大鼠急性心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡与Bcl—2／Bax蛋白的表达

目的：为了证实急性心肌缺血再灌注过程中存在着不同程度的心肌细胞凋亡现象,初步研究心肌细胞凋亡与Bcl-2/Bax蛋白表达的关系。方法：电镜观察心肌细胞的超微结构变化,抽提心肌组织DNA琼脂糖凝胶电泳,TUNEL法原位标记凋亡的心肌细胞,免疫组化技术和图像分析技术检测心肌细胞内Bcl-2/Bax蛋白表达。结果：缺血及再灌注组电镜观察心肌细胞出现典型凋亡超微结构特征,TUNEL染色可见不同程度的心肌细胞凋亡阳性反应,DNA电泳显示在缺血再灌注2h组出现明显的DNA ladder,再灌注较在缺血组心肌细胞中Bcl-2表达明显降低（P＜0．05）,而Bax表达明显增高＊（P＜0．05）,结论：急性心肌缺血及再灌注能诱导不同程度的心肌细胞凋亡,Bcl-2/Bax基因对心肌细胞凋亡的发生有着重要的调控作用。     

高+Gz重复暴露对大鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察高＋Gz重复暴露后脑组织星形胶质细胞中胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的变化。方法SD大鼠30只，随机分为对照组和＋10G；暴露组。＋G2暴露组的大鼠暴露于＋10Gz／45S，共暴露5次，中间间隔5min。分别于＋Gz暴露后不同时间灌注取脑，免疫组织化学染色观察脑GFAP的表达情况。结果＋Gz暴露后1d、2d，顶叶皮层、海马GFAP阳性细胞数较对照组均显著增多（P〈0．05），以弱阳性细小型为主；暴露后4d、6d，顶叶皮层、海马GFAP阳性细胞数较对照组进一步增多（P〈0．01），以中等阳性细胞为主，肥大的GFAP增多。结论重复暴露＋10Gz／45s可引起大鼠顶叶皮层、海马GFAP表达显著增加。     

+Gz暴露对大鼠大脑皮层HSP70蛋白表达的影响

目的：观察＋Gz暴露对大鼠大脑皮层HSP70蛋白表达水平的影响，探讨＋Gz暴露致脑损伤的机理。方法：100只SD大鼠随机分为对照组，＋2Gz暴露组，＋6Gz暴露组，＋10Gz暴露组，各组在G暴露后的6h、1、2．4、6d处死，免疫组织化学方法观察大鼠脑皮层HSP70蛋白表达情况，并对结果进行统计分析。结果：3个＋Gz暴露组的HSP70蛋白表达水平均显著高于对照组；不同G值之间的比较表明，＋6Gz组HSP70蛋白表达水平最高，＋10Gz组最低。结论：＋Gz暴露对大鼠大脑皮层HSP70蛋白表达水平有显著影响。     

+Gz暴露对大鼠脑星形胶质细胞S100蛋白表达的影响

目的观察＋Gz暴露后大鼠脑星形胶质细胞中S100蛋白表达的改变。方法雄性SD大鼠44只,随机分为对照组、＋6Gz／3min暴露组、＋10Gz／3min暴露组。分别于＋Gz暴露后不同时间灌注取脑,免疫组织化学染色观察脑S100蛋白的表达情况。结果＋6Gz暴露后6h,顶叶皮层、海马可见S100蛋白呈中等强度的阳性反应,阳性细胞数较对照组显著增多（P〈0．01）,多为细小型,暴露后1d、2d、4d和6d,S100蛋白阳性反应程度进一步增强,阳性细胞数进一步增多。＋10Gz暴露后各时间点,顶叶皮层、海马S100蛋白呈较强的阳性反应,阳性细胞数较＋6Gz组显著增多（P〈0．01）,暴露后2d出现少量肥大型,仍以细小型为主。结论＋Gz暴露可引起大鼠顶叶皮层、海马S100蛋白表达显著增加．而＋10Gz／3min比＋6Gz／3min暴露引起脑组织S100蛋白的轰达增加更明显。     

