siRNA沉默MACC1基因表达对宫颈癌细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨siRNA沉默结肠癌转移相关基因1(MACC1)表达对Hela宫颈癌细胞增殖及侵袭的影响。方法通过脂质体将siRNA MACC1及siRNA NC转入Hela细胞中,RT-PCR及western blot检测转染效果,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell法检测细胞侵袭能力,western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、cyclin E,基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9蛋白表达及细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化水平。结果与siRNA NC组比较,siRNA MACC1组中MACC1蛋白及mRNA表达量降低(P0.01),细胞活力及侵袭能力下降(P0.01),细胞周期阻滞在G1期,cyclin D1、cyclin E、MMP2、MMP9及p-ERK表达量下调(P0.01)。结论siRNA MACC1能显著的抑制宫颈癌Hela细胞增殖与侵袭,可能与下调ERK磷酸化水平有关。     

siRNA沉默Msi1表达对宫颈癌Hela细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨siRNA沉默Msi1基因表达对人宫颈癌Hela细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法针对Msi1基因mRNA序列设计合成siRNA,转染人宫颈癌Hela细胞;实验分Msi1siRNA组、空白对照组、脂质体组及阴性对照组;通过RT-PCR法检测Msi1基因在mRNA水平的表达;分别利用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色试验、群体倍增时间及平皿克隆实验分析干扰Msi1基因对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制效应;通过细胞划痕实验观察干扰Msi1对细胞迁移能力的影响;利用Transwell小室实验观察干扰Msi1对细胞侵袭能力的影响。结果Msi1siRNA能有效抑制人宫颈癌Hela细胞中Msi1基因的表达;Msi1siRNA转染Hela细胞24、48、72h后,与其他各组比较,Msi1siRNA组Hela细胞的生长、增殖速度明显减缓（均P＜0.05）。空白对照组Hela细胞群体倍增时间为（20.18±0.01）h,而干扰Msi1基因处理后的Hela细胞,群体倍增时间延长至（35.68±0.04）h（P＜0.05）;同时平皿克隆实验结果发现,Msi1siRNA处理后的Hela细胞与其他各组相比,Hela细胞生长明显减慢（均P＜0.05）;细胞划痕实验和Transwell小室实验分别显示处理后的Hela细胞其迁移和侵袭能力均明显下降,与其他各组相比差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论沉默Msi1基因表达对人宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移及侵袭有负性调节作用。     

CSF-1R在鼻咽癌细胞株中的表达情况及对细胞增殖、凋亡、侵袭转移能力的影响

目的 研究集落刺激因子1 受体(colony-stimulating factor 1 receptor,CSF-1R)在鼻咽癌中的表达,并对其功能进行初步探讨。方法 培养5-8F、6-10B、CNE-2、NP69细胞株,用实时荧光定量PCR 和Western blot法检测4种细胞株中CSF-1R的表达情况,通过比较5-8F、6-10B、CNE-2 鼻咽癌细胞株与NP69 正常鼻咽上皮细胞株中CSF-1R 的表达,筛选出CSF-1R 高表达细胞株和低表达细胞株;通过实时荧光定量PCR 检测两种细胞株的增殖因子Cyclin D1、凋亡因子Bcl-2和Bax、侵袭转移因子MMP-2 的mRNA 表达情况,分析CSF-1R 的表达与鼻咽癌预后的关系。结果 5-8F 鼻咽癌细胞株中CSF-1R 呈现高表达水平(P=0.000),6-10B 鼻咽癌细胞株中CSF-1R 呈现低表达水平(P=0.000、P=0.370),CNE-2鼻咽癌细胞株中CSF-1R 的表达与正常鼻咽上皮细胞株差异无统计学意义(P=0.057、P=0.481)。CSF-1R 高表达细胞株5-8F 的增殖、侵袭转移能力明显强于CSF-1R 低表达细胞株6-10B(P均=0.000),而凋亡能力则弱于6-10B细胞株(P=0.000)。结论 鼻咽癌细胞与正常鼻上皮细胞株之间CSF-1R的表达差异有统计学意义。CSF-1R 的表达与细胞增殖因子Cyclin D1、凋亡因子Bcl-2 及BAX、侵袭转移因子MMP-2 的表达有一定的相关性,CSF-1R 表达水平越高,细胞的增殖、侵袭转移能力越强,凋亡能力越弱。     

