温肾醒脑方对血管性痴呆大鼠Ang-1和HIF-1α表达的影响

目的:探讨温肾醒脑方对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠血管生成素-1(Ang-1)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的影响。方法:采用劳倦过度、房事不节法,高脂饮食法,以及反复性脑缺血再灌注结合降压法复制肾(阳)虚痰瘀型VD模型。将大鼠随机分为假手术组、模型对照组、温肾醒脑方组3组,每组18只。动物于造模后2 h开始灌胃,温肾醒脑方组以7.1 g/kg药液(体表面积换算,相当于60 kg成人量的3倍)灌胃给药,每天1次;模型对照组与假手术组给予等体积蒸馏水。各组动物在手术后2 h和处死前2h进行神经功能评分。分别于造模后3 d、7 d和14 d处死动物,采用免疫组织化学法检测Ang-1与HIF-1α表达情况。结果:与假手术组对比,模型对照组和温肾醒脑方组大鼠的神经功能评分差别均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与同一时间点模型对照组对比,用药3d,7 d和14 d的温肾醒脑方组的神经功能评分降低,差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。VD大鼠脑缺血后Ang-1阳性细胞随时间延长而增加,温肾醒脑方能促进其表达,与模型...     

温肾醒脑方对血管性痴呆大鼠认知功能和神经干细胞增殖的影响

目的:探讨温肾醒脑方对VD模型大鼠学习记忆功能、神经干细胞增殖及b FGF基因表达的影响,阐明温肾醒脑方益智醒脑开窍的机理。方法:采用"劳倦过度、房室不节"法、高脂饮食法以及反复性脑缺血再灌注结合降压法复制肾(阳)虚痰瘀型VD模型,将动物随机分为正常组、假手术组、模型组、温肾醒脑方组(中药组),于造模后1 d、30 d处死动物,评价动物的认知功能,免疫组织化学法观察nestin阳性细胞,ELISA和RT-PCR检测b FGF表达水平。结果:造模后动物逃避潜伏期明显延长,中药治疗组与模型组相比较,逃避潜伏期时间明显缩短差异具有统计学意义(P0.05);中药组与假手术组相比,差异无显著性(P0.05)。正常大鼠海马和皮层有少量nestin阳性细胞,造模后假手术组、模型组和中药组大鼠nestin阳性细胞数稍有增加,差异无统计学意义(P0.05);30天后模型组、假手术组与正常组nestin阳性细胞数基本相近,差异无统计学意义(P0.05),中药治疗组在海马与皮层均有显著增加,与正常组、模型组相比差异具有统计学意义(P0.05)。正常组脑组织有低水平b FGF蛋白和基因表达,造模后模型组、假手术组与中药治疗组表达增强,中药治疗组、模型组与正常组相比差异有统计学意义(P0.05),但两组间差异无统计学意义(P0.05);中药治疗组b FGF水平维持在比较高的水平,而模型组基本恢复到正常组水平,中药治疗组与模型组、正常组相比差异均有统计学意义(P0.05)。结论:温肾醒脑方能促进认知功能的恢复,增强VD大鼠神经干细胞增殖和b FGF表达,是其益智醒脑开窍的可能机理。     

温肾醒脑方对血管性痴呆大鼠认知功能的影响及机制研究

目的:研究温肾醒脑方对血管性痴呆(Vascular dementia,VD)大鼠认知功能的改善作用及对Nrf2、Keap1相关信号通路的影响。方法:70只雄性SD大鼠随机分成正常组、假手术组、模型组、脑复康组(0.15 g/kg)、温肾醒脑方给药组(高剂量组5 g/kg、中剂量组2.5 g/kg、低剂量组1.25 g/kg),每组10只动物。采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立VD模型。给予温肾醒脑方灌胃治疗后,Morris水迷宫测试治疗后VD大鼠认知功能的改善情况。检测脑组织中SOD、MDA、GSH-Px、NOS,HE染色观察脑海马组织的病理变化情况,RT-PCR大鼠脑组织NQO1、HO-1的mRNA水平和Western Blot检测Keap1、Nrf2、NQO1、HO-1蛋白水平的表达情况以及EMSA检测Nrf2与ARE结合力。结果:与正常组比较,VD模型组大鼠逃避潜伏期明显较长,游泳总距离明显缩短,穿越站台总数明显减少(P0.01);大脑组织中MDA含量显著增加,SOD、GSH-Px和NOS的含量明显减少(P0.01);大脑组织结构明显受损伤,细胞形态改变,细胞核固缩,核仁不清晰;同时大脑组织中细胞核Nrf2蛋白表达降低、细胞质中Keap1蛋白表达增加,NQO1、HO-1 mRNA和蛋白表达降低(P0.01)。与VD模型组比较,脑复康和温肾醒脑方组大鼠的认知行为得到很大的提高,脑组织MDA、SOD、GSH-Px、NOS含量和脑组织病理结构得到很好的改善,Nrf2、Keap1、NQO1、HO-1在mRNA水平或蛋白水平上有一定程度改变,特别是温肾醒脑方组大鼠的改善非常显著。结论:温肾醒脑方可以改善VD大鼠的认知行为,其机制可能与Nrf2-Keap1-NQO1/HO-1抗氧化应激信号通路相关。     

