靶向超声介导VEGF基因转染防止血管再狭窄的实验研究

目的 探讨超声造影剂SonoVue携带血管内皮生长因子(VEGF)基因靶向释放、转染损伤血管防止其再狭窄的可行性.方法 构建真核表达质粒pCDNA3.1(-)/hVEGF165.建立兔股动脉的球囊损伤模型并随机分为两组:损伤后不干预的对照组;损伤后血管腔内注射携带VEGF基因质粒的造影剂并行超声辐照的实验组.4周后取损伤处血管,HE染色计算血管内膜/中膜面积比值,免疫组化及Western Blot了解血管壁平滑肌细胞的增殖情况和VEGF的表达.结果 实验组的血管内膜/中膜面积比值显著低于对照组(P<0.05),免疫组化显示实验组血管壁平滑肌细胞增殖核抗原(PCNA)表达明显减低,同时可见大量VEGF阳性反应的棕褐色颗粒,Western Blot提示实验组VEGF的表达量明显高于对照组(P<0.05).结论 超声介导的靶向释放可以实现VEGF基因的有效转染,减轻损伤内膜的病理增生,有效阻止血管再狭窄发生,提示靶向超声可以为防止血管再狭窄的基因治疗提供新途径.     

超声靶向破坏阳离子微泡介导SDF-1α基因转染提高外源性血管新生效应的研究

目的通过证实超声介导阳离子微泡能显著提高微泡的携基因量及体内转染后的血管新生效应来探讨阳离子微泡作为基因载体的价值。方法紫外分光光度法检测阳离子微泡与声诺维微泡在体外的基因携带效率。构建兔子急性心肌梗死模型并分组:阳离子微泡组(超声靶向破坏携SDF-1α基因的阳离子微泡并进行转染)、声诺维微泡组(超声靶向破坏携SDF-1α基因的声诺维微泡并进行转染)和对照组(不进行转染)。转染后3 d后3组各取3只兔子处死,ELISA检测目的基因蛋白表达情况;转染后4周行超声心动图和心肌超声造影,检测兔子心功能及心肌灌注情况,之后全部处死,免疫组化检测心肌血管新生效应。结果阳离子微泡组基因携带率是声诺维微泡组的11倍。阳离子微泡组SDF-1α蛋白表达是声诺维微泡组的4倍,对照组的9倍。阳离子微泡组在心肌毛细血管新生效应、心肌血流灌注和心功能方面均优于声诺维微泡组和对照组(P<0.05)。结论阳离子微泡能明显提高在体外的基因携带效率,从而使体内转染效率增强,更好地促进心肌血管新生,是一种高效的基因载体。     

超声微泡造影剂对心肌组织的生物学效应及介导VEGF基因转染大鼠心肌的实验研究

目的 探讨超声微泡造影剂对心肌组织的生物学效应及其介导VEGF基因转染大鼠心肌的有效性。方法 18只健康雄性Wistar大鼠，取3只采用超声波在鼠胸壁破坏微泡造影剂，观察对心肌组织显微结构的影响。将另15只急性心肌梗死3天后的雄性Wistar大鼠分为3组，每组5只。第一组采用超声破坏微泡造影剂的方式，将pcDzVEGFm基因转染大鼠心肌至造影剂不再显影(约6min)；第二组尾静脉输入同等剂量携pcD。VEGF。基因的造影剂；第三组为对照。2周后，取缺血心肌组织行VEGF免疫组织化学染色，观察心肌组织血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达情况。结果超声波破坏微泡造影剂能使心肌组织充血，产生大量空泡，并有部分心肌细胞坏死。采用超声微泡造影剂介导的VEGF基因转染，能明显增强大鼠心肌组织VEGF蛋白的表达。结论 超声微泡造影剂能明显增强对组织的空化效应，其介导的VEGF基因治疗是一种无创、新型、高效的基因转移方法。     