DHA对宫颈癌细胞株凋亡、侵袭和转移的影响

目的探讨多不饱和脂肪酸DHA对宫颈癌细胞（HeLa、Siha）凋亡、迁移侵袭的影响。方法HeLa、Siha细胞,分为空白对照 组、不同浓度DHA组,观察不同药物浓度作用于宫颈癌细胞后的形态学改变,Hoechst 33258染色检测48 h后细胞核凋亡情况; MTT法检测DHA作用于宫颈癌细胞24、48、72 h后的细胞凋亡情况;流式细胞仪检测不同浓度DHA作用于宫颈癌细胞48 h后 的凋亡率;细胞划痕实验和Transwell 迁移实验检测不同浓度DHA对宫颈癌细胞体外迁移能力的影响;Western Blotting检测 DHA刺激细胞48 h 后凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、cleaved-caspase3）及肿瘤转移侵袭相关蛋白MMP-9、VEGF表达情况。结果 倒置显微镜下及经Hoechst33258染色后,随着DHA浓度增加,宫颈癌细胞形态改变越明显,凋亡小体增多;MTT结果显示DHA 呈时间-浓度依赖性抑制宫颈癌细胞增殖,促进其凋亡;细胞划痕实验和transwell迁移实验提示DHA作用于细胞后,浓度越高, 对细胞的体外迁移能力的抑制作用越强;Western Blotting 显示DHA作用于细胞48 h 后,cleaved-caspase3、Bax蛋白表达增加 （P<0.05）,而Bcl-2、MMP-9、VEGF 蛋白表达下降（P<0.05）,Bcl-2/Bax 比值下降（P<0.05）。结论DHA 可通过调控 cleaved-caspase3、Bax及Bcl-2表达,促进宫颈癌细胞凋亡的作用并能通过降低MMP-9、VEGF的表达抑制宫颈癌细胞的迁移和 侵袭。     

KAI1基因对宫颈癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨肿瘤转移抑制基因KAI1对宫颈癌CaSki细胞体外增殖和侵袭能力的影响.方法 通过脂质体转染技术,将真核表达质粒pCMV-KAI1导入低表达的宫颈癌CaSki细胞,免疫组化及实时荧光定量RT-PCR法检测转染前后细胞内KAI1蛋白和mRNA的表达,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及Transwell侵袭力小室测定KAI1基因对细胞增殖能力及侵袭能力的影响.结果 转染目的基因的CaSki细胞中KAI1 mRNA水平及蛋白表达明显增强(P<0.05),细胞体外增殖能力明显弱于未转染组和转染空载体组(P<0.05),细胞穿膜数量明显少于未转染组和转染空载体组(P<0.05).结论 肿瘤转移抑制基因KAI1对宫颈癌细胞体外增殖及侵袭能力有一定抑制作用.     

川芎嗪对宫颈癌细胞增殖和侵袭转移的抑制作用及分子机制

目的 探究川芎嗪(TMP)对人宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法 用含有质量浓度为0、0.25、0.50、1.00和2.00 mg·mL^-1 TMP的培养基处理人宫颈癌SiHa细胞后,用CCK-8法检测细胞增殖能力;用Transwell小室检测细胞侵袭、迁移能力;用蛋白免疫印记法检测细胞内上皮-间质转化(EMT)相关蛋白、基质金属蛋白酶2/7/9(MMP2/7/9)和PI3K/AKT/GSK-3β通路相关蛋白的表达水平。结果 在0.25～2.00 mg·mL^-1浓度范围内,TMP对SiHa细胞的增殖、侵袭和迁移表现出浓度依赖性的抑制作用(P<0.05或P<0.01);与0 mg·mL^-1 TMP处理组相比,0.50、1.00和2.00 mg·mL^-1 TMP处理组细胞内E-Cadherin、PI3K、p-AKT及p-GSK-3β表达水平显著上升,而N-cadherin、Vimentin、β-Catenin和MMP2/7/9的表达水平显著下降(P<0.05或P<0....     

PHF19对宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨PHF19基因对宫颈癌细胞株Hela和HCC94的增殖、侵袭和迁移的影响.方法 培养人宫颈癌Hela细胞和HCC94细胞,用siRNA敲低PHF19基因的表达.RT-qPCR检测不同组细胞中PHF19基因mRNA水平的表达情况.采用CCK-8检测细胞的增殖情况.采用细胞划痕、Transwell实验观察PHF1...     

腺病毒过表达TSLC1对宫颈癌细胞增殖侵袭能力和血管新生能力的影响

目的:研究腺病毒过表达肺癌肿瘤抑制因子-1(tumor suppressor in lung cancer 1,TSLC1)对宫颈癌细胞增殖侵袭能力和血管新生能力的影响。方法:培养Caski宫颈癌细胞株并分为空白对照组、Ad-RFP组、Ad-TSLC1组,分别用不含腺病毒及血清的DMEM、对照腺病毒Ad-RFP、TSLC1过表达的重组腺病毒Ad-TSLC1处理,12、24h后分别测定增殖、侵袭、血管新生基因的表达量。结果:AdTSLC1组细胞内HERC4、CyclinD1、Bcl-2、S100A6、N-cadherin、Snail、Twist、EFEMP1、VEGF、Jagged1的mRNA表达量显著低于空白对照组、Ad-RFP组,Ad-RFP组细胞内HERC4、CyclinD1、Bcl-2、S100A6、N-cadherin、Snail、Twist、EFEMP1、VEGF、Jagged1的mRNA表达量与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:腺病毒过表达TSLC1能够抑制宫颈癌细胞的增殖侵袭及血管新生。     

