痰结核杆菌DNA的聚合酶链反应检测及应用

痰结核杆菌ＤＮＡ的聚合酶链反应检测及应用陈良玺，宋世云，赵秀菊，吕云生，季学东陈光连，邢桂云，管庆兰，马振霞，付勋杰我们对１８８例结核病患者进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测，并同时与直接涂片镜检法、培养检查结核菌和非结核患者作对照进行了分析研究，现报告...     

聚合酶链反应技术检测咽拭子标本中结核菌DNA的评价

为探讨聚合酶链反应（PCR）检测咽拭子标本中结核菌在诊断肺部疾病的价值。应用PCR法检测肺结核患者50例，非肺结核患者55例及100例正常健康人咽拭子标本中结核菌和咽拭子涂片找抗酸杆菌，并与痰涂片检查作比较。肺结核组、非肺结核组及正常健康人咽拭子PCR阳性率分别为60％、3O．9％及10％，涂片为6％、0％和0％。结核组及非结核组痰PCR阳，牲率为54％和10．9％，涂片为26％和0％。结果表明PCR检测咽拭子标本结核菌DNA是肺结核病早期诊断和鉴别诊断的一种有价值的检测手段。但应注意假阳性或假阴性出现的可能。     

聚合酶链反应和DNA探针联合检测临床标本中结核杆菌的研究

目的为提高聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测未培养临床标本中结核杆菌的敏感性和特异性，方法，首先通过琼脂糖凝胶电泳检测ＰＣＲ扩增产物，然后用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ法转移到至膜上，与地高辛标记的人型结核杆菌ＤＮＡ探针杂交。结果ＰＣＲ电泳检测的灵敏度为１ｐｇ而ＤＮＡ探针检测将灵敏度提高到１００ｆｇ。２４种受试菌株中，只有结核分支杆菌复合体和蟾分杆菌有２４５ｂｐ扩增带，其中牛型结核分支杆菌与１８８ｂｐ探针不杂交，对２     

聚合酶链反应对脑脊液标本中结核杆菌DNA重复序列的检测

采用聚台酶链反应（ＰＣＲ）对３４例结核性脑膜炎（结脑）患者脑脊液（ＣＳＦ）进行检测，其中５份结核杆菌培养阳性的标本，ＰＣＲ检测均阳性；２９例ＣＳＦ结核杆菌培养阴性的标本，１９例ＰＣＲ检测阳性，总的阳性率为７０．５％。而作为对照的２０例非结脑患者的ＣＳＦ标本则无阳性。利用育法微量结核杆菌与对照菌测试，可以反证本方法的准确性，其符合率为１００％，提示本方法可以用于临床标本中结核杆菌ＤＮＡ的快速检测，不失为一快速，灵敏而又特异的诊断手段。关键词     

聚合酶链反应对胃活检标本中幽门螺杆菌DNA的检测

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对幽门螺杆菌（ＨＰ）特异性的尿素酶Ａ基因进行扩增，４０个循环可以检测出１０个ＨＰ，加用非同位素地高辛探针杂交，可以检出单个ＨＰ。用本法对１００例胃镜活检标本进行ＰＣＲ检测，其阳性率达８２％，而尿素酶水解试验，细菌涂片及培养的阳性率则分别为６８％、４６％、１８％。ＰＣＲ方法能快速、敏感，特异地检测出临床标本中ＨＰ，对于研究ＨＰ与上消化道疾病之间的关系，指导抗菌治疗均具有重要意义。     

聚合酶链反应检测HBV DNA的临床意义

应用ＰＣＲ对１７１例肝病血清检测结果，ＨＢＶＤＮＡ阳性率５９．１％，ＥｌｉＳＡ检测ＨＢｓＡｇ阳性率４３．２７％，二者比较有显著性差异（Ｐ〈０．０１），ＨＢｓＡｇ（＋）／ＨＢｅＡｇ（＋）组ＨＢＶＤＮＡ阳性率７９．５％，而ＨＢｓＡｇ（＋）抗－ＨＢｅ（＋）组主５７．９％，ＨＢｓＡｇ（－）／抗－ＨＢｓ（＋）组，ＨＢＶＤＮＡ阳性率３６．８％。     

套式聚合酶链反应检测结核杆菌DNA

套式聚合酶链反应检测结核杆菌ＤＮＡ王晓东孟昭智陶静郑传文刘德鸿聚合酶链反应（ＰＣＲ）以其特异、敏感、快速的特点从众多结核杆菌检查方法中脱颖而出。套式ＰＣＲ经套式引物进行前后两次扩增，进一步提高了结核杆菌检测的特异性与敏感性。材料和方法：ＤＮＡ模板提取...     

