miR-449a通过下调HDAC1表达抑制肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移北大核心

目的:分析miR-449a对人非小细胞肺癌细胞株A549增殖、侵袭和迁移的影响。方法:通过Real-time PCR检测人肺成纤维细胞MRC-5、人非小细胞肺癌细胞株A549和HCC827中miR-449a和组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)的表达水平。利用CCK-8法和Transwell法分析miR-449a对A549细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。使用生物信息软件分析miR-449a的靶向集合位点,并构建荧光素酶报告基因质粒,通过荧光素酶报告基因法分析miR-449a对HDAC1的靶向调控作用。通过Western blot分析miR-449a和HDAC1表达水平对A549细胞增殖及EMT相关分子表达水平的影响。建立裸鼠皮下瘤模型分析miR-449a和HDAC1对A549细胞体内增殖的影响。结果:miR-449a在MRC-5细胞中表达水平显著高于A549(P<0.0001)和HCC827(P<0.01);HDAC1在MRC-5细胞中表达水平显著低于A549(P<0.0001)和HCC827(P<0.01)。CCK-8法检测显示在A549细胞中转染miR-449a能够显著抑制其增殖。Transwell法检测显示在A549细胞中转染miR-449a能够显著抑制其侵袭和迁移(P<0.0001)。生物信息学预测显示miR-449a能够靶向结合HDAC1的3'-UTR;双荧光素酶报告基因分析显示,miR-449a能够靶向作用于HDAC1的3'-UTR抑制萤光素酶表达,Real-time PCR的结果表明过表达miR-449a能够显著抑制HDAC1的表达。在A549细胞中转染miR-449a或针对HDAC1小干扰RNA(siRNA)均能够下调HDAC1的表达,抑制细胞体内、外增殖;同时E-cadherin和ZO-1的表达水平下降,而N-cadherin、Fibronectin和Vimentin的表达水平增加。结论:miR-449a通过靶向抑制HDAC1的表达,抑制肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

miR-492对非小细胞肺癌细胞迁移及侵袭能力的影响

目的:探讨miR-492对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:RT-qPCR检测NSCLC组织及细胞株（Calu-1、A549、H1650和H1299）中miR-492的表达。A549细胞瞬时转染miR-492 mimics或miR-492 inhibitors,并通过划痕实验及Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力。双荧光素酶实验证实miR-492调控的靶基因。结果:NSCLC组织及细胞株中miR-492表达明显升高。将miR-492 mimics转染A549细胞后,细胞的迁移和侵袭能力明显增强。将miR-492 inhibitors转染A549细胞后,细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。PTPN9是miR-492的直接靶基因。结论:miR-492可能通过调节靶基因PTPN9,从而促进NSCLC细胞的迁移和侵袭。     

miR-940在非小细胞肺癌中的表达及对肺腺癌A549细胞生物学功能的影响北大核心

目的:探讨miR-940在非小细胞肺癌中的表达及对肺腺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法:选取标本库中2015年10月至2016年12月在我院胸外二科行手术治疗的非小细胞肺癌患者85例,检测癌组织和癌旁组织中miR-940的表达水平。将miR-940 mimics和miR-940 inhibitors转染至A549细胞中,检测转染后各组A549细胞中miR-940的表达水平。根据细胞增殖实验、划痕实验和Transwell实验检测各组细胞的增殖、迁移及侵袭能力变化。双荧光素酶实验证实miR-940的靶基因。结果:miR-940在癌组织中的表达量显著低于癌旁组织中的表达量,差异有统计学意义(P=0.004)。细胞增殖实验结果显示,miR-940 mimics组的细胞增殖率显著低于miR-940 inhibitors组(P<0.05);细胞划痕实验结果显示,miR-940 mimics组的划痕愈合率明显低于miR-940 inhibitors组(P<0.05);Transwell细胞侵袭实验结果显示,miR-940 mimics组的侵袭细胞数显著低于miR-940 inhibitors组的侵袭细胞数,差异有统计学意义(P<0.01)。Cbl-b是miR-940的直接靶基因。结论:miR-940在非小细胞肺癌中呈低表达,miR-940可能通过靶向抑制Cbl-b基因,进而抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

