竞争抑制法检测抗-HBc总抗体的影响因素及对策

目的研究酶联免疫吸附试验(ELISA)待测血清标本与辣根过氧化物酶(HRP)标记的乙型肝炎病毒(HBV)核心抗体(抗-HBc-HRP)加入间隔时间对抗-HBc总抗体检测结果的影响。方法选择HBV标志物检测结果为阴性的标本分A、B、C 3组:A组,加样后延长室温放置不同时间再加入抗-HBc-HRP;B组,加样同时加入抗-HBc-HRP延长室温放置不同时间;C组,A组方式测定的阴性转阳性标本再用ELISA试剂2和化学发光(CLIA)试剂重复测定,确认阴、阳性结果。结果A组加样方式对抗-HBc总抗体检测结果影响明显,且加样和加入抗-HBc-HRP的间隔时间越长,标本的假阳性越多;B组加样方式对抗-HBc总抗体检测结果基本无影响;C组ELISA试剂1和试剂2有72.8%的检测结果一致;20例ELISA阴性转阳性标本经过CLIA方法验证仍为阴性。结论A组的不公平竞争在不同时间内可出现程度不等的抗-HBc总抗体假阳性;B组加样方式可最大限度地减少抗-HBc总抗体假阳性,保证检验质量。     

竞争抑制法检测抗-HBc总抗体的影响因素及对策

目的 研究酶联免疫吸附试验（ELISA）待测血清标本与辣根过氧化物酶（HRP）标记的乙型肝炎病毒（HBV）核心抗体（抗-HBc-HRP）加入间隔时间对抗-HBc总抗体检测结果的影响。方法 选择HBV标志物检测结果为阴性的标本分A、B、C3组：A组，加样后延长室温放置不同时间再加入抗-HBc-HRP；B组，加样同时加入抗HBc-HRP延长室温放置不同时间；C组，A组方式测定的阴性转阳性标本再用ELISA试剂2和化学发光（CLIA）试剂重复测定，确认阴、阳性结果。结果 A组加样方式对抗一HBc总抗体检测结果影响明显，且加样和加入抗-HBc-HRP的间隔时间越长，标本的假阳性越多；B组加样方式对抗-HBc总抗体检测结果基本无影响；C组ELISA试剂1和试剂2有72．8％的检测结果一致；20例ELISA阴性转阳性标本经过CLIA方法验证仍为阴性。结论 A组的不公平竞争在不同时间内可出现程度不等的抗-HBc总抗体假阳性；B组加样方式可最大限度地减少抗-HBc总抗体假阳性，保证检验质量。     

加样间隔时间对ELISA竞争抑制法检测抗-HBe和抗-HBc结果的影响

目的 研究ELISA竞争抑制法待检标本与辣根过氧物酶(HRP)标记的抗体加入间隔时间对抗-HBe和抗-HBc结果的影响.方法 用ELISA竞争抑制法将120份标本(放射免疫法定量检测乙肝标志物全部阴性)分两组检测抗-HBe和抗-HBc.一组加入标本后于室温放置不同时间再加入酶标抗体;另一组是将标本和酶标抗体同时加入,于室温放置不同时间,其余严格按说明书操作,最后于酶标仪读取抗-HBe、抗-HBc的结果.结果 加入标本后1、2、5、10、20、30分钟时加入酶标抗体其抗-HBe利抗-HBc的结果分别与0分钟的结果比较,在1分钟组结果无差异(P>0.05).2分钟组结果有差异(0.0l0.05).结论 加入标本后酶标抗体加入间隔时间越长,假阳性率越高,为了保证抗-HBe和抗-HBc检测结果的准确性,标本加入后应在一分钟内加入酶标抗体;标本和酶标抗体同时加入室温放置时间的长短对检测结果基本无影响.     

