大鼠脑出血后细胞凋亡与神经元特异性烯醇化酶及神经损伤关系的研究

目的：了解大鼠脑出血后血肿周围组织细胞凋亡与神经元特异性烯醇化酶（NSE）的表达及大鼠神经功能缺损程度的关系。方法：用胶原酶注入到大鼠尾状核的方法制作脑出血模型。将大鼠分为脑出血、假手术组、正常组3组。采用苏木素伊红（HE）染色、NSE免疫组织化学染色及TUNEL分别观察各组在脑出血后第6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、5 d、7 d时血肿周围NSE及TUNEL的表达。用Longa评分法评价大鼠神经功能缺损程度。结果：大鼠在胶原酶注入6 h后形成稳定的血肿,在造模24～48 h神经功能缺损程度最重;6 h即见到TUNEL阳性细胞的表达,在48 h最明显;NSE从神经元中漏出弥散到细胞间隙也在48 h达高峰。结论：脑出血血肿周围凋亡与神经功能缺损及NSE的变化有关,凋亡可能在脑出血的神经损伤中起重要的作用。     

实验性脑出血血肿周围组织细胞凋亡的研究

目的探讨脑出血大鼠血肿周围组织细胞凋亡的发生、发展情况。方法64只SD大鼠被随机分为2组,实验组（56只）采用胶原酶诱导大脑尾状核脑出血模型,对照组（8只）为假手术组,实验组分为术后6h、12h、24h、48h、72h、7d、14d7个时相点,运用TUNEL、SP技术和电子显微镜检测血肿周围组织中细胞凋亡及caspase-3蛋白表达。结果TUNEL阳性细胞数在实验组6h时可见,24～48h表达明显,与对照组相比有显著性差异（P〈0.05）。caspase-3蛋白表达规律与TUNEL一致,但高峰时间早于TUNEL。透射电镜可见细胞凋亡形态学改变。结论脑出血后血肿周围组织存在神经细胞凋亡,且与caspase-3蛋白表达有关。     

促红细胞生成素对大鼠脑出血神经的保护作用

目的 研究促红细胞生成素(EPO)对脑出血神经保护作用的机制.方法 用立体定向技术,将自体小凝血注入大鼠尾状核区制备脑出血模型.110只Wistar雄性大鼠,随机分成四组:正常组、假手术组、ICH对照组、rhEPO治疗组.应用免疫组化及原位细胞凋亡检测脑出血灶周组织Bcl-2、Bax表达及凋亡细胞.统计学方法采用LSD-t检验及Pearson相关分析.结果 ICH对照组及rhEPO治疗组术后6 h血肿周围皮质TUNEL,Bcl-2,Bax阳性细胞明显增加,72 h达到高峰,120 h下降,各时间点与假手术组比较,差异具有统计学意义(P<0.01).rhEPO治疗组TUNEL、Bax阳性细胞数明显少于同时点ICH对照组(P<0.01),但Bcl-2阳性细胞数明显增加(P<0.01).Bax蛋白表达及Bax/Bcl-2均与细胞凋亡呈正相关(P<0.01).结论 凋亡机制参与脑出血后继发性损伤过程,EPO通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,对脑出血后神经损伤起保护作用.     

实验性脑出血后细胞凋亡与神经损伤的关系

目的 探讨脑出血后血肿周嗣组织细胞凋亡、Bcl-2和Bax蛋白表达与神经功能损伤的关系。方法 SD大鼠70只，随机分为实验组和对照组，每组各35只。实验组采用胶原酶诱导尾状核脑出血模型，分别于术后6h、12h、24h、48h、72h、7d、14d共7个时相点（每个时相点5只）评测其神经功能缺损情况。之后处死大鼠，采用TUNEL法、免疫组化SP技术，检测血肿周嗣脑组织细胞凋亡及Bcl-2，Bax蛋白的表达。结果脑出血后大鼠出现不同程度的神经功能缺损，以术后48h左右损害严重．出血后6h血肿周嗣组织出现TUNEL阳性细胞，48h达高峰。Bcl-2和Bax蛋白表达高峰期分别是脑出血术后6h和48h。结论 脑出血后细胞凋亡与神经损伤程度一致，细胞凋亡在脑出血后神经功能损伤中起重要作用。     