DDX17基因表达下调对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的：探讨 DDX17基因在非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的中的作用。方法：采用慢病毒介导的 shRNA,下调非小细胞肺癌 A549细胞中 DDX17的表达,实时荧光定量 PCR 和 Western blot 验证下调效果。CCK －8和平板克隆实验检测细胞增殖能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell 实验检测细胞侵袭能力变化。结果：DDX17－shRNA 可有效下调非小细胞肺癌 A549细胞中 DDX17蛋白和 mRNA 的表达。DDX17表达下调后,A549细胞的增殖受到抑制,24、48、72小时细胞增殖能力较对照组分别降低23％、42％和59％。细胞克隆形成数目较对照组明显减少,两组细胞克隆数目分别为75±9和30±6。细胞迁移速率较对照组降低,两组迁移率分别为（49．4±7．4）％和（17．8±3．7）％。细胞侵袭数目较对照组明显减少,两组细胞24小时侵袭数目分别为89．7±13．2和30．0±5．7。结论：DDX17表达下调可显著抑制非小细胞肺癌 A549的增殖、迁移和侵袭。     

肺癌miR-146a表达及其对细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的探讨微小RNA-146a(miR-146a)在肺癌组织和细胞中的表达和甲基化状态,及其对A549细胞增殖、侵袭、迁移的影响及可能机制。方法收集2018年1月至2019年4月在我院行根治性手术的非小细胞肺癌组织和对应癌旁组织,实时荧光定量PCR(QPCR)和甲基化特异性PCR(MSP)检测miR-146a的表达水平和甲基化状态,并分析甲基化状态与肺癌临床病理特征的关系。采用5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-AZA-2’-dC)处理A549细胞(处理组),MTT、Transwell实验和划痕实验检测处理组细胞增殖、侵袭和迁移活性。采用Western blotting检测Notch1和发状分裂相关增强子1(Hes-1)蛋白表达。结果肺癌组织和A549细胞中miR-146a表达量分别为0.63±0.28、0.85±0.11,均低于癌旁正常组织和BEAS-2B细胞(P<0.05)。MSP检测显示肺癌组织miR-146a甲基化率为62.5%(50/80),高于癌旁组织(P<0.05);miR-146a甲基化状态与肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。处理组细胞miR-146a表达水平为2.15±0.48,高于空白对照组(P<0.05);处理组细胞增殖、侵袭和迁移活性均低于空白对照组(P<0.05)。处理组Notch1蛋白和Hes-1蛋白表达水平分别为0.24±0.05和0.22±0.06,均低于空白对照组(P<0.05)。结论启动子异常甲基化导致在肺癌组织和细胞中miR-146a表达量降低,可能通过减弱对Notch1/Hes-1信号通路的抑制作用,促进肺癌细胞增殖、侵袭和转移,miR-146a有望成为肺癌新的生物治疗靶点。     

miR-30a通过靶向调控ZEB2抑制非小细胞肺癌的迁移与侵袭

目的:探讨miR-30a在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞中的表达情况及miR-30a在肺癌细胞迁移和侵袭过程中的作用及其机制。方法:采用qRT-PCR检测miR-30a在不同NSCLC细胞株中的表达情况;采用脂质体2000转染miR-30a mimics和E盒结合锌指蛋白2（E-box binding zinc finger protein 2,ZEB2） siRNA;通过qRT-PCR检验miR-30a mimics和ZEB2 siRNA的转染效率及转染后ZEB2 mRNA的表达水平变化;Western blot检测转染miR-30a mimics和ZEB2 siRNA后ZEB2蛋白表达情况;采用双荧光素酶报告实验验证miR-30a和ZEB2的相互作用机制;划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测上调miR-30a和干扰ZEB2对A549细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:实验结果显示,与正常人支气管上皮细胞相比,在不同NSCLC细胞株中miR-30a的表达呈不同程度下调;NSCLC细胞转染miR-30a mimics和ZEB2 siRNA后均获得满意的转染效果:miR-30a mimics和ZEB2 siRNA明显降低了NSCLC细胞中ZEB2的mRNA和蛋白的表达水平,组间差异具有统计学意义。双荧光素酶报告实验验证miR-30a对ZEB2 3' UTR具有直接调控作用。细胞迁移实验和侵袭实验结果显示,与Blank组和NC组相比,miR-30a过表达组和ZEB2基因沉默组的A549细胞迁移和侵袭能力均明显降低,说明miR-30a mimics和ZEB2 siRNA均对A549细胞细胞迁移和侵袭有抑制作用。结论:上调miR-30a的表达水平可以负调控ZEB2转录后表达水平,通过抑制上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的进程来抑制肺癌细胞的转移和侵袭。     

