小鼠BPIN端功能基因片段的克隆及其表达产物的胞内杀菌作用

目的：克隆小鼠BPI36-259基因片段,转染细胞获得具有杀菌作用的目的抗菌蛋白。方法：采用生物信息学方法,构建PUC57-muBPI1-281质粒;PCR扩增获得muBPI36-259基因片段,制备pcDNA3.1（＋）-muBPI36-259重组质粒;采用电穿孔法将上述重组质粒转染RAW264.7细胞,Western blot法检测目的蛋白在胞内的表达;建立胞内杀菌实验模型,检测muBPI36-259目的蛋白对胞内寄生菌（伤寒杆菌）的杀伤作用。结果：muBPI36-259目的蛋白在RAW264.7细胞内成功表达,对胞内寄生菌-G-伤寒杆菌具有杀伤作用。结论：成功克隆了小鼠BPI36-259基因片段,转染RAW264.7细胞获得具有生物学活性目的抗菌蛋白。     

分枝杆菌噬菌体D29 LysinB/Holin真核表达载体的构建及杀菌试验

目的构建分枝杆菌噬菌体D29 LysinB/Holin融合蛋白真核表达载体, 通过细胞感染模型研究其在胞内对结核分枝杆菌的杀伤效果。方法构建原核重组质粒pET32a-LysinB并诱导表达, 纯化蛋白后制备多克隆抗体;构建真核重组质粒pcDNA3.1(+)-LysinB/Holin并转染进单核巨噬细胞RAW264.7, 经制备的LysinB多克隆抗体进行表达鉴定后, 建立细胞感染模型并通过抗酸染色和菌落计数检测LysinB/Holin融合蛋白的杀菌效果。结果成功制备LysinB的多克隆抗体。重组质粒pcDNA3.1(+)-LysinB/Holin在真核细胞中有效表达LysinB/Holin融合蛋白且对细胞无明显毒性。LysinB/Holin融合蛋白可有效杀伤胞内的结核分枝杆菌。结论重组质粒pcDNA3.1(+)-LysinB/Holin对胞内结核分枝杆菌有较好的杀伤效果, 且对细胞无明显毒性, 具有治疗结核病的潜能。     

小鼠巨噬细胞内表达结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白对细胞增殖和凋亡的影响

 目的：建立培养滤液蛋白10-早期分泌性抗原靶6（CFP10-ESAT6）真核表达质粒并转染RAW2647巨噬细胞,观察胞内表达CFP10-ESAT6对细胞活性及凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法：将CFP10-ESAT6融合基因插入真核表达质粒pEGFP-N1,构建重组质粒,转染RAW264.7巨噬细胞。采用MTT的方法测定CFP10-ESAT6融合蛋白对RAW264.7巨噬细胞活性的影响,采用结核分枝杆菌19 kD脂蛋白和十字孢碱（staurosporine）处理RAW264.7巨噬细胞,并以流式细胞术检测细胞凋亡率以及Toll样受体2（TLR2）的表达。结果：成功构建了重组质粒pEGFP-N1/CFP10-ESAT6并转染至RAW264.7巨噬细胞;与对照组相比,胞内表达CFP10-ESAT6不能影响巨噬细胞的活性,但可以明显抑制结核分枝杆菌19 kD脂蛋白所造成的凋亡(P＜0.05),并显著抑制了TLR2的表达(P＜0.05)。结论：巨噬细胞内表达的CFP10-ESAT6融合蛋白不具有细胞毒性作用,但可以通过下调TLR2的表达来抑制结核分枝杆菌19 kD脂蛋白所造成的凋亡。     

胞红蛋白对巨噬细胞氧化损伤的保护作用

<正>目的:本文探讨巨噬细胞氧化应激过程中胞红蛋白(CYGB)表达模式;研究CYGB在巨噬细胞氧化应激过程中的作用。方法:(1)Western blot检测RAW264.7细胞在H2O2刺激不同时间CYGB的蛋白表达水平;检测RAW264.7细胞在不同浓度H2O2刺激12 h时CYGB蛋白的表达水平。(2)构建CYGB过表达/低表达巨噬细胞模型,将RAW264.7细胞分为4组:对照     