安宫牛黄丸对大鼠脑出血后水通道蛋白-4表达的影响

目的:探讨安宫牛黄丸对大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage)后脑水肿及脑组织水通道蛋白-4(aquaporin-4,AQP-4)表达的影响.方法:将SD大鼠随机分为正常对照(CON)组、假手术(SHAM)组、脑出血(ICH)组、安宫牛黄丸治疗(AGNHW)组.每组分为5个时间点,分别为6、12、24、48、72 h,每个时间点5只大鼠.采用自体股动脉血注入尾状核建立大鼠脑出血模型,HE染色观察各组血肿周围神经细胞形态学改变,免疫组织化学方法观察各组血肿周围脑组织AQP-4表达的变化.结果:大鼠实验性脑出血后AQP-4表达升高,48 h达到高峰,72 h仍高于正常;脑出血后6 h可见神经细胞坏死,24～48 h时段达到高峰,脑组织损伤程度与AQP-4表达呈显著正相关(r=0.829,P<0.001);安宫牛黄丸处理后,脑组织损伤减轻,AQP-4表达下降.结论:脑出血后AQP-4表达与脑组织损伤程度呈显著正相关,安宫牛黄丸能够有效抑制大鼠脑出血后AQP-4蛋白表达,减轻脑水肿.     

胰岛素样生长因子-1在脑出血后脑组织中的表达及作用

目的研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在大鼠脑出血(ICH)后脑组织中的表达及与同谷氨酸表达、细胞凋亡之间的相关性;用不同途径给予IGF-1干预后观察上述变化,探讨IGF-1在ICH中的作用。方法应用立体定向技术制备ICH模型。将动物随机分为假手术组、ICH组和干预组,分别在不同时间断头取脑标本,连续切片作TUNEL、IGF-1及谷氨酸阳性细胞免疫组化染色。结果与ICH后2 h血肿周围出现IGF-1阳性细胞,24 h达高峰,第7天恢复到正常。谷氨酸阳性细胞在ICH后2 h血肿周围开始表达,第3天达高峰,第7天时仍有表达。TUNEL阳性细胞在ICH后8 h血肿周围开始出现,72 h达高峰,第7天时仍见少许凋亡细胞。ICH后IGF-1的表达同谷氨酸阳性细胞数、凋亡细胞数呈正相关。IGF- 1干预后谷氨酸阳性细胞及TUNEL阳性细胞均明显减少。结论IGF-1参与了ICH的病理生理过程,它对损伤的脑组织起修复、保护作用。     

高压氧预处理减轻大鼠脑出血后脑水肿

目的 观察高压氧预处理(Hyperbaric oxygen preconditioning,HBOP)对大鼠脑出血后脑水肿和血肿周围炎症反应及神经细胞凋亡的影响.方法 选用36只雄性Sprague-Dawley大鼠(体质量300～350 g),其中18只大鼠接受连续5次HBOP(HBOP组:3个绝对大气压,100%O2,每次1 h,1次/d,连续5 d),另18只大鼠接受连续五次假预处理(对照组:1个绝对大气压,空气,每次1 h,1次/d,连续5d).预处理结束24 h后,立体定向基底节内注射自体股动脉血100μL建立基底节脑出血模型,72 h后处死,采用干湿重法测定脑组织水含量(24只大鼠,HBOP组及对照组各12只);采用HE染色镜下观察血肿周围炎症细胞浸润,采用缺口末端标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡(12只大鼠,HBOP组及对照组各6只);统计学分析采用stata 7.0统计软件对脑组织水含量值进行成组设计资料的t检验.结果 HBOP组脑出血72 h后血肿周围基底节脑组织水含量显著低于对照组[(81.6±0.7)%vs.(82.8±0.9)%,(P<0.01)];血肿周围炎症细胞浸润程度显著轻于对照组,血肿周围凋亡细胞显著少于对照组.结论 HBOP显著减轻脑出血后脑水肿,显著抑制脑出血后炎症反应以及减少神经细胞凋亡.     

大鼠脑出血模型中神经细胞凋亡的特征及Bcl-2蛋白对细胞凋亡的调控

目的:研究大鼠脑出血灶周围是否存在细胞凋亡及Bcl-2蛋白的表达。方法:SD大鼠50只,随机分为5组,10只为对照组,其余40只建立大鼠脑出血模型,分别于模型制备后12,24,48,72h取脑组织,应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,免疫组化SP法检测Bcl-2蛋白。结果:正常细胞对照中未见TUNEL及Bcl-2阳性细胞,其余各组中TUNEL及Bcl-2阳性细胞均有不同程度表达。凋亡率随出血后时间不同而发生相应改变,在出血后48～72h达到高峰,TUNEL阳性细胞率峰值为(24.50±2.69)%,实验组与对照组间差异有显著性意义(P<0.05)。Bcl-2蛋白在出血灶周围细胞中亦有表达,其阳性表达率峰值为(20.76±1.97)%,且Bcl-2蛋白的表达与凋亡细胞之间并无明显线性关系。结论:细胞凋亡参与了脑出血后神经细胞的继发损伤过程,其在出血后的表达存在一个时间窗,对临床及时治疗有一定指导意义;Bcl-2蛋白在出血后一定时间内持续升高,但与细胞凋亡不同步,表明了bcl-2的抑制细胞凋亡的作用。     