miR-148a 靶向HMGB3抑制非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭和增强顺铂抗肿瘤效应的机制研究

目的:探讨miR-148a靶向HMGB3抑制非小细胞肺癌细胞迁移和侵袭的作用机制。方法:采用RT-qPCR和Western blot检测非小细胞肺癌组织和癌旁组织标本中miR-148a和HMGB3相对表达水平;以A549、H1299细胞为研究对象,Transwell和MTT法分别检测过表达miR-148a、敲低HMGB3和DDP干预对细胞迁移、侵袭及细胞活力的影响;TargetScan在线预测、双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-148a与HMGB3的靶向关系;miR-148a过表达或敲减HMGB3并联合DDP,Transwell和MTT法检测细胞迁移、侵袭和细胞活力。结果:非小细胞癌组织中miRNA-148a表达明显下调（P<0.05）,HMGB3在mRNA和蛋白水平表达均明显上调（P<0.05）,miR-148a与HMGB3表达呈负相关（r=-0.856 8,P<0.000 1）;过表达miR-148a或敲低HMGB3能明显抑制细胞迁移和侵袭（P<0.05）,过表达miR-148a或敲低HMGB3联合DDP干预,细胞活力明显下降（P<0.05）;TargetScan在线预测、双荧光素酶报告基因实验和Western blot检测表明miR-148a能调控HMGB3表达。结论:miR-148a在非小细胞肺癌组织中表达下调,HMGB3是miR-148a的靶基因,过表达miR-148a能抑制HMGB3表达从而抑制非小细胞肺癌细胞A549、H1299迁移和侵袭并增强顺铂抗肿瘤效应。     

miR-140-5p靶向HDAC7抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制探讨

目的:探讨miR-140-5p靶向组蛋白去乙酰化酶7(histone deacetylase 7,HDAC7)调控非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法:采用qRT-PCR检测人NSCLC组织及癌旁组织中miR-140-5p的表达水平。用miR-140-5p mimic（模拟物）及miR-140-5p NC（阴性对照）转染A549细胞,CCK8法及克隆形成实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-5p与HDAC7的靶向关系,Western blot检测各组细胞HDAC7及PI3K、p-PI3K、AKT、和p-AKT表达水平。结果:与癌旁组织相比,miR-140-5p在NSCLC组织中的表达水平明显减低,差异有统计学意义（P＜0.01）。与miR-140-5p NC组相比,过表达miR-140-5p后A549细胞在48和72 h的增殖能力明显降低（P＜0.05）;且细胞克隆形成、细胞迁移和侵袭能力均降低（均P＜0.05）,PI3K/AKT信号通路中关键分子p-PI3K和p-AKT蛋白水平明显降低（均P＜0.05)。生物信息学预测HDAC7可能是miR-140-5p的一个靶基因,且双荧光素酶报告结果证实miR-140-5p直接靶向调节HDAC7表达。结论:miR-140-5p通过靶向HDAC7表达进而抑制NSCLC A549细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与通过抑制PI3K/AKT信号通路的激活有关。     

