IL-6对培养PVR的视网膜色素上皮细胞生长的影响及地塞米松的调节作用

目的　探讨白细胞介素 6(IL 6)对增生性玻璃体视网膜病变 (PVR)的视网膜色素上皮 (RPE)细胞体外生长的影响 ,以及地塞米松对这种增生的调节作用。方法　将地塞米松加入体积比为 10 %PVR的玻璃体切割物培养的RPE细胞培养板中 ,放射免疫学方法检测IL 6的分泌 ;将IL 6、PVR的玻璃体切割物和RPE细胞共同培养 ,测定掺入的3 H TdR和3 H proline的cpm值 ;用不同浓度的地塞米松、PVR玻璃体切割物和RPE细胞共同培养 ,测定掺入的 3 H TdR和3 H proline的cpm的值。 结果　加入地塞米松培养PVR的RPE细胞合成IL 6的量减少 ;IL 6和PVR的RPE细胞共同孵育后 ,细胞增殖明显 ,胶原合成增强 ;地塞米松抑制培养PVR的RPE细胞增殖和胶原合成 ,且随浓度的增加 ,抑制作用增强。结论　IL 6促进PVR培养的RPE细胞增殖和胶原的合成 ,地塞米松抑制RPE细胞增殖和胶原合成 ,一定程度是通过抑制IL 6合成而发挥作用。     

视网膜色素上皮细胞在增生性玻璃体视网膜病变中的作用

增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)是在炎症和免疫功能细胞及多种活化因子对眼内细胞修复反应的调控过程中,由于过度促进细胞增殖、移行以及由细胞介导的胶原收缩而形成的。参与PVR的细胞目前已知的有5种,其中视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞是最主要的,本文将影响RPE细胞功能的各种影响因素及PVR的治疗进展作一综述。     

姜黄素对IL-1β诱导视网膜色素上皮细胞分泌IL-8和sICAM-1的影响

目的:研究姜黄素对IL-1β诱导RPE细胞分泌IL-8和sICAM-1的影响。方法:RPE细胞经含4mL/LFBS的DMEM/F12同步后分为四组:①rhIL-1β干预组;②rhIL-1β 姜黄素组,姜黄素分5mg/L和10mg/L两个浓度;③姜黄素组,只分别加入5mg/L和10mg/L姜黄素;④空白对照组(4mL/LFBS DMEM/F-12)。所有样本干预24h后收集培养上清液和该孔细胞蛋白裂解液。ELISA法检测rhIL-1β(5μg/L)和姜黄素诱导hfRPE细胞分泌IL-8和sICAM-1的量。结果:rhIL-1β(5μg/L)组RPE细胞分泌的IL-8和sICAM-1分别比空白对照组升高了20倍和8倍,加入姜黄素能显著抑制其分泌。5mg/L姜黄素使IL-8和sICAM-1含量分别降低了36.88%和14.90%,10mg/L则分别达到55.73%和41.78%。姜黄素本身不刺激hfRPE细胞分泌IL-8和sICAM-1。结论:姜黄素可显著抑制IL-1β刺激的RPE细胞分泌炎前因子IL-8和sICAM-1,有可能防止PVR的发生。     

金雀异黄素对培养人视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用

目的观察金雀异黄素对培养人视网膜色素上皮(hRPE)细胞增生的影响.方法通过MTT比色法和核仁嗜银蛋白染色分析,观察金雀异黄素对hRPE增生的影响.结果不同浓度的金雀异黄素可以抑制hRPE增生,在25～100mg·L-1的范围内呈剂量效应关系,抑制率为12.0%～64.6%(P＜0.05);并随时间的延长,抑制效应增强.嗜银蛋白染色结果50mg·L-1金雀异黄素作用12h即有胞核内AgNORs的减少,平均数为2.7(P=0.034),25mg·L-1金雀异黄素作用24h后,其胞核内AgNORs的数量平均为3.9(P=0.023).并随剂量的增加和时间的延长,胞核内AgNORs的数量减少.结论不同浓度的金雀异黄素作用于培养hRPE细胞,抑制hRPE细胞的增生,有剂量和时间效应关系,随剂量增加和时间延长,抑制作用越明显.提示金雀异黄素可以为增生性玻璃体视网膜病变的机理和防治研究提供新的思路.     

