川芎嗪对慢性高氧肺损伤新生大鼠内源性一氧化氮合酶表达水平的影响

目的观察川芎嗪干预对新生大鼠高氧肺损伤的影响及可能作用机制。方法80只足月新生12h内的清洁级SD大鼠,随机分为空气组（A组）、空气＋川芎嗪组（B组）、高氧（60％）组（C组）、高氧＋川芎嗪组（D组）。B、D两组每日腹腔注射川芎嗪30mg／kg,一日一次,A、C两组每日腹腔注射等量生理盐水,实验第14天每组随机选取8只,测量体重后取肺组织,测量肺质量,HE染色观察肺组织病理改变并计算其放射状肺泡计数（RAC）、RT—PCR方法检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）mRNA表达水平;免疫组织化学染色法检测eNOS蛋白表达水平。结果C组显示明显的肺泡发育受阻,体重（g）、肺质量（g）、RAC值（个）较A、B组均明显减少[体重：（17．4±3．2）比（29．5±1．7）、（29．3±1．6）,肺质量：（0．26±0．04）比（0．41±0．03）、（0．40±0．03）,RAC值：（4．8±0．7）比（9．0±0．8）、（8．8±0．9）,P〈0．05],D组病理改变减轻,体重、肺质量、RAC值高于C组（P〈0．05）,与A组相近（P〉0．05）。与A组（3．54±0．37）相比,C组肺组织eNOS表达水平（2．76±0．23）明显降低,D组（3．80±0．36）表达较C组增加,差异有统计学意义（P〈0．05）,与A组相近（P〉0．05）。结论高氧可导致新生大鼠出现肺损伤,病理改变类似于早产儿新型支气管肺发育不良,川芎嗪干预对其有一定保护作用,其机制可能与川芎嗪促进eNOS的表达并捅过内源性NO生成增多而降低肺微血管压力有美．     

早产鼠高氧暴露后肺组织血管内皮生长因子和一氧化氮合酶的动态变化及相互关系

目的：最近研究表明,血管内皮生长因子（VEGF）及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)功能的缺失,在支气管肺发育不良（BPD）发病机制中发挥了重要的作用。该文通过动态观察持续中浓度高氧暴露（60％O2）对早产大鼠肺内VGEF蛋白及mRNA和eNOS蛋白及mRNA表达的影响,探讨BPD的发病机制。方法：将21 d 孕早产鼠随机分为高氧暴露组(简称高氧组) 和空气对照组(简称空气组) ,分别置于常压高氧仓中（60％O2）和正常空气中暴露。分别于生后1,4,7,11,14 d每组各处死6只大鼠,留取肺组织标本。苏木精-伊红染色观察病理改变,免疫组化检测VEGF和eNOS蛋白表达,逆转录-聚合酶链反应方法检测VEGF和eNOS mRNA表达。结果：早产鼠高氧暴露4 d后出现肺泡间隔减少,微血管发育异常,间质纤维化,且病变随着高氧暴露时间的延长而加重。高氧组大鼠第4,7天时肺组织VEGF蛋白表达明显低于相应空气对照组(P< 0. 05), VEGF mRNA表达亦显著减少(P< 0. 05)。随着暴露时间的延长,VEGF蛋白和mRNA进行性降低。高氧组大鼠在高氧暴露过程中肺组织eNOS蛋白和mRNA表达亦随着暴露时间的延长而降低。结论：高氧暴露导致早产鼠肺组织VEGF和eNOS表达持续性减少,微血管发育异常和肺泡化受阻。这些由高氧暴露诱导产生的BPD样损害,可能与VEGF和eNOS的表达下调有关,且二者之间存在着密切的联系。［中国当代儿科杂志,2007,9（5）：473-478］     