大鼠脑出血模型中神经细胞凋亡的特征及Bcl-2蛋白对细胞凋亡的调控

目的：研究大鼠脑出血灶周围是否存在细胞凋亡及Bcl-2蛋白的表达。方法：SD大鼠50只，随机分为5组，10只为对照组，其余40只建立大鼠脑出血模型，分别于模型制备后12，24，48，72h取脑组织，应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡，免疫组化SP法检测Bcl-2蛋白。结果：正常细胞对照中未见TUNEL及Bcl-2阳性细胞，其余各组中TUNEL及Bcl-2阳性细胞均有不同程度表达。凋亡率随出血后时间不同而发生相应改变，在出血后48～72h达到高峰，TUNEL阳性细胞率峰值为(24．50&;#177;2．69)％，实验组与对照组间差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。Bcl-2蛋白在出血灶周围细胞中亦有表达，其阳性表达率峰值为(20．76&;#177;1．97)％，且Bcl-2蛋白的表达与凋亡细胞之间并无明显线性关系。结论：细胞凋亡参与了脑出血后神经细胞的继发损伤过程，其在出血后的表达存在一个时间窗，对临床及时治疗有一定指导意义；Bcl-2蛋白在出血后一定时间内持续升高，但与细胞凋亡不同步，表明了bcl-2的抑制细胞凋亡的作用。     

脑出血患者血肿周围组织炎性反应与细胞凋亡的相关性研究

目的探讨脑出血患者血肿周围组织炎性反应与细胞凋亡的关系。方法对30例手术的脑出血患者于血肿旁约1cm处取少许脑组织作为试验组，按发病到手术的时间将试验组分为〈6h（6例）、6～12h（7例）、12～24h（5例）、24～72h（6例）、〉72h（6例）。从前两组中选7例患者于手术入颅路径上远隔血肿处取少许脑组织作为对照组。应用苏木素-伊红（HE）染色、免疫组化染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）、逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）分别观察组织病理、炎性细胞浸润和小胶质细胞增生、凋亡细胞、促凋亡基因（Bax）、抗凋亡基因（Bcl-X）的变化情况。结果光镜观察显示：对照组和试验组6h内脑组织基本正常，试验组6～12h损伤较轻，12～24h损伤较重，24～48h损伤严重，以后逐渐好转，8d时与对照组相似。免疫组化显示：中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞浸润从6～12h逐渐明显，12～24h达高峰（P均〈0．01），小胶质细胞增生从24～72h开始，72h以后明显增强（P均〈0．01）；凋亡细胞、Bax蛋白表达从6～12h开始增加，12～24h达高峰（P〈0．05或P〈O．01）。Bcl—X蛋白及其mRNA表达从12～72h有增加的趋势，但差异无显著性。RT—PCR显示：Bax mRNA表达与免疫组化结果相似；相关分析显示：中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞浸润和小胶质细胞增生与凋亡细胞、Bax蛋白和BaxmRNA表达呈显著正相关（P〈0．05或P〈0．01）．与Bcl—X蛋白及其mRNA表达无相关性（P均〉0．05）。结论脑出血后血肿周围组织的炎性反应与细胞凋亡关系密切，并与组织病理损伤相一致。     

大鼠脑出血血肿周围组织病理变化的动态观察

目的 了解脑出血后血肿周围组织的病理变化及规律。方法用胶原酶注入到大鼠尾状核的方法制作脑出血模型。将大鼠分为脑出血、假手术组、正常3组。分别观察各组在脑出血后第6h、12h、24h、2d、3d、5d、7d时血肿周围及对侧相应组织、额叶、小脑在光镜下的病理改变。结果大鼠在胶原酶注入6小时后形成稳定的血肿，病灶可分为血肿区、血肿周围区及相邻的正常脑组织区。血肿周围以细胞肿胀、细胞毒性及血管源性水肿、神经元坏死和变性为主要表现，水肿在第3d最突出，第7d仍未完全消退；出血12h血肿周围开始出现中性粒细胞，第3d开始出现泡沫细胞。结论脑出血血肿周围以细胞肿胀、水肿、神经细胞坏死、变性为主要表现，中性粒细胞及泡沫细胞的出现说明血肿周围存在炎症反应。血肿周围组织是今后治疗的目标。     