聚合酶链反应检测HBV－DNA的临床意义

本文采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和ＥＬＩＳＡ法对２７３７例乙肝患者血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ和乙肝病毒标志物进行检测，结果发现各组ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率：①ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）和抗ＨＢｃ（＋）组为９９．２７％；②ＨＢｓＡｇ（＋）、抗ＨＢｅ（＋）和抗ＨＢｃ（＋）组为４４．７７％；③ＨＢｓＡｇ（＋）和抗ＨＢｃ（＋）组为４２．８６％；④ＨＢＶ标志物均阴性为１５．９２％。结果表明ＨＢＶ－ＤＮＡＰＣＲ检出先于其它乙肝病毒标志物，可早期发现乙肝。ＰＣＲ法直接检测ＨＢＶ－ＤＮＡ更有利于临床对乙肝的诊断和治疗。     

聚合酶链反应检测日本血吸虫DNA的探索

为建立一种敏感、有效的日本血吸虫病诊断及疗效考核方法,利用单扩增聚合酶链反应(PCR)及套式-聚合酶链反应(NEST-PCR)检测急、慢性日本血吸虫病患者及动物模型标本中日本血吸虫5D 基因。结果从动物模型采取的肝、脾组织及大便标本均为阳性,而血吸虫病患者的血清标本及日本血吸虫感染鼠的血清、血浆及外周血单个核细胞标本均未检出阳性。这表明外周血中可能不含有日本血吸虫 DNA,使 PCR 方法应用于血吸虫病的诊断及疗效考核受到限制。     

实时荧光定量聚合酶链反应法检测痰结核杆菌DNA及其临床应用

结核杆菌培养法周期长，而且存在药物抑菌现象，容易产生假阴性结果。痰涂片抗酸染色计数法在敏感度、特异度等方面均不理想。本研究采用Taqman荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术，检测痰标本结核杆菌载量的实时荧光定量PCR体系，评价该体系检测结核杆菌以及监控抗结核药效的可行性。     

聚合酶链反应检测原发性肺结核分支杆菌DNA

比较研究了标准微生物技术与聚合酶链反应(PCR)检测儿童原发性肺结核的敏感性。PCR 可用于检测肺结核分支杆菌基因组中多拷贝IS 6110插入元件.患者和方法22例原发性肺结核患儿。男女各11例,平均年龄7±3岁.其中14例根据以下两项或多项标准确诊:有发热、体重下降、咳嗽等症状及体检     

聚合酶链反应检测日本血吸虫DNA瓣探索

为建立一种敏感、有效的日本血吸虫病诊断及疗效考核方法，利用单扩增聚合酶链反应（ＰＣＲ）及套式－聚合酶链反应（ＮＥＳＴ－ＰＣＲ）检测急、慢性日本血吸虫患者及动物模型标本中日本血吸虫５Ｄ基因。结果从动物模型采取的肝、脾组织及大便标本均为阳性，而血吸虫病患者的血清标本及日本血吸虫感染鼠的血清、血浆及外周血单个核细胞标本均未检出阳性。这表明外周血中可能不含有日本血吸虫ＤＮＡ，使ＰＣＲ方法应用于血吸虫病的诊     

聚合酶链反应检测临床标本中结核分支杆菌DNA诊断结核病的评价

常规的结核病诊断方法,抗酸染色镜检（镜检）阴性率低,结核菌培养需时长,常给诊断和治疗造来困难。聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术自１９８５年发明以来,为结核病建立了一种快速、敏感、特异与简便的细菌检查方法,取得了令人鼓舞的效果。近年来,我们应用ＰＣＲ技术检测２７７０份临床标本结核分支杆菌ＤＮＡ（ＴＢ－ＤＮＡ）,对ＰＣＲ技术在结核病诊断中的作用进行评价。１材料和方法病例选择：（１）结核组：１２０３例,其中肺结核８８４例（包括慢性纤维空洞型肺结核２０例,浸润型肺结核６４５例,结核性胸膜炎１７２例,血行播散型…     

标本处理方法对聚合酶链反应检测结核分支杆菌结果的影响

目的探讨应用十二烷基硫酸钠（SDS）处理标本在结核分支杆菌聚合酶链反应（PCR）中的价值。方法从186例活动性结核病人收集痰、胸腹水、脑脊液、尿、血液等标本266份,标本分别用SDS和常规方法进行处理。两种方法处理的标本同时用PCR-反相膜杂交试验检测结核分支杆菌,并将结果进行比较。结果用SDS和常规方法处理的标本,PCR-反相膜杂交试验结核分支杆菌的检出率分别为65.0%（173/266）和51.5%（136/266）。通过配对计数资料卡方检验,SDS法和常规法之间的差异具有非常显著性意义（χ     