BPIFB1在铜绿假单胞菌引起的炎症反应中的调节作用

目的研究杀菌性/通透性增强蛋白折叠结构1(BPIFB1)在铜绿假单胞菌引起的炎症反应中的作用机制和调节途径。方法应用RNA干涉、特异性蛋白激酶抑制剂阻断法,通过ELISA、Western blot法测定BPIFB1与脂多糖(LPS)共同作用于RAW264.7细胞后膜表面CD14、TLR受体以及胞内相关信号转导通路分子表达水平的变化情况。结果 BPIFB1与LPS作用后RAW264.7细胞表面CD14、TLR4和MyD88的表达水平明显下降;当细胞中MyD88、TRAF6、NF-κB等蛋白分子的表达被各自特异性siRNA所阻断后,BPIFB1与LPS抑制细胞因子TNF-α过表达的能力也被显著抑制;当用BPIFB1与LPS处理过的细胞用相应蛋白激酶抑制剂作用后,细胞内相关通路蛋白p38、pERK1/2、Akt1磷酸化水平被明显抑制。结论 BPIFB1与LPS结合通过阻抑相关胞内细胞因子的表达,降低了铜绿假单胞菌所产生的细胞炎性反应程度。     

CRISPR/Cas9技术敲除RAW264.7细胞的GPR43基因抑制其对肺炎克雷伯菌的吞噬功能

目的利用成簇的规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)技术构建稳定敲除G蛋白偶联受体43(GPR43)基因的RAW264.7细胞系,探究GPR43基因在肺炎克雷伯菌感染过程中的作用机制。方法设计3对针对GPR43基因的小导向RNA(sgRNA),将sgRNA插入pLenticrisprV2质粒中,利用慢病毒包装系统包装含有sgRNA的重组质粒pLenticrisprV2;将病毒感染RAW264.7细胞,嘌呤霉素筛选单克隆细胞;将扩增的单克隆细胞提取基因组DNA,测序GPR43基因相关序列并与野生型GPR43基因进行比对,确认敲除成功的细胞株(GPR43~(-/-) RAW264.7细胞), Western blot法检测GPR43蛋白水平。肺炎克雷伯菌感染GPR43~(-/-) RAW264.7细胞,实时定量PCR法检测细菌感染后细胞内白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平的变化,并观察敲除GPR43后, RAW264.7细胞吞噬能力的变化。结果挑选的单克隆细胞经Western blot验证GPR43蛋白不表达,并且DNA测序结果显示在sgRNA插入位置缺失34个碱基,证明成功敲除GPR43基因。GPR43~(-/-) RAW264.7细胞感染肺炎克雷伯菌后,细胞中的IL-1β、 IL-6和TNF-α表达水平均低于对照组,且GPR43~(-/-) RAW264.7细胞对肺炎克雷伯菌的吞噬能力降低。结论 CRISPR/Cas9技术敲除GPR43基因,抑制其对肺炎克雷伯菌的吞噬功能及炎性细胞因子的产生。     

槐定碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞CD14、P38、iNOS表达的影响

目的 探讨槐定碱不同给药方式对内毒素诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞表达CD14、p38 MAPK及i NOS的影响及意义。方法 采用LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型;实验细胞分为4组(n=6):空白对照组、LPS组、槐定碱预处理组、槐定碱预混合组;分别利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测RAW264.7巨噬细胞CD14、p38、i NOS m RNA表达量及蛋白表达量。结果 槐定碱2种给药方式(预处理及预混合)均可显著下调LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞p38、i NOS m RNA及CD14、p-p38、i NOS蛋白表达;槐定碱与LPS预混合可下调LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞CD14 m RNA表达,而槐定碱预处理对CD14 m RNA表达无明显影响。结论 槐定碱可能通过调控CD14、p38、i NOS表达与活化发挥抗内毒素效应。     