+Gz暴露对大鼠脑星形胶质细胞GFAP表达的影响

目的观察＋Gz暴露后大鼠脑星形胶质细胞中胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein。GFAP）表达的改变。方法雄性SD大鼠44只，随机分为对照组、＋6Gz／3min暴露组、＋10Gz／3min暴露组。分别于＋Gz暴露后不同时间灌注取脑，免疫组织化学染色观察脑GFAP的表达情况。结果＋6Gz暴露后6h，顶叶皮层、海马可见GFAP呈中等强度的阳性反应，阳性细胞数较对照组显著增多（P〈0．01），多为细小型，暴露后1d、2d、4d和6d，GFAP阳性反应程度进一步增强。阳性细胞数进一步增多。＋10Gz暴露后各时间点，顶叶皮层、海马GFAP呈较强的阳性反应，阳性细胞数较＋6Gz组显著增多（P〈0．01），暴露后2d出现少量肥大型，仍以细小型为主。结论＋Gz暴露可引起大鼠顶叶皮层、海马GFAP表达显著增加，而＋10Gz／3min比＋6Gz／3min暴露引起脑组织GFAP的表达增加更明显。     

细胞凋亡及相关Bcl-2蛋白在大鼠肝促癌中的作用

目的：研究大鼠肝癌促癌阶段促癌物苯巴比妥（PB）对细胞凋亡的作用及其相关基因Bcl-2表达情况。方法：复制大鼠肝癌启动／促进模型,采用TUNEL法检测各实验组不同时相眯细胞凋亡率,免疫组化SABC法检测Bc1-2基因蛋白表达情况。结果：高、中、低剂量组和启动组随着时相点的延长细胞凋亡率是降低的,且各时相点间凋亡率均值比较差异显著（P＜0．05）,而正常组和单纯促癌组各时相眯凋亡率基本稳定,无显著差异（P＞0．05）。撤除组当撤除PB后细胞凋亡率显著升高,与撤除前一时相点比较差异显著（P＜0．05）。Bcl-2基因蛋白表达在高、中剂量组随着时相点的延长呈现增加的趋势,且各时相点间均值比较差异显著（P＜0．05）。低剂量组和启动组随着时相点的延长Bcl-2基因蛋白表达呈下降趋势,但各时相点间比较差异不显著（P＞0．05）。政党组和单纯促癌组各时相点Bcl-2基因蛋白表达基本稳定,无显著差异（P＞0．05）。撤除组当撤除PB后Bcl-2基因蛋白表达显著降低,与撤除前一时相点比较差异显著（P＜0．05）。结论：在大鼠肝促癌阶段,促癌物PB能抑制大鼠肝癌前病变的细胞调亡,增加凋亡相关Bcl-2基因蛋白表达,提示凋亡的抑制可能是促癌作用的机制之一,凋亡的抑制与Bcl-2基因蛋白表达的增加有关。     

Bcl—2、Bax在肾癌中的表达

目的 检测Bcl-2、Bax基因在肾癌中的表达。方法 采用免疫组化法。结果 肾癌Bcl-2比正常肾组织阳性表达率高,Bax比正常肾组织低（P＜0．05）;Bcl-2、Bax表达在肾癌的细胞学分类、病理分级、临床分期无显著性差异（P＞0．05）;肾癌Bcl-2表达与Bax负相关（P＜0．05,γ＝－0．312）;单因素生存分析Bcl-2、Bax表达及肾癌的各细胞学分类生存率无差异（P＞0．05）,肾癌病理分级G1＋G2组比G3＋G4组生存率高（P＜0．05）,临床分期S1＋S2组比S3＋S4组高（P＜0．05）,Cox回归多因素生存只发现肾癌病理分级能单独作为反映肾癌预后因素的指标（P＜0．05）。结论 Bcl-2、Bax在肾癌的发生中并不能单独起主导作用,不能独立作为反映肾癌预后的指标,可能只是参与肾癌发生多种因素之一。     