丹皮酚对急性心肌梗死大鼠Smad2, Smad3, Smad7 mRNA含量表达的影响

目的:研究丹皮酚对急性心肌梗死(AMI)大鼠进行性心室重构的保护作用及其对转化生长因子-β(TGF-β)/Smads信号通路上Smad2,Smad3,Smad7 mRNA含量表达的影响。并探讨其延缓甚至逆转心室重构的分子机制。方法:采用左冠状前降支(LAD)结扎法制作在体大鼠急性心肌梗死模型,在心电图评价的基础上,将造模成功的大鼠随机分为模型组、丹皮酚低、中、高剂量组、卡托普利组,另有只穿线不结扎的假手术组,每组10只,共6组。丹皮酚低、中、高剂量组分别给予ip8,12,16 mg·kg-1剂量的丹皮酚注射液,假手术组与模型组每天ip等体积生理盐水,卡托普利组用蒸馏水稀释其片剂碾成的药粉,给予ig 10 mg·kg-1,所有干预均1次/d;4周后分别取材,测定各组大鼠心脏质量指数及梗死面积,采用实时荧光定量RTq PCR技术检测各组心肌组织Smad2,Smad3,Smad7 mRNA的表达水平。结果:与模型组比较,丹皮酚低、中、高剂量组、卡托普利组大鼠心肌梗死面积明显减少(P0.05),心脏质量指数降低(P0.05);模型组Smad2,Smad3 mRNA的表达水平均明显高于假手术组(P0.01),Smad7的表达低于假手术组(P0.01);丹皮酚各剂量干预组Smad2,Smad3 mRNA的表达明显低于模型组(P0.01),Smad7 mRNA的表达则明显强于模型组(P0.01)。结论:丹皮酚有抗AMI大鼠心肌纤维化的作用,其机制与上调TGF-β1抑制性信号蛋白Smad7的mRNA表达及下调TGF-β受体调控信号蛋白Smad2,Smad3的mRNA表达有关。即其作用机制可能与干预TGF-β/Smads信号转导有关。     

温肾益髓生血方对RA大鼠肝脏BMP/Smad信号通路的影响

目的:探讨温肾益髓生血方对RA大鼠贫血的改善作用及其骨形成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)/Smad信号通路的影响。方法:42只雄性SPF级Wister大鼠,根据体质量分层随机分组2次,即正常组、假手术组、模型组、尿毒清(2.33 g·kg-1)组、温肾益髓生血(3.5 g·kg-1)组。模型组和治疗组上午180 mg·kg-1·d-1腺嘌呤灌胃,下午治疗组给予相应的治疗药物,正常组、假手术组和模型组给予等体积的去离子水灌胃,每周称量大鼠体质量,治疗12周后,各组大鼠麻醉后取血,分离血清,检测肌酐(SCr),尿素氮(BUN),尿酸(UA);全血测红细胞(RBC),血红蛋白(HGB);取材固定肾组织、肝脏组织,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏病理,免疫组化及原位杂交技术检测大鼠肝脏BMP6,Smad4,Smad1/5/8,p-Smad1/5/8,铁调素(hepcidin)mRNA及蛋白表达水平。结果:与正常组及假手术组比较,模型组体质量明显降低(P0.01),血清BUN,SCr水平明显升高(P0.01),肾脏病理损害明显;与模型组比较,温肾益髓生血组大鼠一般状态明显改善,血RBC,HGB水平升高(P0.01),与正常组和假手术组比较,模型组大鼠肝脏高表达BMP6,Smad4,Smad1/5/8,hepcidin(P0.01);与模型组比较,温肾益髓生血组BMP6,Smad4,Smad1/5/8,p-Smad1/5/8,hepcidin蛋白表达水平显著降低(P0.01)。结论:温肾益髓生血方对RA大鼠贫血具有一定的改善作用,可能是通过干预肝脏BMP/Smad信号通路实现的。     