新生大鼠高氧肺损伤血管内皮生长因子蛋白及其mRNA表达变化研究

目的：血管内皮生长因子（VEGF）参与肺的发育和损伤修复,VEGF具有促进肺泡和肺血管增殖以及预防新生儿支气管肺发育不良（BPD）的作用。该研究的目的是探讨新生大鼠高氧肺损伤后肺组织VEGF蛋白及VEGF mRNA表达的变化。方法：新生Sprague-Dawley大鼠48只随机分为高氧实验组和空气对照组,高氧实验组吸入95%以上高氧建立高氧肺损伤模型。分别采用免疫组化法和逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）检测新生大鼠3 d,7 d,14 d肺组织VEGF蛋白及VEGF mRNA表达变化。结果：空气对照组新生大鼠生后随着肺发育,肺组织中VEGF蛋白及VEGF mRNA表达逐渐增加。高氧实验组新生鼠吸入高氧3 d,肺VEGF蛋白表达出现降低,在7 d,14 d明显降低与对照组比较差异有显著性（VEGF 蛋白:12.67±3.82 vs 7.79±5.23; 15.10±8.91 vs 5.85±3.37, 均P<0.01）;高氧实验组VEGF mRNA表达在3 d,7 d,14 d均明显低于对照组（VEGF mRNA: 1.19±0.63 vs 0.78±0.22, 1.52±0.47 vs 0.53±0.18, 1.89±0.81 vs 0.48±0.12, 均P<0.01）。结论：VEGF能促进新生大鼠肺发育,VEGF蛋白及VEGF mRNA表达与新生大鼠肺发育有密切关系。高氧可抑制VEGF蛋白及VEGF mRNA在新生大鼠肺内的表达,VEGF在新生鼠肺发育和高氧肺损伤发病机制中起重要作用。     

高浓度氧对早产鼠肺一氧化氮合酶表达的影响

目的：明确高浓度氧对早产大鼠肺一氧化氮(nitric oxide, NO)合成及一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)表达的影响,以探讨内源性NO在新生儿高氧肺损伤中的作用。方法：3日龄早产鼠随机分为空气组和高氧组,检测实验3 d及7 d时两组肺湿重/干重比值(W/D),肺组织病理学改变,支气管肺泡灌洗液中NO含量及诱导型NOS(iNOS),内皮细胞型NOS(eNOS)在肺内的分布和表达(免疫组织化学方法)。结果：3 d时高氧组表现为急性肺损伤：充血、出血、炎性渗出;7 d时,W/D值高于空气组(5.54±0.41) vs (5.00±0.15),(P<0.05),病理改变依然明显。与空气组相比,暴露3 d及7 d时,高氧组灌洗液中的NO含量(17.06±5.86)和(23.75±4.07) μmol/L较空气组(5.59±2.03)和(7.93±2.33) μmol/L明显上升(P均<0.01)。高氧组肺气道和肺泡上皮细胞、炎症细胞iNOS表达强阳性,强度高于空气组(P<0.01),且高氧7 d组高于3 d组(P<0.01)。与空气组比较,7 d时高氧组气道上皮细胞eNOS表达增加(P<0.05)。结论：高氧可上调早产大鼠肺炎症细胞、上皮细胞NOS的表达,促进NO合成,提示内源性NO介导参与了高氧诱导的肺损伤。     

Endostatin and vascular endothelial cell growth factor (VEGF) in piglet lungs: effect of inhaled nitric oxide and hyperoxia

Pulmonary hyperoxic injury manifests as widespread alveolar-epithelial and microvascular endothelial cell necrosis, resolution of which requires angiogenesis. We investigated the hypothesis that inhaled nitric oxide (iNO) and hyperoxia each decreases lung vascular endothelial growth factor (VEGF) expression but increases endostatin and that concurrent administration of both gases will show a greater effect. Piglets were randomized to breathe for 5 d room air (RA); RA + NO (RA + 50 ppm NO), O(2) (hyperoxia, F(I)O(2) >0.96), O(2) + NO, or O(2) + NO + REC (O(2) + NO plus recovery in 50% O(2) for 72 h. After the piglets were killed, we measured lung capillary leak, VEGF mRNA, VEGF, and endostatin protein in homogenates, plasma, and lavage. VEGF mRNA decreased significantly with O(2) and O(2) + NO compared with breathing RA (p < or = 0.05). VEGF protein declined in the experimental groups with a significant reduction in the recovery group compared with the RA group (p < or = 0.05). Similar but more dramatic, endostatin declined in all groups relative to the RA group (p < 0.001). Lavage fluid VEGF protein and lung capillary leak rose significantly with O(2) and O(2) + NO compared with RA, but endostatin was unchanged. At 72 h of recovery from hyperoxia, VEGF mRNA and lavage fluid VEGF but not lung VEGF protein had normalized. Hyperoxia and iNO suppresses lung endostatin expression, but iNO unlike hyperoxia alone does not alter lung VEGF production. Hyperoxia paradoxically raises lavageable VEGF levels. This latter effect and that on VEGF mRNA level but not protein is abrogated by recovery in reduced F(I)O(2) for 72 h.     