LncRNA-p21调控Notch信号通路对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨LncRNA-p21调控Notch信号通路对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法 pcDNA-lincRNA-p21、空载质粒pcDNA转染A549细胞设为过表达组和空载组;稳定转染过表达组加入Notch信号通路特异性激活剂Jagged1蛋白,设为Notch激活剂组;不作处理细胞为对照组。MTT法、划痕实验和Transwell小室实验检测各组细胞增殖、迁移和侵袭情况。RT-qPCR及Western blot法检测各组Notch1、HES-1、NICD、E-cadherin、Vimentin的mRNA和蛋白表达。结果 过表达组培养24、48和72 h MTT实验A值均低于对照组、空载组和Notch激活剂组,Notch激活剂组低于对照组和空载组（P<0.05）;过表达组48 h细胞迁移率和穿膜细胞数及Notch1、HES-1、NICD、Vimentin mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组、空载组和Notch激活剂组,Notch激活剂组低于对照组和空载组（P<0.05）;过表达组E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量高于对照组和Notch激活剂组,Notch激活剂组高于空载组和对照组（P<0.05）。结论 LncRNA-p21基因过表达可抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭,其调控机制可能与抑制Notch信号通路、阻断A549细胞上皮间质转化有关。     

肺癌细胞中miR-96对其侵袭和迁移的影响

Abstract：Objective To investigate the expression of miR-96 in lung cancer tissues and demonstrate theregulative effects of miR-96 ASO on the invasion and migration of lung cancer cells in vitro. Methods Theexpression of miR-96 in 116 cases of lung cancer tissues and their adjacent tissues were detected by fl uorogenicquantitative PCR method. The effects of miR-96 ASO on the invasion and migration ability of lung cancercells were measured by transwell assay and wound healing assay. Invasion-related protein expression wasanalyzed by Western blot. Results In 116 cases of lung cancer, the expression of miR-96 in 63.80%(74/116)of lung cancer tissues was significantly higher than that in adjacent tissues(P<0.05). miR-96 expression inlung cancer cells in miR-96 ASO transfection group was significantly lower than that in MOCK and NCgroup(P<0.05). Transwell and wound healing assay results showed that the invasion and migration ability wasdecreased greatly after transfected with miR-96 ASO, furthermore, down -regulation of miR-96 resulted inobvious inactivation of MMP2 and MMP9(P<0.05). Conclusion miR-96 was up-regulated in human lungcancerous tissue. Reducing the expression of miR-96 can effectively inhibit the invasion and migration of lungcancer cells. miR-96 may become a new target for regulating the invasion and migration ability in lung cancer.     

shRNA干扰半胱氨酸蛋白酶抑制剂C抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭和迁移

目的 研究半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（cystatin C, Cys C）表达对NSCLC A549细胞的生长、侵袭和转移的作用及其潜在的分子机制。方法 采用短发夹RNA（sh-RNA）干扰沉默Cys C表达,构建sh-Cys C载体,并转染人肺腺癌A549细胞中,筛选sh-Cys C稳转子。用CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭。此外,还采用Western blot检测侵袭和迁移关键蛋白表达的变化。结果 shRNA干扰Cys C,明显下调Cys C的表达;与对照组相比,发现shRNA介导的Cys C沉默显著抑制A549细胞体外增殖、迁移和侵袭。此外,还发现Cys C的下调可以显著抑制基质金属蛋白酶（MMP9、MMP14）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结论 shRNA干扰半胱氨酸蛋白酶抑制剂C,明显下调Cys C的表达,Cys C的下调可抑制非小细胞肺癌A549细胞的侵袭和迁移。     

miR-7-5p通过调控POLE4对非小细胞肺癌细胞增殖侵袭的影响及作用机制

目的 检测miR-7-5p、POLE4在非小细胞肺癌中的表达水平及对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 qRT-PCR检测NSCLC组织、癌旁组织、肿瘤细胞、人正常支气管上皮细胞中miR-7-5p和POLE4 mRNA相对表达水平;荧光素酶报告基因分析非小细胞肺癌细胞中miR-7-5p与POLE4的靶向关系;将si-NC、si-POLE4转染至SPC-A-1细胞中设为si-NC组和si-POLE4组,同时设置对照组;MTT法、划痕实验和Transwell实验分别检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭。结果 miR-7-5p在非小细胞肺癌组织和细胞中的表达水平降低、POLE4表达水平升高;miR-7-5p可靶向结合POLE4;si-POLE4组培养72 h,细胞OD值显著低于对照组和si-NC组（P<0.05）。si-POLE4组培养48 h细胞的迁移率和穿膜细胞数低于对照组和si-NC组（P<0.05）。结论 miR-7-5p可能通过靶向结合POLE4,抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