两种试剂检测乙型肝炎病毒e抗体结果比较

目的 探讨两种酶联免疫吸附试验(ELISA)一步法试剂对乙型肝炎病毒e抗体(抗-HBe)检测结果的影响.方法 用上海科华及北京金豪公司生产的试剂盒测定患者样本.样本加入反应孔后分别于0、15、30 min和60 min后加入酶标志物(金豪抗-HBe还要同步加HBeAg中和试剂),余下步骤均按说明书严格操作.另将金豪试剂改变加样顺序以人为构成不同形式的不公平竞争以探讨其影响.结果 科华试剂由于预先包被了HBeAg,加样时间长的标本吸光度A值降低.金豪试剂无明显影响.改变加样顺序后得到的吸光度A值也证实了不公平竞争的影响.结论 竞争法检测抗-HBe时应在样本加入后同步加入HBeAg中和试剂及酶联试剂,以尽可能减少加样时差对结果的影响.     

非公平竞争对竞争抑制法检测抗-HBc总抗体的影响

目的:研究酶联免疫吸附实验(ELISA)在乙肝"两对半"中检测核心总抗体(抗HBc)总抗体由于加入标本与加入酶标记物在时间上不同步形成的"不公平"竞争对结果的影响.方法:收集单纯抗HBc阳性标本及部分阴性标本共90例,标本加入固相孔内放置不同时间后再加入抗HBc-辣根过氧化物酶(HRP)和将标本与抗HBc-HRP预先混匀后再加入固相孔内,所得结果与真实参考结果相比较,并同时考察由于加入标本与加入酶标记物在时间上不同步对乙肝表面抗原(HBsAg)阳性标本中抗-HBc的影响.结果:单纯抗HBc阳性标本加入标本与其后加入抗HBc-HRP的时间间隔越长假阳性越多,但这种影响对HBsAg阳性标本影响很小.结论:加入标本间隔一定时间后再加入抗HBc-HRP而引起的抗HBc假阳性,可通过在试管内预先混匀标本和抗HBc-HRP来消除.同时这种假阳性在HBsAg阳性标本中基本不存在.     

全自动酶联免疫分析仪检测乙肝核心抗体的加样质量控制

目的选择TECAN全自动酶联免疫分析仪检测乙肝核心抗体(HBcAb)的理想检测程序。方法对同一样本设置不同的加样方式、加样顺序,获得相应的数据,比较检测结果以确定理想检测程序。结果 TECAN全自动酶联免疫分析仪检测HBcAb,加样针存在拖带现象,可能造成标本污染,出现假阳性结果,或污染阴性对照,使CO值降低,造成假阴性结果。通过改进加样程序,减少携带概率,避免阴性对照污染,提高检测质量。结论用单独加样方式,先加阴阳对照再加标本的顺序为理想的检测程序。     

竞争抑制法检测HBeAb的影响因素及对策

目的研究酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清标本与辣根过氧化物酶（HRP）标记的乙型肝炎病毒（HBV）e抗体（抗-HBe—HRP）,加入间隔时间对抗-HBe抗体检测结果的影响。方法选择HBV标志物检测结果为阴性的标本分为A、B、C3组。A组加样后延长室温放置不同时间再加入抗HBe-HRP;B组在加样的同时加入了抗-HBe-HRP延长室温放置不同时间;C组为A组方式测定的阴性转阳性标本再用ELISA试剂2和化学发光（CLIA）试剂重复测定,确认阴、阳性结果。结果A组加样方式对抗-HBe抗体检测结果影响明显,且加样和加入抗HBe-HRP的间隔时间越长,标本的假阳性越多;B组加样方式对抗HBe抗体检测结果基本无影响;C组ELISA试剂1和试剂2有73．1％的检测结果一致;25例ELISA阴性转阳性标本经过CLIA方法验证后仍为阴性。结论A组的不公平竞争在不同时间内可出现不同程度的抗-HBe抗体假阳性;B组加样方式可最大限度地减少抗-HBe抗体假阳性,保证了检验质量。     