宫内炎性预敏及生后高氧暴露对早产大鼠肺血管内皮生长因子及其受体表达的影响

目的观察宫内炎性预敏及生后高氧暴露对早产大鼠肺血管内皮生长因子（VEGF）及其受体表达的影响,探讨其与新型支气管肺发育不良（BPD）发病机制之间的关系。方法早产大鼠随机分为生理盐水＋高氧组、LPS＋高氧组、LPS组和正常对照组,于生后第1、7和14天随机取8只,行HE染色,观察肺组织形态学结构,做辐射状肺泡计数（RAC）采用Western blot和RT-PCR方法检测各组肺组织VEGF及其受体Fit-1和Flk-1蛋白及mRNA表达水平。结果（1）正常对照组和LPS组在生后1～14d随鼠龄增加,RAC逐渐增多,但LPS组在生后第1～14天RAC均低于对照组（P分别=0．029,0．013,0．009）;生理盐水＋高氧组和LPS＋高氧组则随鼠龄增加RAC逐渐下降,LPS＋高氧组至生后14dRAC低于其他三组（P分别=0.000,0.002,0.012）。（2）VEGF及其受体Flk-1蛋白的表达与其相应肺组织RAC变化规律基本一致。而Fit-1表达在四组中均随鼠龄增加而呈增高趋势。（3）VEGF及其受体mRNA表达规律与其蛋白表达强度变化规律基本一致。结论宫内炎性预敏及生后高氧暴露可能是导致新型BPD发生的重要因素。     

Monocyte chemoattractant protein-1 and its receptor CCR-2 in piglet lungs exposed to inhaled nitric oxide and hyperoxia.

Monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1), acting through its C-C chemokine receptor 2 (CCR-2), has important roles in inflammation, angiogenesis, and wound repair. The individual and combined effects of inhaled nitric oxide (NO) and hyperoxia on lung MCP-1 and CCR-2 in relation to lung leukocyte dynamics are unknown. Because MCP-1 gene is up-regulated by oxidants, we hypothesized that inhaled NO with hyperoxia will increase MCP-1 production and CCR-2 expression more than either gas alone. We randomly assigned young piglets to breathe room air (RA), RA+50 ppm NO (RA+NO), O(2), or O(2)+NO for 1 or 5 d before sacrifice. Lungs were lavaged and tissues preserved for hybridization studies, Western blotting, histology, and immunohistochemistry. The results show that lung MCP-1 production and alveolar macrophage count were significantly elevated in the 5-d O(2) and O(2)+NO groups relative to the RA group (p < or = 0.05). In contrast, lung CCR-2 abundance was diminished in the O(2) group (p 相似文献   

角质细胞生长因子对吸入高体积分数氧新生大鼠肺组织的影响

目的 研究角质细胞生长因子(KGF)对高体积分数氧(高氧)暴露下新生大鼠肺组织结构的影响.方法 将新生的108只SD大鼠随机分为空气组、高氧组和KGF干预组,每组36只.每组又分为3d、7d、14d3个亚组.高氧组、KGF干预组大鼠持续暴露于氧体积分数＞950mL·L-1氧箱中,KGF干预组于吸氧同时背部皮下注射重组人角质细胞生长因子(rhKGF)1mg·d-1,连用3d后改为0.5mg·d-1直至实验结束.空气组和高氧组给予等量9g·L-1盐水.空气组大鼠呼吸空气.3d、7d、14d亚组在相应时间点取肺组织,通过肉眼及光镜下观察其肺组织病理学变化,并作肺泡辐射状计数(RAC).结果 空气组7d时出现肺泡化,14d时肺泡化成熟.高氧组时小血管扩张充血,肺间质细胞增多,7d时肺间隔变厚,肺泡腔大小不一,肺泡数减少,14d时肺泡数明显减少,肺泡大小不等,出现明显纤维化.KGF干预组7d时可见肺泡结构较完整,14d时少数肺泡融合,间质细胞增生不严重.高氧组3d时RAC与空气组相比差异无统计学意义(P＞0.05),7d、14d时RAC与空气组相比差异均有统计学意义(Pa＞0.01).KGF干预组各时间点RAC与空气组比较差异均无统计学意义(Pa＞0.05).结论 长时间暴露于高氧环境,可导致新生大鼠肺组织发育障碍,但KGF能促进肺泡的发育,减轻纤维化,可有效减轻高氧吸入对新生大鼠肺组织的损伤.     