白藜芦醇对大鼠脑创伤后伤区脑组织神经细胞凋亡的影响

目的探讨白藜芦醇（resveratrol，Res）对大鼠脑创伤后神经细胞凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用改良的Feeney自由落体脑损伤模型，对颅脑损伤大鼠用Res（50mg／kg，ip）治疗，应用原位末端标记法（TUNEL）及免疫组织化学方法检测受损脑组织治疗前后TUNEL阳性细胞数、Bcl-2及Bax的表达变化。结果治疗组大鼠脑组织TUNEL及Bax表达阳性细胞数低于创伤组及对照组（P〈0．05），Bcl-2表达伤后持续升高，治疗组高于对照组和创伤组（P〈0．05），创伤组和对照组差异不明显（P〉0．05）。结论白藜芦醇具有抗凋亡作用，可能是通过抑制促凋亡因素，促进抑凋亡因素表达来减少颅脑损伤后神经细胞的凋亡，发挥脑保护作用，其详细机制有待进一步研究。     

骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的抗凋亡机制

目的探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植治疗大鼠脊髓损伤的潜在抗凋亡机制。方法成年雄性SD大鼠48只，随机分为对照组、模型组、治疗组，每组16只。模型组、治疗组采用改良Allen法建立大鼠下胸段脊髓损伤模型。造模后7d，于L4～L5间隙蛛网膜下腔向对照组及治疗组注射BMSCs，模型组注射同体积Hank缓冲液。术后评估大鼠后肢运动功能。以原位末端标记法（TUNEL）检测神经细胞凋亡，免疫组织化学染色法检测Bax、Bcl-2的表达。结果BMSCs移植后，治疗组动物后肢运动功能持续恢复。移植后14d，模型组TUNEL阳性细胞数量高于对照组和治疗组（P〈0．01），治疗组亦高于对照组（P〈0．01）；模型组Bax阳性细胞表达多于对照组和治疗组（P〈0．01），治疗组Bax阳性细胞表达多于对照组（P〈0.01），Bcl-2阳性细胞表达各组间差异无统计学意义（P〉0．05）。移植后28d，各组TUNEL阳性细胞数量均减少，模型组仍然高于对照组和治疗组，但差异无统计学意义（P〉0.05）；各组Bax阳性细胞表达减少，各组间比较，差异无统计学意义（P〉0．05），Bcl-2阳性细胞表达变化不明显。结论BMSCs移植可改善脊髓损伤大鼠后肢运动功能，减少神经细胞凋亡，具有潜在抗凋亡作用，这一作用可能通过下调凋亡调控蛋白Bax表达而实现。     

G_z对大鼠血液流变学的影响

观察了＋10Gz重复暴露（G值增长率1G／s，持续3min，30min后重复暴露，共3次）。对大鼠血液流变学的影响。结果表明，＋Gz组大鼠全血粘度（ηb）、全血还原粘度、血浆纤维蛋白原含量、红细胞聚集指数（EAI）及屈服应力较对照组均有升高（P＜0．05），而血浆粕度、红细胞比积、Casson粘度及红细胞刚性指数则无明显改变；在各切变率时，ηb增加值与EAI增加值均呈显著正相关（P＜0．05）。提示＋10Gz重复暴露可引起大鼠血液流变学改变，全血粘度增高主要是红细胞聚集程度增加引起的。     

p53、rasp21及C-myc癌基因蛋白在胃癌中的表达及分布特征

目的通过对胃癌标本中p53、rasp21及C-myc癌基因蛋白的表达分析,探讨其在胃癌发生中的作用。方法用免疫组化方法检测了60例胃癌标本中p53、rasp21及C-myc的表达及分布。结果p53、rasp21及C-myc在胃癌中的阳性表达分别为51.7％、40.0％、66．7％;胃癌旁正常黏膜七皮的阳性率分别为1．6％、13．3％、15．0％,与肿瘤区相比较有显著差异（P〈0．01）。rasp21及Cmyc在肿瘤区与肿瘤移行区、癌旁正常黏膜区染色强度比较有差异（P〈0．05）。p53及C-myc阳性表达与肿瘤的分化程度有关,即分化越差,其阳性表达越高。结论p53、rasp21及C-myc与胃癌的发生、发展密切相关,p53及Gmyc在肿瘤分化过程中可能起重要作用。     