一种合成的新型内毒素结合肽突变体的体内外拮抗内毒素效应初步研究

目的设计构建新型内毒素结合肽突变体(mutant of endotoxin binding peptide,mEBP),并研究其体内外拮抗内毒素效应。方法采用F-moc固相合成法获得内毒素结合肽(endotoxin binding peptide,EBP)及其突变体mEBP;CCK-8法检测mEBP对RAW264.7细胞增殖的影响;ELISA法检测mEBP对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7细胞分泌TNF-α和IL-6的影响;Western blot法检测mEBP对LPS诱导的RAW264.7细胞表达p-p38 MAPK的影响;中性红法测定mEBP对LPS诱导的RAW264.7细胞吞饮功能的影响。复制烧伤合并内毒素血症小鼠模型;检测mEBP对建模后6 h小鼠血浆中TNF-α、ALT和AST浓度的影响;检测mEBP对模型小鼠48 h生存率的影响。结果 mEBP无可见的细胞毒性;mEBP可降低LPS诱导的RAW264.7细胞分泌TNF-α和IL-6(P<0.05);抑制p-p38 MAPK信号通路的激活;抑制RAW264.7细胞的吞饮功能(P<0.01);mEBP预处理可明显降低烧伤合并内毒素血症模型小鼠血浆中的TNF-α、ALT和AST浓度(P<0.05),提高模型小鼠48h生存率。结论 mEBP和EBP均具有明显的拮抗内毒素活性,其中mEBP拮抗活性更强。     

二氢杨梅素抗感染性休克的作用与机制研究

目的:探讨二氢杨梅素(Dihydromyricetin,DMY)抗内毒素休克的作用及其机制。方法:小鼠给予DMY处理7d后,腹腔注射脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)建立小鼠休克模型,在LPS刺激24、48、72、96、120、144、168 h后统计小鼠的死亡率。体外培养RAW264.7细胞,以DMY(10、50、100μmol/L)预处理细胞1 h后给予LPS 100 ng/ml刺激细胞。利用Western blot技术检测P-ERK、ERK、P-JNK、JNK、P-p38、p38蛋白的表达,免疫细胞化学技术检测RAW264.7巨噬细胞中c-Jun,c-Fos的核转录。结果:与LPS诱导组相比,DMY明显降低了LPS诱导小鼠感染性休克的死亡率;同时体外实验结果显示,DMY不仅可剂量依赖性抑制LPS诱导的RAW264.7细胞P-ERK、P-JNK、P-p38和蛋白表达水平的上调。还可明显抑制LPS诱导引起的RAW264.7细胞c-Jun,c-Fos蛋白核转录。结论:DMY可通过抑制MAPK信号通路的磷酸化水平从而抑制c-Jun和c-Fos的激活,降低LPS诱导的小鼠感染性休克的死亡率。     

Ficolin 3的表达、纯化及其对RAW264.7巨噬细胞的活化作用

目的构建人ficolin-3基因的原核表达载体在大肠杆菌中表达后纯化,检测可溶性His-ficolin在诱导巨噬细胞系RAW264.7活化中的作用。方法从人外周血单个核细胞cDNA中扩增人ficolin-3基因的cDNA序列,将其插入pET22原核表达载体中,酶切鉴定并测序验证重组质粒pET22b-ficolin 3后,在大肠杆菌BL21中诱导表达并纯化His-ficolin 3。以His蛋白为对照,利用流式细胞术检测不同浓度可溶性His-ficolin 3对RAW264.7细胞吞噬鸡红细胞能力的影响,利用ELISA检测His-ficolin 3对RAW264.7细胞分泌IL-6、IL-12和TNF-α的影响。结果酶切鉴定获得预期目的片段,测序证实重组质粒pET22b-ficolin 3构建成功。SDS-PAGE提示相对分子质量(Mr)33 000处有可溶性目的蛋白His-ficolin 3表达,His柱纯化后产物纯度在90%以上。Western blot法检测证实纯化产物为His-ficolin 3。和His蛋白相比,His-ficolin 3对RAW264.7细胞的吞噬能力具有剂量依赖性,即His-ficolin3浓度越高,吞噬能力越强;此外,His-ficolin3能显著诱导RAW264.7细胞分泌IL-6、IL-12和TNF-α等炎性细胞因子。结论成功构建了pETb-Ficolin 3重组载体并获得了纯度为90%以上的His-ficolin 3。His-ficolin 3能够显著促进巨噬细胞RAW264.7的活化。     