西洋参茎叶总皂甙对培养人胚视网膜色素上皮细胞增生的影响

目的 研究西洋参茎叶总皂甙(PQS)对人视网膜色素上皮细胞(RPE)增生的抑制作用。方法 通过活细胞计数法与MTT比色法分别检测不同质量浓度(10μg／ml～500μg／ml)PQS和PQS(200μg／ml)在不同作用时间(6～120h)对RPE增生及代谢的影响。结果 PQS组细胞增殖受抑制，细胞生存率下降，400μg／ml抑制作用最强；其抑制效应在6h出现，72h达高峰。结论 PQS可能通过阻滞钙通道、干扰RPE代谢对RPE增殖具有剂量和时间依赖方式的抑制作用。     

苏拉明对体外培养的人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的 观察苏拉明(suramin)对体外培养的人视网膜色素上皮细胞(retinalpigment epithelial cells)生长、增殖的影响。方法 以300mg·L~(-1)苏拉明作用于培养的视网膜色素上皮细胞,于不同的时间点行细胞计数,绘制生长曲线,台盼蓝染色判定细胞的活性;将不同浓度的苏拉明(0、100、200、300、400mg·L~(-1))加入RPE细胞培养液,72h后用四甲基唑盐(MTT)比色法测吸光值A,并计算不同浓度条件下的细胞增殖抑制率;流式细胞技术检测细胞周期变化。结果 苏拉明在所设浓度内均抑制RPE细胞增殖,并存在时间-效应及剂量-效应关系,最大增殖抑制率约78％,72h时IC_(50)为272mg·L~(-1)。FCM示suramin使G_2/M期细胞增加了14.2％。结论 苏拉明能抑制体外培养的人视网膜色素上皮细胞增殖,可作为防治增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的候选药物作进一步研究。     

肝细胞生长因子对视网膜色素上皮细胞增生及损伤愈合的影响

目的 研究肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)对培养的人视网膜色素上皮(retinal pigmental epithelial，RPE)细胞增生和损伤愈合的影响。方法 MTT比色法检测细胞增生情况，相差显微和细胞计数法观察RPE细胞损伤后的愈合情况。结果 中等浓度HGF(10ng／ml)刺激RPE细胞的增生较低浓度组(0．01～1ng／m1)明显增多(P＜0．05)，而与高浓度(100ng／ml)组比较无统计学差异(P＞0．05)。随着HGF刺激时间的延长，迁移的细胞数量增多，同一时间点，HGF处理组明显比对照组细胞数量多(P＜0．05)。结论 中等浓度的HGF可促进细胞增生，对损伤后的RPE细胞有迁移作用。     

雷帕霉素对人视网膜色素上皮细胞增生和凋亡的影响

背景雷帕霉素（RAPA）是哺乳动物RAPA靶蛋白（mTOR）特异性抑制剂,能有效抑制晶状体上皮细胞（LECs）及多种肿瘤细胞增生并具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用,研究其对视网膜色素上皮（RPE）细胞是否具有类似作用对临床上预防和治疗增生性玻璃体视网膜病变（PVR）具有重要意义。目的研究RAPA对体外培养的人RPE细胞增生和凋亡的影响。方法对人RPE细胞（D407细胞株）进行体外传代培养,按照培养基中加入药物的不同将培养的细胞分为9组,空白对照组进行常规培养;二甲基亚砜（DMSO）对照组在培养基中加入质量分数0．1％。DMSO;实验各组将5、10、20、40、80、160、320nmol／LRAPA分别加入培养基中并分别培养12、24、48h。应用噻唑蓝（MTT）法检测各组吸光度（A490）值并计算各组人RPE细胞增生的抑制率,应用Hoechst染色法检测各组人RPE细胞的凋亡率,评价上述各浓度RAPA作用不同时间后对人RPE细胞增生和凋亡的影响。结果不同浓度RAPA组对人RPE细胞的抑制率随浓度的增高而明显升高,差异有统计学意义（F=484．451,P〈0．01）,20～320nmol／LRAPA组在各时间点所测细胞增生抑制率均明显高于DMSO溶剂对照组,差异均有统计学意义（P〈0．01）。RAPA对细胞增生的抑制率随作用时间的延长明显增加,差异有统计学意义（F=232．262,P〈0．01）,各浓度的RAPA作用24h和48h后细胞增生的抑制率均明显高于12h,差异均有统计学意义（P〈0．05）。与空白对照组及溶剂对照组比较,10nmol／LRAPA作用12、24、48h均有诱导细胞凋亡的作用,差异均有统计学意义（P〈0．05）;20～320nmol／LRAPA组细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义（P〈0．叭）。各浓度RAPA组随作用时间的延长人RPE细胞的凋亡率明显增加（F=625．584,P〈0．01）。Hoechst33258染色可见凋亡细胞核碎裂并呈块状致密浓染,染色质固缩。结论RAPA以浓度和时间依赖的方式抑制体外培养的人RPE细胞增生并诱导其凋亡。     

