蛇毒解聚素在裸鼠胶质瘤模型中的干预治疗作用研究

目的研究蛇毒解聚素（CN）对裸鼠人脑胶质瘤动物模型的治疗可行性,探讨蛇毒解聚素抑制U87胶质瘤裸鼠移植瘤生长的作用机制。方法建立BALB／c裸鼠U87胶质瘤移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为2组,采用间质内注射给药方法。蛇毒解聚素按40μg每次给药。定期观察肿瘤生长情况,测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率。全部BALB／c裸鼠移植瘤石蜡标本用SP法免疫组化染色,检测移植瘤组织中的微血管计数（MVD）,Ki-67标记指数以及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）。结果与溶媒对照组相比,蛇毒解聚素组均能抑制肿瘤生长（P〈0．01）,其体积抑瘤率为50％,并能明显降低肿瘤微血管密度、能下调移植瘤组织中bFGF的蛋白表达及Ki-67标记指数。结论蛇毒解聚素能明显抑制U87裸鼠移植瘤生长。     

白藜芦醇对裸鼠U87细胞移植瘤生长及血管生成的影响

目的 研究白藜芦醇(Res)对人脑胶质瘤系U87细胞的体内抗癌活性及血管生成的影响. 方法 BALB/c裸鼠20只,背部皮下接种胶质瘤细胞U87建立皮下移植瘤模型.随机数字表法分为10、100mg/kgRes治疗组,溶剂对照组,空白对照组,每组5只.观察4组裸鼠移植瘤的生长曲线并应用免疫组织化学法检测瘤组织中微血管密度(MVD)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达:采用原位末端标记法(TUNEL)检测瘤组织细胞的凋亡. 结果与空白对照组及溶剂对照组相比,100 mg/kg Res治疗组裸鼠移植瘤的体积、重量降低;100 mg/kg Res治疗组瘤组织中MVD、VEGF的表达明显降低,凋亡细胞数增高,差异均有统计学意义(P<0.05). 结论 Res对U87人脑胶质瘤细胞裸鼠移植瘤的生长具有明显抑制作用,这可能与Res导致U87移植瘤细胞凋亡及血管生成减少有关.     

预防性协同给药抑制裸鼠脑胶质瘤的生长

目的观察预防性单独及协同给药对脑胶质瘤生长的影响。方法将浓度为107/ml、细胞成活率95%以上的U251MG脑胶质瘤细胞悬液,接种至6w龄雄性裸鼠脑白质内。接种次日给药,2次/w,分4大组,即消炎痛口服给药组(两个剂量组);榄香烯腹腔注射给药组(两个剂量组);消炎痛和榄香烯低剂量协同用药组;对照组(肿瘤对照和空白对照)。给药20和30d时,断颈处死裸鼠,脑标本做石蜡切片,3μm厚,行HE、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)等染色。结果肿瘤对照组:裸鼠脑内肿瘤增生明显,瘤内幼稚血管形成,瘤细胞向白质内浸润,GFAP染色强阳性。单独给药组:瘤细胞较肿瘤对照组少,GFAP染色阳性。协同给药组:给药30d时大量瘤细胞发生凋亡,GFAP呈阴性表达。结论预防性的两药协同作用可更好地诱导裸鼠脑内人脑胶质瘤细胞发生凋亡。     

阿苯达唑抑制胶质瘤裸鼠模型肿瘤生长

目的 探讨阿苯达唑（ABZ）对胶质瘤裸鼠模型肿瘤生长的影响。方法 将术中获取的胶质母细胞组织消化为单细胞悬液用无血清干细胞培养基进行培养胶质母细胞瘤干细胞（GSC）,用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养胶质瘤细胞系U87、U251、U172,以25、50、100、200 ng/ml的终浓度ABZ作用细胞,采用MTT法检测细胞增殖。右侧腋窝皮下注射0.2 ml（5×106个细胞）GSC及U87细胞悬液构建胶质瘤裸鼠模型,将30只胶质瘤裸鼠模型随机分为6组,GSC和U87细胞移植各3组,每种移植瘤模型均分为模型组（腹腔注射等体积DMSO）、低剂量ABZ组（腹腔注射ABZ,50 mg/kg）、高剂量ABZ组（腹腔注射ABZ,100 mg/kg）。定时测量肿瘤长径与短径,计算肿瘤体积;PCR法和免疫印迹法检测裸鼠肿瘤组织血管内皮生长因子（VEGF）mRNA和蛋白表达水平。结果 ABZ对GSC、U87、U251和A172细胞生长均具有明显抑制效果（P<0.05）,而且抑制效果具有浓度依赖性（P<0.05）,浓度>50 ng/ml抑制效果较好。腹腔注射ABZ后,高剂量和低剂量ABZ组移植瘤体积增长较对照组均明显减慢（P<0.05）。高剂量ABZ组和低剂量ABZ组肿瘤VEGF mRNA和蛋白表达水平较对照组均明显降低（P<0.05）。结论 ABZ可以抑制胶质瘤裸鼠模型肿瘤生长,可能与抑制肿瘤细胞增殖和血管生成有关。     