大黄对高氧致新生大鼠支气管肺发育不良的影响

目的 探讨大黄对高氧致新生大鼠支气管肺发育不良（BPD）的影响。方法 将64只生后4 d大鼠随机分成空气对照组、大黄对照组、高氧模型组和高氧+大黄组（n=16）。大鼠暴露于60%氧浓度中构建BPD模型。造模同时,两个大黄干预组每天给予600 mg/kg大黄提取物混悬液灌胃1次。各组大鼠于生后14 d、21 d,苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织形态学改变;分光光度计法检测丙二醛（MDA）水平及超氧化物歧化酶（SOD）活性;RT-PCR、Western blot法检测肺组织中TNF-α、IL-6 mRNA和蛋白表达水平。结果 高氧模型组大鼠肺组织出现肺泡数目减少、体积增大、结构简单化等发育受阻的表现,并随高氧暴露时间的延长损伤加重;高氧+大黄组大鼠肺组织病理改变明显减轻。大鼠生后14 d及21 d,与两对照组相比,高氧模型组放射状肺泡计数（RAC）明显减少,肺组织中SOD活性降低,MDA水平、TNF-α mRNA及蛋白水平、IL-6 mRNA及蛋白水平均升高（P < 0.05）。与高氧模型组相比,高氧+大黄组RAC明显增加,肺组织中SOD活性升高,MDA水平、TNF-α mRNA及蛋白水平、IL-6 mRNA及蛋白水平均降低（P < 0.05）。结论 大黄可能通过抑制炎症和氧化应激反应对高氧致新生大鼠BPD发挥保护作用。     

MK-801对新生大鼠高氧性肺损伤的保护作用

目的观察谷氨酸(Glu)的NMDA受体拮抗剂MK-801对新生大鼠高氧性肺损伤的影响,探讨Glu在高氧性肺损伤中的可能作用。方法出生12h内的SD新生大鼠随机分为:空气对照组、空气 MK-801组、高氧对照组及高氧 MK-801组。观察持续高氧暴露7d后各组肺湿/干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞及中性粒细胞数、肺组织及BALF中一氧化氮(NO)含量的变化。结果MK-801可有效地抑制高氧所致新生大鼠肺W/D、BALF中白细胞和中性粒细胞、肺组织和BALF中NO含量的增高。结论MK-801可有效地减轻新生大鼠高氧性肺损伤,提示内源性Glu通过NMDA受体介导,促进NO的产生而加重肺损伤。     

高氧暴露对早产鼠肺组织HO-1和GCLC表达的影响

目的探讨高浓度氧暴露对新生早产大鼠肺组织中血红素加氧酶-1（HO-1）和谷氨酰-L-半胱氨酸连接酶催化亚单位（GCLC）动态表达的影响。方法受孕21 d大鼠行剖宫产取出早产鼠80只，喂养1 d后随机分为空气组和高氧组。空气组早产鼠放置在室内常压空气中饲养，高氧组早产鼠放置在同一室内常压氧箱中（氧浓度85%~95%）饲养，分别于第1、4、7、10、14天，每组取8只大鼠，采集两组早产鼠肺组织标本。采用苏木精-伊红染色法检测两组早产鼠不同时间点肺组织结构的病理变化；采用Western blot技术和RT-qPCR检测两组早产鼠不同时间点肺组织HO-1和GCLC蛋白及mRNA的表达变化。结果与空气组相比，高氧组早产鼠体重下降显著（P < 0.05）。与空气组相比，高氧组早产鼠肺组织病理切片显示肺组织结构紊乱、肺泡间隔增宽、肺泡数目减少和肺泡简单化。高氧组早产鼠肺组织中HO-1 mRNA相对表达量在第7天时低于空气组，在第10、14天时高于空气组（P < 0.05）。高氧组早产鼠肺组织中GCLC mRNA表达量在第1、4、7天时低于空气组，在第10天时高于空气组（P < 0.05）。与空气组比较，高氧组早产鼠肺组织中HO-1蛋白表达水平在各时间点均升高；除第1天外，GCLC蛋白表达水平在其他各时间点均升高（P < 0.05）。结论高氧暴露导致早产鼠生长发育迟缓、肺发育阻滞。早产鼠肺组织HO-1和GCLC蛋白及mRNA的表达变化可能与高氧暴露导致早产鼠肺损伤发病过程相关。     