还元注射液对实验性脑出血大鼠脑组织显微、超微结构的影响

目的探讨还元注射液对实验性脑出血大鼠脑组织显微、超微结构的影响及保护作用. 方法将 30只 SD大鼠随机分为正常组、模型组和还元组,每组 10只.各组于造模后 2 h分别腹腔注射生理盐水和还元注射液 1 mL/(100g.次 ), 2次 /d,共给药 3 d.第 4天断头处死迅速取脑,制成光镜、电镜片,观察组织学变化. 结果①正常组光镜、电镜下脑组织结构正常;②模型组光镜下,血肿范围大,充满变性红细胞,脑组织变性、坏死,毛细血管严重水肿;电镜下,神经细胞和胶质细胞明显肿胀,胞浆内大部分细胞器消失,染色质消失,神经细胞脱髓鞘,轴浆消失;③还元组光镜下,血肿形成囊肿,与周围脑组织界限不十分明显,血肿内有大量的胶质细胞和巨噬细胞,血肿周围无明显变性神经细胞,毛细血管无明显水肿;电镜下,神经细胞和胶质细胞无明显肿胀,胞浆内细胞器结构基本完整,神经纤维结构大致正常. 结论还元注射液对实验性脑出血大鼠脑组织结构具有保护作用.     

大鼠脑出血血肿周围神经细胞的另类死亡方式——胀亡

目的通过建立大鼠脑出血动物模型观察脑出血后血肿周围神经细胞胀亡时程表达变化。方法48只大鼠随机分为两组：脑出血组和对照组,脑出血组尾状核注入自体血50μL,对照组注入等量生理盐水。分别于6h、24h、2d、3d、5d、7d后处死,根据Rosenberg评分对各组大鼠进行评分,电镜下观察神经细胞胀亡及凋亡形态学变化并计数胀亡神经元。结果脑出血组大鼠神经功能评分24h最高,血肿周围存在胀亡神经元,且胀亡指数24h达高峰,以后逐渐下降,与对照组相比有统计学差异。结论脑出血后存在神经细胞胀亡,且有一定时空变化规律。     

Ⅶ型胶原酶诱导大鼠脑出血模型研究

目的:Ⅶ型胶原酶制作大鼠脑出血模型并评价。方法:Ⅶ型胶原酶立体定向注入大鼠尾壳核,于术后1、3、7d观察大鼠神经行为学、血肿体积及脑组织病理改变。结果:存活大鼠均有神经功能缺损,术后3d最明显;尾壳核有出血灶,术后3d血肿体积最大;血肿及周围脑组织存在典型脑出血后病理改变。结论:Ⅶ型胶原酶制作大鼠脑出血模型是理想的造模方法。     

平肝熄风汤对脑出血大鼠海马线粒体膜电位和神经功能的影响

目的观察大鼠脑出血后神经缺损症状和线粒体膜电位的改变,及中药制剂平肝熄风汤的干预作用. 方法用Ⅶ型胶原酶于脑内定位注射诱导大鼠脑出血模型.神经缺损积分评定神经功能;用荧光分光光度计测定线粒体悬液的荧光强度反映线粒体膜电位. 结果大鼠脑出血后迅速出现神经缺损症状,平肝熄风汤能明显降低神经缺损症状积分( 4 h 8.80分, 1 d6.80分, 3 d 2.80分, 7 d 1.60分).脑出血大鼠线粒体膜电位于术后 4 h显著下降, 1d时膜电位下降达高峰, 3, 7 d逐步恢复,仍低于正常组和假手术组( t=7.352 P< 0.05 ).平肝熄风汤治疗组在脑出血后 1, 3, 7 d,线粒体膜电位均明显高于模型组( t=2.583 P< 0.05). 结论大鼠脑出血后线粒体膜电位下降;平肝熄风汤能阻断膜电位下降,同时能减轻出血后神经损伤.     