PKCα对人视网膜色素上皮细胞移行作用的影响

目的 通过体外实验探讨蛋白激酶Cα(PKCα)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞移行的影响.方法 实验研究.培养正常人PKCαRPE细胞,将实验分为Control组、Thymeleatoxin (PKCα激动剂)组、siRNA-PKCα(PKCα抑制剂)组和Nonsilencing siRNA (Non-siRNA)组,应用RT-PCR检测RPE细胞内PKCαmRNA的表达.细胞划痕实验观察RPE细胞的移行速度,Transwell实验观察RPE细胞的跨膜细胞数,活细胞动态实验观察RPE细胞的细胞活力.组间数据比较采用独立样本t检验.结果 通过光镜和免疫荧光方法计数成功培养获得RPE细胞.Thymeleatoxin组的RPE细胞内PKCαmRNA的含量明显高于Control组(t=3.712,P=.034),siRNA-PKCα组的PKCαmRNA的含量明显低于Non-siRNA组(t=3.274,P=0.031).Thymeleatoxin组RPE细胞的移行速度、跨膜细胞数、细胞活力等均明显优于Control组(t=9.743、5.616、2.300,均P＜0.05),siRNA-PKCα组的移行速度、跨膜细胞数、细胞活力等均明显弱于Non-siRNA组(t=3.643,P＜0.001;t=7.202,P=0.002;t=2.418,P=0.042).结论 PKCα对人RPE细胞的移行有上调作用,提示PKCα可为增生性玻璃体视网膜病变的防治提供新的药物靶点.     

凝血酶对体外培养的视网膜色素上皮细胞生长的影响

目的 探讨凝血酶对视网膜色素上皮细胞的影响。方法 利用体外培养的视网膜色素上皮细胞，观察不同浓度的凝血酶对视网膜色素上皮细胞的影响。结果 各浓度的凝血酶对体外培养的视网膜色素上皮细胞具有促进增殖的作用。且40U/ml尤为明显。结论 凝血酶对体外培养的视网膜色素上皮细胞具有促进增殖的作用。这为探讨增生性玻璃体视网膜病变的提供了实验依据。     