罗格列酮对新生大鼠高氧肺损伤的保护作用

目的：探讨PPAR-γ配体罗格列酮在新生大鼠高氧肺损伤中的保护作用。方法：取新生Sprague-Dawley大鼠96只,随机分为对照组、高氧组和罗格列酮治疗组。对照组在空气中饲养,后两组暴露在85%～90%氧气中。治疗组给予罗格列酮腹腔内注射每日1次（2 mg/kg）。3组于实验第1、3、7、14 d各处死8只大鼠并取其肺组织,行苏木精-伊红染色观察其病理形态改变,同时取其肺泡灌洗液（BALF）,检测其中的丙二醛（MDA）含量及白细胞计数。结果：对照组在各时间点均未见明显病理性改变;高氧组3 d时肺泡上皮细胞肿胀,肺泡腔内可见大量炎性渗出液,14 d时肺泡减少,肺间质增厚,肺泡发育受阻;与高氧组相比,罗格列酮治疗组炎症反应表现较轻,肺泡发育障碍有所缓解。与对照组相比,高氧组3 d时辐射状肺泡计数(RAC)明显下降（P<0.05）,MDA和白细胞计数明显增高（P<0.05）,这种变化一直持续至14 d（P<0.05）;与高氧组相比,罗格列酮治疗组3、7、14 d各亚组RAC明显增高（P<0.05）,MDA和白细胞计数水平较低（P<0.05）。结论：高氧肺损伤时出现肺部的急性炎症反应和肺泡发育受阻,罗格列酮对高氧肺损伤可能具有保护作用。     

维甲酸下调结缔组织生长因子表达减轻新生大鼠高氧肺损伤的研究

目的：探讨维甲酸（RA）对高氧肺损伤保护作用的机制。方法：90 只Sprague Dawley新生鼠随机平分为空气组、高氧组和高氧+RA 组。高氧组、高氧+RA 组置于 85% 氧浓度的氧箱中,高氧+RA 组每日腹腔注射RA 500 μg/kg。分别于实验第 4天、7天、14天行开胸术取新生鼠肺组织,苏木精-伊红染色光镜下行辐射状肺泡计数,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫组化检测肺组织结缔组织生长因子（CTGF）表达。结果：与空气组相比,高氧组和高氧+RA 组肺组织随氧暴露时间延长,出现炎性细胞浸润,肺泡结构紊乱,肺泡数量减少,肺间隔增厚,其中高氧+RA 组病理改变明显轻于高氧组;在第7天和第14天,高氧组和高氧+RA组肺组织 CTGF 的 mRNA 和蛋白表达比空气组增加（P＜0.05）;且高氧+RA组中 CTGF 的 mRNA 和蛋白表达在第 14 d 比高氧组减少（P＜0.05）。结论：高氧暴露下新生鼠肺组织 CTGF 表达增加,RA 保护高氧肺损伤可能是通过下调 CTGF 表达。     

持续高氧暴露降低新生大鼠肺组织血管内皮生长因子的表达

目的：高氧肺损伤是导致支气管肺发育不良(BPD)的最常见原因。血管内皮生长因子(VEGF)在新生肺中具有促进内皮细胞增殖、分化、诱导血管发生的作用。本研究动态观察高氧暴露对新生鼠肺组织VEGF表达的影响,探讨BPD的发生机制。方法：新生Wistar大鼠出生后随机分为空气组和高氧组(均n=30)。高氧组在生后12h内开始,予以持续吸入95%氧气。分别于生后1、2、3、7、14、21d各处死5只大鼠,留取肺组织标本。苏木精-伊红染色观察病理改变,免疫组化检测VEGF蛋白表达,原位杂交方法检测VEGFmRNA表达。结果以切片视野灰度值表示,值越高说明蛋白或mRNA表达越少。结果：新生鼠高氧暴露7d后肺泡间隔减少,肺微血管发育异常,间质纤维化,且病变随高氧暴露时间延长而加重。高氧组大鼠第3,7天时肺组织VEGF蛋白表达明显低于相应空气对照组(81.9±0.8vs80.8±1.0,82.8±1.2vs79.2±1.6,均P<0.01)。VEGFmRNA表达亦显著减少(89.5±1.1vs88.0±1.0,91.1±1.5vs87.7±1.7,均P<0.001)。随着暴露时间的延长,VEGF蛋白和mRNA进行性降低,在高氧暴露14、21d时几乎检测不到VEGF蛋白和mRNA的表达。结论：高氧暴露抑制新生鼠肺VEGF的表达,这可能与高氧诱导BPD的发生有关。     