Study on the Effect and Mechanism of Bushen Huayu Recipe(补肾化瘀方)on Endometrial Fibrosis in Rats with Uterine Adhesion Based on TGF-β1/Smad Pathway

目的:观察补肾化瘀方对宫腔粘连(IUA)大鼠子宫内膜纤维化的改善作用,探究其作用机制.方法:采取机械+感染双重损伤法建立IUA大鼠模型,将造模大鼠随机分为模型组、补肾化瘀方组、补肾化瘀方+SRI-011381组、SRI-011381组,每组15只.另取15只大鼠作为假手术组.药物治疗21d后,观察大鼠子宫形态,HE染色观察子宫组织病理变化,计数子宫内膜腺体数量,Masson染色观察纤维化情况,ELISA试剂盒检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的水平,qRT-PCR检测子宫组织转化生长因子-β1(TGF-β1) mRNA、Smad3 mRNA、Smad4 mRNA和Smad7 mRNA表达水平,Western blotting法测定TGF-β1、Smad3、Smad4、Smad7、p-Smad3、p-Smad4、p-Smad7水平.结果:与假手术组比较,模型组大鼠子宫组织增粗,腺体数量减少,纤维化面积增加,血清炎症因子水平升高,TGF-β1 mRNA、Smad3 mRNA、Smad4 mRNA表达及Smad3、Smad4磷酸化增加,Smad7 mRNA表达及磷酸化减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).与模型组比较,补肾化瘀方组大鼠子宫腺体数量增加,纤维化面积减少,血清炎症因子水平降低,TGF-β1 mRNA、Smad3 mRNA、Smad4 mRNA表达及Smad3、Smad4磷酸化减少,Smad7 mRNA表达及磷酸化增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).SRI-011381可抑制补肾化瘀方的作用,促进纤维化,进一步激活TGF-β1/Smad通路(P＜0.05).结论:补肾化瘀方对IUA大鼠子宫内膜纤维化有改善作用,其机制可能与调节TGF-β1/Smad通路有关.     

扶脾柔肝方对肝纤维化大鼠转化生长因子-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨扶脾柔肝方对肝纤维化(HF)大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路的干预作用。方法将SD大鼠随机分为7组:正常对照组,模型组,秋水仙碱组(0.2 mg·kg~(-1)),扶正化瘀组(0.415 g·kg~(-1)),扶脾柔肝方低、中、高剂量组(20,40,80 g·kg~(-1))。采用大鼠背部皮下注射(sc)50%四氯化碳和灌胃(ig)30%乙醇的方法诱导HF,造模10周,成功建立大鼠HF模型,其后给予相应药物10 m L·kg~(-1),每日1次,连续4周,正常对照组、模型组给予等量生理盐水。检测大鼠血清TGF-β1;HE染色和Masson染色观察肝组织病理学变化;免疫组化法检测肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;同时,采用荧光定量PCR方法及免疫印迹法(Western blot)检测肝组织中TGF-β1、Smad 3、Smad 4、Smad7 mRNA及蛋白的表达。结果模型组的HF程度较其余组明显严重,与正常对照组比较,模型组大鼠血清TGF-β1明显升高(P0.01),肝组织α-SMA蛋白及TGF-β1、Smad3、Smad4 mRNA及蛋白表达升高Smad 7表达降低(P0.01);与模型组比较,扶脾柔肝方各组大鼠血清TGF-β1明显降低(P0.05,P0.01),肝组织α-SMA蛋白及TGF-β1、Smad3、Smad4 mRNA及蛋白表达下调(P0.01),Smad 7 mRNA及蛋白表达升高(P0.05,P0.01)。结论扶脾柔肝方下调HF肝组织α-SMA蛋白及TGF-β1、Smad3、Smad4 mRNA及蛋白表达水平,上调Smad7 mRNA及蛋白表达水平,可能是其抗HF作用机制之一。     

