正常人骨髓基质祖细胞体外传代培养的实验研究

目的 :研究正常人骨髓基质祖细胞 ( CFU- F)在体外传代培养过程中的功能变化。方法 :采用体外液体单层和半固体培养法。结果 :F1传代细胞对骨髓红系祖细胞集落形成单位 ( CFU- E)和粒系祖细胞集落形成单位 ( CFU- GM)支持能力最显著 ,F2 代对有核细胞粘附能力最显著。结论 :F1代是进行第二次接种骨髓细胞的最佳时机 ,而对有核细胞的粘附能力主要与成纤维细胞有关。     

肿瘤坏死因子α对红系造血的抑制作用

目的：探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）在红系祖细胞造血过程中的作用。方法：利用免疫磁珠法分离并纯化人类外周血CD34^ 细胞，在体外与TNF-α一起培养，测定红系、非红系细胞扩增倍数及集落形成能力；用流式细胞仪检测细胞表面标记。结果：TNF-α抑制暴式红系集落形成单位（BFU-E）的形成及血型糖蛋白A(GpA)的表达，增加红系集落形成单位（CFU-E）和非红系集落的数量；GpA^ 细胞缺乏TNFR Ⅰ表达，TNFα增加GpA^-细胞表达TNFRⅡ；这些TNFRⅡ^ 的GpA^-细胞具有树突状细胞（DC）相关的表达标记。结论：TNF-α抑制红系祖细胞的生长，选择性地发生在分化的早期阶段，与TNF-α诱导增加的DC有关。     

骨髓基质细胞体外扩增能力及支持造血的研究

目的：观察成纤维细胞集落形成单位（CFU－F）贴壁层的形成,体外传代培养,扩增的情况,研究各阶段（CFU－F）对粒－单核细胞集落形成单位（CFU－GM）和红细胞集落形成单位（CFU－E）生长及细胞因子对造血的支持作用,并测定骨髓有核细胞对基质细胞的粘附能力,方法：利用改进的液体培养法,培养骨髓基质细胞并传代,利用甲基纤维素半固体培养法,培养人骨髓细胞,观察CFU－GM,CFU－E集落数,：人骨髓基质细胞在体外可以传代培养4代并能扩增28倍,其中F3代对CFU－GM和CFUE的促进增殖作用最强,且对骨髓有核细胞的粘附能力最强,结论：人,骨髓基质细胞可体外传代扩增并支持造血细胞生长。     

大鼠骨髓内皮祖细胞的分离培养及其生物学特性

目的：探讨大鼠骨髓内皮祖细胞的分离培养方法及其生物学特性。方法：采用二次贴壁法体外扩增培养大鼠骨髓内皮祖细胞,观测细胞增殖能力;免疫化学检测细胞CD133、CD34、Flk1、CD31的表达;三维培养细胞并观察其体外成血管能力。结果：细胞培养第4天集落样生长,呈圆形或梭形;第10天细胞长满瓶底,呈鹅卵石样外观。原代血管内皮祖细胞CD133、CD34、Flk1均表达阳性;第2代细胞CD34、CD31、Flk1均表达阳性,CD133表达阴性。三维培养第2代血管内皮祖细胞在胶原内有＂出芽式＂生长现象及管腔样结构形成。结论：体外扩增法可以从骨髓中分离培养出内皮祖细胞,三维培养发现其具有体外成血管能力。     

人骨髓基质干细胞克隆对脐血造血干细胞体外扩增作用的研究

目的：探讨人骨髓基质干细胞的克隆化培养及其对体外造血干细胞扩增的影响。方法：取正常肋骨分离骨髓，制备单个核细胞贴壁培养，约5d后取集落样生长的梭形细胞扩增培养，传代、将分选的脐血造血干／祖细胞接种到克隆培养的人骨髓基质干细胞及其他培养条件液上，比较不同培养条件及不同代次骨髓基质干细胞对造血干／祖细胞扩增能力及集落形成能力的影响。结果：人骨髓基质干细胞能扩增达20代以上，经流式细胞仪检测证实基质干细胞，单纯细胞因子组和细胞因子加基质干细胞组能有效扩增造血细胞，而后者有维持长期造血的作用。结论：该克隆培养方法能有效扩增骨髓基质干细胞，培养的细胞有体外支持长期造血的作用。     