分批加酶试剂法消除操作时差对竞争法检测抗-HBc的假阳性影响

目的 探讨操作时差对竞争法检测抗-HBc的假阳性影响及消除办法,提高检验质量.方法 方法1:在竞争法检测抗-HBc酶标孔中加入血清标本后放置5,10,15,20,30 min再加酶试剂,然后进行下一步操作;方法2:同时加入血清标本及酶试剂后放置5,10,15,20,30 min,然后再进行下一步操作;方法3:同时加入血清标本及酶试剂,立即进行下一步操作(放置0 min,作为标准对照组).用上述三种方法对36例抗-HBc阴性标本及30例抗-HBc阳性标本进行实验,对实验结果进行统计分析,探讨操作时差对竞争法检测抗-HBc假阳性的影响及消除办法.结果 方法1:36例抗-HBc阴性标本5,10,15,20,30 min各组吸光度低于对照组,假阳性率分别为16.7%,27.8%,33.3%,36.1%,38.9%;30例抗-HBc阳性标本5,10,15,20,30 min各组吸光度低于对照组,但未造成结果的假阳性及假阴性.方法 2:36例抗-HBc阴性标本及30例抗-HBc阳性标本5,10,15,20,30 min各时间段组与对照组比较吸光度差异均无统计学显著性意义,无一例出现假阳性或假阴性.结论 同时加入血清标本及酶试剂,放置不同时间,将血清标本与酶试剂的不公平竞争时差转变为公平竞争时差,可消除操作时差对竞争法检测抗-HBc的假阳性影响.工作中可在加完一批样本即加入酶试剂,然后加下批标本及酶试剂,即分批加酶试剂法,可保证检测结果的准确性.     

HCV-ELISA加样负偏差对稀释液吸光值的影响及其意义

目的探讨酶联免疫法检测丙型肝炎抗体(HCV-ELISA)加样负偏差导致的稀释液吸光值(OD值)变化。方法应用稀释液加样后变色技术,分别在HCV-ELISA标准加样量10μL(对照组)基础上递减1、2、3、4、5μL比较进行加样,分析不同加样偏差所致的稀释液OD值(620nm)的变化及意义。结果除A组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)外,B、C、D、E组对照组均存在统计学意义(P<0.01)。结论稀释液OD值随着加样负偏差增大而下降,可利用其变化关系判定实验加样准确度,避免因肉眼无法判定加样偏差而导致的血液检测结果不准确,确保血液安全。     

微粒子酶免分析与酶联免疫吸附法检测HBsAg的比较

目的 比较微粒子酶免分析(MEIA)法与酶联免疫吸附(ELISA)法检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的灵敏度和准确性.方法 用两种方法对乙型肝炎(下称乙肝)专科门诊186份血清进行HBsAg测定.对4 120例体检者中挑选用ELISA方法检验乙肝两对半HBsAg阴性,只有乙型肝炎病毒e抗体(抗-HBe),乙型肝炎病毒c抗体(抗-HBc)2项阳性模式66例,仅有HBeAg 1项阳性的1例,HBeAg阳性同时抗-HBc阳性的2例,进行MEIA法的测定.结果 186例血清中MEIA法检测HBsAg阳性94例,ELISA法检测HBsAg阳性78例(P＜0.05),二者阳性率差异有统计学意义,挑选出的其它3种模式MEIA法HBsAg有部分检出.结论 MEIA测定HBsAg能大大提高其分析检测的灵敏度、准确性.     

乙型肝炎病毒核心抗体特殊模式检测结果比较

目的:探讨酶联免疫吸附(ELISA)与微粒子免疫化学发光(MEIA)两种方法对"乙肝两对半"中抗-HBc检测结果判断,减少误诊.方法:用ELISA筛选出200例特殊模式用MEIA方法再次检测核心抗体,并进行HBV-DNA含量检测结果分析.结果:ELISA与MEIA两种检测方法对抗-HBc检出率差异有统计学意义(P<0.05);三组HBV-DNA含量检测差异无统计学意义(P>0.05).结论:抗-HBc是最早出现在体内的非保护性抗体,MEIA是检测特殊模式较好方法,联合HBV-DNA含量检测结果共同分析,减少误诊发生.     