miR-324-3P对宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移的作用及其机制研究

背景 miR-324-3P在多种恶性肿瘤中发挥着重要作用,调控Wnt/β-catenin信号通路可能是其参与肿瘤进展的重要途径,miR-324-3P在宫颈癌中的具体作用尚不清楚.目的 研究miR-324-3P对宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移的作用及其机制.方法 收集入住我院宫颈癌患者的宫颈癌组织和正常宫颈组织各40例,Ta...     

MiR-218在宫颈癌组织中的表达及对HeLa细胞凋亡及转移的影响

目的 探讨miR-218在宫颈癌组织中的表达,以及对宫颈癌HeLa细胞凋亡及迁移的影响。方法 采用qRT-PCR检测23 例正常子宫颈组织和114 例宫颈癌组织中miR-218 mRNA的表达,分析与临床病理特征的关系;HeLa细胞分为3组:对照组（细胞不转染）、转染空脂质体阴性对照组(NC组)和 转染miR-218类似物 (miR-218M组)。MTT检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移; qRT-PCR和Western blot分别检测Bcl-2、Bax、NF-κB和E-cadherin mRNA和蛋白表达。结果 miR-218 mRNA在宫颈癌组织中表达下调,在宫颈癌不同病理类型、分期分级、有无淋巴结转移及间质浸润深度间表达差异有统计学意义（P Bax mRNA和蛋白表达水平上调, E-cadherin mRNA和蛋白表达上调,NF-κB mRNA和蛋白表达下调。结论 MiR-218低表达可能与宫颈癌的病理分级分期等生物学行为有关,上调miR-218表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞侵袭转移。     

SphK1与食管癌侵袭和转移的关系

目的 探讨鞘氨醇激酶1(SphKl)通路在食管癌侵袭和转移中的作用及临床意义。方法 采用Real-time PCR和Western blot检测SphKl在食管癌组织中的表达,设计构建SphKl靶向shRNA质粒,建立SphKl稳定沉默的细胞系。MTT和Transwell法检测SphKl基因沉默对EC-1细胞增殖、侵袭的影响,明胶酶谱检测其对基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和MMP-2分泌的影响。结果 SphKl的mRNA和蛋白质表达水平与侵袭能力明显相关。SphKl-siRNA能显著抑制EC-1细胞的增殖和侵袭,并能显著抑制EC-1细胞的MMP-9和MMP-2蛋白分泌。结论 SphKl与食管癌侵袭和转移关系密切,转染靶向SphKl基因的siRNA序列能够抑制食管癌EC-1细胞的增殖和侵袭,其机制与抑制MMP-9和MMP-2蛋白分泌密切相关。     

Ebp1的表达对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究降低Ebp1的基因表达水平对乳腺癌细胞T47D野生型增殖能力和侵袭能力的影响。方法:转染并筛选Ebp1降表达的单克隆细胞株clone1,clone2,clone3,阴性对照组命名为control。应用小干扰RNA技术降低Ebp1的表达,采用Western blotting技术检测Ebp1蛋白水平的变化,噻唑蓝（MTT）比色法和克隆形成实验观察其对T47D野生型细胞增殖能力和克隆形成能力的影响;采用Matrigel侵袭实验研究其对细胞侵袭能力的影响。结果:Western blotting检测表明siRNA干扰后T47D野生型细胞中Ebp1的蛋白表达水平明显下降,且与亲本和control组细胞比较,Ebp1降表达的细胞克隆的增殖能力和侵袭能力明显增强,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:Ebp1表达下降可以明显促进乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力,提示Ebp1可能是乳腺癌增殖和侵袭的抑制性因子。     

Ebp1的表达对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究降低Ebp1的基因表达水平对乳腺癌细胞T47D野生型增殖能力和侵袭能力的影响。方法:转染并筛选Ebp1降表达的单克隆细胞株clone1,clone2,clone3,阴性对照组命名为control。应用小干扰RNA技术降低Ebp1的表达,采用Western blotting技术检测Ebp1蛋白水平的变化,噻唑蓝（MTT）比色法和克隆形成实验观察其对T47D野生型细胞增殖能力和克隆形成能力的影响;采用Matrigel侵袭实验研究其对细胞侵袭能力的影响。结果:Western blotting检测表明siRNA干扰后T47D野生型细胞中Ebp1的蛋白表达水平明显下降,且与亲本和control组细胞比较,Ebp1降表达的细胞克隆的增殖能力和侵袭能力明显增强,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:Ebp1表达下降可以明显促进乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力,提示Ebp1可能是乳腺癌增殖和侵袭的抑制性因子。     