葫芦素E对脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的影响及作用机制

分析葫芦素E(CuE)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症反应的影响,研究其抗炎作用的分子机制。采用改良MTT法检测RAW264.7细胞的增殖;以碘化丙锭染色检测CuE对细胞周期的影响;采用细胞内细胞因子染色法分析肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达;免疫荧光染色分析胞内Actin的结构;应用免疫印迹法检测CuE对G-肌动蛋白(G-ac-tin)及核转录因子NF-κB核转位的影响。实验结果显示CuE对RAW264.7细胞的增殖具有剂量依赖性抑制作用,并降低细胞内G-actin的水平;CuE明显阻止LPS诱导的细胞伸展和伪足形成,使细胞周期阻滞于G2/M期。同时,CuE还明显抑制LPS活化的RAW264.7细胞表达促炎因子TNF-α,并显著降低LPS诱导的转录因子NF-κB的核转位作用。这些结果表明,CuE通过破坏RAW264.7巨噬细胞的肌动蛋白细胞骨架,引起细胞周期阻滞,并抑制LPS诱导的NF-κB核转位以及TNF-α的表达,从而发挥抗炎作用。     

槲皮素对ox-LDL所致的小鼠巨噬细胞脂质蓄积和过氧化的影响

 目的：研究槲皮素(quercetin,QUE)预处理对氧化低密度脂蛋白 (oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)所致小鼠巨噬细胞脂质蓄积和过氧化的影响,并探讨可能的分子机制。方法：体外培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,给予20、40和80 μmol/L QUE预处理30 min,再加入ox-LDL (100 mg/L)继续培养24 h。采用油红O染色检测细胞内脂质蓄积,测定培养液乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,以评价细胞膜完整性和脂质过氧化程度。分别采用real-time PCR和免疫印迹技术检测清道夫受体CD36 mRNA和蛋白表达变化。结果：QUE (20,40和80 μmol/L)预处理显著抑制ox-LDL所诱导的巨噬细胞内脂质蓄积和泡沫细胞形成,且呈浓度依赖性。ox-LDL组细胞LDH释放增加,而QUE预处理则显著抑制ox-LDL的上述细胞毒性。与ox-LDL组比较,QUE预处理组细胞内ROS含量和培养液中MDA水平明显降低。另外QUE预处理在mRNA和蛋白水平均明显抑制ox-LDL所诱导的CD36表达上调。结论: QUE可减轻ox-LDL所诱导的小鼠巨噬细胞脂质蓄积和过氧化,其机制可能部分是通过下调CD36表达实现的。     

肺炎支原体经ROS激活NLRP3炎性体诱导RAW264.7细胞分泌IL-1β

 目的: 观察肺炎支原体(Mycoplasma pneunoniae,Mp)促进NLRP3炎性体的活化及下游促炎性细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)的表达是否与活性氧簇(ROS)有关。方法: 预先用5 mmol/L ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理RAW264.7细胞30 min,用10 MOI Mp分别感染RAW264.7细胞4、8、16和24 h。流式细胞术检测细胞内ROS水平;real-time PCR法检测细胞NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达;Western blot 法检测NLRP3、ASC和caspase-1 p20的蛋白水平;ELISA法检测细胞上清液IL-1β的分泌水平。结果: 与正常组比较,感染后4、8、16和24 h模型组ROS生成显著增加(P< 0.01);感染后8、16和24 h模型组NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达显著增加 (P<0.01),感染后16和24 h NLRP3、ASC和caspase-1 p20的蛋白水平上调(P<0.01),感染后24 h 细胞上清液IL-1β含量显著增加(P< 0.01);与模型组比较,NAC组在上述相应时点ROS生成降低,NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达下调,蛋白水平下降,细胞上清液IL-1β的含量减少。结论: Mp可能通过刺激RAW264.7细胞生成ROS而激活NLRP3炎性体。     