超声破坏微泡促进骨骼肌血管新生的实验研究

目的　探讨超声破坏微泡引起的微血管破裂促进大鼠骨骼肌血管新生的有效性。方法　将 30只 Wistatr大鼠随机分为 3组 ,1组经静脉输入自制的白蛋白微泡造影剂 0 .5 ml,同时用 1MHz,2 .0 W/cm2 的超声在其骨骼肌局部间歇作用 2 min;1组仅在骨骼肌局部用同等的超声能量作用 ;第 3组作为对照组。实验结束后 ,各组分别取 1只做石蜡切片观察显微结构的变化。各组剩余的大鼠于 2周后处死 ,免疫组化观察骨骼肌中血管内皮生长因子 (VEGF)和血管内皮细胞 因子的表达。结果　超声破坏微泡组大鼠骨骼肌中可见 VEGF和 因子的表达较多 ,有较多的新生血管生成 ;而单纯超声作用组 VEGF和 因子表达较少 ,血管新生不明显 ;对照组中无 VEGF和 因子表达 ,无新生血管。结论　超声破坏微泡引起的微血管破裂可刺激骨骼肌中内源性 VEGF的分泌 ,促进血管生成。     

超声破坏微泡造影剂促进大鼠心肌血管新生的实验研究

目的探讨超声破坏微泡刺激大鼠心肌内源性VEGF分泌、促进血管生成的新途径。方法正常成年Wistar大鼠30只随机分为3组。第1组超声破坏微泡组，第2组单纯超声辐照组，第3组对照组。每组均进行3次处理。第一次处理3d后每组各取1只大鼠断颈处死后取其心肌，常规HE染色光镜观察心肌结构变化。剩余大鼠于2周后取材，免疫组化检测心肌组织中VEGF表达，CD34免疫组化检测评定超声破坏微泡促进心肌血管新生疗效。结果超声破坏微泡组心肌组织中见大量VEGF和CD34表达，新生血管较多。单纯超声组心肌组织中有较少VEGF和CD34表达，新生血管较少。对照组仅有极少量VEGF和CD34表达，未见明显新生血管。结论超声破坏微泡可刺激心肌内源性VEGF分泌，促进血管新生。     

超声造影剂介导血管内皮生长因子基因治疗心肌缺血的实验研究

目的探讨超声破坏造影剂微泡介导血管内皮生长因子(VEGF)基因转染兔缺血心肌的有效性。方法新西兰白兔48只，结扎兔冠状动脉左旋支，建立急性心肌梗死模型。术后3d，经胸超声检查左室壁运动情况，明确心肌缺血区域，然后将VEGF真核表达质粒与新型超声造影剂JD-95混合后，经耳缘静脉输入兔体内，同时进行超声实时造影成像，照射心脏缺血区。其他对照组包括超声和造影剂组、单独基因组、基因和超声组、基因和造影剂组以及空白对照组。术后17d处死动物，取动物缺血心肌、肝、肾及下肢骨骼肌组织，用免疫组化方法检测VEGF蛋白表达。结果在超声破坏造影剂微泡介导基因转染的实验组中5只兔的缺血心肌中VEGF蛋白的表达，2只兔肾有VEGF表达。而其他对照组中无VEGF蛋白表达。结论超声破坏造影剂微气泡的方法是将体外生物活性物质传递至心肌中的一种有效途径。     

载自杀基因的靶向微泡联合超声抑制视网膜母细胞瘤的实验研究

目的 探讨载自杀基因的靶向微泡联合超声对视网膜母细胞瘤（RB）的抑制作用。方法 制备携带单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶（HSV1-tk）质粒和VEGFR2抗体的靶向微泡,分为空白对照组、细胞+质粒组、细胞+质粒+SonoVue组、细胞+靶向微泡组、细胞+质粒+超声辐照组、细胞+质粒+SonoVue+超声辐照组和细胞+靶向微泡+超声辐照组进行实验。荧光显微镜观察基因转染情况,流式细胞仪检测转染率,加入丙氧鸟苷（GCV）后,检测细胞的抑制率。结果 细胞+靶向微泡+超声辐照组的转染率为（24.78±1.04）%,较细胞+质粒+SonoVue+超声辐照组（14.31±0.69）%高。随着GCV浓度的增加,培养时间的延长,各组的抑制率逐渐升高。当GCV浓度在100 mg/l,培养96h后,细胞+靶向微泡+超声辐照组对RB细胞的抑制率达（92.91±1.71）%。结论 在加入GCV后,携带HSV1–tk的靶向微泡联合超声能有效的抑制RB细胞。     