姜黄素对人宫颈癌细胞Caski侵袭转移的影响

 【目的】 研究姜黄素对人宫颈癌细胞Caski侵袭转移的影响并探讨其可能的机制。【方法】 以10, 25, 50 μmol/L姜黄素处理Caski细胞24,48,72 h后,MTT法检测其对Caski细胞的生长抑制作用。应用Transwell小室进行人工重组基底膜(Matrigel)侵袭和运动实验,观察姜黄素对Caski细胞侵袭和转移的影响。Western blot检测细胞中MMP-2。MT1-MMP和NF-κB蛋白水平变化。 【结果】应用姜黄素处理后人宫颈癌细胞生长受到抑制且作用呈时效-量效依赖关系;同时细胞侵袭和迁移能力明显降低;MMP-2, MT1-MMP 和 NF-κB 蛋白的表达均明显减弱。【结论】 姜黄素能够减弱人宫颈癌细胞Caski的侵袭和转移,其机制可能与降低MMP-2, MT1-MMP and NF-κB的表达有关。     

姜黄素对人宫颈癌细胞Caski侵袭转移的影响

【目的】研究姜黄素对人宫颈癌细胞Caski侵袭转移的影响并探讨其可能的机制。【方法】以10,25,50μmol/L姜黄素处理Caski细胞24,48,72h后,MTT法检测其对Caski细胞的生长抑制作用。应用Transwell小室进行人工重组基底膜（Matrigel）侵袭和运动实验,观察姜黄素对Caski细胞侵袭和转移的影响。Westernblot检测细胞中MMP-2、MT1-MMP和NF-κB蛋白水平变化。【结果】应用姜黄素处理后人宫颈癌细胞生长受到抑制且作用呈时效-量效依赖关系;同时细胞侵袭和迁移能力明显降低;MMP-2,MT1-MMP和NF-κB蛋白的表达均明显减弱。【结论】姜黄素能够减弱人宫颈癌细胞Caski的侵袭和转移,其机制可能与降低MMP-2,MT1-MMPandNF-κB的表达有关。     

MTA1基因对宫颈癌细胞HeLa侵袭转移的影响

目的 探索MTA1基因与宫颈癌细胞HeLa侵袭迁移能力的关系.方法 以脂质体LipofectamineTM2000介导的方法将含有MTA1全长基因的质粒pEGFP-C1/MTA1转染HeLa细胞,应用Western blotting检测转染效果,细胞黏附实验检测细胞黏附能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化,Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 MTA1质粒转染的宫颈癌HeLa细胞中,MTA1蛋白的表达、黏附能力、迁移及侵袭能力均明显高于转染空载体组及未转染组(P<0.05).结论 MTA1基因与宫颈癌细胞的侵袭迁移能力有关,MTA1基因可能成为宫颈癌治疗的一个新的靶点.     

UCH37与MARCH8表达对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的分析泛素羧基末端水解酶37(UCH37)、膜相关RINpCH 8(MARCH8)对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。 方法将Hela细胞分为si-NC组、si-UCH37组和si-MARCH8组,利用siRNA技术在Hela细胞中沉默UCH37、MARCH8基因。CCK-8法检测细胞增殖能力。Transwell检测细胞迁移和侵袭能力。qRT-PCR检测细胞UCH37、MARCH8 mRNA表达水平。Western blotting检测细胞UCH37、MARCH8蛋白水平。 结果宫颈癌Hela细胞UCH37、MARCH8 mRNA和蛋白水平明显高于人正常宫颈上皮HUCEC细胞(P＜0.05)。与si-NC组比较,si-UCH37组UCH37和si-MARCH8组MARCH8的mRNA和蛋白水平均降低;si-UCH37组和si-MARCH8组细胞增殖活性、迁移细胞数量、侵袭细胞数量均减少(P＜0.05)。 结论UCH37和MARCH8在宫颈癌细胞中高表达,干扰其表达后可抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

阿可拉定的有关物质研究

目的 分离纯化阿可拉定（淫羊藿苷,IC-162）的主要有关物质,进行结构确证。方法 利用反相硅胶和凝胶柱色谱分离阿可拉定中的2个主要杂质,经化合物谱图数据（LC-DAD、LC-MS、¹H-NMR和¹³C-NMR）鉴定其结构。结果 阿可拉定中2个主要杂质分别为8-异戊烯基山柰酚和朝藿素B。结论 阿可拉定有关物质的定量和定性研究可以为制定合理的杂质限度提供依据。