Ⅶ型胶原酶构建大鼠脑出血模型的组织病理学研究

目的:采用Ⅶ型胶原酶构建大鼠脑出血模型,研究血肿周围组织病理变化规律。方法:尾状核注射Ⅶ型胶原酶制作大鼠脑出血模型,造模后12h、1d、3d及7d,采用HE染色及免疫荧光组织化学法,观察血肿周围组织病理及神经细胞变化规律。结果:造模后灶周组织主要表现为红细胞逐渐崩解吸收、炎症细胞浸润、病灶中央神经细胞液化坏死;星型胶质细胞在出血伊始即出现增生,7d时增生最活跃;神经元在各时间点均表现为死亡。结论:Ⅶ型胶原酶制作大鼠脑出血模型可模拟人类原发性脑出血的病理生理过程。     

不同龄大鼠脑出血后脑水肿及补体表达情况比较

目的探讨不同龄大鼠脑水肿及补体表达的差异。方法使用不同龄SD大鼠建立脑出血模型，分别观察3、7、14、21d时脑组织水含量，神经功能，补体C3、C9的RNA及蛋白表达情况。结果首先对脑水肿的发生发展规律进行分析，发现老龄大鼠与成年大鼠脑水肿发生时程相仿，但水肿程度老龄大鼠轻于成年大鼠；补体C3及C9均有表达，通过免疫组化检查发现这些补体表达主要集中在血肿周围的脑组织，1周左右表达最强，3周基本消退。老龄大鼠的补体表达情况明显弱于成年大鼠；成年大鼠组神经功能恢复较老龄大鼠组更为良好，可能神经元的再生能力在神经功能恢复中起更主要的作用。结论年龄是脑出血后影响预后重要因素，尽管老龄组脑水肿和免疫反应较轻，但神经功能恢复欠佳。     

促红细胞生成素对脑出血大鼠脑血肿周围Fas相关死亡域蛋白和Caspase-8表达的影响

目的 研究大鼠脑出血不同时期Fas相关死亡域蛋白(FADD)和Caspase-8表达及促红细胞生成素(EPO)对其的影响,探讨EPO的脑保护机制.方法 SD雄性大鼠126只随机分为假手术组、脑出血组、EPO干预组各42只,各组又按不同时间点分为术后3、6、12、24、48、72 h和7 d共7个亚组(每个亚组6只).采用自体血脑内注射法建立脑出血动物模型,应用免疫组化方法 检测脑出血后不同时间点血肿周边脑组织中FADD和Caspase-8表达情况.结果 脑出血后3 h FADD和Caspase-8升高[分别为(4.66±0.46)和(15.89±1.81)],48 h达到高峰[分别为(35.88±4.24)和(45.04±3.99)],与脑出血组比较,EPO干预组3 h和48 h的FADD和Caspase-8表达显著减少[分别为(3.92±0.64)和(28.24±1.90)、(13.32±2.01)和(35.08±2.85)].结论 脑出血后血肿周围细胞FADD和Caspase-8表达明显增多,EPO可能通过抑制FADD和Caspase-8的表达,对脑出血后脑组织有保护作用.     

阿托伐他汀对大鼠脑缺血后补体水平的影响

目的 研究大鼠脑缺血后补体表达的变化规律,探讨阿托伐他汀对大鼠脑缺血后补体表达的影响.方法 160只健康成年S-D大鼠随机分为正常组、假手术组、缺血组、治疗组,缺血组和治疗组分别再分为缺血后6 h、12 h、24 h、48 h、3 d、5 d、2同七个小组.线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(The middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,缺血2h后退出线栓,假手术组不插入线栓.麻醉清醒后大鼠出现对侧肢体瘫痪表明造模成功.治疗组在造模成功后开始口饲阿托伐他汀钙10 mg/d,每日1次,连用2周.缺血组不给予阿托线他汀类药物.对缺血组和治疗组大鼠不同时点进行神经功能缺失评分,然后断头取脑,免疫组化法检测脑内补体C1q和C3d的表达情况.结果 正常组大鼠脑内有少量补体表达,假手术组补体表达与正常组比较无统计学意义(P＜0.05),脑缺血后脑内补体C1q和C3d的表达水平逐渐增加,至缺血后24 h达高峰,5 d左右恢复至正常水平.缺血组补体C1q、C3d的表达明显高于假手术组(P＜0.05),治疗组补体C1q和C3d的表达明显低于缺血组(P＜0.05),治疗组神经功能评分明显低于缺血组(P＜0.05);结论 脑缺血后脑内补体C1q、C3d的表达逐渐升高,阿托伐他汀可以抑制脑内补体的激活,改善神经功能.