泛素-特异性蛋白酶7在高氧暴露早产鼠肺组织中的表达及意义

目的 探讨泛素-特异性蛋白酶7（USP7）及Wnt信号通路中关键因子在高氧暴露早产大鼠肺组织中的表达及意义。方法 将180只新生早产Wistar大鼠随机均分成空气对照组、空气干预组、高氧对照组及高氧干预组,每组45只。干预组早产鼠每天腹腔注射USP7特异性抑制剂P5091（5 mg/kg）,高氧组建立早产大鼠高氧暴露肺损伤动物模型。分别于实验过程第3、5、9天时处死动物收集早产鼠肺组织标本,通过苏木精-伊红染色病理切片观察肺组织病理变化;采用RT-PCR及Western blot技术检测肺组织中USP7及Wnt信号通路关键因子β-catenin、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的mRNA及其蛋白表达水平。结果 空气各组肺组织形态结构基本正常;高氧对照组3 d、5 d时可见肺泡明显压缩、结构紊乱,有明显炎症细胞、红细胞渗出及间质水肿改变;高氧对照组9 d时可见肺泡结构紊乱、肺泡间隔明显增厚;高氧干预组肺组织结构紊乱、炎症细胞浸润、红细胞渗出情况均较相应时间点的高氧对照组有所减轻;各时间点高氧各组放射状肺泡计数（RAC）均明显低于相应空气各组（P < 0.05）,且高氧干预组RAC较高氧对照组明显升高（P < 0.05）。实验第3、5、9天时,高氧各组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达均较相应空气各组增加（P < 0.05）;高氧干预组β-catenin mRNA及β-catenin、α-SMA蛋白表达较高氧对照组减少（P < 0.05）;高氧干预组USP7 mRNA及蛋白表达与高氧对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）,空气干预组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达与空气对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 高氧暴露可激活Wnt/β-catenin信号通路;USP7可能通过Wnt/β-catenin信号通路参与高氧肺损伤;USP7特异性抑制剂P5091可能通过加强β-catenin的泛素化来加速其降解,减少肺上皮-间质转化,从而对高氧肺损伤具有一定的保护作用。     

积雪草苷对高氧致新生大鼠支气管肺发育不良的保护作用及其机制研究

目的 基于小分子RNA-155（miR-155）/细胞因子信号抑制因子1（SOCS1）轴研究积雪草苷对高氧致新生大鼠支气管肺发育不良的保护作用。方法 将新生大鼠随机分为对照组、模型组、积雪草苷低剂量（10 mg/kg）组、积雪草苷中剂量（25 mg/kg）组、积雪草苷高剂量（50 mg/kg）组、布地奈德（1.5 mg/kg）组,每组12只。除对照组外的其他各组在高浓度氧中暴露14 d建立新生大鼠支气管肺发育不良模型,同时以相应浓度积雪草苷对不同剂量积雪草苷组进行灌胃,布地奈德组行布地奈德雾化治疗。采用苏木精-伊红染色检测各组大鼠肺组织发育情况,测定放射状肺泡计数（RAC）、肺泡平均截距（MLI）;采用超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）检测试剂盒分别检测肺组织SOD、MDA水平;采用酶联免疫吸附法检测血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素6（IL-6）水平;采用实时荧光定量PCR法检测各组大鼠肺组织中miR-155、SOCS1的mRNA水平;采用蛋白免疫印迹法检测各组大鼠肺组织中SOCS1蛋白的相对表达。结果 与对照组相比,模型组大鼠出现肺组织结构紊乱,肺泡融合增大,肺泡间隔不均,平均间隙增大,肺泡数量明显减少等肺发育不良症状,同时MLI、肺组织MDA水平、血清IL-6及TNF-α水平、肺组织miR-155水平均明显升高（P < 0.05）,肺组织RAC、SOD水平、SOCS1 mRNA及蛋白水平均明显降低（P < 0.05）。与模型组相比,积雪草苷低、中、高剂量组、布地奈德组大鼠上述肺发育不良症状改善,MLI、肺组织MDA水平、血清IL-6及TNF-α水平、肺组织miR-155水平均降低（P < 0.05）,肺组织RAC、SOD水平、SOCS1 mRNA及蛋白水平均升高（P < 0.05）,且积雪草苷对肺发育不良症状及上述指标的改善程度有剂量依赖性（P < 0.05）。积雪草苷高剂量组与布地奈德组相比,上述指标差异均无统计学意义,且均达到对照组水平（P > 0.05）。结论 积雪草苷可减轻高氧导致的新生大鼠肺部炎症损伤,改善支气管肺发育不良症状,且存在剂量依赖性。其作用机制可能与下调miR-155表达、上调SOCS1表达有关。     

