamogeton crispus L.,CEPC)对人宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法、流式细胞术(FCM)、荧光倒置显微镜和激光共聚焦显微镜(LSCM)观察等手段,研究不同浓度受试物对Hela细胞增殖抑制、细胞周期阻滞、细胞形态学变化及胞内Ca2+浓度变化的影响。结果CEPC对Hela细胞增殖有明显的抑制作用;呈现G2/M期阻滞。荧光显微镜和LSCM观察到细胞核浓缩等典型的细胞凋亡形态特征。处理组细胞内Ca2+浓度显著升高。结论CEPC对Hela细胞有生长抑制作用,诱导细胞凋亡是这种作用的主要形式,胞内Ca2+浓度升高可能是细胞凋亡的作用机制之一。     

曲古菌素A联合全反式维甲酸诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的协同作用

目的:探讨曲古菌素A(TSA)联合全反式维甲酸(ATRA)诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的协同作用及其相关机制。方法:TSA与ATRA联合或者单独作用于SiHa细胞,采用CellTiter 96Aqueous法检测细胞增殖情况,7AAD荧光染色法观察细胞凋亡形态,Annexin V/7AAD法流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot法检测P53、BCL-2和Caspase-3蛋白的表达变化。结果:细胞增殖实验结果显示TSA联合ATRA对SiHa细胞有显著的增殖抑制作用;7AAD荧光染色结果显示联合用药组细胞凋亡明显增加,出现核碎裂等典型凋亡改变;流式细胞术检测结果显示联合用药组凋亡率显著增高;Western Blot结果显示:与对照组比较,联合用药组中P53和活化性Caspase-3蛋白的表达水平显著升高,而BCL-2蛋白表达水平显著下降。结论:TSA联合ATRA在体外对SiHa细胞具有明显的协同抑制增殖和诱导凋亡作用,推测其机制可能与P53和活化性Caspase-3蛋白表达水平上调、BCL-2蛋白表达水平下调有关。     

大豆异黄酮诱导HeLa细胞凋亡、细胞周期阻滞和[Ca~(2+)]_i浓度升高(英文)

目的探讨大豆异黄酮SI-I抑制HeLa细胞生长机制。方法 HeLa细胞经过10,20,and 40 g/ml的大豆异黄酮SI-I处理4d后,采用倒置显微镜和透射电镜观察其形态学变化,利用流式细胞仪检测细胞周期分布,通过激光扫描共聚焦显微镜观察细胞中[Ca2+]i浓度。结果倒置显微镜观察到HeLa细胞数量明显变少,细胞严重变形。透射电镜观察到HeLa细胞发生凋亡形态学变化。流式细胞仪分析发现HeLa细胞周期阻滞于G0/G1或G2/M期,细胞凋亡率随SI-I浓度的增加而上升。激光扫描共聚焦显微镜观察到凋亡的HeLa细胞内[Ca2+]i显著升高。结论大豆异黄酮SI-I抑制HeLa细胞生长是通过凋亡诱导作用,并且细胞周期阻滞和[Ca2+]i浓度升高可能是其诱导凋亡机制之一。[营养学报,2012,34(4):373-378]     

Hydrofluoric acid burns of the eye

A case of hydrofluoric acid (HF) burns of the eye is reported and a review is presented of our investigation into the mechanism of HF toxicity in ocular tissues. A number of therapeutic procedures that have been successful in the treatment of HF skin burns were studied in the rabbit for use in the eye. Immediate single irrigation with water, normal saline or isotonic magnesium chloride solution is the most effective therapy for ocular HF burns. Extrapolation of other skin burn treatments to use in the eye is unacceptable due to the toxicity of these agents in normal eyes and the additive damage caused in burned eyes.     

钙通道与妊娠期高血压疾病关系的研究进展

血管平滑肌细胞膜上钙通道的正常活动是其兴奋舒缩过程的关键,并参与维持血管的基本紧张度。有研究表明妊娠期高血压疾病患者胞浆内游离Ca2 浓度升高,这可能与钙通道的开放增加引起细胞外Ca2 内流增多有关。另外,缺氧、内源性血管收缩物质、蛋白激酶及环磷酸腺苷等亦可通过对钙通道的间接作用升高胞浆内Ca2 浓度,引起血管收缩,血压升高。故推测妊娠期高血压疾病的发生与平滑肌细胞膜上钙通道的改变相关。     