超声介导脂膜微泡靶向传输绿色荧光蛋白基因的体内实验研究

目的探讨超声（US）对裸鼠人宫颈癌（Hela）皮下移植瘤绿色荧光蛋白（EGFP）基因传输和定位的作用以及脂膜微泡（LSMB）对转染的增强作用。方法将LSMB和质粒经裸鼠尾静脉注入,并予以超声辐照（LSMB＋US）,辐照条件为：2.0W/cm^2,20%占空比,2min,以仅质粒注射（P）、质粒注射加超声辐照（US＋P）、LSMB和质粒注射（LSMB＋P）作为对照,行冰冻切片和组织学检查,通过荧光评分评估EGFP表达,并对表达持续时间和靶向性进行分析。结果注射质粒和LSMB联合超声辐照可明显增加基因转染效率,LSMB＋US组的裸鼠皮下移植瘤内有显著的EGFP表达,均高于P组、US＋P组或LSMB＋P组（P〈0.01）;基因表达的最佳时间是第3天（P〈0.01）;无论有否超声照射,裸鼠其他器官组织中均无明显的EGFP表达,且未观察到明显的组织损伤。结论超声辐照联合LSMB和质粒注射的方法能显著增加裸鼠移植瘤的基因转染,而无明显的副作用,是一种高效的非病毒基因传输方法,为目前的基因治疗提供新思路。     

抗内皮细胞黏附分子-1靶向微泡介导hAng-1基因转染治疗兔心肌缺血的实验研究

目的 探讨应用抗心肌内皮细胞粘附分子-1（ICAM-1）靶向微泡能否提高血管生成素-1基因在缺血心肌中的转染效率.方法 体外实验检测抗ICAM-1靶向微泡与经人白细胞介素-1β刺激后的ECV304细胞结合的程度.体内实验分三组：①对照组：hAng-1基因＋超声照射;②非靶向微泡组：携hAng-1基因微泡＋超声照射;③靶向微泡组：携hAng-1基因的抗ICAM-1靶向微泡＋超声照射.制作兔急性心梗模型,分别用上述三种方法从静脉导入hAng-1基因.2周后心肌造影检测梗死心肌灌注状况聚合酶链反应（RT-PCR）检测hAng-1基因的mRNA表达以评价转染疗效.结果 携抗ICAM-1抗体的微泡在体外能大量靶向结合到产生炎性反应的ECV304细胞周边.应用靶向微泡转染2周后,左室内径减小,射血分数升高,但与非靶向微泡比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,而心肌造影显示心肌内造影剂填充量较非靶向微泡组增多,且 RT-PCR定量灰度分析hAng-1mRNA（1.04±0.08）高于非靶向微泡组（0.53±0.04）,差异有统计学意义（P〈0.01）.结论 微泡与抗ICAM-1抗体连接后形成靶向微泡载体,可明显提高hAng-1基因在体内的转染效率,增加心肌梗死后局部的血管新生效应.     

超声微泡介导碱性成纤维细胞生长因子基因转染鼠缺血心肌的实验研究

目的 探讨超声激活携基因微泡对外源基因在梗死心肌组织中表达的影响及治疗性血管新生在鼠心梗模型中的可行性研究.方法 采用心肌内注射途径,超声激活携基因微泡组注射携碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)基因微泡后进行超声辐照,单纯基因组和对照组分别注射等量bFGF基因质粒和生理盐水.4周后观察基因表达和促血管新生效应.结果 与单纯基因治疗组相比超声激活携基因微泡组荧光强度和bFGF mRNA表达水平显著提高(P<0.05),且血管新生更明显(P<0.05).结论 超声激活携基因微泡可明显提高bFGF基因在鼠活体心肌的表达,促进血管新生.     