贝氏考克斯体毒力与毒力相关蛋白芯片的研制

目的:构建贝氏考克斯体毒力与毒力相关蛋白芯片.方法:根据贝氏考克斯体全基因组序列,筛选出约160个编码毒力及毒力相关蛋白的基因,采用PCR扩增基因片段,将获得的基因片段与pET32a表达载体连接,然后将该重组质粒转化大肠杆菌并使目的基因表达,采用Ni-NTA亲和层析柱纯化表达的目的重组蛋白.将纯化的重组蛋白点在醛基化玻片上制备蛋白芯片.结果:由贝氏考克斯体104个重组蛋白构建毒力与毒力相关蛋白芯片,通过荧光扫描仪分析蛋白芯片与贝氏考克斯体感染的小鼠血清反应,发现10个重组蛋白与该血清反应为强阳性.结论:所制备的毒力与毒力相关蛋白芯片具有贝氏考克斯体特异性,可用于贝氏考克斯体感染患者血清的检测.     

氡诱发小鼠肺损伤与P53和Bcl-2、Bax蛋白表达的研究

目的 建立氡染毒小鼠肺损伤模型,观察不同剂量组小鼠肺组织损伤情况,分析氡对P53、Bcl-2、Bax在肺组织中表达的影响。方法 建立氡染毒小鼠模型,使染毒累积剂量分别达到30工作水平月(WLM)和60WLM;采用TUNEL法检测小鼠肺组织细胞凋亡程度;采用免疫组化SP法及Westernblot法,检测各组肺组织P53、Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果 与正常对照组相比,氡染毒30和60WLM小鼠肺细胞凋亡指数均明显增加(t=18.11、-10.30,P<0.05);氡染毒30WLM组P53蛋白明显增加(t=-11.08,P<0.05);60WLM组P53蛋白和Bax蛋白表达明显增加(t=-7.00、-2.52,P<0.05),Bcl-2蛋白表达明显下降(t=4.36,P<0.05);氡染毒30和60WLM与对照组相比,Bcl-2、Bax比值均明显下降(t=2.78、4.07,P<0.05)。结论 氡染毒可使小鼠肺损伤,出现肺细胞凋亡,P53、Bcl-2、Bax途径可能参与了肺细胞的凋亡调节。     

TAT-CAⅢ融合蛋白的表达、纯化及其跨膜转运功能鉴定

目的:构建含有及不含有TAT的CAⅢ质粒表达载体,并进行诱导表达、纯化,在体外初步鉴定TAT-CAⅢ的跨膜转运功能。方法:采用PCR的方法扩增编码CAⅢ和TAT-CAⅢ全长的DNA序列,分别重组入pET28a质粒表达载体中,测序鉴定后转化大肠埃希菌BL21(DE3),构建重组体的表达菌株;IPTG诱导表达后,用Ni-NTA亲和层析柱分离纯化融合蛋白,纯化产物进行SDS-PAGE分析、Western blot鉴定及磷酸酶活性染色;然后分别以1μmol/L纯化的CAⅢ及TAT-CAⅢ孵育C2C12成肌细胞1h,间接免疫荧光法检测两者在细胞内的分布情况。结果及结论:成功地构建了含有及不含有TAT的CAⅢ质粒表达载体;转化大肠埃希菌BL21(DE3)后表达并纯化出相对分子量分别约32 000(CAⅢ)和35 000(TAT-CAⅢ)的融合蛋白,Westernblot和酶活性染色鉴定表明成功地获得了两种融合蛋白;间接免疫荧光染色显示,TAT-CAⅢ孵育组细胞内可见有较强的绿色荧光,而CAⅢ组细胞内则未见荧光,表明TAT可介导CAⅢ由胞外跨膜转导进入胞内。     

C反应蛋白真核表达载体的构建与表达

目的构建人C反应蛋白(CRP)真核表达载体,并观察其在NIH3T3细胞中的表达定位情况。方法利用带HA反向互补序列碱基的特异性引物,从p91023/CRP载体上将编码人CRP的基因序列亚克隆到真核表达载体pcDNA3上;对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,利用脂质体转染方法转染NIH3T3细胞;并使用Westernblot和细胞免疫化学技术对重组质粒pcDNA3/HA-CRP在NIH3T3细胞中的表达及其蛋白定位进行分析。结果PCR、双酶切和测序鉴定表明,pcDNA3/HA-CRP真核表达质粒构建正确;转染实验发现,该质粒能够在NIH3T3细胞中表达,表达产物主要定位在细胞膜和核周边内质网的区域。结论成功构建了带HA标签的人CRP真核表达载体,该载体能够在哺乳动物细胞NIH3T3中表达,为进一步研究CRP的细胞内生物学功能提供了一个重要的工具。     