小鼠骨髓红系祖细胞体外培养细胞分化的形态学观察

用改良Iscove甲基纤维素法体外培养小鼠骨髓红系祖细胞,对形成的红系集落细胞分化进行形态学观察。结果发现:(1)在低浓度红细胞生成素培养条件下,处于较晚发育期的红系祖细胞(CFU-E)可形成数十个细胞组成的集落,但各集落间的细胞数量及发育阶段的同步性有较大差异;(2)在高浓度红细胞生成素培养条件下,处于较早发育期的红系祖细胞(BFU-E)可形成数千个甚至上万个细胞组成的大集落,且集落内细胞的发育阶段具较高的同步性;(3)在CFu-E和BFu-E培养集落中均可观察到自然出现的核固缩及排核现象。以上发现为哺乳类红细胞自然排核学说及红系终末细胞中存在不利于细胞核增殖生长的“胞质因子”工作假说提供了有利的佐证。     

急性ITP患者外周血T细胞对骨髓巨核细胞的影响

目的 探讨急性ITP患者外周血T细胞对骨髓巨核细胞生成的影响.方法 本文采用改良的血浆凝块技术以及细胞共培养系统研究急性ITP患者T细胞在体外对骨髓巨核细胞生成的影响.从而探讨其发病机制.结果 实验结果显示,急性ITP患者外周血T细胞与靶细胞共同培养时,对巨核系祖细胞集落形成单位(CFU-MK)的集落效应无明显的影响.但其中三例PAIgG升高患者的T细胞对CFU-MK有不同程度的抑制作用.结论 ITP的发病机制相当复杂.除体液免疫机制外,还有细胞免疫机制参与.T细胞及其亚群对巨核系祖细胞生成抑制在ITP的发病机制中可能起一定的作用.     

对192份脐血多个指标的综合评估

采用密闭式脐血采血法收集了１９２份脐血，对脐血的采集量、有核细胞数、经淋巴细胞分离液分离后的单个核细胞的回收率进行了评估用含有多种生长因子的半固体培养基对脐血所含的粒单祖细胞及红系祖细胞进行了检测，并和骨髓的同类祖细胞作了比较．结果，脐血的平均可采集量为９９ｍＬ，每份脐血所含有的有核细胞数为（１３６±４８）×１０８，分离后单个核细胞的回收率为（４２３±１６４）％，脐血的粒单祖细胞及红系祖细胞的集落产率均高于骨髓，差异有显著性，（Ｐ＜００５）．脐血形成的粒单及红系集落体积也较骨髓的同类集落体积大．结果表明脐血比骨髓更富含造血祖细胞     

骨髓基质细胞体外扩增能力及支持造血的研究

目的 :观察成纤维细胞集落形成单位 (CFU- F)贴壁层的形成、体外传代培养、扩增的情况 ,研究各阶段 (CFU- F)对粒 -单核细胞集落形成单位 (CFU- GM)和红细胞集落形成单位 (CFU- E)生长及细胞因子对造血的支持作用 ,并测定骨髓有核细胞对基质细胞的粘附能力。方法 :利用改进的液体培养法 ,培养骨髓基质细胞并传代 ,利用甲基纤维素半固体培养法 ,培养人骨髓细胞 ,观察 CFU- GM、CFU- E集落数。结果 :人骨髓基质细胞在体外可以传代培养 4代并能扩增 2 8倍 ,其中 F3代对 CFU- GM和 CFU-E的促进增殖作用最强 ,且对骨髓有核细胞的粘附能力最强。结论 :人骨髓基质细胞可体外传代扩增并支持造血细胞生长     

白血病红系、粒系造血祖细胞集落测定及血清调控作用研究

本文报告了应用我们已建立的红系造血细胞体外培养方法,并配合粒系造血祖细胞体外培养方法,观察了慢性粒细胞白血病(简称慢粒)红系和粒系造血祖细胞集落细胞的体外增殖特性、集落产率、集落细胞染色体核型变化,以及慢粒集落细胞对刺激因子反应特性。此     