酶联免疫吸附试验竞争法检测HBeAg的探讨

目的 研究酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清标本与辣根过氧化物酶(HRP)标记的乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb-HRP),加入间隔时间对HBeAg检测结果的影响.方法 选择乙型肝炎病毒(HBV)标志物检测结果为阴性的标本分为甲、乙两组,甲组:加样后延长室温放置时间再加入HBeAb-HRP;乙组:加样同时加入HBeAb-HRP,延长室温放置时间.结果 甲组加样方式对HBeAg检测结果影响明显,且加样和加入HBeAb-HRP的间隔时间越长,标本的假阳性越多;乙组加样方式对HBeAg检测结果基本无影响.结论 甲组的不公平竞争在不同时间内可出现程度不等的HBeAg假阳性;乙组加样方式可最大限度地减少HBeAg假阳性,以确保检测结果的准确性.     

HBsAg阴性HBV DNA阳性样本300例补充试验结果分析

目的 分析乙肝表面抗原（HBsAg）阴性乙肝病毒DNA(HBV DNA)阳性标本的补充试验结果。方法 选择2013年至2021年间的献血者样本,用酶联免疫吸附试验（ELISA）法筛查,无反应性标本用核酸检测技术（NAT）方法检测,对HBV DNA检测呈反应性的部分样本再进行乙肝五项进行补充试验。结果 对498 279份ELISA阴性的样本进行NAT检测,共检出HBV DNA阳性886例,隐匿性乙肝（OBI）检出率为1.78‰,对其中300份样本进行乙肝五项补充试验,发现抗-HBc阳性27例,抗-HBe、抗-HBc两项阳性62例,HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性11例,抗-HBs、抗-HBc阳性163例,抗-HBs阳性10例,五项全阴共有27例。结论 献血者中存在血清学阳性OBI和血清学阴性OBI,补充试验对指导献血者就医,提升血站服务具有重要意义。     

检测抗-HIV1标准物时样品针加样先后顺序的改变对S/CO值的影响

目的 全自动酶免分析仪酶联免疫吸附试验法检测人类免疫缺陷病毒抗体1型(抗-HIV1)标准物.方法 检测石景山医院患者血清样本带抗-HIV1标准物时,先加标准物后加患者血清与先加患者样本血清后加标准物这种加样针次序的改变分析对标准物血清S/CO值的影响.结果 检测过程中,仪器样品针对抗-HIV1标准物与患者血清标本加样的...     

乙型肝炎病毒标志物阳性与丙氨酸转氨酶变化分析

目的观察乙型肝炎病毒(HBV)前S2抗原和乙肝血清学标志物:乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(抗-HBs)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝e抗体(抗-HBe)、乙肝核心抗体(抗-HBc)不同阳性类型患者血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)的变化。方法用酶联免疫吸附实验(ELISA)和酶速率法检测951例患者乙肝血清标志物和ALT,根据HBV标志物不同阳性情况分为3组:A组363例,HBsAg、HBeAg、抗-HBc、pre-S2阳性;B组486例,HBsAg、抗-HBc、pre-S2阳性,抗-HBe阳性或阴性;C组102例,HBsAg、抗-HBc阳性,pre-S2阴性,HBeAg和抗-HBe阳性或阴性。结果各组ALT50U/L例数及百分率分别为A组363例(46.3%),B组486例(23.5%),C组9例(8.8%),其中A组与B组ALT异常率,B组与C组ALT异常率,A组与C组异常率比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论乙肝患者中大三阳合并前S2抗原人群的ALT异常率明显高于前S2抗原阴性和其他乙肝模式的患者。     

胶体金免疫层析试验检测乙肝两对半时HBsAg假阴性结果的处置

目的胶体金免疫层析试验(GICA)检测乙肝两对半时,对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)结果疑似假阴性的标本分别用酶联免疫吸附试验(ELISA)和时间分辨荧光分析法(TRFIA)定量试验进行HBsAg检测,并用抗体中和确认试验进行确认,以获得一个处理GICA检测HBsAg产生假阴性结果的可靠方法。方法 2014年1月至2015年2月用GICA检测乙肝两对半的标本3 078例,选取其中结果为单乙型肝炎核心抗体(抗-HBc),或单乙型肝炎e抗体(抗-HBe)为阳性,或抗-HBc和抗-HBe同为阳性,而HBsAg、乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)均为阴性的标本86例,分别用ELISA和TRFIA检测其HBsAg,对检测为阳性的标本进行抗体中和确认试验确认。结果 86例标本经抗体中和确认试验确认阳性的为35例;ELISA检出阳性标本28例,其中2例为假阳性;TRFIA检出阳性标本35例与抗体中和确认试验符合率100%。结论 GICA检测乙肝两对半时,对HBsAg结果疑似假阴性的标本可选用TRFIA进行复查确认。     