益肾通络方对肾纤维化模型大鼠肾组织转化生长因子-β1、Smad7表达的影响

目的探讨益肾通络方治疗肾纤维化的可能作用机制。方法采用阳离子牛血清白蛋白皮下和尾静脉注射建立肾纤维化大鼠模型,将造模成功的50只大鼠随机分为模型组、对照组和益肾通络方低、中、高剂量组,每组各10只,并设10只同批正常大鼠为正常组。益肾通络方低、中、高剂量组分别予益肾通络方生药4.58、9.16、18.32 g/(kg·d)灌胃,对照组以肾炎四味片1.58 g/(kg·d)灌胃,模型组和正常组以等容量(1 ml/100 g)的蒸馏水灌胃,每天灌胃1次,连续4周。采用免疫组织化学方法结合图像分析系统测定大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad7的平均灰度值、平均光密度值、阳性细胞数、阳性率,并进行相关性分析。结果光镜下模型组肾组织TGF-β1表达明显增多,Smad7表达不明显。与模型组比较,益肾通络方各剂量组和对照组肾组织TGF-β1平均灰度值、阳性率、阳性细胞数明显减少,Smad7平均灰度值、阳性率、阳性细胞数明显提高,并且以益肾通络方中、高剂量作用更明显(P0.05或P0.01)。相关分析显示,TGF-β1与Smad7呈线性负相关(P0.01)。结论益肾通络方治疗肾纤维化可能机制是调节TGF-β1与Smad7的相互作用关系,促进Smad7表达,抑制TGF-β1表达。     

丹龙醒脑方对脑缺血再灌注大鼠侧脑室室管膜下区神经干细胞增殖与c-myc、c-jun表达的影响

目的探讨丹龙醒脑方对局灶性脑缺血再灌注大鼠侧脑室室管膜下区(SVZ)神经干细胞(NSCs)增殖与c-myc、c-jun表达的关系。方法采用线栓法制备大脑中动脉栓塞局灶性脑缺血再灌注模型。150只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和丹龙醒脑方小、中、大剂量组。于再灌注24 h后,丹龙醒脑方各剂量组予相应剂量药液灌胃,模型组和假手术组予等体积蒸馏水灌胃。1次/d,连续7 d。再灌注1、3、7 d采用m-NSS法进行神经功能缺损评分,再灌注7 d取缺血侧SVZ脑组织,采用Brdu免疫组化检测NSCs增殖,RT-q PCR、Western blot分别检测c-jun、c-myc m RNA和蛋白的表达。结果与假手术组比较,其余各组神经功能缺损评分明显升高(P0.01);再灌注3、7 d,与模型组比较,丹龙醒脑方各剂量组神经功能缺损评分明显降低(P0.01)。与假手术组比较,其余各组Brdu阳性细胞率明显升高;与模型组比较,丹龙醒脑方各剂量组Brdu阳性细胞率亦明显升高(P0.01)。丹龙醒脑方各剂量组较假手术组、模型组c-jun、c-myc蛋白及m RNA表达均明显增强(P0.05,P0.01)。结论丹龙醒脑方能改善脑缺血后神经功能,促进SVZ NSCs增殖,其机制可能与增强c-jun和c-myc表达及延长表达持续时间有关。     

保元排毒丸对单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1、Smad3、Smad7表达的影响

目的观察保元排毒丸对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠TGF-β1、Smad3、Smad7表达的影响。方法 48只大鼠随机分为假手术组,UUO组,厄贝沙坦组,保元排毒丸低、中、高剂量组,每组8只。假手术组和UUO组大鼠灌胃生理盐水,其他组大鼠灌胃相应药物14 d。末次灌胃24 h后,Masson染色观察肾组织病理变化,Western blot、RTPCR分别检测TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白、mRNA表达。结果与UUO组比较,保元排毒丸各剂量组和厄贝沙坦组肾纤维化程度明显减轻(P0.01),TGF-β1、Smad3表达明显降低(P0.05),Smad7表达明显升高(P0.05)。结论保元排毒丸可通过下调TGF-β1、Smad3表达,上调Smad7表达来延缓UUO大鼠肾纤维化。     