超声靶向微泡破碎和生物可降解纳米粒

目的 探讨超声靶向微泡破碎(UTMD)的物理靶向和纳米粒的生物靶向联合的双靶向方法细胞内递送siRNAs的效果.方法 制备RGD和非RGD生物可降解纳米粒;L16(45)正交设计筛选超声、微泡、纳米粒的优化参数;实验分成优化参数组、RGD纳米粒组、非RGD纳米粒组和空白对照组;倒置荧光显微镜和流式细胞仪观察并检测分子探针Cy3标记的siRNAs在细胞内的摄取.结果 RGD纳米粒组的细胞摄取率和荧光强度分别为(93.49±1.37)%和34.28±2.06,优化参数组的细胞摄取率和荧光强度分别为(88.33±1.24)%和30.59±3.93,两组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).非RGD纳米粒组的细胞摄取率和荧光强度分别为(71.24±2.80)%和18.39±0.90,优化参数组的细胞摄取率和荧光强度分别为(84.78±2.13)%和27.18±0.91,两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 UTMD物理靶向和纳米粒生物靶向联合的双靶向方法不能提高siRNAs的细胞内递送.

Abstract：

Objective To investigate the intracellular delivery of siRNAs through the applications of ultrasound targeted microbubbles destruction(UTMD)and biodegradable nanoparticles carriers.Methods Preparation of nanoparticles with and without RGD sequences,parameters optimization via L16(45)orthogonal design,control experiments in groups of optimization,RGD targeted nanoparticles,non-RGD nanoparticles and blank control, and determinations by inverted fluorescence microscope and flow cytometry were performed.Results The uptake and fluorescence intensity of PC-3 cells in group of RGD targeted nanoparticle was (93.49±1.37)% and 34.28±2.06 respectively,and that in group of optimization was (88.33±1.24)% and 30.59±3.93 respectively(P＞0.05).Whereas the uptake and fluorescence intensity of PC-3 cells in group of non-RGD nanoparticles was(71.24±2.80)% and 18.39±0.90 respectively,and that in group of optimization was (84.78±2.13)% and 27.18±0.91 respectively(P＜0.05).ConclusionsThe applications of UTMD with RGD targted nanoparticles cannot increase the intracellular delivery of siRNAs.     

超声微气泡介导cy5ODN转染大鼠肾的研究

目的：探讨超声联合脂质体微气泡介导寡核苷酸cy5ODN靶向转染肾的有效性和安全性。方法：健康雄性Wistar大鼠30只，分为对照组、单纯cy5ODN组、造影剂＋cy5ODN组、超声＋cy5ODN组和超声＋造影剂＋cy5ODN组。予以实验刺激后，7d取肾组织检测荧光表达，光镜下观察肾组织病理改变，以评价该方法的副作用。结果：超声＋造影剂＋cy5ODN组cy5ODN基因转染率显著高于其余各组，实验各组均未见到明显肾小球损害。结论：超声联合类脂质体微泡能显著增强基因在肾组织的转染效率，可望为肾疾病的基因治疗提供一种新的安全、有效的转导方法。     

Experimental research on therapeutic angiogenesis induced by hepatocyte growth factor directed by ultrasound-targeted microbubble destruction in rats.

OBJECTIVE: The purpose of this study was to explore the feasibility of therapeutic angiogenesis in myocardial infarction induced by hepatocyte growth factor (HGF) mediated by ultrasound-targeted microbubble destruction. METHODS: Forty Wistar rats were divided into 4 groups after the models of myocardial infarction were prepared: (1) HGF, ultrasound, and microbubbles (HGF+US/MB), (2) HGF and ultrasound, (3) HGF and microbubbles, and (4) surgery alone. Destruction of ultrasound-targeted microbubbles loaded with the HGF gene with an electrocardiographic trigger mode was performed in the HGF+US/MB group. All the rats were killed after being transfected for 14 days. Enhanced green fluorescent protein expression was examined in the myocardium, liver, and kidney in all groups by fluorescence microscopy; CD34 expression was detected by immunohistochemistry, and microvessel density (MVD) was counted in the high-power field on microscopy. Hepatocyte growth factor expression in the myocardium was detected by western blotting and an enzyme-linked immunosorbent assay. RESULTS: Enhanced green fluorescent protein expression was detected in the myocardium of the HGF+US/MB group, but a few areas of HGF expression were detected only in small vessels and the capillary endothelium, and no expression was found in the surgery-alone and HGF and microbubbles groups. The results of MVD counting by microscopy showed that the MVD in the myocardium of the HGF+US/MB group was the highest among all the groups. The results of western blotting and the enzyme-linked immunosorbent assay showed that the amount of HGF in the myocardium was highest in the HGF+US/MB group. CONCLUSIONS: Ultrasound-targeted microbubble destruction could deliver HGF into the infracted myocardium and produce an angiogenesis effect, which could provide a novel strategy for gene therapy of myocardial infarction.     