多发性硬化患者骨髓造血干(祖)细胞体外集落培养及其意义

目的：探讨多发性硬化（MS）患者骨髓造血干（祖）细胞体外培养的增殖分化功能及其临床应用意义。方法：采用体外胶原半固体培养法观察19例MS患者骨髓造血干（祖）细胞巨核系集落形成情况，甲基纤维素半固体培养法观察粒单系和红系集落形成情况。并将各系集落形成单位按复发期和缓解期分组及按病程≤3年和病程〉3年分组与健康对照组分别进行比较分析。结果：①MS复发期组的粒-单系集落形成单位（CFU-GM）显著低于健康对照组（P=0．006），也显著低于缓解期组（P=0．001）。MS缓解期组CFU-GM虽比健康对照组高，但差异无统计学意义（P〉0．05）。MS复发期组、缓解期组的巨核系集落形成单位（CFU-MK）、红系集落形成单位（CFU-E）与健康对照组相比，差异均无统计学意义（均P〉0．05）。②MS病程≤3年组和病程〉3年组的CFU-MK、CFU-GM、CFU-E与健康对照组相比。差异均无统计学意义（均．P〉0．05）。结论：MS复发期患者骨髓造血干（祖）细胞本身或其分化成粒-单系的过程存在异常；MS复发期造血干（祖）细胞也可能对造血生长因子的反应较缓解期差．     

白细胞介素2激活的外周血和脐带血及骨髓单个核细胞培养上清对骨髓造血的影响

目的：探讨用白细胞介素2（IL-2）激性的外周血（APB）和脐带血（ACB）及骨髓（ABM）单个核细胞的培养上清,对骨髓造血的影响和作用的可能机制。方法：应用MTT法,在体外同时检测APB和ACB及ABM培养上清,对骨髓和外周血单个核细胞增殖能力的影响;同时用集落培养法,检测这3种上清对骨髓粒-单细胞集落和成纤维细胞集落形成能力的影响。结果：加入APB和ACB及ABM培养上清,对正常骨髓和外周血单个核细胞增殖能力,以及粒-单细胞集落和成纤维细胞集落形成无显著的影响。结论：应用IL-2对自体干细胞移植物进行体外净化时,培养上清对正常造血细胞和单个核细胞无显著影响。     

急性非淋巴细胞性白血病病程中骨髓正常和异常细胞克隆的变化

体外半固体造血祖细胞培养技术用于急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)的研究已有10多年的历史,但同时将白血病集落形成单位(L-CFU)、红系集落形成单位(CFU-E)及粒单系集落形成单位(CFU-GM)作为在祖细胞水平反     

IL-33转基因小鼠骨髓造血干/祖细胞向髓系细胞分化的能力增强

目的利用IL-33转基因小鼠研究IL-33对造血干/祖细胞的增殖和分化影响。方法利用流式细胞仪分析IL-33转基因小鼠及同窝野生对照小鼠的外周血、脾脏、骨髓细胞的免疫表型及造血干细胞分化不同阶段细胞的数量变化;利用体外成克隆实验和细胞周期分析研究IL-33对于造血干细胞增殖能力的影响。结果与野生型小鼠相比,IL-33转基因小鼠B细胞和T细胞在外周血中都明显降低,粒细胞在外周血和骨髓中都有明显增加;IL-33转基因小鼠的骨髓造血干细胞和多能祖细胞数量减少,共同淋系祖细胞数量减少,共同髓系祖细胞和粒单系祖细胞数量增加;IL-33转基因小鼠的造血干细胞处于S-G2-M的细胞增多;体外单克隆实验发现IL-33转基因小鼠造血干细胞形成的集落数增加。结论 IL-33转基因小鼠造血干细胞增殖能力增强,更易向髓系细胞分化。     