排毒保肾丸对肾纤维化大鼠肾组织TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的观察排毒保肾丸对5/6肾切除大鼠肾纤维化的影响并探讨其可能作用机制。方法将50只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、排毒保肾丸组、尿毒清颗粒组,每组10只。除正常组、假手术组外,其余各组大鼠均采用5/6肾切除方法建立肾纤维化模型。排毒保肾丸组和尿毒清颗粒组分别予排毒保肾丸1.0 g/(kg·d)和尿毒清颗粒3.33 g/(kg·d)灌胃,正常组、假手术组、模型组予2 ml生理盐水灌胃,每日1次。各组均灌胃4周后处死大鼠,取残肾组织行HE、PAS、PASM、Masson染色病理观察,检测肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2、Smad7蛋白及其mRNA的表达水平。结果病理结果显示,模型组大鼠局灶节段性肾小球缺血性皱缩,较多炎性细胞浸润伴轻至中度纤维化;与模型组比较,排毒保肾丸组残肾组织病变程度减轻。与正常组、假手术组比较,模型组大鼠TGF-β1蛋白及其mRNA、Smad2蛋白及其mRNA表达水平均显著升高,Smad7蛋白及其mRNA表达水平均显著下降(P0.01);与模型组比较,排毒保肾丸组和尿毒清颗粒组TGF-β1蛋白及其mRNA、Smad2蛋白及其mRNA表达水平均显著降低,而Smad7蛋白及其mRNA表达水平均显著升高(P0.01)。结论排毒保肾丸有抗肾纤维化的作用,下调肾组织TGF-β1、Smad2的表达和上调Smad7的表达可能是其作用机制之一。     

二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病大鼠信号转导蛋白Smad3,4,6,7基因表达的影响

目的:观察二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织中信号转导蛋白Smads的影响,探讨二陈汤加味对COPD作用的机制。方法:将50只SD大鼠随机分5组,每组10只动物,包括正常组、模型组、二陈汤加味低、中、高剂量(5,10,20 g·kg~(-1)·d~(-1))组。以烟熏加气管滴注脂多糖(LPS)的方法制备COPD大鼠模型。建模后,治疗组灌胃给药,正常组及模型组灌胃等量生理盐水。评价肺功能,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测肺组织中Smad3,Smad4,Smad6和Smad7mRNA表达,免疫组织化学检测大鼠肺组织中Smad3,Smad4,Smad6,Smad7蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组用力肺活量(forced vital capacity,FVC),第1秒末时间肺活量(FEV_1)和FEV_1/FVC均显著降低(P0.01);模型组肺组织Smad3和Smad4 mRNA的表达量升高(P0.05),Smad6和Smad7 mRNA表达均降低(P0.05);Smad3和Smad4蛋白的表达显著增强(P0.01),Smad6和Smad7蛋白的表达显著减弱(P0.01)。与模型组比较,二陈汤加味中、高剂量组FVC,FEV_1和FEV_1/FVC均显著提高(P0.01);Smad3和Smad4 mRNA的表达量均下降(P0.05),Smad6和Smad7 mRNA的表达量升高(P0.05);Smad3,Smad4蛋白的表达显著减弱(P0.01),Smad6,Smad7蛋白的表达显著增强(P0.01)。结论:二陈汤加味能有效抑制细支气管结构重塑作用。其机制可能是通过降低Smad3,提高Smad6和Smad7,协调Smad4基因表达,抑制细支气管及肺组织结构重塑。     

益肾化瘀方对单侧输尿管结扎大鼠转化生长因子β1、Smad7信号蛋白表达的影响

目的探讨益肾化瘀方抗肾间质纤维化的可能作用机制。方法 108只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、缬沙坦组和益肾化瘀方高、中、低剂量组,每组18只。除假手术组外其余大鼠采用单侧输尿管结扎方法建立肾间质纤维化模型,造模次日益肾化瘀方高、中、低剂量组分别予益肾化瘀方浓缩液32、16、8 g/(kg·d)灌胃,缬沙坦组予缬沙坦溶液13.3 mg/(kg·d)灌胃,假手术组、模型组予生理盐水20 ml/(kg·d)灌胃,各组均连续灌胃28天。分别于造模后第7、14、28天观察大鼠肾组织病理改变,计算肾间质纤维化面积,检测大鼠肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad7信号蛋白的表达。结果模型组大鼠出现肾间质炎细胞浸润和梭形核细胞增生,伴局灶性肾间质纤维化,各治疗组肾脏病理表现均有不同程度的减轻,其中益肾化瘀方高剂量组病理改变与缬沙坦组相当。与同时间点假手术组比较,其余各组大鼠肾间质纤维化面积、TGF-β1升高,Smad7信号蛋白减少(P0.01);与同时间点模型组比较,除益肾化瘀方低剂量组外,其余各治疗组大鼠肾间质纤维化面积、TGF-β1降低,Smad7信号蛋白增加(P0.05或P0.01),并且以益肾化瘀方高剂量组和缬沙坦组改善最明显(P0.05)。结论益肾化瘀方可能通过抑制大鼠肾组织中TGF-β1的高表达,上调Smad7的表达,从而减轻肾间质纤维化。     