重组VEGF165-PE38融合基因对裸鼠移植性人胶质瘤血管生成的抑制作用

目的 研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)和铜绿假单胞菌外毒素A(PE)融合基因的真核表达载体对裸鼠移植性人脑恶性胶质瘤血管生成的影响,探索抗肿瘤血管生成的新方法.方法 采用裸鼠背部皮下注射U251细胞建立移植性恶性胶质瘤模型,9 d后按随机数字表法将裸鼠分为未治疗组、PBS组、空质粒组、重组质粒组,采用HE染色观察肿瘤组织的形态学变化.免疫组织化学SP法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAF)、CD31、PE的表达.分析肿瘤组织的微血管密度(MVD). 结果 注射后第16天重组质粒组裸鼠移植瘤体积明显小于其他3组,差异有统计学意义(P<0.05);重组质粒组裸鼠移植瘤MVD低于其他3组,差异均有统计学意义(P<0.05);重组质粒组裸鼠肿瘤组织PE呈阳性表达,而在空质粒组、PBS组及未治疗组均为阴性表达. 结论 VEGF165-PE38融合基因的表达产物对人脑恶性胶质瘤有明显的抑制作用,并能抑制肿瘤新生血管生成,可能为一种有效抗肿瘤血管治疗的新策略.     

白藜芦醇对裸鼠U87细胞移植瘤生长及血管生成的影响

目的 研究白藜芦醇(Res)对人脑胶质瘤系U87细胞的体内抗癌活性及血管生成的影响. 方法 BALB/c裸鼠20只,背部皮下接种胶质瘤细胞U87建立皮下移植瘤模型.随机数字表法分为10、100mg/kgRes治疗组,溶剂对照组,空白对照组,每组5只.观察4组裸鼠移植瘤的生长曲线并应用免疫组织化学法检测瘤组织中微血管密度(MVD)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达:采用原位末端标记法(TUNEL)检测瘤组织细胞的凋亡. 结果与空白对照组及溶剂对照组相比,100 mg/kg Res治疗组裸鼠移植瘤的体积、重量降低;100 mg/kg Res治疗组瘤组织中MVD、VEGF的表达明显降低,凋亡细胞数增高,差异均有统计学意义(P<0.05). 结论 Res对U87人脑胶质瘤细胞裸鼠移植瘤的生长具有明显抑制作用,这可能与Res导致U87移植瘤细胞凋亡及血管生成减少有关.     

雷公藤红素对荷瘤裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响

目的：探讨雷公藤红素对荷SHG44胶质瘤裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响。方法34只SHG －44胶质瘤裸鼠随机分为空白对照组、顺铂组、4 mg／kg雷公藤红素组、2 mg／kg雷公藤红素组和1 mg／kg雷公藤红素组,每周两次,共给药4周。定期观察肿瘤生长情况测量肿瘤体积,计算抑瘤率。免疫组化染色检测移植瘤组织中的MVD、bFGF、VEGF、VEG‐FR1、VEGFR2的蛋白表达。结果4 mg／kg和2 mg／kg的雷公藤红素能抑制肿瘤生长,下调移植瘤组织中VEGFR1、VEG‐FR2的蛋白表达和降低微血管计数（MVD）,4 mg／kg的雷公藤红素还能下调荷瘤裸鼠移植瘤组织中bFGF的蛋白表达。结论雷公藤红素能明显抑制荷SHG44胶质瘤裸鼠的移植瘤生长和血管生成,其机制可能与雷公藤红素下调肿瘤组织中bF‐GF、VEGFR1、VEGFR2的蛋白表达有关。     

