Slit/Robo信号在中枢神经发育和再生中的作用

<正>1984年Kidd等[1]首次在果蝇胚胎中发现Slit蛋白,1999年Brose等[2]发现Slit蛋白受体Roundabout(Robo),自此人们对Slit/Robo信号的认识有了重要的进展。在脊椎动物和无脊椎动物中,Slit/Robo是轴突导向和细胞迁移的一个重要调节机制[3-5]。它主要是通过对细胞骨架蛋白产生排斥、吸引等作用而影响生物的结构、发育和导向,产生众多的生物学功能[6,7]。除此之外,Slit/Robo信号还影响肿瘤的发生与迁移[8-12],白细胞趋化,肾脏血管生成和心脏发育等[13]。Slits是一种分泌型细胞外基质蛋白,在哺乳动物体内存     

Slit及Robo在神经系统发育与生长中的作用

Slit及其受体Robo是近年发现的参与神经轴突诱向、细胞迁移甚至轴突分支、树突生长过程的新的诱向分子。本文从Slit和Robo蛋白的分子结构、在中枢神经系统中的表达、在中枢神经系统发育中的作用及在成体脑内可能作用的研究进行综述。     

Slit2/Robo1信号对鸡胚早期神经管及体节发育的影响

目的: 探讨Slit2/Robo1对鸡胚早期神经管和体节发育的影响。 方法: 显微注射法将质粒注射入HH10期胚胎神经管内,活体胚胎细胞电穿孔方法转染胚胎半侧神经管,以另一侧神经管为对照侧,原位杂交及免疫荧光方法观察转染10 h后神经管的发育和神经嵴细胞迁移至体节的情况。结果: 下调Robo1侧神经管发育较正常对照侧异常,同时发现Slug表达和神经嵴细胞迁移至体节路线发生改变。结论: Slit2/Robo1信号可能通过影响Slug基因表达,对胚胎早期神经管闭合、神经嵴细胞正常产生及迁移方向以及体节分化有重要作用。     

生长锥诱向中Eph-ephrins导向分子家族的信号转导

轴突导向(axon guidance)是神经细胞发育的一种特殊的运动形式,通过其末端膨大的结构-生长锥(growth cone)表面的受体识别生长路径上不同时间和空间表达的信号分子,寻找到靶标后获得停止前进的信号,使轴突与靶细胞建立突触联系[1]。生长锥诱向(turning)调节轴突延伸,是轴突导向     

神经轴突导向分子Slit3功能研究进展

 神经轴突导向分子Slit3是近年发现的分泌型细胞外基质蛋白,基因功能研究表明,Slit3对神经元的发育并非必要,但对非神经细胞相关发育过程却是必须的。目前研究认为Slit3也是一个新的血管生成因子,对细胞迁移、血管生成、器官发育、生殖调节以及肿瘤和精神疾病的发生等多种生命活动具有重要作用。     

神经纤维蛋白在神经生长锥的表达和定位

目的　探索神经纤维蛋白 (neurofilamentprotein ,NFP)在神经生长锥的表达及其机能意义。方法　采用免疫双荧光染色法 ,以荧光显微镜观察NFP在初代培养脊神经节细胞生长锥的表达及其定位特征。结果　NFP密集分布在细胞质中、神经突起内 ,延伸至生长锥体部的C区内 ;结论　NFP是构成生长锥的细胞骨架成分之一 ;参与神经突起及生长锥的物质运输活动     

钮蛋白在神经生长锥的三维分布及其机能意义

目的　探索钮蛋白 (vinculin)在神经生长锥形态变化和神经生长过程中的作用机制。　方法　用免疫细胞化学方法 ,检测了初代培养鸡胚脊神经节细胞生长锥的细胞骨架蛋白vinculin的三维分布特征及其与纤维型肌动蛋白 (F actin)的相互关系。　结果　在三维的水平面上 ,vinculin与F actin的免疫反应活性在P领域和C领域的部分区域重合 ,在P领域伸展方向前端和丝状伪足内免疫反应活性最强。vinculin比F actin更接近细胞膜分布 ;在纵轴方向 ,vinculin主要分布在中部以上的表面游离侧 ,基质侧未见分布 ;F actin大部分与vinculin重叠 ,但比vinculin分布更广泛。　结论　vinculin是构成膜骨架蛋白成分之一 ,具有连接生长锥细胞膜和F actin的作用 ,参与生长锥形态变化、伪足伸缩 ,使神经突起生长。     

Slit2在化学诱导的小鼠皮肤癌形成过程中作用

目的 探讨Slit2过表达在小鼠皮肤癌形成过程中的作用.方法 利用Slit2-Tg转基因小鼠构建DMBA/TPA化学多级皮肤癌模型,测量小鼠背部皮肤肿瘤的长径变化,观察皮肤癌成癌各时期的病理变化.结果 成功构建小鼠皮肤癌模型.Slit2-Tg小鼠皮肤癌的长径明显比C57小鼠的长,且Slit2-Tg小鼠皮肤癌的形成速度明显增快.结论 Slit2促进了小鼠皮肤癌的发生、发展.     