氧化剂对RAW264.7细胞M-CSF

目的:揭示氧化应激对巨噬细胞巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)基因表达的影响。方法:采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术,观察氧化剂叔丁基氢过氧化物(tbOOH)对RAW264.7细胞M-CSF mRNA表达的影响。结果:一定浓度的tbOOH(1.5×10^-4 mol/L)能够诱导RAW264.7细胞M-CSF mRNA表达,且随tbOOH浓度的增加,其对M-CSF mRNA的诱导作用增强;另外,环己酰亚胺(cycloheximide)及acetovanilone可减弱tbOOH对RAW264.7细胞M-CSF表达的诱导。结论:tbOOH可诱导RAW264.7细胞M-CSF mRNA的表达,且作用在转录水平,该过程中有新的蛋白质合成及内源性活性氧产生的参与。     

干扰P2X_7R基因对RAW264.7细胞增殖和吞噬的影响

目的:应用RNA干扰技术抑制小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞P2X7受体(P2X7R)基因的表达,建立稳定干扰细胞株,并观察其对细胞增殖和凋亡的影响。方法:用脂质体法将P2X7R shRNA重组质粒转染至RAW264.7细胞,经G418筛选后获得稳定干扰细胞株。细胞分为野生型(WT)组、阴性对照(NC)组和干扰(sh P2X7R)组。Real-time PCR法检测细胞中P2X7R mRNA的表达,Western blot检测细胞中P2X7R蛋白的表达;CCK-8方法检测细胞生长活性,5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,Ed U)掺入实验检测细胞增殖活性;流式细胞术分析细胞周期的分布和吞噬情况。结果:P2X7R shRNA能明显抑制RAW264.7细胞的P2X7R mRNA和蛋白的表达,抑制率在80%以上。48 h后,sh P2X7R组细胞的生长速度明显高于NC组和WT组(P0.05),增殖期细胞比例明显升高(P0.05),说明下调P2X7R基因能明显促进细胞增殖。sh P2X7R组的细胞周期出现改变,S期和G2/M期的比例明显上升,增殖指数增高(P0.05)。sh P2X7R组的细胞吞噬活性明显高于NC组(P0.05)。结论:本研究成功构建了稳定干扰P2X7R基因表达的小鼠巨噬细胞株RAW264.7,sh P2X7R能够明显促进RAW264.7细胞的增殖,改变了细胞的吞噬活性。     

葛根素对RAW264.7源性泡沫细胞胆固醇摄取及外排功能的影响

目的:探讨葛根素(puerarin,Pur)对RAW264.7源性泡沫细胞胆固醇摄取及外排功能的影响。方法:以氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导RAW264.7源性泡沫细胞。细胞经处理后,利用荧光探针Di I-ox-LDL检测泡沫细胞摄取ox-LDL的能力,NBD标记胆固醇外排实验检测泡沫细胞的胆固醇外排功能,Western blot法检测LC3II、P62、CD36、ATP结合盒转运蛋白A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)、溶酶体酸性脂肪酶(lysosomal acid lipase,LAL)以及p-AMPK的蛋白水平。结果:RAW264.7源性泡沫细胞经Pur处理后胆固醇摄取减少、胞内胆固醇外排增加并且自噬相关蛋白LC3II表达增加,P62表达减少,脂质吸收相关蛋白CD36表达减少,胆固醇外排相关蛋白ABCA1和LAL表达增加,其变化与自噬激动剂雷帕霉素处理后改变类似。Pur与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤共处理后,胆固醇摄取增加、胆固醇外排功能减弱,并且ABCA1、LAL和p-AMPK的蛋白水平减少,但CD36表达未有明显改变。结论:Pur可使得泡沫细胞LAL和ABCA1介导的胆固醇外排能力有所增强,其机制可能是通过AMPK通路增强自噬对胆固醇外排的调控;又可通过对CD36负向调节而使得泡沫细胞对脂质的摄取减少。     