载基因微泡介导β-galactosidase质粒转染心肌细胞的对照研究

目的　观察不同的载基因微泡介导体外培养心肌细胞报告基因转染与表达,探讨微泡性质 与浓度在超声破裂微泡介导基因转染过程中的效应。方法　以β galactosidase质粒为报告基因,制备两 种不同性质的载基因微泡,利用诊断性超声破裂微泡进行体外心肌细胞基因转染,测定β galactosidase表 达水平并进行细胞活性检测。结果　超声载基因破裂氟烷气体微泡(PESDA)转染组心肌细胞β galactosidase表达约为单纯质粒转染组80倍(P<0.01),并在一定范围内随微泡浓度增加而增高。超声 破裂载基因PESDA转染组基因表达水平明显高于超声破裂载基因声振白蛋白微泡(ASDA)转染组(P< 0.05),而两组对细胞活性影响却无明显差异(P>0.05)。结论　超声微泡性质及浓度对超声破裂微泡介 导基因转染效率具有重要影响,低能量诊断性超声破裂载基因PESDA较超声破裂载基因ASDA能更为 有效地介导基因转染,是一种安全高效的基因传输方法。     

超声爆破微泡介导内皮抑素基因抑制兔颈动脉粥样硬化的实验研究

目的 探讨利用超声爆破微泡介导内皮抑素(endostatin,ES)基因转染对兔颈动脉粥样硬化斑块内新生血管及斑块生长的抑制作用.方法 20只颈动脉粥样硬化模型兔随机分为三组:A组,微泡+超声;B组,对照质粒+微泡+超声;C组,ES质粒+微泡+超声.建模2周行超声爆破微泡介导基因转染,间隔3周时重复转染1次.建模14周时行超声及数字减影血管造影(DSA)检查,病理检测病变血管新生内膜、斑块内新生血管及ES表达情况.结果 超声显示A组和B组内膜明显增厚,斑块较大,管腔明显狭窄,收缩期峰值流速(PSV)增加,C组上述指标明显较A组和B组低(P＜0.05).病理检测C组内中膜厚度(IMT)、内膜厚度(IT)、内中膜厚度比(IT/MT)、内膜面积(IA)、内中膜面积比(IA/MA)及新生内膜狭窄率与A组和B组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).C组颈动脉新生血管及血管内皮生长因子(VEGF)表达均较A组和B组低,内膜及胫前肌可见较多ES表达,而A组和B组无明显ES表达.结论 一定超声辐照条件下,超声爆破微泡介导ES基因转染可抑制兔颈动脉粥样硬化病变的发展,有可能为动脉粥样硬化性疾病的基因治疗提供一种安全有效的方法 .