RhoA/ROK信号通路对LPS诱导的人外周血单核细胞分泌细胞因子的调控作用

目的 探讨RhoA／ROK信号通路对人外周血单核细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8等细胞因子的调控作用。方法 用Percoll非连续性密度梯度离心法分离单核细胞，并用LPS诱导人外周血单核细胞活化；Pull down方法检测用RhoA活性，ROK活性用其底物MBS的磷酸化来表示，总RhoA、ROK及磷酸化MBS蛋白表达用免疫印迹法测定，用ELISA法检测细胞因子水平。结果 LPS可诱导单核细胞RhoA快速活化，并呈时间依赖性，Pho特异性抑制剂C3转化酶能显著抑制LPS诱导的人外周血单核细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8等细胞因子；LPS亦可诱导单核细胞ROK活化，ROR特异性抑制剂Y27632可显著降低LPS刺激的人外周血单核细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8等细胞因子。结论 LPS可活化人外周单核细胞RhoA／ROK信号通路，选择性抑制RhoA和ROK活化能抑制单核细胞分泌多种细胞因子，提示RhoA／ROK信号通路可能在调控单核细胞分泌细胞因子中发挥重要作用。     

神经生长导向因子Slit2在鸡胚脊髓发育中的表达

目的 观察神经生长导向因子Slit2在鸡胚神经管和脊髓不同发育时期的表达变化。方法 用免疫组织化学方法检测Slit2蛋白在鸡胚原肠期(HH6-HH10)神经管和第3d-17d(E3-E17期)脊髓中的表达和分布情况。结果 Slit2蛋白在鸡胚神经管和脊髓不同发育时期均有阳性表达,在脊髓中线结构区呈优势表达,在第9d(E9期)脊髓中线底板处表达最明显,第11d后Slit2蛋白阳性表达逐渐减弱并呈散在分布。结论 神经生长导向因子Slit2在鸡胚各发育时期神经管和脊髓的阳性表达呈动态变化。Slit2蛋白在脊髓发育过程起着重要作用。     

Slit2在类风湿性关节炎大鼠滑膜的表达与益赛普对其干预的影响

目的探讨Slit2表达在类风湿性关节炎大鼠滑膜中的作用及益赛普对类风湿性关节炎大鼠滑膜Slit2表达的影响。方法用弗氏完全佐剂皮下注射建立佐剂性关节炎模型,其中8只造模14 d后予益赛普治疗,取正常、模型及治疗组膝关节组织进行HE染色及免疫组化观察Slit2的表达。结果模型组病理学积分明显高于正常组,Slit2在佐剂性关节炎大鼠滑膜表达水平显著增加,且与时间相关,通过益赛普治疗后病理学积分减少,Slit2表达下调。结论 Slit2蛋白可能在大鼠佐剂性关节炎的发生发展中发挥着重要作用,益赛普可以下调Slit2蛋白的表达。     

大鼠海马发育过程中Rho GTPases相关信号分子mRNA的表达

目的探讨Rho GTPases相关信号分子的发育规律。方法RT-PCR法检测大鼠发育不同阶段Rho-A、Rac-1、CRMP-1和Tub β3mRNA的表达。结果RT-PCR实际扩增长度与设计长度相吻合。内参照β-actin的PCR产物电泳条带在各个阶段均呈高表达。Rho-A和Rac-1的表达有相似的变化规律,随着海马发育呈明显的阶段性,表达的高峰在胚胎、幼年和老年阶段,而新生阶段和成年阶段处于相对低表达阶段;Rac-1的表达量在海马发育的各个阶段均超过Rho-A的表达量。CRMP-1和Tubβ3的表达从胚胎到成年的各个阶段与CRMP-1的表达具有相似的变化趋势,以胎鼠、新生大鼠和幼年大鼠表达较多,但老年阶段CRMP-1的表达较成年阶段显著升高(P<0.05),而Tubβ3在老年阶段停留在成年阶段的水平。结论大鼠海马发育过程中,Rho-A和Rac-1呈阶段性高表达,CRMP-1和Tubβ3的表达从胚胎到成年逐渐减少,但老年阶段CRMP-1表达再次增多。     