丹龙醒脑方对脑缺血再灌注大鼠海马区神经干细胞增殖及Frizzled1、Dvl1、CyclinD1表达的影响

目的:探讨丹龙醒脑方对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠海马区神经干细胞增殖,以及Frizzled1、Dvl1、Cyclin D1表达的影响。方法:将80只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉组、丹龙醒脑方7.4g/kg组和丹龙醒脑方14.8g/kg组,采用线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,再灌注1d、3d和7d采用改良m-NSS法进行神经功能缺损评分,7d后取大鼠缺血侧海马组织,采用免疫荧光法检测海马区Brdu阳性细胞率;采用RT-q PCR法、Western Blot法分别检测Frizzled1、Dvl1、Cyclin D1 mRNA和蛋白表达。结果:1再灌注1d,与假手术组比较,其余各组神经功能缺损评分明显升高,而各组间差异无统计学意义;再灌注3d、7d,与模型组比较,依达拉奉组、丹龙醒脑方7.4g/kg组、丹龙醒脑方14.8g/kg组评分明显降低。2与假手术组比较,各组Brdu阳性细胞率增大,Frizzled1、Dvl1、Cyclin D1mRNA及蛋白的表达明显增强;与模型组比较,依达拉奉组、丹龙醒脑方7.4g/kg组、丹龙醒脑方14.8g/kg组Brdu阳性细胞率增大,Frizzled1、Dvl1、Cyclin D1mRNA及蛋白的表达明显增强。结论:丹龙醒脑方能改善神经缺损症状,促进脑缺血后海马区NSCs增殖,其机制可能与通过上调缺血再灌注后海马区Frizzled1、Dvl1表达水平,从而促进Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因Cyclin D1的表达水平有关。     

扎里奴思方干预骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠黏附分子及NeuN表达的影响

目的:观察扎里奴思方(扎方)干预骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对大脑中动脉阻塞(MCAO)模型大鼠黏附分子及神经元核抗原(Neu N)表达的影响,并探讨其作用机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、扎方组、移植组和联合组;线栓法制备大鼠MCAO模型,体外全骨髓贴壁筛选法培养及扩增BMSCs;大鼠ig给药(14.6 g·kg~(-1)·d~(-1)),BMSCs悬浮液经颈内动脉移植入脑;移植后1,3,7,14 d取材,评价神经功能积分(NS),逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测血管细胞间黏附分子~(-1)(VCAM~(-1))和整合素α4mRNA表达,免疫组化法测Neu N表达。结果:MCAO模型大鼠NS及Neu N表达较假手术组显著降低(P0.01),VCAM~(-1)及整合素α4mRNA表达显著增高(P0.01);与模型组比较,扎方1,3,14 d移植3,7,14 d及联合各组NS增加(P0.01,P0.05),扎方、移植及联合各组Neu N增加(P0.01),VCAM~(-1)及整合素α4mRNA降低(P0.01);与移植组比较,扎方7 d组NS减小(P0.05),联合1,3,14 d组NS增加(P0.01),扎方1,3 d组VCAM~(-1)mRNA减少(P0.01),扎方1,7,14 d组整合素α4mRNA减少(P0.01),联合各组VCAM~(-1)及整合素α4mRNA均降低(P0.01),扎方及联合各组Neu N增高(P0.01);扎方与联合组比较,联合各组NS及Neu N表达增加(P0.01),VCAM~(-1)和整合素α4mRNA表达降低(P0.01);同组间比较,各组NS,Neu N及VCAM~(-1) mRNA均以7 d组变化显著,14 d有明显改善(P0.01),整合素α4mRNA以3 d组变化显著,14 d可改善(P0.01)。结论:脑缺血后神经功能及神经元均出现不同程度损伤;扎方和BMSCs移植均可不同程度改善脑缺血后神经功能及脑组织神经元状态,以二者联合作用显著,其机制可能与干预VCAM~(-1)及整合素α4动态表达有关。     