胰岛素样生长因子结合蛋白-6对RPE细胞增殖和迁移的影响

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-6(insulin-like growth factor binding protein-6,IGFBP-6)对视网膜色素上皮(retinal pigmented epithelium,RPE)细胞增殖和迁移的影响。方法用IGF-Ⅱ(50mg·L-1)、PDGF(20mg·L-1)、VEGF(40mg·L-1)和TGF-β(4mg·L-1)干预ARPE-19细胞6h,以诱导细胞增殖,再加入不同浓度IGFBP-6(1mg·L-1、10mg·L-1、100mg·L-1、500mg·L-1、1000mg·L-1)作用24h、48h后,通过MTS实验观察OD值的变化,研究IGFBP-6对细胞增殖的影响。细胞划痕实验分为IGF-Ⅱ组(50mg·L-1)、IGF-Ⅱ+IGFBP-6组(含IGF-Ⅱ50mg·L-1和IGFBP-6500mg·L-1)、无血清培养液组的实验,细胞划痕24h、48h后,计算各组细胞移行愈合率的变化,从而研究IGFBP-6对细胞迁移的影响。结果 MTS比色法显示一定浓度的IGFBP-6(100mg·L-1、500mg·L-1、1000mg·L-1)可以抑制IGF-Ⅱ诱导的ARPE-19细胞增殖(P<0.05),各浓度IGFBP-6对PDGF、VEGF、TGF-β诱导的细胞增殖均无明显影响(均为P>0.05);细胞划痕实验显示,IGF-Ⅱ组、IGF-Ⅱ+IGFBP-6组、无血清培养液组的细胞移行愈合率[分别为(24h:43.91%±3.85%、29.76%±2.49%、26.12%±2.33%;48h:66.09%±1.67%、59.88%±3.43%、57.05%±2.49%)]差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 IGFBP-6能够抑制IGF-Ⅱ诱导的RPE细胞增殖和迁移。     

金丝桃素抑制体外培养的人视网膜色素上皮细胞增殖的初步研究

目的研究蛋白激酶C特异性抑制剂—金丝桃素对体外培养的人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment ep-ithelialcells,RPE细胞)增殖的影响,探讨它防治增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的细胞机制。方法用含0.5～5μM金丝桃素血清培养人RPE细胞,用细胞计数法、MTT比色法测定金丝桃素对RPE细胞增殖的影响。结果细胞计数法显示金丝桃素药物作用3d后,能抑制RPE细胞增殖,呈明显的剂量依赖性。四唑盐(tetra-zolium salt)MTT比色实验显示金丝桃素对PMA诱导的RPE细胞增殖有剂量和时间依赖性抑制。结论金丝桃素对体外培养的RPE细胞有剂量和时间依赖性抗增殖效果,具有潜在的治疗PVR前景。     

视网膜下液对培养的人眼视网膜色素上皮细胞和成纤维细胞增殖作用的影响

目的：了解不同程度增生性玻璃体视网膜病变（PVR）的视网膜下液（SRF）对视网膜色素上皮细胞（RPE）、成纤维细胞（FB）增殖的影响。方法：用溴标法和MTT法测定不同程度PVR的SRF对RPE和FB增殖的促进作用。结果：几乎所有的SRF都具有促进细胞增殖的作用,用1：10比例稀释,PVR程度为PVR＜C1,PVRC1,PVR＞C13组。SRF作用24h后RPE的增殖率分别为对照组的128.5％,139.8％,156.8％,FB的增殖率分别为对照组的126.3％,143.1％及172.3％。结论：SRF液促进细胞增殖的作用随着PVR程度的加重而增强。     

Expression of IGFBP-6 in a proliferative vitreoretinopathy rat model and its effects on retinal pigment epithelial cell proliferation and migration

AIM: To investigate the expression of insulin-like growth factor binding protein-6 (IGFBP-6) in a proliferative vitreoretinopathy (PVR) model and its effects on proliferation and migration in retinal pigment epithelial (RPE) cells.METHODS: A PVR Wistar rat model was established by the intravitreal injection of RPE-J cells combined with platelet-rich plasma (PRP). The expression levels of IGFBP-6 were tested by ELISA. ARPE-19 cell proliferation was evaluated by the MTS method, and cell migration was evaluated by wound healing assays.RESULTS: The success rate of the PVR model was 89.3% (25/28). IGFBP-6 was expressed at higher levels in the vitreous, serum and retina of rats experiencing advanced PVR (grade 3) than in the control group (vitreous:152.80±15.08ng/mL vs 105.44±24.81ng/mL, P>0.05; serum:93.48±9.27ng/mL vs 80.59±5.20ng/mL, P<0.05; retina:3.02±0.38ng/mg vs 2.05±0.53ng/mg, P<0.05). In vitro, IGFBP-6 (500ng/mL) inhibited the IGF-II (50ng/mL) induced ARPE-19 cell proliferation (OD value at 24h:from 1.38±0.05 to 1.30±0.02; 48h:from 1.44±0.06 to 1.35±0.05). However, it did not affect basal or VEGF-, TGF-β- and PDGF-induced cell proliferation. IGFBP-6 (500ng/mL) reduced the IGF-II (50ng/mL)-induced would healing rate [24h:from (43.91±3.85)% to (29.76±2.49)%; 48 h:from (66.09±1.67)% to (59.88±3.43)%].CONCLUSION: Concentrations of IGFBP-6 increased in the vitreous, serum, and retinas only in advanced PVR in vivo. IGFBP-6 also inhibited IGF-II-induced cell proliferation in a not dose or time dependent manner and migration. IGFBP-6 participates in the development of PVR and might play a protective role in PVR.     