影响FAME全自动酶免分析系统检测因素探讨

目的　探讨 3种常见的影响全自动酶免分析系统检测结果的因素 ,提高 ELISA法检测结果的准确性。方法　 ( 1 )随机选择对照组和实验组各 44份无偿献血者血样 ,分别进行两种不同方式的抗凝 ,应用 FAME全自动酶免分析系统进行 HBs Ag、抗 -HCV、抗 -HIV、TP4个项目检测 ,比较两组检测结果。 ( 2 )在全自动加样仪的加样高度设置中 ,不断增加加样高度 ,观察 FAME对 4个质控血清平行孔的检测效果。( 3 )在不同温度的 FAME洗液下 ,对 88份正常的无偿献血者血样进行 4个项目检测 ,观察不同温度的洗液对检测结果的影响。结果　 ( 1 )除抗 -HCV外 ,实验组中其他 3项检测结果均有假阳性出现 ,且阴性标本的 S/CO值明显高于对照组 ( P<0 .0 0 1 )。( 2 )当加样高度低于 9.1 mm时 ,抗 -HCV有假阴性出现 ,4项检测的 CV值均较高 ,均一性差。 ( 3 )洗液温度低于 1 4℃时 ,除抗 -HCV外 ,其他 3项检测结果有假阳性出现 ,CV值较高 ,均一性差。结论　标本的抗凝效果、全自动加样仪的加样高度和洗液温度对全自动酶免检测结果均有影响 ,只有在血样充分抗凝、加样高度和洗液温度适当等条件下 ,才能获得准确的检测结果     

加样时间差异对酶免疫竞争法检测抗-HBc结果的影响

酶免疫竞争法是检测乙型肝炎（乙肝）病毒核心抗体（抗-HBc）最普遍的方法，其方法不断改进，反应时间大为缩短，在成批样本测定时，常导致出现前后结果不一问题。对此进行如下分析。     

学龄前儿童乙型肝炎表面抗体阳性率调查

我站于2005年3月至4月,对县直幼儿园学龄前儿童2325人进行乙肝表面抗体检测,结果报告如下:1材料与方法1.1潍坊三维生物工程有限公司生产的酶联免疫法乙肝表面抗体检测试剂盒。1.2仪器设备潍坊科华酶标仪ST360、洗板机ST36 W。1.3方法空腹采静脉血2ml,取血清按试剂盒说明书操作。2结果(见表1)2.2结果判定样本OD值S/C.O≥1者判为抗-HBs阳性;反之,判为抗-HBs阴性。从上表中可以看出:学龄前儿童平均乙肝抗体阳性率为42.2%。随着儿童年龄的增长,表面抗体的阳性率逐年下降。3结论我国是一个乙肝大国,据报导乙肝表面抗原阳性率在人群中占10%…     

乙型肝炎病毒PreS2抗原及抗-PreS2抗体检测的意义

目的分析乙型肝炎(下称乙肝)病毒PreS2抗原及抗-PreS2抗体检测的临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对乙肝病毒PreS2抗原及抗-PreS2抗体进行检测。结果PreS2抗原在乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、HBeAg、抗-HBc阳性组和HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性组的检出率分别为100%和83.3%,两组分别与抗-HBs、抗-HBc阳性或抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc阳性组比较,差异有统计学意义(P0.05)。抗-PreS2抗体在抗-HBs、抗-HBc阳性或抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc阳性组的检出率为33.3%,与HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性组和HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论将PreS2抗原与抗-PreS2抗体作为常规检测,在观察乙型肝炎病毒的早期感染及患者预后判断方面有重要价值。