pEGFP-ING4抑制裸鼠皮下人U87移植瘤生长及肿瘤血管生成

目的 探讨pEGFP-ING4对裸鼠体内人U87细胞移植瘤生长及对肿瘤血管生成的影响.方法 将成功构建的18只人U87细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为pEGFP-ING4和pEGFP-C2转染组及PBS空白对照组3组,测量各组肿瘤的体积变化,荧光显微镜观察转染瘤体内绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达情况,免疫组织化学SABC法检测微血管密度(microvessel density,MVD).结果 荧光显微镜下pEGFP-ING4 组和pEGFP-C2组均观察到GFP表达,接种后第21d、28d、35d各组皮下肿瘤体积(mm3)为:PBS 组(201.8±19.3,418.9±26.4,622.1±51.3),pEGFP-C2 组(197.6±18.9,398.4±20.4,593.7±48.7),pEGFP-ING4 组(138.9±8.4,198.7±21.5,293.2±31.6),肿瘤接种后在同一时间点内,pEGFP-ING4 组肿瘤体积明显小于另外两组(P<0.05);MVD检测(个/mm2):PBS 组(15.83±0.98),pEGFP-C2 组(15.83±1.62),pEGFP-ING4 组(4.17±1.17),与另外两组比较,pEGFP-ING4 组MVD明显降低(P<0.01).结论 ING4基因能够明显抑制人U87细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,抑制胶质瘤血管的生成可能是其抗肿瘤的重要机理之一.     

注射维生素C治疗脑胶质瘤的实验研究

目的探讨维生素C治疗脑胶质瘤的作用机制,为胶质瘤的临床治疗提供实验室依据。方法制作大鼠C6脑胶质瘤模型。荷瘤7d后将Wistar大鼠随机分为5组,每组10只,即对照组;维生素C低剂量组（2．0g／kg）;维生素C中剂量组（4．0g／kg）;维生素C高剂量组（8．0g／kg）;5-Fu组（20mg／kg）。于用药结束后次日处死各组小鼠,计算肿瘤体积和抑瘤率;流式细胞术检测各组肿瘤组织细胞凋亡率;免疫组化法检测各组肿瘤组织Ki-67蛋白表达情况。结果维生素C可抑制大鼠肿瘤生长,且呈剂量依赖性,实验组肿瘤体积与对照组相比有显著差异（P〈0.05）,维生素C高剂量组与5--Fu组肿瘤体积比较无统计学差异（P〉0.05）。维生素C可诱导大鼠肿瘤细胞凋亡,维生素C各组与对照组相比均有极显著性差异（P〈0.01）,维生素C高剂量组凋亡率高于5-Fu组（P〈0.05）。免疫组化法检测肿瘤组织细胞Ki-67蛋白表达中,维生素C各组与对照组相比均有极显著性差异（P〈0.01）,维生素C高剂量组与5-Fu组细胞凋亡率比较无统计学差异（P〉0.05）。结论维生素C在-定剂量范围内可抑制C6大鼠脑胶质瘤的生长,诱导肿瘤细胞发生凋亡是其机制之一;药理剂量的维生素C能降低C6大鼠脑胶质瘤细胞增殖活性,具有-定的抗肿瘤作用。     

反义IGF-IR基因片段对裸鼠胶质瘤形成的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子-I受体(IGF—IR)的反义基因片段对裸鼠胶质瘤的形成及其病理的影响。方法 体外用反义IGF—IR基因片段孵育胶质瘤细胞，并接种裸鼠体内，了解其肿瘤形成能力及其肿瘤组织学和IGF—IR的表达：结果 野生型C6细胞和正义寡核苷酸孵育的C6细胞在BALB／c裸鼠体内形成肿瘤的潜伏期均为4d，而经反义寡核苷酸孵育的C6细胞在裸鼠体内形成肿瘤的潜伏期为11～12d，肿瘤形成的潜伏期明显延长，肿瘤的生长得到抑制。肿瘤形成7d时，研究发现正义核酸组与野生组肿瘤病理组织学是一致的，且IGF—IR均呈高表达，反义核酸组肿瘤细胞变得稀疏，而且可见部分肿瘤细胞核固缩，染色质凝聚边缘化，甚至有细胞出现核碎裂等凋亡征象，IGF—IR表达明显减少。而在肿瘤形成的25d时，反义核酸组胶质瘤的病理表现和IGF—IR蛋白的表达与对照组和正义核酸组无明显差异。结论反义IGF—IR基因片段能抑制裸鼠胶质瘤的形成能力，但逃脱反义IGF—IR基因片段封闭的肿瘤细胞经过体内的增殖可形成肿瘤。     