曲尼司特对体外培养人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的:观察曲尼司特对体外培养人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增殖的影响。方法:用不同浓度的曲尼司特0(对照组),12.5,25,50,100mg/L作用于体外培养的3~5代人RPE细胞(RPE-19细胞株),在倒置显微镜下、结合HE染色观察细胞形态,并采用细胞角蛋白CK18对细胞进行鉴定。分别在作用12,24,48h后采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞抑制率,蛋白质印迹法(Western-Blot)和免疫组织化学法观察不同浓度的曲尼司特作用24h后细胞表达转化生成因子-β1(TGF-β1)、血小板衍化生长因子受体A(PDGFR-A)蛋白的情况。结果:相同时间点不同浓度曲尼司特对细胞抑制率随浓度增加而增大,差异有统计学意义(P<0.05)。TGF-β1蛋白表达定位于细胞浆,PDGFR-A蛋白定位于胞膜和胞浆,它们的表达量都随曲尼司特浓度的增加而下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:曲尼司特可以抑制人RPE细胞的增殖,并有剂量依赖性,其机制可能与下调TGF-β1和PDGFR-A蛋白表达有关。     

神经生长因子对人胚胎视网膜色素上皮细胞生长及其DNA合成的影响

目的　探讨神经生长因子 (NGF)对体外培养的人胚胎视网膜色素上皮 (RPE)细胞的促增殖作用及DNA合成的影响。方法　分别用MTT法测定加入NGF 10 0、2 0 0、30 0 μg/L 48h后人RPE细胞数量的改变和核酸蛋白分析仪测定加入NGF 5 0、10 0、2 0 0、30 0、40 0 μg/L 48h后人RPE细胞DNA质量浓度的变化。 结果　 10 0、2 0 0、30 0 μg/LNGF作用 48h后其细胞增殖的A值分别为 ( 0 2 137± 0 0 2 33)、( 0 2 188± 0 0 181)、( 0 2 32 2± 0 0 16 4) ,与对照组 ( 0 1897± 0 0 15 2 )相比 ,差异有显著性 (q test ,P <0 0 5 ) ;10 0、2 0 0、30 0、40 0 μg/LNGF作用 48h后其细胞DNA质量浓度分别为 ( 981 2 2 0 4± 12 3 5 35 7)、( 1375 8484± 2 44 4 718)、( 16 5 8 70 71± 176 9381)、( 2 35 3 0 86 3± 6 0 9 90 6 4) μg/ml ,与对照组 ( 6 6 6 8188± 14 1 330 2 ) μg/ml相比差异有显著性 (q test,P <0 0 5 )。结论　NGF可促进人RPE细胞增殖及促进细胞DNA合成。     

视网膜下液体对人视网膜色素上皮细胞生长的刺激作用及其临床特征

研究了28例孔源性视网膜脱离患者视网膜下液对人眼视网膜色素上皮细胞生长的作用。所有标本均可刺激视网膜色素上皮细胞增殖，但存在较大范围的活动性，发现增殖刺激活力与视网膜脱离的增殖性玻璃体视网膜病变程度、视网膜脱离范围和脱离持续时间呈正相关，且与视网膜脱离增殖性玻璃体视网膜病变程度及脱离范围相关性最大（P＜0．01）。结果表明：增殖性玻璃体视网膜病变在C级以上，脱离范围超过2个象限、脱离时间超过4周者，视网膜下液促增殖活力显著增强。