制首乌总多糖对贫血小鼠造血祖细胞增殖的影响

目的观察制首乌总多糖(PPS)对放化疗所致骨髓抑制贫血小鼠造血祖细胞增殖的影响。方法建立骨髓抑制贫血小鼠模型,采用造血祖细胞培养技术,观察PPS体内ip给药和细胞培养直接用药对造血祖细胞增殖和骨髓有核细胞(BMC)数目的影响。结果体内用药能显著增加BMC数目,提高BFU-E、CFU-E和CFU-Meg集落数产率(P<0.01),能增加CFU-GM集落数产率(P<0.05);在一定浓度下,体外直接用药,能增加CFU-Meg集落数产率(P<0.01)。结论PPS能通过间接作用促进红系和粒系祖细胞的增殖,能通过间接和直接作用刺激巨核系祖细胞的增殖。     

烷化溶血磷脂作为骨髓净化药物的实验研究

目的：探讨烷化溶血凝脂（ALP）作为骨髓净化药物的潜在应用价值。方法：克隆形成实验测定HL60细胞生长;正常粒－单核系造血祖细胞（CFU－GM）集落产率的变化检测ALP对正常造血祖细胞的影响;RT－PCR检测bcl-2mRNA表达;流式细胞术检测Bcl-2蛋白表达。结果：ALP作用后,HL60细胞的克隆形成率明显下降（P＜0．01）;ALP对CFU－GM的影响不显著,20μg/ml预处理24h,CFU－GM集落产率才被抑制（P＜0．01）;ALP不影响bcl-2基因在mRNA及蛋白水平的表达。结论：ALP具有抑制白血病细胞增殖的作用,但对正常造血细胞无显著毒性,在白血病病人自体骨髓体外净化中有良好的应用前景。     

小蘖胺对小鼠升白细胞作用机理的研究

本文采用小鼠体内扩散盒及脾结节法,结合骨髓有核细胞计数,探讨了小蘖胺对小鼠骨髓白细胞系造血功能的影响.该药能显著提高小鼠骨髓有核细胞数,量效关系显著,促进骨髓造血干细胞及粒系祖细胞的集落生成率.认为其作用机理与促进骨髓造血干细胞及粒系祖细胞的增殖、分化有关.     

ITP患者T细胞对巨核细胞生成作用的影响

本文应用改良的血浆凝块技术和共培养系统研究特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者T细胞在体外对异体骨髓巨核细胞生成作用的影响,以探讨ITP的发病机制。实验结果表明,从总体来看,ITP患者的T细胞当加到培养物中和靶细胞共培养时,对巨核系祖细胞集落形成单位(CFU-MK)的集落效应无明显的影响。其中三例PAIgG升高患者的T细胞对CFU-MK有不同程度的抑制作用。以上结果提示ITP的发病机制相当复杂。除体液免疫机制外,也有细胞免疫机制参与,T细胞或其亚群对巨核系祖细胞生成抑制在ITP的发病机制中可能起着一定的作用。     

昆布多糖对大鼠骨髓巨噬细胞生物活性的影响

目的 研究昆布多糖对大鼠骨髓巨噬细胞生物活性的影响.方法 制备并体外培养大鼠骨髓造血干/祖细胞、巨噬细胞;制备昆布多糖作用后的骨髓巨噬细胞条件培养液,测定培养液中造血生长因子促红细胞生成素(EPO)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)表达及活性;测定昆布多糖条件培养液作用后造血祖细胞的集落产率.结果 经昆布多糖诱导的骨髓巨噬细胞培养上清液可显著提高骨髓造血祖细胞的集落产率;经昆布多糖诱导后,骨髓巨噬细胞的EPO、GM-CSF和IL-3的表达增高.结论 昆布多糖可刺激骨髓巨噬细胞造血因子表达增高,从而促进髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)、红系祖细胞(CFU-E)、粒一单系造血祖细胞(CFU-GM)的增殖分化.     

人参蜂王浆对正常和照射豚鼠造血免疫器官CFU-F影响的实验研究

骨髓及脾细胞体外培养中加不同浓度人参蜂王浆后培养8～12天,计数基质祖细胞集落(CFU-F)数。发现实验组形成的CFU-F小型集落明显高于对照组。培养1Gy照射的骨髓细胞,加入3.10~(-1)～3.10~(-3)g/ml人参蜂王浆后,细胞呈融合生长,认为人参蜂王浆对骨髓和脾细胞体外培养形成的小型CFU-F有成集落刺激作用,而对大型集落则相反。