白血病抑制因子对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响及其机制

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）中白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor, LIF）对细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法 采用荧光定量PCR和Western blot检测LIF在人NSCLC组织和癌旁组织中的表达;应用重组LIF因子处理非小细胞肺癌细胞系A549和Z793, MTT技术检测重组LIF因子对细胞增殖的影响; Transwell实验检测重组LIF因子对细胞侵袭的影响;Western blot检测重组LIF因子对肿瘤细胞中AKT/mTOR信号通路的影响。结果 LIF在肺癌组织中的表达水平较正常癌旁组织显著上调（P=0.0078）。重组LIF处理A549和Z793细胞后,肿瘤细胞增殖较对照组明显增加（P<0.01）;肿瘤细胞的侵袭能力较对照组明显增强（P<0.01）;AKT蛋白的磷酸化水平明显增加,且其下游底物mTOR的表达显著上调。结论 LIF在非小细胞肺癌中表达上调,并通过激活AKT/mTOR信号通路促进非小细胞肺癌细胞的增殖和侵袭。     

miR-145通过靶向AP4对非小细胞肺癌A549细胞迁移侵袭的影响

 目的 探讨miR-145对非小细胞肺癌迁移与侵袭能力的影响及其可能的作用机制。方法 qRTPCR法检测非小细胞肺癌组织中miR-145和激活增强子结合蛋白4（activating enhancer binding protein4, AP4）mRNA的表达。A549细胞转染miR-145 mimic或者AP4 siRNA后，划痕实验与Transwell小室法分别检测A549细胞的迁移与侵袭能力，qRT-PCR法与免疫印迹法（Western blot）检测A549细胞中AP4 mRNA与蛋白表达水平；双荧光素酶报告基因法检测AP4 mRNA与miR-145的关系。结果 与癌旁正常组织相比，非小细胞肺癌组织中miR-145表达明显降低（P<0.05），而AP4 mRNA和蛋白表达均明显升高（均P<0.05）；与对照组相比，转染miR-145 mimic后，A549细胞中miR-145表达明显升高（P<0.05），AP4 mRNA和蛋白水平明显降低（P<0.05）；A549细胞的迁移数与侵袭能力均显著下降（均P<0.05）；双荧光素酶报告基因法验证AP4 mRNA是miR-145的靶基因。A549细胞转染AP4siRNA后，A549细胞的迁移数与侵袭数显著下降（均P<0.05）。结论 上调miR-145能抑制A549细胞的迁移与侵袭能力，可能与其抑制靶基因AP4表达有关。     

敲低PRPF19对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨敲低PRPF19之后对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法利用GEPIA等数据库分析PRPF19在胰腺癌及其正常组织中的表达差异;通过Western blot和qRT-PCR检测胰腺癌细胞中PRPF19蛋白和mRNA的表达水平;小干扰RNA(siRNA)技术沉默胰腺癌细胞中PRPF19的表达,并通过Western blot和qRT-PCR验证其敲低效率;CCK-8、克隆形成以及Transwell实验检测敲低PRPF19对胰腺癌细胞增殖、克隆形成以及迁移和侵袭能力的影响。结果GEPIA分析显示,与正常胰腺组织相比,PRPF19在胰腺癌组织中高表达;与正常胰腺细胞相比,PRPF19在MIA PaCa-2、PANC-1等多种胰腺癌细胞系中高表达(P<0.05);与对照组相比,敲低PRPF19后,胰腺癌细胞的增殖速率明显下降,克隆形成数量、细胞迁移和侵袭数量均减少(P<0.05)。结论敲低PRPF19可抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,PRPF19可能作为胰腺癌的一个癌基因发挥重要作用。     