Rho/Rho激酶信号通路与血管内皮通透性的研究

Rho/Rho激酶信号通路是体内普遍存在的一条信号通路,它通过调节细胞内肌动蛋白骨架的聚合状态而扮演着"分子开关"的角色,参与细胞形态维持、细胞粘附与迁移、细胞增殖与凋亡、基因转录、平滑肌收缩等多种生物学行为.Rho/Rho激酶信号通路在血管内皮通透性的病理生理过程中发挥了重要作用,抑制Rho/Rho激酶信号通路取得了显著的内皮保护作用.     

雌激素对大鼠阴道平滑肌细胞RhoA/Rho激酶表达的影响

目的 研究去势及雌激素替代对大鼠阴道平滑肌细胞RhoA/Rho激酶表达的影响.方法 30只10周龄雌性SD大鼠随机均分成:对照4和6周组(C4,C6)、去势4和6周组(OE4,OE6)和去势+雌二醇(E2)干预4和6周组(E4,E6).E4和E6组分别于去势后每周皮下注射E2(250 μg/kg)4和6周,OE4和OE6组注射等量0.9％氯化钠注射液,4和6周时测定血清E2水平及用免疫组化和Western blot检测阴道平滑肌细胞Rock1、Rock2的表达.结果 OF4和OE6组血清E2水平显著低于C4和C6(P＜0.01),OF4和OE6组阴道平滑肌细胞Rock1表达显著高于C4和C6(0.261 ±0.039 vs 0.207 ±0.032;0.270 ±0.037 vs 0.208 ±0.032,P＜0.05),OE4和OE6组阴道平滑肌细胞Rock2表达显著高于C4和C6(0.377 ±0.035 vs 0.294 ±0.033;0.388 ±0.038 vs 0.300 ±0.034,P＜0.05).结论 低雌激素水平上调RhoA/Rho激酶在大鼠阴道平滑肌中的表达,E2替代治疗可抑制RhoA/Rho激酶在去势大鼠阴道平滑肌中的高表达,雌激素可能通过调控RhoA/Rho激酶表达影响阴道平滑肌功能.     

利多卡因对产后大鼠神经毒性、神经元活性及Rho/ROCK信号的影响

目的 探讨利多卡因对产后大鼠神经毒性、神经元活性及Rho/ROCK信号的影响。方法 40只大鼠随机分为对照组、模型组、利多卡因组与布比卡因组,每组10只,除对照组大鼠外,其余三组大鼠均建立妊娠大鼠模型。建模成功后,利多卡因组、布比卡因组大鼠分别注射5%浓度利多卡因、1.065%浓度布比卡因各20μL,模型组大鼠注入等体积生理盐水。通过高倍显微镜观察并进行神经损伤评分、尼氏染色观察神经元形态、TUNEL法检测神经细胞凋亡、Real-time PCR法检测RhoA、ROCK基因mRNA相对表达、免疫印迹检测RhoA、ROCK蛋白表达。结果 对照组、模型组大鼠的神经元形态未见异常,利多卡因组大鼠神经元萎缩且数目、尼氏体数量减少;布比卡因组大鼠组神经元数目、尼氏体少量减少。与对照组相比,模型组大鼠脊髓神经损伤评分升高(P<0.05),神经细胞凋亡率、RhoA、ROCK2基因mRNA表达及蛋白表达比较无意义(P>0.05);与模型组比较,利多卡因组神经损伤评分、神经细胞凋亡率、RhoA、ROCK2基因mRNA表达、蛋白表达升高(P<0.05);与布比卡因组比较,利多卡因组大鼠神...     