SERCA抑制剂抑制人结肠癌SW480细胞生长的作用机制研究

目的探讨SERCA抑制剂抑制结肠癌细胞株SW480生长的作用机制,为结肠癌治疗提供实验依据。方法（1）应用Ca^2＋荧光指示剂Fura-2检测细胞内Ca^2＋的浓度。（2）MTT法检测细胞抑制率。结果毒胡萝卜素（Tg）可使SW480细胞内Ca^2＋水平由（133．26±5．17,197．46±4．62）明显升高到（436．63±5．21,766．41±3．12）,差异有统计学意义（P〈0．05）;毒胡萝卜素（Tg）对人结肠癌细胞株SW480的抑制率随浓度（10～50μmol／L）的提高而增高,由（10．67±5．28）％至（31．46±7．21）％,抑制率差异有统计学意义（P〈0．05）;毒胡萝卜素（Tg）与W7合用时,这种效应则受到抑制。结论随着毒胡萝卜紊（Tg）浓度的增大,细胞内钙浓度同步上升;同时毒胡萝卜素（Tg）对该细胞株的抑制率增高。但其所诱导的细胞抑制具体钙信号途径还有待进一步研究。     

乌贼墨对H22癌细胞内Ca2+浓度、核膜Ca2+/Mg2+-ATP 酶活性及c-jun表达的影响

利用荧光探针和免疫组织化学方法,研究了乌贼墨对Ｈ２２癌细胞内ＣＡ＾２＋浓度,核膜Ｃａ＾２＋／Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶活性及ｃ－ｊｕｎ表达的影响。结果发现,乌贼墨使Ｈ２２癌细胞内Ｃａ＾２＋浓度分别降低了６９％和７９％,核膜Ｃａ＾２＋／Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶活性分别降低了２１％和３７％,ｃ－ｊｕｎ表达明显减少。     

砷中毒对小鼠脑细胞内钙离子浓度影响的研究

目的:探讨砷中毒导致脑细胞损伤的机制。方法:采用尾静脉注射亚砷酸钠建立中毒动物模型,以Fluo-3/AM为细胞内游离钙离子的荧光指示剂,用激光扫描共聚焦显微镜测定脑细胞内[Ca2+]i的含量变化,同时采用原子吸收分光光度计测定脑组织中砷(As)、用生化试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的活性水平。结果:实验组小鼠脑细胞内的平均荧光强度明显高于对照组,实验组为116.10±33.75,对照组为42.78±22.66(P<0.001);实验组小鼠脑组织中As含量、MDA水平明显高于对照组,而SOD水平则低于对照组,两组差异有显著性意义(P<0.05)。结论:砷可增加小鼠脑细胞内的游离钙离子浓度,提示脑细胞内钙超载可能是其致脑细胞损伤的分子机制之一。     

外源性一氧化碳释放分子对体外培养PC12细胞的谷氨酸兴奋性神经毒性

  目的  探讨一氧化碳释放分子2（CORM-2）对PC12细胞谷氨酸信号通路的影响及作用机理,揭示急性一氧化碳中毒迟发性脑病（delayed encephalopathy after acute carbon monoxide poisoning,DEACMP）发生的可能机制,为CO的中毒及其后遗症的防治提供实验依据。
  方法  以高分化的PC12细胞为研究对象,经不同浓度的CORM-2暴露后,用MTS法检测细胞活力,确定合适的染毒浓度及染毒时间,收集细胞后用蛋白免疫印迹法检测N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体主亚基（NR1）及NMDA受体2B亚基（NR2B）蛋白的表达,检测细胞内钙离子浓度及细胞释放的谷氨酸含量,用流式细胞术检测细胞的凋亡情况。
  结果  随着CORM-2浓度的增加,PC12细胞的活力呈剂量依赖性降低（P < 0.05）;各剂量与对照组相比,NMDA受体的NR1亚基的表达未发生显著的变化（P > 0.05）,250 μmol/L和300 μmol/L剂量组NR2B蛋白的相对表达水平以及Ca2+浓度、谷氨酸水平均高于对照组和200 μmol/L剂量组（P < 0.05）;随着CORM-2浓度的增加,PC12细胞的凋亡率也呈剂量依赖性增加（P < 0.05）。
  结论  随着COMR-2浓度的增加,PC12细胞的活力呈剂量依赖性降低。CORM-2可使PC12细胞谷氨酸信号通路激活。CORM-2可能通过激活谷氨酸信号通路引起Ca2+内流,进而导致细胞凋亡。这些结果对认识CO中毒机制具有重要意义。