Abstract：

Objective To explore the inhibition effect on angiogenesis and plaque growth of carotid atherosclerosis by transfection of endostatin gene using microbubbles combined with ultrasound exposure.Methods Twenty rabbit models of carotid atherosclerosis were randomly divided into 3 groups:group A,microbubble+ ultrasound; group B, control plasmid + microbubble + ultrsound; group C, ES plasmid +microbubble+ ultrasound. Two weeks after surgery, ultrasound/microbubble mediated gene transfer was performed,and it was performed once again three weeks after the first transfection. Ultrasonography and digital subtraction angiography(DSA) were performed at the time of 14 weeks. The carotid arteries were taken to detect the neointima and angiogenesis, and the expression of endostatin was detected using pathological means. Results The imagings of ultrasound showed that the intima in group A and B were thick significantly with larger plaques, and the lumen became stenosis with the peak systolic velocity increasing,however,in group C,the parameters mentioned above were significantly less than those of group A and B ( P＜0.05). Pathological results displayed that intima-media thickness (IMT), intima thickness (IT), intima thickness/media thickness (IT/MT), intima area (IA), intima area/media area (IA/MA) and neointimal stenosis rates were greater in group A and B, however, they were less in group C ( P＜0.05).The number of neovascularization and vascular endothelial growth factor(VEGF) expression in group A and B were more than those of group C. There was more endostatin positive expression in carotid arteries and anterior tibial muscles of group C, while there was nearly no expression in group A and B. Conclusions Under the conditioned ultrasonic irradiation, ultrasound/microbubble mediated endostatin gene transfection can inhibit the development of carotid atherosclerosis in rabbits, which might provide a safe and effective strategy for gene therapy of atherosclerotic disease in future.     

低频超声联合微泡影响前列腺癌DU145细胞血管内皮细胞生长因子表达的实验研究

目的探讨低频超声联合微泡对前列腺癌DUl45细胞血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的影响。方法体外培养前列腺癌DUl45细胞,细胞呈对数生长时分为4组进行实验：对照组（细胞悬液1ml）、单纯微泡组（800μl细胞悬液加入200μl微泡剂SonoVue）、单纯低频超声组（1ml细胞悬液以频率80kHz、声强0．45W／cm2超声辐照30S）、低频超声联合微泡组（800μl细胞悬液加入200μl微泡剂SonoVue后立即以频率80kHz、声强0．45W／cm2超声辐照30s）。MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测凋亡率,Western印迹法检测细胞VEGF蛋白的表达。采用单因素方差分析比较对照组、单纯微泡组、单纯低频超声组、低频超声联合微泡组细胞存活率、凋亡率、VEGF蛋白表达量差异,进一步组间两两比较采用SNK-q检验。结果对照组、单纯微泡组、单纯低频超声组、低频超声联合微泡组细胞存活率分别为100％、（96．50±12．49）％、（93．20±5.31）％、（81．30±9．32）％;凋亡率分别为（1．10±0．26）％、（1．78±0．63）％、（5．85±0．45）％、（9．36±0．90）％;VEGF蛋白表达量分别为0．81±0．05、0．79±0．06、0．58±0．04、0．38±0．05。单纯微泡组、单纯低频超声组细胞存活率与对照组比较差异均无统计学意义,低频超声联合微泡组细胞存活率较对照组降低,且差异有统计学意义（q=5．88,P〈0．05）。单纯微泡组细胞凋亡率、VEGF蛋白表达量与对照组比较差异均无统计学意义;单纯低频超声组、低频超声联合微泡组细胞凋亡率均高于对照组,VEGF蛋白表达量均低于对照组,且差异均有统计学意义（q=14．09、24．51、8．06、14．89,P均〈0．05）。低频超声联合微泡组细胞凋亡率高于而VEGF蛋白表达量低于单纯低频超声组,且差异亦均有统计学意义（q=10．42、6．83,P均〈0．05）。结论微泡能增强低频超声抑制前列腺癌DUl45细胞增殖及促进凋亡,其机制可能与其下调前列腺癌DUl45细胞VEGF表达有关。     

超声微泡介导转染FKBP12.6基因对小鼠H9c2(2-1)心肌细胞结构和功能的影响

目的探讨超声微泡介导转染FKBP12.6基因后小鼠H9c2(2-1)心肌细胞结构和功能的变化。方法将pcDNA3.1-FKBP12.6质粒与白蛋白包裹微泡造影剂混合,经超声转染H9c2(2-1)细胞后,通过倒置显微镜和透射电镜观察心肌细胞生长状况和超微结构的变化;荧光显微镜检测细胞内Ca2 浓度的变化;分别用RT-PCR、免疫组织化学检测mRNA、蛋白的表达。结果超声触发微泡破裂转染的FKBP12.6基因可在心肌细胞高效表达,细胞生长良好,蛋白合成活跃。高表达FKBP12.6的心肌细胞中,总的钙离子浓度增加。结论超声微泡介导FKBP12.6基因转染心肌细胞,可以明显改善心肌细胞的结构和功能。     