血管内皮生长因子在新生大鼠高氧肺损伤模型中的表达及意义

目的探讨高浓度氧暴露致新生大鼠急性肺损伤时血管内皮生长因子（VEGF）的表达及其对肺发育的影响,为临床防治支气管肺发育不良提供理论依据。方法生后2—3日龄新生Sprague—Dawley（SD）大鼠48只随机分为空气组和高氧组各24只,分别置于空气及常压氧气（I〉95％）喂养,采用荧光定量PCR和Western Blot方法检测第1、3、7天时各组大鼠肺组织VEGF mRNA和蛋白表达水平,HE染色动态观察新生大鼠肺组织形态结构变化。结果两组大鼠肺组织第1、3、7天VEGF mRNA和蛋白表达水平均逐渐降低,高氧组明显低于空气组,第1天差异无统计学意义（P〉0．05）,第3、7天差异有统计学意义（P〈0．05）[VEGF mRNA：1天（0．86±0．35）比（1．00±0．28）,3天（0．54±0．26）比（0．92±0．34）,7天（0．32±0．20）比（0．61±0．12）;VEGF蛋白：1天（0．78±0．33）比（1．00±0．16）,3天（0．60±0．08）比（0．85±0．27）,7天（0．34±0．12）比（0．56±0．18）]。与空气组相比,高氧组肺组织显著发育不良,肺泡结构简单,肺泡数目减少,肺微血管发育受阻。结论VEGF对肺发育起重要作用,其确切作用机制有待进一步研究。     

High-dose inhaled nitric oxide and hyperoxia increases lung collagen accumulation in piglets

Nitric oxide (NO), a pro-oxidant gas, is used with hyperoxia (O(2)) to treat neonatal pulmonary hypertension and recently bronchopulmonary dysplasia, but great concerns remain regarding NO's potential toxicity. Based on reports that exposure to oxidant gases results in pulmonary extracellular matrix injury associated with elevated lavage fluid levels of extracellular matrix components, we hypothesized that inhaled NO with or without hyperoxia will have the same effect. We measured alveolar septal width, lung collagen content, lavage fluid hydroxyproline, hyaluronan and laminin levels in neonatal piglets after 5 days' exposure to room air (RA), RA + 50 ppm NO (RA + NO), O(2) (FiO(2) > 0.96) or O(2) + NO. Matrix metalloproteinase (MMP) activity and MMP-2 mRNA were also measured. In recovery experiments, we measured lung collagen content in piglets exposed to RA + NO or O(2) + NO and then allowed to recover for 3 days. The results show that lung collagen increased 4-fold in the RA + NO piglets, the O(2) and O(2) + NO groups had only a 2-fold elevation relative to RA controls. Unlike the RA + NO piglets, the O(2) and O(2) + NO groups had more than 20-fold elevation in lung lavage fluid hydroxyproline compared to the RA group. O(2) and O(2) + NO also had increased lung MMP activity, extravascular water, and lavage fluid proteins. MMP-2 mRNA levels were unchanged. After 3 days' recovery in room air, the RA + NO groups' lung collagen had declined from 4-fold to 2-fold above the RA group values. The O(2) + NO group did not decline. Alveolar septal width increased significantly only in the O(2) and O(2) + NO groups. We conclude that 5 days' exposure to NO does not result in pulmonary matrix degradation but instead significantly increases lung collagen content. This effect appears potentially reversible. In contrast, hyperoxia exposure with or without NO results in pulmonary matrix degradation and increased lung collagen content. The observation that NO increased lung collagen content represents a new finding and suggests NO could potentially induce pulmonary fibrosis.     