基于TGF-β1/Smad 通路探讨红花黄色素对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠的保护作用

目的观察红花黄色素对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠的保护作用及其对转化生长因子β1（TGF-β1）/ Smad 信号通路的影响。方法采用腺嘌呤（250 mg·kg-1）灌胃建立肾纤维化大鼠模型。将SD 大鼠随机分为对照 组、模型组、氯沙坦组（9 mg·kg-1）及红花黄色素低、高剂量组（9、18 mg·kg-1）,每组10 只,灌胃给药,每天 1 次,连续30 d。检测大鼠血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）含量;采用HE 和Masson 染色法观察大鼠肾脏组织病 理学变化;采用RT-qPCR 法检测大鼠肾组织中TGF-β1、Smad4 及Smad7 mRNA 表达情况;采用免疫组化法 及Western Blot 法检测大鼠肾组织中TGF-β1、Smad4 及Smad7 蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组 大鼠血清Cr、BUN 含量显著升高（P＜0.01）;大鼠肾脏组织中TGF-β1 mRNA 及蛋白表达水平明显升高（P＜ 0.05）,Smad7 mRNA 及蛋白表达水平明显下降（P＜0.05）。与模型组比较,各给药组大鼠血清Cr、BUN 水平明 显降低（P＜0.05,P＜0.01）;各给药组大鼠肾脏组织中TGF-β1 mRNA 及蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）, Smad7 mRNA 及蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。各组大鼠肾脏组织中Smad4 mRNA 及蛋白表达水平无明显 变化（P > 0.05）。结论红花黄色素对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠具有保护作用,其机制可能与抑制TGF-β1/ Smad 信号通路有关。     

解毒活血方对术后腹腔粘连大鼠TGF-β/Smad信号通路的影响

目的:探讨解毒活血方防治术后腹腔粘连的可能作用机制。方法:取SD雄性大鼠50只,随机分为5组:假手术组、模型组、解毒活血方低、中、高剂量组对照组。除假手术组外,其余各组大鼠均采用锉刀法制备术后腹腔粘连模型。解毒活血方低、中、高剂量组灌胃分别给予420、840、1680 g·L~(-1),假手术组和模型组给予相同体积的生理盐水,每日1次,各组于术后第7天处死大鼠进行肉眼粘连评分,留取粘连组织行HE染色和Masson染色,光镜下观察粘连组织病理变化,RT-PCR和Western Blot分别检测粘连组织TGFβR1、Smad7mRNA和TGFβR3、Smad6蛋白表达水平。结果:解毒活血方可降低大鼠术后腹腔粘连评分,减轻成纤维细胞的增生。RTPCR和Western Blot结果均表明,与模型组相比,解毒活血方组中高剂量组TGFβR1、TGFβR3表达明显下降,而Smad6和Smad7表达明显上升(P0.05),且作用具有剂量依赖性。结论:解毒活血方抑制术后腹腔粘连的形成,其机制可能与下调TGFβR1、TGFβR3的表达,上调Smad6和Smad7的表达有关。     

补肾醒脑方对血管性痴呆大鼠胆碱能抗炎通路的影响

目的:观察补肾醒脑方对血管性痴呆大鼠胆碱能抗炎通路的影响,探讨其对血管性痴呆大鼠脑保护作用机制。方法:将Wistar大鼠随机分为假手术组、模型对照组、补肾醒脑方组、喜德镇组4组,每组10只。均灌胃给药,术前每天1次进行预防性给药1周,术后24 h继续给药,1 d 1次,连续7 d,模型对照组和假手术组给予蒸馏水(5 m L/d)灌胃,补肾醒脑方组给予补肾醒脑方灌胃,喜德镇组给予喜德镇灌胃。于术后的第2天、第4天、第6天测试各组大鼠的学习记忆能力;选取脑缺血再灌注24 h后为观察点,采用酶联免疫吸附法检测大鼠脑组织IL-1β、TNF-a和TGF-β、IL-10含量,采用比色法测定Ch AT、Ach E活性。结果:补肾醒脑方治疗组IL-1β、TNF-a和IL-10、TGF-β表达较模型对照组降低(P0.05),补肾醒脑方治疗组Ach E活性较模型对照组降低(P0.05),补肾醒脑方治疗组Ch AT的活性较模型对照组明显提高(P0.05);补肾醒脑方治疗组IL-1β、TNF-α表达较假手术组增高(P0.05);模型对照组IL-1β,TNF-α表达较假手术组显著增高(P0.01);在控制其他因素不变的条件下,IL-1β与Ach E呈正相关(r=0.94,P=0.000),与Ch AT呈负相关(r=-0.93,P=0.002);TNF-a与Ach E呈正相关(r=0.92,P=0.003),与Ch AT呈负相关(r=-0.91,P=0.004)。结论:促炎因子TNF-a、IL-1β和抗炎因子TGF-β、IL-10在缺血性脑损伤中具有重要作用,Ach可抑制致炎细胞因子释放。补肾醒脑方可作用于胆碱能抗炎通路,能够缓解血管性痴呆大鼠迷走神经受到的阻抑作用,使Ach的合成增加,抑制炎性反应,减轻脑组织的损伤。     