HCV NS3丝氨酸蛋白酶与野生型P53相互作用的研究

目的：探讨HCV NS3丝氨酸蛋白酶与P53蛋白之间的关系。为研究NS3丝氨酸蛋白酶在HCV所致肝癌发生发展机制中的作用奠定基础。方法：构建HCV NS3丝氨酸蛋白酶基因及其N端缺失突变体的重组质粒,通过酵母双杂交系统定性及定量检测P53与NS3及共突变体的相互作用。结果：HCV NS3丝氨酸蛋白酶、N端缺失15个氨基酸及缺失30个氨基酸的NS3丝氨酸蛋白酶与P53均有相互作用,且相互作用的强度无显著差异,结论：HCV NS3丝氨酸蛋白酶与P53之间确定存在相互作用,但NS3参与相互作用的区段不在N2S3的N端,而在其C端。     

胃癌及肠上皮化生组织中P53、C-myc蛋白表达

目的:探讨P53、C-myc表达在胃癌发生、发展中的作用.方法:对60例胃癌、10例肠上皮化生组织和10例对照组,应用免疫组化检测P53和C-myc基因蛋白.结果:胃癌组的突变P53和C-myc基因表达均显著增高(P＞0.01),而肠上皮化生组中P53和C-myc的表达与正常组无显著差异(P＞0.05),肠上皮化生组的C-myc表达明显低于胃癌组(P＞0.01).结论:P53基因发生突变、失活以及C-myc基因激活,在胃癌的发生中可能起重要作用,检测C-myc基因蛋白表达有助于预测胃粘膜癌变.     

P16、P21蛋白表达与肝细胞癌预后的关系

 目的 研究P16、P21蛋白表达与肝细胞癌(HCC)预后的关系.方法 采用免疫组化SABC法染色检测46例HCC组织与38例癌旁组织P16、P21蛋白的表达情况,并分析其与预后的关系.结果 P16蛋白的阳性表达率在HCC(41.3%)显著低于癌旁组织(65.8%)(P＜0.05),P16蛋白阳性表达在术后3年复发组(17.4%)显著低于无复发组(73.7%)(P＜0.01),在3年存活组(64%)显著高于死亡组(11.8%,P＜0.01).P21蛋白的阳性表达率在HCC(19.6%)显著低于癌旁组织(52.6%)(P＜0.01),P21蛋白阳性表达在术后3年复发与无复发组差异无统计学意义,在术后3年存活组与死亡组差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 P16、P21蛋白的表达缺失同HCC的发生密切相关.且P16蛋白表达缺失与HCC的预后相关.P16蛋白的表达缺失是HCC预后的一个可靠因子.     

放疗前后喉癌组织中Bcl-2及Bax蛋白表达及其临床意义

目的　探讨放疗对喉癌组织中Bcl 2和Bax基因蛋白表达的影响及放疗后喉癌复发原因。方法　通过采用免疫组化SP法 ,测定 2 7例患者放疗前、放疗后和复发后喉癌组织中Bcl 2和Bax蛋白的表达。结果　与放疗前相比 ,放疗后喉癌组织中Bcl 2蛋白表达明显减少 (P <0 0 1) ,Bax蛋白表达明显增多 (P <0 0 5 )。喉癌放疗后局部组织中Bax蛋白表达与复发的时间长短有关 (P <0 0 5 )。结论　喉癌组织内Bcl 2和Bax蛋白表达参与了放疗引起的细胞凋亡过程 ,局部组织内Bax蛋白的表达水平与喉癌复发时间有关     

利用INTERNET进行蛋白质结构的检索,图像显示和模型构建

越来越多的蛋白质结构数据库和软件资源可以通过ＩＮＴＥＲＮＥＴ的ＷＷＷ Ｍｏｓａｉｃ和Ｎｅｔｓｃａｐｅ程序存取。