“三通针法”电针调控Rho/ROCK(Rho kinase)及MEK/ERK信号通路对脊髓损伤大鼠胞浆型磷脂酶A2的影响

背景:胞浆型磷脂酶A2(cytosolic phospholipase A2,cPLA2)是治疗脊髓损伤的新型策略和靶标,其受RhoA/Rho kinase及MEK/ERK信号通路的调控。而电针可通过调控RhoA/Rho kinase和MEK/ERK信号通路治疗脊髓损伤。目的:探讨电针调控Rho/ROCK(Rho kinase)及MEK/ERK信号通路对脊髓损伤后cPLA2的影响。方法:90只雌性SD大鼠,随机取72只制备脊髓损伤模型,BBB评分后随机分为脊髓损伤组、电针治疗组、U0126治疗组(ERK阻断剂)和Y27632治疗组(ROCK阻断剂),另18只设为假手术组(只进行椎板咬除,但不进行脊髓撞击)。电针治疗组大鼠取大椎、腰阳关以及双侧次髎、足三里进行电针治疗,每天1次,每次20 min,共14次;U0126治疗组和Y27632治疗组分别予以U0126和Y27362隔天1次硬膜下腔注射。治疗结束经BBB评分后处死大鼠,收集脊髓组织,ELISA检测脊髓组织前列腺素E2、血小板活化因子的水平;TUNEL法检测脊髓神经细胞凋亡率;Western blot检测脊髓RhoA、ROCKⅡ、M...     

糖尿病大鼠肾组织中PTEN/AKT/mTOR通路对自噬的调控作用

目的:观察糖尿病大鼠肾组织中PTEN和自噬水平的变化,探讨糖尿病肾病中PTEN/AKT/m TOR通路对自噬的调控机制。方法:将SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)和糖尿病组(DM组),每组各8只。用链脲佐菌素复制DM大鼠模型。于成模后10周处死大鼠后测定相应生化指标和肾脏指数,免疫组化观察肾小管上皮细胞PTEN蛋白的表达部位;Western blotting法检测肾组织LC3、PTEN及PTEN/AKT/m TOR通路的变化;realtime PCR检测肾组织PTEN的mRNA表达水平。结果:DM组的血糖、24 h尿蛋白量和肾脏指数均显著高于NC组(P0.05)。与NC组相比,DM组大鼠肾组织的LC3I和LC3II水平明显降低(P0.05)。PTEN主要分布于肾小管上皮细胞中,DM组PTEN蛋白的表达水平明显低于NC组(P0.05)。DM大鼠肾组织中,PTEN/AKT/m TOR通路的活性增高。结论:糖尿病大鼠肾脏组织中细胞自噬水平下降,而参与自噬调控的PTEN/AKT/m TOR通路活性升高,提示其自噬水平的变化可能受到PTEN/AKT/m TOR通路的调节。     

ROCK1及其相关信号分子参与张应变调控的血管平滑肌细胞增殖

目的探讨Rho相关卷曲蛋白激酶1(Rho-associated coiled-coil containing protein kinase 1,ROCK1)及其相关信号分子在感受张应变机械刺激、调控血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖功能中的作用。方法应用张应变加载系统对体外培养VSMCs施加牵张幅度10%、频率1.25 Hz生理性周向张应变;Brdu检测VSMCs增殖水平;Western blotting检测力学加载后VSMCs的ROCK1表达水平以及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)α/βII、蛋白激酶D(protein kinase D,PKD)、胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)磷酸化水平;采用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)检测ROCK1对VSMC增殖和PKCα/βII、PKD、ERK磷酸化的调控作用。结果 10%生理性张应变加载12、24 h显著抑制VSMCs的ROCK1表达,并显著抑制PKD和ERK的磷酸化;10%生理性张应变加载12 h显著抑制PKCα/βⅡ的磷酸化,但加载24 h PKCα/βⅡ的磷酸化与静止对照组相比无显著差异。RNAi抑制VSMCs的ROCK1表达后,VSMCs增殖水平显著降低,同时PKCα/βⅡ和PKD磷酸化水平显著降低,但ERK磷酸化无明显变化。结论 10%生理性张应变可能通过抑制ROCK1表达调控PKCα/βⅡ和PKD的磷酸化水平,从而影响VSMCs增殖,维持血管稳定性。探讨张应变力学刺激调控血管细胞功能的细胞内信号转导网络,对心血管生理和疾病病理机制研究具有一定意义。     

Rho蛋白对肿瘤细胞骨架活动及生长调节的影响

近年来对 Rho 家族蛋白的研究进展很快,Rho 家族蛋白最主要的功能是调节肌动蛋白细胞骨架的重组,从而调节细胞的的形态变化和运动.Rho 族蛋白与肿瘤关系密切,在其调节子和效应子作用下,该族蛋白的活化能增强细胞的运动能力,诱导细胞周期进展的基因表达,促进胞外基质的降解和重建,因此,在调节肿瘤细胞增殖、凋亡和浸润转移等生物学行为中发挥重要作用.对 Rho 蛋白的深入研究有助于进一步判断其在这些行为过程中的作用机制,从而为肿瘤治疗提供新的依据.