载基因及穿膜肽脂质超声造影剂制备的实验研究

目的 研究自制的脂质超声造影剂载基因及穿膜肽的能力,评价其物理性质及显影效果.方法 采用机械振荡法制备载基因及穿膜肽的脂质超声造影剂,检测微泡形态、分布、浓度、粒径、表面电位及载基因和穿膜肽的能力,并观察其对兔心脏的显影效果.结果 自制载基因及穿膜肽脂质超声微泡造影剂的粒径为(2.27±0.38)μm,浓度为(3.07±0.42)×109个/ml,表面电位为(1.95±0.13)mV.该造影剂中基因的包封率为32%,穿膜肽的包封率为35%.体内造影显示该造影剂能有效增强心肌显影.结论 自制载基因及穿膜肽脂质超声造影剂符合理想超声造影剂的要求,载基因及穿膜肽的效率高,可作为携带基因等生物活性物质的载体材料.     

携VEGFR2单抗靶向微泡评价小鼠肿瘤新生血管

目的 探讨携带抗血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)单克隆抗体的超声微泡造影剂(MBv)评价小鼠肿瘤新生血管的可行性.方法 以生物素-亲和素桥接法构建MBv.免疫荧光法体外鉴定其性质.建立小鼠H22肿瘤模型,分别注射MBv和普通脂质微泡(MBc)进行超声造影检查.定量分析造影图像视频强度变化,描绘时间-强度曲线,并行肿瘤组织VEGFR2免疫组化检测.结果 成功构建偶联抗小鼠VEGFR2单抗的MBv.造影结果 表明MBv组较MBc组达峰时间提前,峰值较高,持续时间更长.免疫组化证明瘤体内新生血管内壁VEGFR2高度表达.结论 应用MBv结合超声造影可较好地评估肿瘤新生血管状况.MBv是良好的肿瘤靶向造影剂.     

超声介导微泡空化效应对鼠肺微血管内皮细胞膜流动性及细胞骨架的影响

目的 探讨超声介导微泡空化效应对鼠肺微血管内皮细胞膜流动性及细胞骨架的影响.方法 6孔板培养鼠肺微血管内皮细胞,每孔加入20μg质粒EGFP及10%微泡后行超声辐照,辐照方式为连续波,探头频率2 MHz,分别以不同照射时间分组:A组30 s,B组60 s,C组90 8,D组120 s,E组180 s(机械指数均为1.0);对B组再以不同机械指数分组:B1组0.75,B2组1.0,133组1.3,134组1.5,135组1.8(照射时间均为60 s).以激光共聚焦显微镜观察细胞膜荧光恢复评价细胞膜流动性,以免疫荧光法观察细胞微管蛋白、微丝蛋白荧光强度变化.结果 胞膜流动性荧光恢复指数分别为:A组0.173±0.013,B组0.250±0.037,C组0.364±0.022,D组0.381±0.019,E组0.395±0.009(B～E组与A组比较,均P＜0.01);B1组0.171±0.017,B2组0.255±0.026.B3组0.378±0.007,B4组0.382±0.009、B5组0.397±0.008(B2～B5组与B1组比较,均P＜0.01).微管蛋白荧光强度分别为:A组159.15±4.79,B组188.23±6.20,C组205.80±4.48,D组208.99±8.34,E组213.70±5.09(B～E组与A组比较,均P＜0.01),B1组176.84±3.10,B2组187.57±14.52,B3组206.41±11.66,B4组220.12±13.39,B5组221.16±12.78(B2～B5组与B1组比较,均P＜0.01);C、D、E组间两两比较及B3、B4、B5组间两两比较差异均无统计学意义(P＞0.05).不同辐照时间及MI时,微丝蛋白荧光强度差异无统计学意义.结论 超声介导微泡空化在一定能量模式下可引起细胞膜流动性及微管蛋白荧光改变,此效应可能是超声及微泡促基因转染机制之一.