下调TTK表达改善胶质母细胞瘤裸鼠的生存预后

目的 探讨苏氨酸/酪氨酸激酶（TTK）在胶质母细胞瘤（GBM）中的表达变化及其作用。方法 计算机检索TCGA数据库,利用生物信息学技术分析GBM组织TTK的表达水平及其与病人生存预后的关系。免疫组化染色分析我院生物样本库中60例脑胶质瘤组织的TTK表达水平。体外培养U251细胞,慢病毒转染构建TTK低表达细胞系,利用Alarma blue试剂盒测定细胞增殖能力,细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期。将不同TTK表达水平的U251细胞接种裸鼠构建移植瘤模型,分析TTK表达水平与移植瘤模型生存期的关系。结果 生信分析结果显示,GBM组织TTK表达水平明显高于低级别胶质瘤及正常脑组织（P<0.05）,TTK低表达GBM病人的总生存期更长（P<0.05）。我院60例胶质瘤中,高级别胶质瘤TTK高表达率（69.0%,29/42）明显高于低级别胶质瘤（16.7%,3/18;P<0.05）。下调TTK表达明显抑制U251细胞增殖、促进细胞凋亡（P<0.05）。TTK低表达裸鼠移植瘤模型的生存期明显延长（P<0.05）。结论 GBM组织...     

人参皂甙Rh2对人胶质瘤细胞U87MG凋亡的影响

目的 观察人参皂甙Rh2对胶质瘤细胞凋亡的影响并初步探讨其可能机制。方法 将培养的人胶质瘤细胞U87MG随机分为人参皂甙Rh2组、人参皂甙Rh2+尼莫地平组和对照组。人参皂甙Rh2组在常规培养细胞时加入20 μg/ml的人参皂甙Rh2，人参皂甙Rh2+尼莫地平组在人参皂甙Rh2组培养细胞时加入浓度为10 μmol/L的尼莫地平。利用流式细胞仪检测U87MG细胞凋亡，利用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测U87MG细胞内钙离子浓度。结果 与对照组相比，人参皂甙Rh2促进U87MG细胞凋亡（P<0.05），且增加细胞内游离钙离子浓度（P<0.05）；尼莫地平显著减少人参皂甙Rh2引起的U87MG细胞凋亡（P<0.05）。结论 人参皂甙Rh2可以通过增加细胞内游离钙离子浓度促进U87MG细胞凋亡。     

贝伐珠单抗联合高压氧治疗小鼠胶质母细胞瘤的效果

目的 探讨贝伐珠单抗（Bev）联合高压氧（HBO）对小鼠胶质母细胞瘤（GBM）的治疗作用。方法 体外培养U251细胞,随机分为对照组、Bev组（Bev作用24 h）、HBO组（HBO治疗1次）和Bev+HBO组（Bev作用24 h后,接受HBO治疗1次）,采用MTT法检测细胞增殖能力,采用划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力。取100只雄性BALB/c裸鼠,右侧纹状体注射U251细胞建立GBM模型,造模后7 d随机分为对照组（腹腔注射PBS,3次/周,连续2周）、Bev组（腹腔注射Bev,5 mg/kg,3次/周,连续2周）、HBO组（HBO治疗,1次/d,连续2周）、Bev+HBO组（同时接受Bev和HBO处理2周）;每组取10只小鼠记录生存时间;每组取5只小鼠,HE染色测定肿瘤体积;每组取5只小鼠,CD34免疫组化染色测定肿瘤组织微血管密度（MVD）;每组取5只小鼠,PCR检测肿瘤组织基质金属蛋白酶（MMP）9 mRNA表达水平。结果 Bev对U251细胞增殖能力无明显影响（P>0.05）,明显增强U251细胞迁移和侵袭能力（P<0.01）;明显降低肿瘤组织MVD（P<0.05）,明显增加肿瘤组织MMP9 mRNA表达水平（P<0.05）,但对荷瘤小鼠肿瘤体积及生存时间无明显影响（P>0.05）。HBO明显抑制U251细胞增殖、迁移、侵袭能力（P<0.01 ）,明显降低荷瘤小鼠肿瘤组织MMP9 mRNA表达水平（P<0.01）,但对荷瘤小鼠生存时间、肿瘤体积及肿瘤组织MVD均无明显影响（P>0.05）。Bev联合HBO明显抑制U251细胞增殖、侵袭和迁移能力,明显降低荷瘤小鼠肿瘤组织MVD和MMP9 mRNA水平（P<0.05）,明显缩小肿瘤体积（P<0.05）,明显延长荷瘤小鼠的生存时间（P<0.01）。结论 单独应用Bev或HBO对GBM小鼠肿瘤体积及生存时间无明显影响,但Bev联合HBO明显抑制小鼠GBM生长,明显延长小鼠生存时间。     