重组人促红细胞生成素对新生大鼠高体积分数氧肺损伤细胞炎症的影响

目的探讨人重组促红细胞生成素(rhEPO)对新生大鼠高体积分数氧(高氧)肺损伤炎症的影响。方法将72只新生SD大鼠按随机数字表法分为4组:对照组、支气管肺发育不良(BPD)组、高氧+低剂量促红细胞生成素[EPO(L)]组、高氧+高剂量促红细胞生成素[EPO(H)]组。BPD组、高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组新生大鼠暴露于850 mL/L氧气中,高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组分别于高氧暴露后1、3、7 d给予800 IU/kg、2000 IU/kg rhEPO皮下注射,对照组和BPD组注射等量9 g/L盐水。实验开始后3、7、14 d记录各组体质量。HE染色,光镜下观察其肺组织形态结构的改变,检测肺组织放射状肺泡计数(RAC)。免疫荧光染色法检测核因子-κB(NF-κB)的表达,Western blot技术检测肺组织磷酸化NF-κB(pNF-κB)、抑制蛋白(IκB)及Caspase-3的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液中白细胞介素-1β(IL-1β)的表达。结果1.BPD组新生大鼠14 d时体质量明显低于对照组[(18.97±3.21)g比(27.97±2.30)g],差异有统计学意义(P<0.05);14 d时,高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组新生大鼠体质量[(24.16±2.15)g、(26.04±1.97)g]均显著高于BPD组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。2.HE染色观察肺组织形态学结构显示,与对照组比较,BPD组3 d肺泡间隔有少量炎性细胞渗出,7 d更为明显,肺泡腔有渗出,14 d出现肺泡数量减少,肺大疱形成,间隔增厚,RAC明显减少(5.50±1.29比14.33±2.80),差异均有统计学意义(P<0.01);高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组新生大鼠肺组织病理改变减轻,炎性细胞浸润减少,RAC值在14 d均明显高于BPD组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。3.免疫荧光结果显示,BPD组NF-κB p65阳性细胞数目明显增多,荧光强度增强,给予EPO处理后可减少NF-κB p65阳性细胞数目,荧光强度减弱。4.Western blot结果显示,与对照组比较,BPD组pNF-κB p65及Cleaved Caspase-3显著增高,差异均有统计学意义(均P<0.05);IκB明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与BPD组比较,高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组pNF-κB p65及Cleaved Caspase-3显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05),IκB均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。5.ELISA结果显示,与对照组比较,BPD组IL-1β表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组IL-1β表达则显著低于BPD组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论EPO能通过NF-κB途径抑制细胞炎性反应,减轻高氧诱导的肺组织凋亡,对新生大鼠高氧肺损伤起保护作用。     

高氧致慢性肺疾病新生大鼠肺泡损伤及肺泡上皮细胞的变化

目的 探讨高浓度氧致新生鼠肺损伤时肺泡形态学变化和肺泡上皮细胞动态变化.方法 通过吸入85%～90%高浓度氧气建立新生鼠慢性肺疾病组织模型.80只新生鼠分为实验组和对照组,实验组(n=40)吸人85%～90%氧气,对照组(n=40)吸入空气.分别留取1、3、7、14、21 d的肺组织,应用放射状肺泡计数(RAC)并且测量肺泡间隔厚度以判定肺泡发育情况,应用免疫组化及RT-PCR技术测定肺组织表面活性蛋白C(SPC)、水通道蛋白-5(AQP5)蛋白及mRNA表达.结果 在生后1 d和3 d,两组RAC和肺泡间隔厚度差异无显著性(P>0.05).在7 d和14 d,实验组的RAC明显低于对照组(P<0.01),肺泡间隔厚度高于对照组(P<0.01),21 d时肺泡间隔厚度升至最高,与对照组间比较差异有显著性(10.62±5.01 vs 3.62±0.88,P<0.001),RAC降至最低,与对照组间比较差异有显著性(3.57±1.24 vs10.47±0.88,P<0.001).高氧肺损伤实验组SPC 3 d时表达明显减少,7d后开始增多,14 d、21d明显高于对照组;而AQP5随着肺损伤的加重表达进行性下降.结论 高氧肺损伤可导致肺泡发育停滞,明显损伤肺泡上皮细胞,肺泡上皮细胞特异性标志物SPC、AQP5表达结果提示I型肺泡上皮细胞损伤严重,Ⅱ型肺泡上皮细胞虽然数量有所增加但其分化与转化能力明显下降.