miR-601靶向调控MMP-17抑制非小细胞肺癌的迁移和侵袭CSCD

目的探讨miR-601对非小细胞肺癌(NSCLC)迁移和侵袭能力的影响并探讨其可能的作用机制。方法RT-qPCR检测NSCLC组织中miR-601的表达,并分析表达水平与癌细胞侵袭和淋巴结转移的相关性。将miR-601 mimics瞬时转染A549细胞或H1299细胞,Transwell实验检测其对两种细胞迁移和侵袭能力的影响。生物信息学预测miR-601相关靶基因,采用双荧光素酶实验进行靶基因验证。检测miR-601的靶基因对A549细胞或H1299细胞迁移及侵袭能力的影响。结果miR-601在NSCLC组织中表达明显降低(P<0.001),且降低水平与癌细胞的浸润(P<0.007)及淋巴结转移(P<0.011)密切相关。瞬时转染miR-601 mimics能明显抑制A549细胞或H1299细胞的迁移及侵袭能力。生物信息学及荧光素酶报告实验提示MMP-17是miR-601的靶基因。MMP-17能促进A549细胞或H1299细胞的迁移和侵袭,但其促进迁移侵袭的能力可被miR-601抑制。结论miR-601通过靶向调控MMP-17而抑制非小细胞肺癌的迁移和侵袭。     

miR-205对胃癌细胞侵袭迁移的调控作用及其潜在机制

目的 探讨miR-205对胃癌HGC27细胞侵袭、迁移的作用及其机制。方法 实时荧光定量PCR法测定4种不同胃癌细胞（AGS、MKN74、HGC27、SGC7901）中miR-205的表达情况。体外培养的HGC27细胞通过转染miR-205 mimic上调细胞中miR-205的表达,划痕实验和Transwell实验观察其侵袭和迁移能力;Western blot检测上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）进程及相关信号通路的活性。结果 miR-205在4种胃癌细胞中均呈低表达（均P<0.05）。过表达miR-205后,HGC27细胞的迁移率由（54.7±4.1）%降低至（34.1±4.5）% （P=0.005）;细胞的侵袭率由（52.8±6.3）%降低至（32.2±4.9）%（P=0.001）。此外,过表达miR-205之后,胃癌细胞中上皮细胞标志物E-cadherin、β-catenin蛋白表达显著上升（P=0.002, P=0.003）,而间质细胞标志物N-cadherin、vimentin的蛋白表达显著下降（P=0.005, P=0.004）,Notch和snail的蛋白表达水平也显著降低（P=0.002, P=0.003）。结论 miR-205在胃癌细胞中低表达,且与胃癌细胞的侵袭和迁移密切相关;其分子机制可能与抑制EMT及Notch/snail信号通路有关。     

miR-124对非小细胞肺癌细胞增殖的影响及其机制

目的 探讨miR-124对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖的影响及其机制.方法 采用CCK8法和克隆形成实验评估miR-124对细胞增殖能力的影响.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测miR-124转染后细胞内PIM3的表达水平.通过双荧光素酶报告系统检测miR-124对PIM3荧光素酶活性的影响,证实miR-124可靶向作用于PIM3的3'UTR区.采用qRT-PCR和Western blot检测si-PIM3转染后细胞内PIM3的表达情况,采用CCK8法和克隆形成实验检测沉默PIM3后对细胞增殖能力的影响.结果 ①miR-124模拟物组的细胞活性(OD值)低于其对照组,差异有统计学意义,且呈时间依赖性;miR-124模拟物组的克隆形成数明显少于其对照组.②miR-124模拟物组的miR-124过表达后,其PIM3表达低于其对照组,差异有统计学意义.③含野生型结合位点(PIM3 3'UTR区完整片段)的miR-124模拟物组的荧光素酶活性低于其对照组,差异有统计学意义;含突变型结合位点(PIM3 3'UTR区突变片段)的两组无明显差异.④si-PIM3组的PIM3被沉默后,其表达水平明显低于其对照组,差异有统计学意义;si-PIM3组的细胞活性(OD值)低于其对照组,差异有统计学意义,且呈时间依赖性;si-PIM3组的克隆形成数明显少于其对照组.结论 miR-124可通过靶向作用于PIM3的3'UTR区下调后者的表达而抑制NSCLC细胞的增殖.