替莫唑胺通过TFRC抑制U87胶质瘤细胞增殖和侵袭

目的 探讨转铁蛋白受体（TFRC）在替莫唑胺抑制U87胶质瘤细胞增殖和侵袭中的作用。方法 体外培养U87胶质瘤细胞,加入50 μmol/L、100 μmol/L和200 μmol/L替莫唑胺作用;构建control siRNA、siTFRC转染U87细胞沉默TFRC表达,构建pcDNA3.1空载体、pcDNA3.1/TFRC转染U87细胞过表达TFRC;利用CCK-8方法检测U87细胞增殖;利用Transwell小室实验检测U87细胞侵袭能力;实时荧光定量PCR和免疫印迹法检查U87细胞TFRC mRNA和蛋白表达。结果 与空白组相比,替莫唑胺处理后,U87细胞的增殖和侵袭能力显著下降（P<0.05）,TFRC mRNA和蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,当替莫唑胺浓度为200 μmol/L时,对U87细胞的抑制能力最强（P<0.05）。当利用pcDNA3.1/TFRC过表达U87细胞TFRC处理后,替莫唑胺对U87细胞增殖和侵袭的抑制能力显著下降（P<0.05）;而当利用siTFRC沉默U87细胞TFRC表达后,替莫唑胺对U87细胞增殖和侵袭的抑制能力显著增强（P<0.05）。结论 替莫唑胺可能通过抑制TFRC的表达而抑制U87胶质瘤细胞的增殖和侵袭。     

芹菜素对脑胶质瘤细胞U87增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的 探讨芹菜素对脑胶质瘤U87细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响及作用机制。方法 体外培养脑胶质瘤U87细胞,加入20、40、80 μmol/L芹菜素干预,以培养基作为空白对照组。使用MTT法检测U87细胞的增长抑制率,使用Hocst染色法观察细胞凋亡情况;使用Transwell检测U87细胞侵袭能力;划痕实验法检测U87细胞迁移能力;使用免疫印迹法检测U87细胞基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、Bak1、Caspase-3表达水平。结果 与空白对照组比较,芹菜素组细胞抑制率显著增加（P<0.05）、细胞凋亡数目明显增加（P<0.05）、细胞侵袭数目显著下降（P<0.05）、细胞迁移数目明显减少（P<0.05）,U87细胞MMP-2、MMP-9、Bak1蛋白表达显著下降（P<0.05）,Caspase-3蛋白表达显著升高（P<0.05）;而且均呈浓度依赖性。结论 芹菜素可有效抑制脑胶质瘤U87细胞增殖、促进凋亡,可能与下调MMP-2、MMP-9、Bak1蛋白表达水平,上调Caspase-3表达有关。     

miR-103a-3p过表达靶向负调控PDK4抑制胶质瘤生长及侵袭

目的 探讨miR-103a-3p过表达对胶质瘤C6细胞恶性生物学行为的影响及对裸鼠移植瘤生长的影响。方法 体外培养鼠源性C6胶质瘤细胞,转染miR-103a-3p mimics质粒过表达miR-103a-3p,转染miR-103a-3p mimics+pcDNA-PDK4质粒分析PDK4过表达对miR-103a-3p过表达的影响;EDU法检测细胞增殖活性;qRT-PCR检测miR-103a-3p、PDK4 mRNA表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Transwell实验检测细胞侵袭能力;免疫印迹法检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin蛋白表达水平。取40只裸鼠,其中20只皮下注射未转染质粒的C6细胞、20只皮下注射转染miR-103a-3p mimics质粒的C6细胞构建移植瘤模型,分析miR-103a-3p mimics过表达对移植瘤生长的影响。结果 生物信息学及双荧光素酶试验证实PDK4是miR-103a-3p的靶点。过表达miR-103a-3p明显降低C6细胞PDK4、Ki67、PCNA、N-cadherin、vimentin表达水平（P<0.05）,明显抑制C6细胞增殖活性、侵袭能力（P<0.05）,明显增加C6细胞E-cadherin表达水平、细胞凋亡率（P<0.05）。过表达PDK4明显抑制过表达miR-103a-3p对C6胶质瘤细胞的作用（P<0.05）。过表达miR-103a-3p明显抑制裸鼠移植瘤生长（P<0.05）,抑制肿瘤组织PDK4、Ki67、vimentin表达（P<0.05）。结论 过表达miR-103a-3p通过靶向抑制PDK4表达,一方面抑制胶质瘤细胞增殖、促进胶质瘤细胞凋亡,从而抑制胶质瘤生长;另一方抑制胶质瘤上皮-间质转化过程,从而抑制胶质瘤细胞侵袭。