聚合酶链反应检测日本血吸虫DNA的实验研究

目的探索核酸检测在日本血吸虫病诊断中的应用。方法根据日本血吸虫基因设计特异性引物,采用PCR方法对日本血吸虫的成虫、虫卵、日本血吸虫感染家兔的肝组织、粪便、外周血清标本中的DNA进行扩增,并将虫卵和粪便的模板DNA倍比稀释后进行扩增,以测定PCR扩增法的敏感性。结果从日本血吸虫的成虫、虫卵、日本血吸虫感染家兔的肝组织、粪便和外周血清中均扩增到分子量为230bp的阳性条带,扩增产物经测序并在基因库中匹配,证实为日本血吸虫基因中的一个片段,其同源性为98%。其PCR扩增敏感性检测结果表明,0.021个虫卵DNA模板即可扩增出该特异性阳性条带。结论聚合酶链反应检测日本血吸虫DNA有较高的敏感性,尤其是能从日本血吸虫感染宿主血清中检测出特异性DNA,具有潜在的诊断应用价值。     

聚合酶链反应技术检测旋毛虫DNA的实验研究

目　的　建立敏感、特异、稳定的聚合酶链反应 (PCR)法 ,以检测旋毛虫病。方法　采用PCR法 ,选择与合成引物并确立最佳扩增条件 ,比较不同的提取DNA方法 ,检测血浆中旋毛虫幼虫。结果　经扩增于 5 0 0bp、6 70bp、12 0 0bp出现特异性片段 ,与原选择的编码基因片段大小相同 ,此特异片段与溶组织内阿米巴、日本血吸虫DNA无交叉反应 ,不同的DNA提取法结果显示 :用裂解煮沸法同样可从仅含 1条旋毛虫幼虫的 2 5 μl正常小鼠血浆中扩增出特异性片段。 结论　PCR法检测旋毛虫敏感高、特异强 ,提示本法可进一步用于人与畜旋毛虫感染的早期诊断与监测     

聚合酶链反应检测痰及胸水结核杆菌的研究

聚合酶链反应检测痰及胸水结核杆菌的研究江苏省南京市第一医院２１０００６时宏珍，王书奎，王自正，陶惠芸，胡孤星我们应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对临床结核病患者的痰及胸水结核杆菌核酸（ＤＮＡ）进行检测，同时与细菌学检查结果（直接涂片及细菌培养）进行比较...     

改良聚合酶链反应检测HBV共价闭合环状DNA

目的:建立一种基于聚合酶链反应(PCR)的简便快速、具有较高敏感性和特异性的检测乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)的方法.方法:分别提取HepG2.2.15细胞内的cccDNA及培养上清中的松驰环DNA(rcDNA)样品,试剂盒纯化;设计2对特异性引物,其扩增区域跨越rcDNA单链区;设计2对非特异性引物,扩增区域位于rcDNA双链区.经单链特异性绿豆芽核酸酶(MBN)分别消化cccDNA及rcDNA样品;以特异性引物和非特异性引物对消化前后的两种样品分别进行PCR扩增,并改变PCR扩增参数如底物数量、循环次数等,观察特异性引物能否顺利扩增消化后的cccDNA,同时又不扩增消化后的rcDNA.HBV基因组质粒样品作为对照.此外还采用实际乙型肝炎患者体内病毒样本检验此策略的实用性.结果:分别以非特异性引物和特异性引物扩增不同模板数的HBVrcDNA样品,2对非特异性引物可扩增出模板数在102以上的HBVrcDNA样品,2对cccDNA特异性引物也可以扩增出模板数在104以上的样品.特异性引物在PCR反应模板数较多时将不能区分消化前的rcDNA和cccDNA.不同数量HBVcccDNA和rcDNA模板在MBN消化前后,分别应用非特异性引物和特异性引物进行PCR扩增,发现不同数量的cccDNA模板分子经过MBN消化后,仍可用特异性引物和非特异性引物扩增出相应条带;rcDNA样品经过MBN消化后,非特异性引物可扩增出产物条带,而特异性引物无法扩增出条带.采用此种策略,我们发现慢性乙肝患者血清HBV核酸样品主要成份为rcDNA,并带有少量cccDNA,而肝细胞内HBV核酸样品富含cccDNA,与实际情况一致.结论:联合应用MBN选择性消化和cccDNA特异性引物的PCR检测法简便快速,敏感性和特异性均较满意.     

聚合酶链反应检测衣原体

聚合酶链反应检测衣原体曹爱琴，陈雷，计雪文检测衣原体有直接涂片法及培养法，但前者阳性率低，后者则繁琐费时。我们建立了聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测衣原体的方法并对１００例患者和５０例体检者进行检测，同时与直接涂片法及免疫荧光法对比，现报告如下：材料与方法...