芪珠方对肝纤维化模型大鼠TGF-β1/Smad信号通路的作用

目的观察芪珠方的不同提取物对大鼠肝脏TGF-β1,Smad4,Smad 7蛋白与mRNA表达的影响,探讨芪珠方抗肝纤维化的作用机制。方法 70只大鼠随机分为正常组,模型组,芪珠方醇提高剂量组,芪珠方醇提低剂量组,芪珠方水提高剂量组,芪珠方水提低剂量组,秋水仙碱组。除正常组外,其余各组大鼠皮下注射40%四氯化碳(CCl_4)橄榄油造模,首次5ml·kg~(-1),以后每次3ml·kg~(-1),每周2次,共8周。于造模开始次日给药,芪珠方高,低剂量组16.2,9.72g·kg~(-1)ig,秋水仙碱组5ml·kg~(-1)剂量ig,每日1次,连续8周。造模结束后所有大鼠处死,肝脏组织学观察,Western-blot检测TGF-β1, Smad4,Smad 7蛋白表达,荧光定量PCR检测TGF-β1,Smad4,Smad 7 mRNA表达。结果模型组大鼠肝组织纤维化程度,炎症程度高于正常组,肝组织内TGF-β1,Smad4的表达增加, Smad7的表达减少(P0.05);经过芪珠方治疗后,治疗组与模型组相比肝组织纤维化和炎症程度降低,肝组织中TGF-β1,Smad4的表达降低,Smad7的表达增加(P0.05)。结论芪珠方抗大鼠肝纤维化有显著效果,其作用机制与其能影响TGF-β1/Smad信号传导通路相关因子表达有关。     

丹龙醒脑方对血管性痴呆肾虚血瘀证大鼠认知及海马病理的影响

目的：建立肾虚血瘀证血管性痴呆（VD）病证结合动物模型,观察丹龙醒脑方对其认知功能及海马病理的影响。方法：72只SD大鼠随机分为假手术组12只和模型组60只。模型组60只采用高脂饮食喂养结合改良2－VO法及摘除性器官法建立VD的肾虚血瘀证大鼠模型,造模成功后随机分为模型组、尼莫地平组和丹龙醒脑方高、中、低剂量组,给予不同剂量丹龙醒脑方和尼莫地平干预4周。观察假手术组和模型组大鼠表征,检测雌二醇（E2）、睾酮（T）、骨钙素（OCN）、钙（Ca）、内皮素－1（ET－1）、一氧化氮（NO）和血液流变学等指标变化,通过Morris水迷宫实验进行行为学检测;取全脑进行海马区HE染色。结果：建模成功大鼠可见典型VD的肾虚血瘀证模型表征,E2、T、OCN、Ca和NO水平明显低于假手术组,全血黏度（低、中、高切）和ET－1水平明显高于假手术组,逃避潜伏期较假手术组明显延长、穿越平台次数及目标象限停留时间较假手术组明显缩短（P < 0.01）。与模型组比较,丹龙醒脑方各剂量组、尼莫地平组逃避潜伏期显著缩短、穿越平台次数及目标象限停留时间显著延长（P < 0.05,P < 0.01）,丹龙醒脑方各剂量组、尼莫地平组大鼠海马CA1区病理状态有所改善。结论：高脂饮食喂养结合改良2－VO法及摘除性器官法构建的模型大鼠符合VD肾虚血瘀病证结合特点。丹龙醒脑方可以提高VD肾虚血瘀证大鼠的认知能力,并改善其海马病理形态,发挥改善VD肾虚血瘀证的作用。