干扰盐皮质激素受体基因对RAW 264.7细胞增殖和凋亡的影响

 目的：应用RNA干扰技术沉默小鼠RAW 264.7巨噬细胞盐皮质激素受体(MR)基因,建立稳定干扰细胞株,并观察其对细胞增殖和凋亡的影响。方法：针对MR基因设计合成重组MR shRNA质粒,脂质体法转染质粒至RAW 264.7细胞,经G418筛选后获得稳定表达细胞株。细胞分为3组：野生型(WT)组、阴性对照（NC）组和干扰（shMR）组。荧光显微镜下观察确定细胞的转染效率;实时定量PCR法检测细胞中MR mRNA的表达;CCK-8方法检测细胞增殖活性;流式细胞术分析细胞周期分布和凋亡情况。结果：(1) MR shRNA能明显抑制RAW 264.7细胞的MR基因表达,抑制率70%以上。(2) 从第3 d开始,shMR组细胞的生长速度明显低于NC和WT组（P<0.05）,说明MR shRNA能明显抑制细胞增殖。(3) WT、NC和shMR组的增殖指数分别为(37.2±0.5)%、(37.5±1.6)%和(31.0±1.3)%,shMR组的细胞周期出现改变,S期和G₂/M期比例明显下降,增殖指数下降（P<0.05）。(4) WT、NC和shMR组的细胞凋亡率分别为(2.18±0.36)%、(6.65±0.81)%和(7.70±1.34)%,shMR组略高于NC组,但二者的差异无统计学意义（P>0.05）。结论：本研究成功构建了稳定干扰MR基因表达的RAW 264.7细胞株,MR shRNA能够明显抑制RAW 264.7细胞增殖,但对其凋亡无明显影响。     

Killing of Legionella pneumophila by nitric oxide in gamma-interferon-activated macrophages.

The role of nitric oxide (NO) radicals in killing the intracellular bacterial pathogen Legionella pneumophila (Lp) was examined in infected macrophages. Murine (RAW 264.7) and human (HL-60) cell monolayers were treated with 100 U/ml gamma-interferon (IFN) and cocultured with Lp in the presence and absence of NGMMA, a specific inhibitor of NO production. Viable Lp in IFN-treated RAW 264.7 cells decreased from 3.8 to 0.7 +/- 0.12 log CFU/ml after 24 h incubation, whereas in IFN+NGMMA-treated RAW 264.7 cells, viable Lp persisted at 2.2 +/- 0.2 log CFU/ml after 24 h. This increased survival corresponded with an inhibition of NO production (5.65 +/- 2.99 microM with NGMMA vs. 58.6 +/- 5.36 microM without NGMMA). Viable Lp were susceptible to killing, in a dose-dependent fashion, by 0, 2.5, and 5.0 mM sodium nitroprusside, a source of NO radicals. IFN-treated RAW 264.7 cells also had significantly decreased levels of intracellular iron (below assay limit) when compared to IFN+NGMMA-treated cells (72.0 +/- 0.78% of control). Normally permissive HL-60 cells treated with IFN were bacteriostatic rather than bactericidal, and NO production was not detected above background. Thus, NO radicals play a critical role in the bactericidal activity against Lp by IFN-treated RAW 264.7 cells, but the absence of NO production limits IFN-treated HL-60 cells to bacteriostasis.     

LRRK2/NF-κB信号对BCG诱导巨噬细胞RAW264.7炎症应答的调控

目的:探讨富亮氨酸重复序列激酶2(LRRK2)在巨噬细胞抗结核分枝杆菌感染中的作用机制。方法:用结核分枝杆菌疫苗株卡介苗(BCG)感染巨噬细胞RAW264.7,菌落形成单位(CFU)计数检测结核分枝杆菌生存率;酶联免疫吸附法测定白细胞介素(IL)-1β、IL-6和干扰素γ(IFN-γ)表达水平;q PCR和Western blot法分别检测相关m RNA和蛋白的表达。结果:BCG感染的巨噬细胞RAW264.7中LRRK2的m RNA和蛋白表达均显著上调,并刺激RAW264.7细胞释放大量细胞因子。此外,沉默LRRK2明显抑制BCG感染巨噬细胞的分枝杆菌存活率;同时,沉默LRRK2降低BCG刺激诱导分泌的促炎细胞因子IL-1β、IL-6和IFN-γ。更为重要的是,LRRK2可能通过正调控NF-κB通路调节BCG诱导的炎症应答进程。结论:LRRK2/NF-κB信号正调控BCG刺激诱导的巨噬细胞炎症应答进程。本研究结果为结核病在基因水平上的诊断和治疗提供了实验依据。